KR100893549B1 - 델타형 간염 바이러스 감염의 치료방법 - Google Patents

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Abstract

숙주에서 B형 간염 표면 또는 preS1 항원의 발현을 생체내에서 처리전 값에 비해 적어도 약 100배 이상으로 감소시키거나; 생체내에서 밀리리터당 약 1 마이크로그램 이하로 감소시키는, 유효량의 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체 또는 그의 프로드럭 또는 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 숙주에서 델타형 간염 감염의 치료방법. 바람직한 예에서, 뉴클레오사이드는 L-FMAU, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭이다.

Description

델타형 간염 바이러스 감염의 치료방법{Method of treating hepatitis delta viral infection}
연방 기금 범례
본 발명은 허여 번호 NIH AI-35164, AI-33655, AI-05399, N01-AI-45197 및 N01-AI-82698하에 미합중국 디파트먼트 오브 헬스 앤드 휴먼 서비스에 의해 일부 지원받았다.
본 발명은 B형 간염 표면항원의 농도를 실질적으로 감소시키는, 유효량의 화합물, 특히 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체를 투여하는 것을 포함하는 델타형 간염 바이러스("HDV"라고도 함)에 감염된 숙주를 치료하기 위한 방법 및 조성물 분야에 관한 것이다. 비제한적인 일례에서, 뉴클레오사이드 유사체는 2'-플루오로-5-메틸-β-L-아라비노퓨라노실-우리딘("L-FMAU"라고도 함) 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭이다.
바이러스성 간염의 가장 심각한 형태인, D형 간염은 D(델타)형 간염 바이러스(HDV), B형 간염 바이러스(HBV)의 서브-바이러스 부수체(sub-viral satellite)로의 감염에 의해 유발된다(Smedile, A. 등(1994) Prog Liver Dis 12, 157-75). 다른 바이러스성 간염의 병인체에 비해, 급성 HDV 감염은 더욱 빈번하게 전격성 간염 과 연관되어 있으며, 대량의 간이 파괴되는 신속한 진행성의, 종종 치명적인 형태의 질병이다. 만성 D형 간염은 전형적으로 만성 HBV 감염과 유사한, 괴사염증성 병변을 특징으로 하지만, 보다 심각하고 빈번하게 경변증 및 간부전으로 빠르게 진행하여, 만성 HDV 감염이 말기 간 질환과 불균형적으로 관련되는 이유가 된다(Smedile, A. 등(1994) Prog Liver Dis 12, 157-75; Rizzetto, M. 등(1983) Ann Intern Med 98, 437-41). HDV 감염이 HBV 단독에 비해 소수의 개체에서 발병한다 하더라도, 그로 인한 급성 또는 만성 간부전은 유럽뿐만 아니라 북아메리카에서도 간 이식의 일반적인 지표이다(Smedile, A. 및 Rizzetto, M.(1992) Int J Clin Lab Res 22, 211-215; Wright, T.L. 및 Pereira, B.(1995) Liver Transplant Surgery 1, 30-42). 만성 질환은 전세계적으로 1500만명에서 발병하며 그중 약 7만명이 미합중국에 있다. 질병 통제 센터는 미합중국에서 HDV 감염으로 인해 한해 1000명이 사망한다고 추산하고 있다(Alter, M.J. 및 Hadler, S.C.(1993) Prog Clin Biol Res 382, 243-50; Alter, M.J. 및 Mast, E.E.(1994) Gastroenterol Clin North Am 23, 437-55).
현재 일반적으로 인정된 유효한 D형 간염의 치료법이 없는 상태이며 간 이식이 관련된 말기 간 질환을 위한 유일한 방법이다. 인터페론 알파가 일부 D형 간염 환자를 치료하는데 어느 정도 성공하였지만, 매우 높은 필요 용량, 가변적인 반응, 치료 중단후 빈번한 재발, 및 약물 투여상의 어려움으로 인해 더 나은 치료방법이 필요하다(Thomas, H.C. 등(1987) Prog Clin Biol Res 234, 277-90; Hoofnagle, J. 등(1987) Prog Clin Biol Res 234, 291-8; Rosina, F. 등(1987) Prog Clin Biol Res 234, 299-303; Rosina, F. 등(1991) Hepatology 13, 1052-6); Farci, P. 등(1994) N Engl J Med 330, 88-94; Hadziyannis, S.J.(1991) J Hepatol 13 Suppl 1: S21-6; Di Marco, V. 등(1996) J Viral Hepat 3, 123-8; Porres, J.C. 등(1989) J Hepatol 9, 338-44).
라미부딘(β-L-2',3'-디데옥시-3'-티아사이티딘, 3TC)은 HIV 및 HBV 감염 치료에 효과적인 것으로 나타난 합성 뉴클레오사이드이다. Liotta 등의 미국특허 제5,539,116호를 참고하라. 라미부딘은 치료중 HBV 복제의 지속적인 억제를 유발하는 것으로 알려져 있다(Nevens, F. 등(1997) Gastroenterology 113: 1258-1263). 그러나, 라미부딘은 만성 델타형 간염 환자에서 질환 활성을 개선시키거나 HDV-RNA 농도를 낮추지 못한다(Lau, D.T. 등(1999) Hepatology 30, 546-9). 라미부딘은 최근 만성 HBV 감염에 대해 미합중국 및 몇몇 다른 국가에서 승인받았다. 만성 HBV 보균자를 라미부딘으로 장기간 치료하면 혈청내 HBV 농도가 감소되고 간 조직이 개선된다(Lai, C.L. 등(1998) N Engl J Med 339, 61-8; Tyrrell, D. 등(1993) Hepatology 18, 112A; Nevens, F. 등(1997) Gastroenterology 113, 1258-63; Dienstag, J.L. 등(1995) N Engl J Med 333, 1657-61). HBV에 대한 극적인 효과에도 불구하고, HBV와 HDV 모두에 만성적으로 감염된 환자의 라미부딘 치료는 HDV의 순환 농도에는 거의 영향을 미치지 못한다; 더욱 중요한 것은 HBV 농도가 억제됨에도 불구하고 질환 활성에는 개선이 없다는 것이다(Honkoop, P. 등(1997) Hepatology 24(Suppl), 1219(초록); Lau, D.T. 등(1999) Hepatology 30, 546-9).
추가적인 형태의 치료방법이 시도되어 왔다. 예를 들어, 서라민은 시험관내 에서 비리온의 헤파토사이트로의 진입을 차단하지만, 독성이 너무 강해 인체에 장기간 사용할 수 없다(Smedile, A. 등(1994) Prog Liver Dis 12, 157-75). 어사이클로버는 시험관내에서 HDV 복제를 증진시킨다(Smedile, A. 등(1994) Prog Liver Dis 12, 157-75). 리바비린은 바이러스학적 또는 생화학적 지수에 유의하게 영향을 미치지 않고 심각한 부작용을 나타낸다(Smedile, A. 등(1994) Prog Liver Dis 12, 157-75). 티모신의 합성 유사체 또한 HDV 감염의 치료에는 효과적이지 못하였다(Smedile, A. 등(1994) Prog Liver Dis 12, 157-75).
상기 HDV 감염 치료법중 어느 것도 효과적인 것으로 일반적으로 인정받지 못하고 있다. HDV 비리온은 리보뉴클레오단백질 핵과 외피로 구성되어 있다. 핵은 HDV-RNA와 이 바이러스에 의해 코딩되는 유일한 단백질인 델타형 간염 항원(HDAg)를 함유한다(Wang, K. S. 등 (1986) Nature 323, 508-14). 외피는 헬퍼, B형 간염, 바이러스의 표면항원 단백질(B형 간염 표면항원, HBsAg)에 의해 형성된다(Bonino, F. (1984) Infect Immun 43, 1000-5; Bonino, F. 등 (1981) Hepatology 1, 127-31; Bonino, F. 등 (1986) J Virol 58, 945-50). 외피는 HBV에 의해 제공되는 유일한 헬퍼 기능이다. HDV는 HBV가 없는 세포내에서 그의 RNA를 복제시킬 수 있으나(Kuo, M. Y. 등 (1989) J Virol 63, 1945-50), HDV 비리온의 팩키징과 방출(Wu, J. C. 등 (1991) J Virol 65, 1099-104; Ryu, W. S. 등 (1992) J Virol 66, 2310-2315.), 및 감염성(Sureau, C., 등 (1992) J Virol 66, 1241-5)을 위해 HBsAg를 필요로 한다. HDV의 HBV에 대한 의존성의 결과로, HDV는 HBV와 관련하여서만 개체를 감염시킨다.
우드척(Woodchuck) 간염 바이러스(WHV)는 HBV와 밀접하게 연관되어 있으므로(약 85% 핵산 상동성), 그의 천연 숙주, 동양 우드척(M. monax)에서 HBV 감염 및 질환의 모델로서 널리 사용되어 왔다(Gerin, J. L. (1990) Gastroenterol Jpn 25 (Supp), 38-42; Tennant, B. C. 등 (1988) Viral Hepatitis and Liver Disease, 462-464). 실험적으로 감염된 우드척 또한 항-HBV 치료법의 분석 및 개발을 위해 널리 사용되어 있다(Zahm, F. E. 등 (1998) Ital J Gastroenterol Hepatol 30, 510-6; Tennant, B. C. 등 (1998) Hepatology 28, 179-91; Mason, W. S. 등 (1998) Virology 245, 18-32; Korba, B. E. 등 (1996) Hepatology 23, 958-63; Hurwitz, S. 등 (1998) Antimicrob Agents Chemother 42, 2804-2809; Block, T. M. 등 (1998) Nat med 4, 610-4; Cullen, J. M. 등 (1997) Antimicrob Agents Chemother 41, 2076-82; Fourel, G. 등 (1990) Nature 347, 294-8; Gangemi, J. 등 (1997) Antivir Therap 1, 64-70; Genovesi, E. V. 등 (1998) Antimicrob Agents Chemother 42, 3209-17; Korba, B. E. 등 (2000) Antiviral Res 45, 19-32; Korba, B. E. 등 (2000) Antiviral Therapy 55, 95-105; Korba, B. E. 등 (2000) Antimicrobial Agents and Chemotherapy 44, 19-32). 우드척에서 만성 WHV 감염을 실험적으로 치료하는데 사용되는 몇몇 항-HBV 약물(아라AMP(araAMP), 리바비린, AZT, ACV, 3TC, 팜시클로버, FTC, 알파-인터페론, 피알우리딘 간시클로버, 티모신 알파-1, 3TC 및 알파-인터페론 또는 3TC 및 팜시클로버의 병용치료)의 효능은 임상시험중 치료받는 HBV 환자에게 투여된 이들 약물의 효능 및 독성 프로파일과 정확하게 일치한다. 항-HBV 약물을 처치한 WHV 감염된 우드척과 HBV 감염된 인간에서 관찰된 유사한 효능은 우드척 동물 모델이 인간에서의 항-HBV 치료법을 예측할 수 있음을 증명한다(Zahm, F. E. 등 (1998) Ital J Gastroenterol Hepatol 30, 510-6; Tennant, B. C. 등 (1998) Hepatology 28, 179-91; Mason, W. S. 등 (1998) Virology 245, 18-32; Hurwitz, S. 등 (1998) Antimicrob Agents Chemother 42, 2804-09; Fourel, G. 등 (1990) Nature 347, 294-8; Gangemi, J. 등 (1997) Antivir Therap 1, 64-70; Genovesi, E. V. 등 (1998) Antimicrob Agents Chemother 42, 3209-17; Korba, B. E. 등 (2000) Antiviral Res 44, 19-32; Korba, B. E. 등 (2000) Hepatology 31, 1165-75; Korba, B. E. 등 (2000) Antiviral Therapy 5, 95-105; Korba, B.E. 등 (2000) Antimicrob Agents Chemother 44, 1757-60). HBV와 같이, WHV는 HDV 입자 형성 및 감염을 지원할 수 있고 동양 우드척은 HDV 감염을 위한 유용한 모델이 되어 왔다(Negro, F. 등 (1989) J Virol 63, 1612-8; Parana, R., Gerard, F., Lesbordes, J. L., Pichoud, C., Vitvitski, L., Lyra, L. G. & Trepo, C. (1995) J Hepatol 22, 468-73; Ciccaglione, A. R. 등 (1993) Arch Virol Suppl 8, 15-21; Bergmann, K. F. 등 (1989) J Immunol 143, 3714-21; Ponzetto, A. 등 (1984) Proc Natl Acad Sci U S A 81, 2208-12; Ponzetto, A. 등 (1987) Prog Clin Biol Res 234, 37-46).
HDV의 그의 헬퍼 바이러스 HBV에 대한 의존성은 지원성 HBV 감염을 성공적으로 치료하면 HDV 감염을 성공적으로 치료할 수 있음을 암시한다. 불행하게도, 약물 라미부딘(글락소-웰컴사)으로 얻어진 최근 결과에 의해 설명되는 바와 같이 이는 사실로 나타나지 않는다(Honkoop, P. 등 (1997) Hepatology 24 (Suppl), 1219 (Abstract); Lau, D. T. 등 (1999) Hepatology 30, 546-9). HBV-HDV 감염된 환자에서 질환에 대한 라미부딘의 영향의 결여는 그러한 환자에서 질병 중증도에 있어서 HDV의 직접적인 역할을 분명히 나타내고 있다. 라미부딘이 HBV 및 WHV 복제를 저해할지라도, 바이러스 표면항원의 생산에 영향을 주지는 못한다(Lau, D. T. 등 (1999) Hepatology 30, 546-9; Doong, S. L. 등 (1991) Proc Natl Acad Sci U S A 88, 8495-9; Korba 등 Hepatology, (2000) 31, 1165-75). HBV 및 이 훼밀리의 다른 대표적인 바이러스들(예: WHV)의 생활사는 바이러스의 게놈 카피를 복제하는 과정과 바이러스 단백질의 생산이 별도로 조절된다는 점에서 독특하다(Ganem, D. 1996. Hepadnaviridae. In "Fields Virology", Fields BN, Knipe DM, Howley P, ed. Lippincott-Raven, Philadelphia, p. 2703-2737). 따라서 바이러스 중합효소를 표적으로 하는 항바이러스제, 예를 들어 합성 뉴클레오사이드(예: 라미부딘)는 HBV 복제를 유의하게 저해할 수는 있지만(예를 들어, 바이러스혈증 감소에 의해 측정됨), 바이러스 mRNA의 농도 또는 바이러스 단백질 생산(예를 들어, 혈장 또는 혈청내 HBV 표면항원의 농도에 의해 측정됨)에 영향을 미치지 못한다. HBV의 생활사가 바이러스 단백질을 별도로 조절하는데 있어서 독특하고 HBsAg가 수많은 대체 전사물로부터 생산될 수 있음이 주어졌음에도, 어떤 인자가 HDV의 치료 종점을 달성하게 하는데 필수적인지는 현재까지 알려져 있지 않다.
미국특허 제5,747,044호는 백신으로 유용한 재조합적으로 생산된 면역원성 HDV 폴리펩타이드를 개시하고 있다.
카이론사의 미국특허 제5,932,219호는 D형 간염 바이러스의 전체 게놈, 전체 HDV 게놈의 cDNA 복제물의 훼밀리를 개시하고 있으며, 이들 cDNA 서열의 일부가 임상 샘플에서 바이러스의 존재를 진단하는 탐침으로 유용함을 교시하고 있다. 이 특허는 또한 백신 생산에 유용한 cDNA에 의해 코딩되는 단백질을 개시하였다. 특히 '219 특허는 p24 및 p27 바이러스 폴리펩타이드를 삽입한 D형 간염 백신을 개시하고 있다. 카이론사의 미국특허 제5,750,350호는 HDV 게놈의 ORF5에 의해 코딩되는 펩타이드를 포함하는 D형 간염 바이러스 분석에 유용한 키트를 청구하고 있다. 미국특허 제5,747,044호는 HDV 뉴클레오타이드 서열 또는 그 상보물의 ORF5내의 면역원적 폴리펩타이드를 포함하는, HDV에 대해 항체를 생성시키는 재조합적으로 생산된 면역원적 입자를 청구하고 있다.
Medeva Holdings B.V.에게 양도된 미국특허 제6,020,167호는 항HBsAg를 함유하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 만성 간염, 특히 B형 간염을 치료하는 방법을 개시하고 있다.
미국특허 제5,770,584호는 알킬 리피드 또는 알킬 리피드 유도체를 투여하는 것에 의한 간염 바이러스 감염의 치료방법을 개시하고 있다.
미국특허 제4,619,896호는 혈청을 계면활성제 및 임의로 항체-항원 해리제로 처리하는 것을 포함하는, 동물 혈액에서 델타 항원을 나출시키는 방법을 개시하고 있다. 혈액 유래된 델타 항원은 상이한 클래스의 D형 간염 바이러스 항체를 검출하고 결정하는데 있어서 진단제로 사용된다.
미합중국 법정 발명 등록 H1,345는 단백질-프레닐 트랜스페라제 저해제를 투여하는 것에 의한 간염 바이러스의 예방 또는 치료방법을 개시하고 있다,
Sureau 등의 Production of Infectious Hepatitis Delta Virus In Vitro and Neutralization with Antibodies Directed against Hepatitis B Virus Pre-S Antigens, Journal of Virology, Feb. 1992, p1241-1245는 시험관내에서 생산된 HDV 입자가 감염성이고 (ⅰ) 감염성 입자가 pre-S1 및 pre-S2 부위를 함유하는 HBV 외피 단백질로 코팅되어 있으며 (ⅱ) HBV 외피 단백질의 pre-S1 및 pre-S2 영역의 에피토프가 HDV 입자의 표면에 노출되어 있고 (ⅲ) 그들 에피토프에 대한 항체가 HDV에 대해 중화 활성을 가짐을 개시하고 있다.
뉴클레오사이드 유사체 L-FMAU[2'-플루오로-5-메틸-β-L-아라비노퓨라노실-우리딘]는 공지 화합물이고 세포 배양물에서 HBV 복제 및 세포 배양물 및 감염된 오리 모두에서 관련된 오리 B형 간염 바이러스에 대해 유의한 항바이러스 활성을 갖는 것으로 나타나 있다(Aguesse-Germon, S. 등 (1998) Antimicrob Agents Chemother 42, 369-76; Balakrishna Pai, S. 등 (1996) Antimicrob Agents Chemother 40, 380-6; Chu, C. K. 등 (1995) Antimicrob Agents Chemother 39, 979-81; Fu, L. 등 (1999) Biochem Pharmacol 57, 1351-9; Kotra, L. P. 등 (1997) J Med Chem 40, 3635-44; Kukhanova, M. 등 (1998) Biochem Pharmacol 55, 1181-7; Ma, T. 등 (1997) J Med Chem 40, 2750-4; Ma, T. 등 (1996) J Med Chem 39, 2835-43; Xu, A. S. 등 (1998) Biochem Pharmacol 55, 1611-9; Yao, G. Q. 등 (1996) Biochem Pharmacol 51, 941-7); Peek, S. 등 (2001) Hepatology 33, 254-66; Zhu, Y. 등 (2001) J. Virol 75, 311-22).
Chu 등의 미국특허 제5,587,362호 및 WO95/20595는 L-FMAU 및 HBV 치료를 위 한 그의 약제학적 조성물을 개시하고 청구하고 있으며, 화합물 합성의 상세한 설명을 제공하고 있다. Chu 등의 미국특허 제5,567,688호는 L-FMAU를 포함한 L-뉴클레오사이드를 이용한 HBV 치료방법을 청구하고 있다. Chu 등의 미국특허 제5,565,438호는 L-FMAU를 이용하여 엡스타인-바르 바이러스(EBV)에 감염된 인간을 치료하는 방법을 청구하고 있다. 미국특허 제5,808,040호 및 제5,753,789호는 화합물을 올리고뉴클레오타이드의 5'-말단, 3'-말단 또는 내부에 포함시킴으로써 올리고뉴클레오타이드를 안정화시키는 L-FMAU의 용도를 개시하고 있다. WO98/15375는 L-FMAU의 제조방법을 개시하고 있다.
L-FMAU는 만성 감염된 우드척에서 WHV 복제에 대한 매우 강력하고 신속하게 작용하는 항바이러스제로 나타나 있다(Korba, B. 등 (1999) Antivir. Res. 41, A54; Chu, C. 등 (1998) in Therapies for viral hepatitis, eds. Schinazi, R. & Sommadossi, J. (International Medical Press, Atlanta), Vol. pp 303-12; Peek, S. F. 등 (1997) Hepatology 26, 425A(Abstract 1187); Peek, S. F. 등 (2001) Hepatology 33, 254-66; Zhu, Y. 등 (2001) J. Virol 75, 311-22). 또한 L-FMAU는 혈청에서 WHV 표면항원의 저해를 유도하는 것으로 알려져 있다(Korba, B. 등 (1999) Antivir. Res. 41, A54; Chu, C. 등 (1998) in Therapies for viral hepatitis, eds. Schinazi, R. & Sommadossi, J. (International Medical Press, Atlanta), Vol. pp 303-12; Peek, S. B. 등 (1997) Hepatology 26, 425A and Peek, S. B. 등 (2000) Hepatology 33, 254-66). L-FMAU는 랫트 및 우드척에서 바람직한 약물동력학적 프로파일 및 충분한 경구 생체이용률을 가지므로 1일 1회 투여에 적 당한 것으로 나타나 있다(Wright, J. D. et al (1995) Pharm Res 12, 1350-3; Wright, J. D. 등 (1996) Biopharm Drug Dispos 17, 197-207; Witcher, J. W. 등 (1997) Antimicrob Agents Chemother 41, 2184-7).
델타형 간염 바이러스에 감염된 다수의 인간, 개체에 대한 델타형 간염 바이러스 감염의 파괴적인 영향 및 효과적인 치료법의 부재로 인해, 델타형 간염 바이러스 감염의 치료를 위한 새롭고 효과적인 방법 및 조성물이 절실히 요구되어 왔다.
따라서, 본 발명의 목적은 델타형 간염 바이러스에 감염된 인간을 포함한 숙주를 치료하기 위한 방법 및 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 추가 목적은 델타형 간염 바이러스 감염의 치료에 효과적인 화합물을 확인하는 방법을 제공하는 것이다.
발명의 요약
숙주에서 B형 간염 표면항원(HBsAg라 함)의 농도를 실질적으로 감소시키는 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체 또는 그의 프로드럭 또는 약제학적으로 허용되는 염의 투여가 그 숙주에서 델타형 간염 바이러스 감염의 치료에 유용하다는 것이 이제 밝혀졌다. 숙주에서 HBsAg의 실질적인 감소는 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체가 B형 간염 표면항원을 생체내 또는 시험관내에서 처리전 값에 비해 적어도 약 100배 이상, 바람직하게는 200 또는 500배로, 또는 적당한 표준 면역분석법, 예를 들어 인간 HBsAg의 상업적 분석법(AUSZYME™, Abbott Laboratories) 또는 Viral Immunology 6: 161, 169; Cote, P.J., C. Roneker, K. Cass, F. Schodel, D. Peterson, B. Tennant, F. DeNoronha, 및 J. Gerin, 1993에서 우드척 B형 간염 표면항원에 대해 기재된 것을 이용하여 혈청 또는 혈장에서 측정된 바로 생체내에서 밀리리터당 1 이하, 바람직하게는 0.5 또는 0.1 마이크로그램으로 감소시키는 것을 의미한다.
뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체가 델타형 간염 감염된 숙주에서 HBsAg를 유의하게 감소시키지 못하면(예: 3TC(β-L-2',3'-디데옥시-3'-티아사이티딘)), 그 뉴클레오사이드는 델타형 간염 바이러스 치료에 효과적이지 못하다는 것은 이미 알려져 있었다. 그러나, HBV의 생활사가 바이러스 단백질을 별도로 조절하는 점에서 독특하고 HBsAg가 다수의 대체 전사물로부터 생산가능함이 주어졌음에도, 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체에 의한 HBsAg의 감소(제거에 반대되는)가 HDV에 대한 치료효과로 해석될 수 있는지 여부를 포함하여, 무슨 인자가 HDV의 궁극적인 치료를 이루는데 필수적인지 현재까지 알려져 있지 않았다. 또한, 혈청 농도에 의해 측정되는 이러한 원하는 결과를 달성하는데 필요한 HBsAg 저해 정도 또는 지속적인 효과를 위해 필요한 치료기간에 대한 정보는 이전에는 존재하지 않았다. 공지된 뉴클레오사이드는 HBsAg 생산의 모든 주형을 표적으로 하지는 않으며 어느 것도 혈청 HBsAg 농도를 통상적으로 저해하지 못하는 것으로 알려져 있었다. 결국, HBsAg 저해가 델타형 간염 바이러스 형성에 대해 효과적이기 위해서는 숙주 간 세포가 HBV 및 HDV 감염을 지원하는 B형 간염이외의 헤파dna(hepadna) 바이러스 모두로 동시감염되어야 하고, 동시감염되지 않았으나 HBsAg를 생성하는 간 세포 부분은 각 경우에 알려져 있지 않다. HBV 단독으로 감염된 간 세포는 혈청 HBsAg 농도에 기여할 수 있지만, 이들 세포에서 HBsAg의 저해는 델타형 간염 바이러스 형성에 영향을 미치지 못한다.
패러다임 뉴클레오사이드 및 비제한적인 예인 L-FMAU를 통해, 뉴클레오사이드가 생체내 또는 시험관내에서 혈청 또는 혈장 HBsAg 농도를 처리전 값 보다 약 100배 이하로 실질적이고도 지속적으로 감소하도록 HBsAg의 생산을 저해하면, 이는 델타형 간염 바이러스 치료에 유용하다는 것이 현재 최초로 확립되었다.
따라서, 본 발명의 일면은 감염된 숙주에게 HBsAg를 생체내 또는 시험관내에서 처리전 값에 비해 적어도 약 100배 이상, 바람직하게는 200 또는 500배로 감소시키거나; 표준 면역분석법(예를 들어 인간 HBsAg의 상업적 분석법(AUSZYME™, Abbott Laboratories) 또는 Viral Immunology 6: 161, 169; Cote, P.J., C. Roneker, K. Cass, F. Schodel, D. Peterson, B. Tennant, F. DeNoronha, 및 J. Gerin, 1993에서 우드척 B형 간염 표면항원에 대해 기재된 것을 이용하여 혈청 또는 혈장에서 측정된 바로 밀리리터당 약 1 마이크로그램 이하, 바람직하게는 0.5 또는 0.1 마이크로그램으로 감소시키는, 유효량의 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체를 투여하는 것을 포함하는 HDV 감염된 숙주, 특히 인간의 치료방법을 제공한다.
다른 예에서, 숙주에서 preS1 항원의 농도를 실질적으로 감소시키는 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체의 투여가 그 숙주에서 델타형 간염 바이러스 감염의 치료에 유용함이 이제 밝혀졌다. 숙주에서 preS1 항원을 실질적으로 감소시킨다는 것은 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체가 B형 간염 표면항원을 Deepen R, Heermann KH, Uy A, Thomssen R, Gerlich WH. "Assay of preS epitopes and preS1 antibody in hepatitis B virus carriers and immmune persons." Med Microbiol Immunol (Berl). 1990; 179(1): 49-60의 것을 포함하여 어떠한 적당한 분석법을 사용하여, 생체내 또는 시험관내에서 처리전 값에 비해 적어도 약 100배 이상, 바람직하게는 200 또는 500배로 감소시키는 것을 의미한다.
또다른 면은 감염된 숙주에서 HBsAg를 생체내 또는 시험관내에서 처리전 값에 비해 적어도 약 100배 이상, 바람직하게는 200 또는 500배로 감소시키거나; 표준 면역분석법(예를 들어 인간 HBsAg의 상업적 분석법(AUSZYME™, Abbott Laboratories) 또는 Viral Immunology 6: 161, 169; Cote, P.J., C. Roneker, K. Cass, F. Schodel, D. Peterson, B. Tennant, F. DeNoronha, 및 J. Gerin, 1993에서 우드척 B형 간염 표면항원에 대해 기재된 것을 포함하는 어떠한 적당한 분석법을 이용하여 혈청 또는 혈장에서 측정된 바로 밀리리터당 약 1 마이크로그램 이하, 바람직하게는 0.5 또는 0.1 마이크로그램으로 감소시키는, 유효량의 단백질-프레닐 트랜스페라제 저해제 또는 티모신-알파-1이 아닌, 비-뉴클레오사이드 유기 소분자(즉, 펩타이드, 단백질, 항체, 호르몬, 리보자임, 핵산, 또는 사이토카인과 같은, 자연에서 발견되는 생물학적 물질 또는 원하는 활성을 보유하는 그의 유도체 또는 유사체 이외의 분자량 500 미만의 분자)를 투여하는 것을 포함하는, HDV 감염된 숙주를 치료하는 방법을 제공한다.
일례에서, 델타형 간염 바이러스 감염을 치료하기 위하여 유효량의 L-FMAU 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭을 그를 필요로 하는 숙주에게 투여한다. 바람직한 예에서, L-FMAU는 그의 상응하는 β-D-에난티오머의 부재하에(즉, 에난티오머적으로 농후화되거나 에난티오머적으로 순수한 형태로) 그를 필요로 하는 숙주에게 투여한다.
다른 예에서, L-FMAU는 델타형 간염 감염된 숙주를 치료하기 위한 또다른 뉴클레오사이드, 뉴클레오사이드 유사체 또는 비-뉴클레오사이드가 될 수 있는, 적어도 하나의 다른 HBsAg 또는 preS1 항원 저하제와 함게 투여된다. 또다른 예에서, 델타형 간염 치료제는 항-B형 간염 약물이 B형 간염 표면항원을 저하시키는지 여부와 무관하게, B형 간염에 대해 활성을 갖는 약물과 함께 투여된다.
또다른 예에서, HDV 감염을 지원하는 B형 간염외의 헤파dna 바이러스의 표면항원을 감소시키는 뉴클레오사이드, 뉴클레오사이드 유사체, 또는 본 명세서에 정의된 다른 소분자를 포함하는 화합물을 투여하는 것을 포함하는 델타형 간염의 치료방법을 제공한다.
또다른 예에서, 화합물이 B형 간염 표면항원의 발현을 생체내 또는 시험관내에서 처리전 값에 비해 100배 이상(바람직하게는 200 또는 500배)으로; 바람직하게는 표준 면역분석법(예를 들어 인간 HBsAg의 상업적 분석법(AUSZYME™, Abbott Laboratories) 또는 Viral Immunology 6: 161, 169; Cote, P.J., C. Roneker, K. Cass, F. Schodel, D. Peterson, B. Tennant, F. DeNoronha, 및 J. Gerin, 1993에서 우드척 B형 간염 표면항원에 대해 기재된 것, 여기에 제공된 방법 또는 다르게 이용가능한 방법을 이용하여 혈청 또는 혈장에서 측정된 바로 밀리리터당 1 마이크로그램 이하(바람직하게는 0.5 또는 0.1 마이크로그램)로 저해하는지 여부를 측정 하는 것을 포함하는 HDV 감염의 치료에 유효한, 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체를 포함한 화합물의 스크리닝 방법을 제공한다.
또다른 예에서, 화합물이 B형 간염 표면항원의 발현을 생체내 또는 시험관내에서 처리전 값에 비해 100배 이상(바람직하게는 200 또는 500배)으로; 또는 표준 면역분석법(예를 들어 인간 HBsAg의 상업적 분석법(AUSZYME™, Abbott Laboratories) 또는 Viral Immunology 6: 161, 169; Cote, P.J., C. Roneker, K. Cass, F. Schodel, D. Peterson, B. Tennant, F. DeNoronha, 및 J. Gerin, 1993에서 우드척 B형 간염 표면항원에 대해 기재된 것, 여기에 제공된 방법 또는 다르게 이용가능한 방법을 이용하여 혈청 또는 혈장에서 측정된 바로 밀리리터당 1 마이크로그램 이하(바람직하게는 0.5 또는 0.1 마이크로그램)로 저해하는지 여부를 측정하는 것을 포함하는 HDV 감염의 치료에 유효한, 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체를 포함한 화합물의 스크리닝 방법을 제공한다.
또다른 예에서, 화합물이 표준 면역분석법을 이용하여 혈청 또는 혈장에서 측정된 preS1 표면항원의 발현을 처리전 값에 비해 100배 이상(바람직하게는 200 또는 500배)으로 저해하는지 여부를 측정하는 것을 포함하는 HDV 감염의 치료에 유효한, 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체를 포함하는 화합물의 스크리닝 방법을 제공한다.
본 발명은 모델 활성 화합물로서 L-FMAU가 HDV 비리온의 팩키징 및 방출을 효과적으로 저해하는 충분한 양으로 B형 간염 표면항원의 발현을 저해하다는 기본적인 발견에 기초한다. 여기에 L-FMAU가 B형 간염 표면항원의 발현을 저해함으로 써 HDV 바이러스혈증 정도의 실질적 감소를 유발한다는 증거가 제시된다.
또다른 예에서, 숙주에서 HDV 감염은 B형 간염 표면항원 또는 preS1 항원의 RNA 전사물에 표적화된 적어도 하나의 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 단독으로 또는 L-FMAU, 또는 다른 HBsAg 또는 preS1 항원 저하 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체와 함께 투여함으로써 치료될 수 있다. 용어 "올리고뉴클레오타이드"는 DNA 및 RNA의 데옥시리보뉴클레오타이드 및 리보뉴클레오타이드 구조와 같은 자연에서 발견되는 타입의 올리고머성 핵산 부위 및 자연에서 발견되는 핵산에 결합할 수 있는 인공 유사체를 모두 포함한다. 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 포스포디에스테르 결합에 의해 연결된 리보뉴클레오타이드 또는 데옥시리보뉴클레오타이드 모노머, 또는 메틸 포스포네이트, 포스포로티오에이트, 포스포로아미데이트, 포스포로디티오에이트, 또는 기타 올리고뉴클레오타이드 안정화 결합에 의해 연결된 유사체에 기초할 수 있다. 그들은 또한 변형된 염기 구조 또는 다른 변형을 갖지만, 자연적으로 발생하는 DNA 및 RNA 구조에 결합하는 능력을 여전히 보유하는 모노머 부위를 포함할 수 있다. 그러한 올리고뉴클레오타이드는 당업계에 잘 알려진 방법, 예를 들어 퍼킨-엘머/어플라이드 바이오시스템(Foster City, Calif.)으로부터 입수가능한 상업적으로 입수가능한 기계 및 시약을 이용하여 제조할 수 있다.
HBV 표면항원 또는 preS1 유전자 서열을 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 올리고뉴클레오타이드가 유전자의 AUG 개시 코돈의 약 25 염기내에서 혼성화하도록 선택되는 것이 바람직하다. HBV 표면항원 및 preS1 유전자에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 예는 Korba 등의 미국특허 제5,646,262호에 기재되어 있으며, (서열번호 1) CTTAGGACTACACTACAAGAG; (서열번호 2) GACTACACTACAAGAG; (서열번호 3) AGGACTACACTACAAGAGGTA; (서열번호 4) TACACTACAAGAGGTA; (서열번호 5) TCTTCCCCAGGATCCT; (서열번호 6) TTTGGGGCGGACATTG; (서열번호 7) CCTAAGAACAGTTGTT; (서열번호 8) GTACAAGTCGCGTCCCAGG; (서열번호 9) TAGGAGCTCTTCTAAC; (서열번호 10) TATTCCCTAGTCTTGT; (서열번호 11) CAAGAGGTACAAGTC; (서열번호 12) CGACCACCTTTCTAAGACGGG; (서열번호 13) CCTTTCTAAGACGGG; (서열번호 14) TAAGACGGGGTA; (서열번호 15) GACGGGGTACGACAT; (서열번호 16) GTACGACATCTAGAA를 포함한다. HDV 감염 치료를 위한 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 다른 예는 Isis Pharmaceuticals, Inc.의 미국특허 제5,985,662호에 개시되어 있으며 (서열번호 17) CCTGATGTGATGTTCTCCAT; (서열번호 18) GAACTGGAGCCACCAGCAGG; (서열번호 19) GAAAGATTCGTCCCCATGC; 및 (서열번호 20) CCACTGCATGGCCTGAGGATG를 포함한다.
본 발명의 기타 및 추가 측면, 특징 및 장점은 하기하는 발명의 바람직한 예의 기술로부터 명백해질 것이다. 이들 예는 개시 목적으로 제공된다.
도 1은 L-FMAU(2'-플루오로-5-메틸-β-L-아라비노퓨라노실-우리딘을 나타낸다.
도 2는 1-O-아세틸-2,3,5-트리-O-벤조일-β-L-리보퓨라노스(화합물 10)의 제조를 도식적으로 나타낸다.
도 3은 1-O-아세틸-2,3,5-트리-O-벤조일-β-L-리보퓨라노스(화합물 10)의 다른 제조를 도식적으로 나타낸다.
도 4는 1,3,5-트리-O-벤조일-2-데옥시-2-플루오로-β-L-아라비노퓨라노스(화합물 13)의 제조를 도식적으로 나타낸다.
도 5는 5'-벤조일 보호되고 비보호된 2'-데옥시-2-플루오로-β-L-아라비노퓨라노실]-5-메틸 우리딘(화합물 17-18)의 제조방법을 나타낸다.
도 6A는 우드척에서 L-FMAU의 처리 주수 대 혈청에서 HDV RNA ㎖당 게놈 균등물의 선 그래프로서, 20주에 걸쳐 L-FMAU로 처리된 HDV-감염된 우드척에서 HDV RNA의 감소를 보여준다. WHV로 만성 감염된 우드척을 실험실 감염성 클론으로부터 유래된 우드척-적응된 HDV 접종물에 감염시켰다. 만성도를 치료 개시전 적어도 11개월동안 적어도 74%의 채혈일 동안 검출가능한 HDV 바이러스혈증에 의해 확립하였다.
도 6B는 우드척에서 L-FMAU의 처리 주수 대 ㎖당 게놈 균등물에서 우드척 혈청 WHV-DNA의 선 그래프이다. WHV로 만성 감염된 우드척을 실험실 감염성 클론으로부터 유래된 우드척-적응된 HDV 접종물에 감염시켰다. 만성도를 치료 개시전 적어도 11개월동안 적어도 74%의 채혈일 동안 검출가능한 HDV 바이러스혈증에 의해 확립하였다. 그 결과 L-FMAU로 치료시 혈청 WHV-DNA가 유의하게 감소되었다.
도 6C는 우드척에서 L-FMAU의 처리 주수 대 우드척 혈청 WHsAg ㎍/㎖의 선 그래프이다. WHV로 만성 감염된 우드척을 실험실 감염성 클론으로부터 유래된 우드척-적응된 HDV 접종물에 감염시켰다. 만성도를 치료 개시전 적어도 11개월동안 적어도 74%의 채혈일 동안 검출가능한 HDV 바이러스혈증에 의해 확립하였다. 그 결과 그 결과 L-FMAU로 치료시 혈청 WHsAg가 유의하게 감소되었다.
도 7A는 L-FMAU 부재시 20주에 걸쳐 HDV-감염된 우드척의 혈청에서 HDV RNA의 존재를 보여주는 선 그래프이다.
도 7B는 L-FMAU 부재시 20주에 걸쳐 우드척에서 WHV-DNA의 혈청 농도를 보여주는 선 그래프이다.
도 7C는 L-FMAU 부재시 20주에 걸쳐 우드척에서 WHsAg의 혈청 농도를 보여주는 선 그래프이다.
도 8은 ㎖당 게놈 균등물에서 평균 혈청 HDV RNA 대 주수의 선 그래프이다. 그래프는 5 마리의 무처리 우드척(원 데이터 점)에서 평균 혈청 HDV 농도를 L-FMAU-처리된 우드척 4878, 4879, 및 4883(사각형 데이터 점)의 것(WHsAg 농도가 치료 동안 100배 이상 감소하였다(도 6B))과 비교한다. 그래프는 치료 시작시 이들 동일한 동물에서의 농도 및 5 마리의 무처리 동물에서 아무 때나의 농도와 비교하여 8 주간의 치료에 의해 이들 3 마리의 동물에서 HDV RNA의 극적인 감소를 보여준다.
본 발명은 B형 간염 표면항원(HBsAg) 또는 preS1 항원의 발현을 실질적이고도 지속적으로 감소시키는, 유효량의 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체 또는 그의 프로드럭 또는 약제학적으로 허용되는 염을 투여하는 것에 의한, 숙주, 특히 인간에서 델타형 간염 바이러스(HDV) 감염을 치료하는 방법이다. HBV의 복제 를 저해하는 것으로 알려진 화합물인 라미부딘이 예기치 않게도 환자에서 HDV-RNA 농도를 저하시키지 못하는 것은 HBV의 성공적인 치료가 반드시 HDV의 성공적인 치료와 상호연관되어 있지는 않음을 증명한다. 본 발명은 L-FMAU를 포함한, B형 간염 표면항원(HBsAg) 또는 preS1 항원의 발현을 실질적이고도 지속적으로 감소시키는 화합물이 HDV 복제의 강력한 저해제라는 놀라운 발견에 기초한 것이다. L-FMAU는 특히 B형 간염 표면항원 발현의 강력한 억제제이다. 본 발명은 따라서 HBsAg 또는 preS1 항원의 실질적이고도 지속적인 저해가 바이러스에 감염된 숙주에서 HDV 바이러스혈증을 유의하게 감소시킬 수 있다는 기본적인 발견을 제시한다. 다르게는, HDV 감염을 지원하는 B형 간염 이외의 헤파dna 바이러스와 함께 델타형 간염으로 감염된 숙주를 그 헤파dna 바이러스의 표면항원 발현을 실질적으로 저해시킴으로써 치료할 수 있다.
본 발명의 일례에서, B형 간염 표면항원 또는 preS1 항원의 발현을 실질적으로 저해하는 유효량의 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 프로드럭 또는 염을 임의로 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 투여하는 단계를 포함하는, HDV로 감염된 숙주를 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 예에서, 유효량의 L-FMAU 또는 그의 약제학적으로 허용되는 프로드럭 또는 염을 임의로 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 투여하는 단계를 포함하는 HDV에 감염된 숙주를 치료하는 방법을 제공한다.
또다른 예에서, 임의로 약제학적으로 허용되는 담체중에, L-FMAU, 또는 유사한 방식으로 작용하는 또다른 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 프로드럭 또는 염을 그를 필요로 하는 숙주에게, B형 간염 표면항원 또는 preS1 항원의 농도를 감소시키는 적어도 하나의 다른 화합물과 배합하여 투여한다.
본 발명의 추가 예에서, a) 시험 화합물을 B형 간염 바이러스의 동물 모델, 예를 들어 동양 우드척에게 투여하고; b) 시험 화합물로 처리된 동물에서 발현된, 간염 표면항원 또는 preS1 항원을 적절하게 모니터링하고; c) 시험 화합물로 처리된 동물에서 간염 표면항원 또는 preS1 항원의 농도를 시험 화합물로 처리되지 않은 대조동물과 비교하고; d) 간염 표면항원 또는 preS1 항원의 농도가 시험 화합물로 처리되지 않은 동물에서의 간염 표면항원의 농도보다 유의하게, 바람직하게는 생체내 또는 시험관내에서 처리전 값에 비해 100배 이상으로; 또는 표준 면역분석법(인간 HBsAg에 대한 상업적 분석법(AUSZYME™, Abbott Laboratories) 또는 Viral Immunology 6: 161, 169; Cote, P.J., C. Roneker, K. Cass, F. Schodel, D. Peterson, B. Tennant, F. DeNoronha, and J. Gerin 1993에 우드척 B형 간염 표면항원에 대해 기재된 것을 이용하여 혈청 또는 혈장에서 측정된 바로, 밀리리터당 1 마이크로그램 이하로 낮은 단계 (c)의 화합물을 선별하는 단계를 포함하는,
HDV 감염의 치료에 유효한 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체를 포함하는 화합물을 확인하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또다른 추가예에서, a) 시험 화합물을 우드척 간염 바이러스 및 우드척-적응된 HDV 접종물에 만성 감염된 우드척에게 투여하고; b) 시험 화합물로 처리된 동물에서 발현된, 간염 표면항원 또는 preS1 항원의 농도를 모니터링하고; c) 시험 화합물로 처리된 동물에서 간염 표면항원 또는 preS1 항원의 농도를 시험 화합물로 처리되지 않은 대조동물과 비교하고; d) 간염 표면항원 또는 preS1 항원의 농도가 시험 화합물로 처리되지 않은 동물에서 간염 표면항원의 농도보다 유의하게, 바람직하게는 생체내 또는 시험관내에서 처리전 값에 비해 100배 이상으로; 또는 표준 면역분석법(인간 HBsAg에 대한 상업적 분석법(AUSZYME™, Abbott Laboratories) 또는 Viral Immunology 6: 161, 169; Cote, P.J., C. Roneker, K. Cass, F. Schodel, D. Peterson, B. Tennant, F. DeNoronha, and J. Gerin 1993에 우드척 B형 간염 표면항원에 대해 기재된 것을 이용하여 혈청 또는 혈장에서 측정된 바로, 밀리리터당 1 마이크로그램 이하로 낮은 단계 (c)의 화합물을 선별하는 단계를 포함하는,
HDV 감염의 치료에 유효한 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체를 포함하는 화합물을 확인하는 방법을 제공한다.
바람직한 예에서, 시험 화합물로 처리된 동물에서 간염 표면항원 또는 preS1 항원 및 D형 간염 RNA의 농도를 동시에 감소시키는 화합물을 선별하여야 한다.
본 발명의 다른 예에서, a) 시험 화합물을 인간 B형 간염 바이러스로 형질감염된 시험관내 세포, 예를 들어, 2.2.15 세포(Sells MA 등(1988) J. Virol. 62: 2836-2844. Korba BE and Gerin JL(1992) Antiviral Res. 19: 55-70. HB611: Ueda K. 등(1989) Virology 169: 213-216)에게 투여하고; b) 시험 화합물로 처리된 동물에서 발현된 간염 표면항원 또는 preS1 항원을 모니터링하고; c) 시험 화합물로 처리된 동물에서 간염 표면항원 또는 preS1 항원의 농도를 시험 화합물로 처리되지 않은 대조동물과 비교하고; d) 간염 표면항원 또는 preS1 항원의 농도가 시험 화합물로 처리되지 않은 동물에서의 간염 표면항원의 농도보다 유의하게, 바람직하게는 생체내 또는 시험관내에서 처리전 값에 비해 100배 이상, 바람직하게는 200 또는 500배 낮은 단계 (c)의 화합물을 선별하는 단계를 포함하는,
HDV 감염의 치료에 유효한 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체를 포함하는 화합물을 확인하는 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 예에서, a) 시험 화합물을 B형 간염 표면항원 또는 preS1 항원 및 델타형 간염 바이러스를 모두 발현하도록 형질감염된 시험관내 세포에게 투여하고(예를 들어, Casey, J.L., A.G. Polson, B.L. Bass, J.L. Gerin; p290-294: Viral Hepatitis and Liver Disease; M. Rizzetto 등, eds. Edizione Minerva Medica, Turin, 1997); b) 시험 화합물로 처리된 세포의 세포내에서 발현되어 배지로 분비된 B형 간염 표면항원 또는 preS1 항원 및 델타형 간염 바이러스의 농도를 모니터링하고; c) 시험 화합물로 처리된 세포로부터 분비된 B형 간염 표면항원 또는 preS1 항원 및 델타형 간염 바이러스의 농도를 시험 화합물로 처리되지 않은 대조세포와 비교하고; d) 간염 표면항원 또는 preS1 및 델타형 간염 바이러스의 분비 농도가 시험 화합물로 처리되지 않은 세포로부터 분비된 B형 간염 표면항원의 농도보다 유의하게 낮은 단계 (c)의 화합물을 선별하는 단계를 포함하는,
HDV 감염의 치료에 유효한 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체를 포함하는 화합물을 확인하는 방법을 제공한다.
Ⅰ. 정의
본 명세서에서 사용된, 용어 "HBsAg" 및 "B형 간염 표면항원"은 특히 인간 B형 간염 바이러스(HBV) 및 우드척 간염 바이러스(WHV)를 포함한, 헤파dna바이러스 훼밀리의 어느 구성원의 표면항원 단백질을 가리키는 것이다.
본 명세서에서 사용된, 용어 "에난티오머적으로 순수한"은 적어도 약 95%, 바람직하게는 약 97%, 98%, 99% 또는 100%의 그 뉴클레오사이드의 단일 에난티오머를 포함하는 뉴클레오사이드 조성물을 가리킨다.
본 명세서에서 사용된, 용어 "숙주"는 인간 및 다른 포유동물을 포함하지만 이들로 제한되지는 않는 델타형 간염 바이러스로 감염될 수 있는 모든 동물을 가리킨다.
용어 "약제학적 염"은 모화합물의 생물학적 활성을 보유하고 원치않는 독성적 영향을 주지 않는 염을 가리킨다. 약제학적으로 허용되는 염은 약제학적으로 허용되는 무기 또는 유기 염기 및 산으로부터 유래된 것들을 포함한다. 적당한 염은 약제학적 분야에 잘 알려진 수많은 다른 산들중 칼륨 및 나트륨과 같은 알칼리 금속, 칼슘, 마그네슘과 같은 알칼리토금속으로부터 유래된 것들 및 암모늄염을 포함한다.
본 명세서에서 사용된, 용어 "뉴클레오사이드"는 어느 원하는 치환체와 결합될 수 있는, 탄수화물 또는 슈도 탄수화물, 바람직하게는 펜토스, 또는 슈가 유사체 또는 하나 이상의 헤테로원자를 포함할 수 있는 변형된 탄소 환 시스템과 N-글라이코시딕 또는 카보사이클릭 결합된 헤테로사이클릭 질소-함유 염기, 바람직하게는 퓨린 또는 피리미딘으로서, 천연 또는 합성일 수 있고 원하는 결과를 얻을 수 있는 원하는 입체화학을 나타낼 수 있는 것을 가리킨다.
본 명세서에 사용된, 용어 "뉴클레오사이드 유사체"는 하이드록실 그룹을 포함하여 사이클릭 또는 어사이클릭 쇄상의 치환체를 포함할 수 있는, 헤테로원자를 포함할 수 있는 어사이클릭 탄소쇄와 N-글라이코시딕 또는 카보사이클릭 결합된 헤테로사이클릭 질소-함유 염기, 바람직하게는 퓨린 또는 피리미딘을 가리킨다.
용어 "프로드럭"은 명세서를 통하여 환자에게 투여시 모 활성 화합물을 제공하는 활성 화합물, 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체의 모든 유도체를 기재하기 위해 사용된다.
본 명세서에서 사용된, 용어 퓨린 또는 피리민딘 염기는 6-알킬퓨린 및 N6-알킬퓨린, N6-아실퓨린, N6-벤질퓨린, 6-할로퓨린, N6-비닐퓨린, N6-아세틸레닉 퓨린, N6-아실 퓨린, N6-하이드록시알킬 퓨린, N6-티오알킬 퓨린, N2-알킬퓨린, N4-알킬피리미딘, N4-아실피리미딘, 4-벤질피리미딘, N4-할로피리미딘, N4-아세틸레닉 피리미딘, 4-아실 및 N4-아실 피리미딘, 4-하이드록시알킬 피리미딘, 4-티오알킬 피리미딘, 티민, 사이토신, 6-아자사이토신을 포함한 6-아자피리미딘, 2- 및/또는 4-머캅토피리미딘, 우라실, C5-알킬피리미딘, C5-벤질피리미딘, C5-할로피리미딘, C5-비닐피리미딘, C5-아세틸레닉 피리미딘, C5-아실 피리미딘, C5-하이드록시알킬 퓨린, C5-아미도피리미딘, C5-시아노피리미딘, C5-니트로피리미딘, C5-아미노피리미딘, N2-알킬퓨린, N2-알킬-6-티오퓨린, 5-아자사이티디닐, 5-아자우라실릴, 트리아졸로피리디닐, 이미다졸로피리디닐, 피롤로피리미디닐, 및 피라졸로피리미디닐을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다. 염기상의 기능성 산소 및 질소 그룹은 필요하거나 원하는대로 보호될 수 있다. 적당한 보호 그룹은 당업자에게 잘 알려져 있으며, 트리메틸실릴, 디메틸헥실실릴, t-부틸디메틸실릴 및 t-부틸디페닐실릴, 트리틸, 알킬 그룹, 아세틸 및 프로피오닐과 같은 아실 그룹, 메탄설포닐, 및 p-톨루엔설포닐을 포함한다. 염기의 예는 사이토신, 5-플루오로사이토신, 5-브로모사이토신, 5-요오도사이토신, 우라실, 5-플루오로우라실, 5-브로모우라실, 5-요오도우라실, 5-메틸우라실, 티민, 아데닌, 구아닌, 이노신, 잔틴, 2,6-디아미노퓨린, 6-아미노푸린, 6-클로로퓨린 및 2,6-디클로로퓨린, 6-브로모퓨린, 2,6-디브로모퓨린, 6-요오도퓨린, 2,6-디요오도퓨린, 5-브로모비닐사이토신, 5-브로모비닐우라실, 5-브로모에테닐사이토신, 5-브로모에테닐우라실, 5-트리플루오로메틸사이토신, 5-트리플루오로메틸우라실을 포함한다.
본 명세서에서 사용되고 달리 정의되지 않는 한 용어 "보호된"은 산소 또는 질소가 위치한 분자의 다른 부위의 유도체화중 추가적인 반응을 방지하기 위하여 산소 또는 질소 원자에 부가되는 그룹을 가리킨다. 매우 다양한 산소 및 질소 보호 그룹이 유기합성 분야의 당업자에게 알려져 있다.
본 명세서에서 사용되고 달리 특정되지 않는 한 용어 알킬은 전형적으로 C1 내지 C18의 포화 직쇄, 분지쇄, 또는 사이클릭, 일차, 이차, 또는 삼차 탄화수소를 가리키며, 특히 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, t-부틸, 펜틸, 사이클로펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, 헥실, 이소헥실, 사이클로헥실, 사이클로헥실메틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 및 2,3-디메틸부틸을 포함한다. 알킬 그룹은 비보호되거나 당업자에게 공지된 바와 같이, 예를 들어 본 명세서에 참고로 인용되는 Greene 등, "Protective Groups in Organic Synthesis," John Wiley and Sons, Second Edition, 1991에 교시된 바와 같이, 필요에 따라 보호된 하이드록실, 아미노, 알킬아미노, 아릴아미노, 알콕시, 아릴옥시, 니트로, 시아노, 설폰산, 설페이트, 포스폰산, 포스페이트, 또는 포스포네이트로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 부위로 임의로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용되고 달리 특정되지 않는 한 용어 "저급 알킬"은 C1 내지 C4 포화 직쇄 또는 분지쇄 알킬 그룹을 가리킨다.
본 명세서에서 사용되고 달리 특정되지 않는 한 용어 아릴은 페닐, 비페닐, 또는 나프틸, 바람직하게는 페닐을 가리킨다. 아릴 그룹은 비보호되거나 당업자에게 공지된 바와 같이, 예를 들어 Greene 등, "Protective Groups in Organic Synthesis," John Wiley and Sons, Second Edition, 1991에 교시된 바와 같이, 필요에 따라 보호된 하이드록실, 아미노, 알킬아미노, 알콕시, 아릴옥시, 니트로, 시아노, 설폰산, 설페이트, 포스폰산, 포스페이트, 또는 포스포네이트로 구성된 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 부위로 임의로 치환될 수 있다.
용어 알크아릴 또는 알킬아릴은 아릴 치환체를 갖는 알킬 그룹을 가리킨다.
용어 아르알킬 또는 아릴알킬은 알킬 치환체를 갖는 아릴 그룹을 가리킨다.
본 명세서에서 사용되는 용어 할로는 클로로, 브로모, 요오도, 및 플루오로를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는, 용어 아실은 식 -C(O)R'(여기서, R'은 알킬; 아릴, 알크아릴, 아르알킬, 헤테로사이클릭, 메톡시메틸을 포함하는 알콕시알킬; 벤질을 포함하는 아릴알킬; 페녹시메틸과 같은 아릴옥시알킬; 할로겐, C1 내지 C4 알킬 또는 C1 내지 C4 알콕시, 또는 아미노산 잔기로 임의로 치환된 페닐을 포함하는 아릴이다)의 부위를 가리킨다.
용어 아미노산은 자연 발생 또는 합성 아미노산을 포함하고 알라닐, 발리닐, 류시닐, 이소류시닐, 프롤리닐, 페닐알라닐, 트립토파닐, 메티오닐, 글라이시닐, 세리닐, 트레오니닐, 시스테이닐, 타이로시닐, 아스파라기닐, 글루타미닐, 아스파토일, 글루타로일, 라이시닐, 아르기니닐, 및 히스티디닐을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용된 용어 헤테로사이클릭은 환 시스템에 적어도 하나의 황, 산소 또는 질소를 포함하는 환 부위를 가리킨다. 비제한적 예는 퓨릴, 피리딜, 피리미딜, 티에닐, 이소티아졸릴, 이미다졸릴, 테트라졸릴, 피라지닐, 벤조퓨라닐, 벤조티오페닐, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 벤조티에닐, 이소벤조퓨릴, 피라졸릴, 인돌릴, 이소인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 퓨리닐, 카바졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 1,2,4-티아디아졸릴, 이소옥사졸릴, 피롤릴, 퀴나졸릴, 피리다지닐, 피라지닐, 신놀리닐, 프탈라지닐, 퀴녹살리닐, 잔티닐, 하이포잔티닐, 및 프테리디닐이다. 헤테로사이클릭 염기상의 기능성 산소 및 질소 그룹은 필요하거나 원하는대로 보호될 수 있다. 적당한 보호 그룹은 당업자에게 잘 알려져 있으며, 트리메틸실릴, 디메틸헥실실릴, t-부틸디메틸실릴 및 t-부틸디페닐실릴, 트리틸 또는 치환된 트리틸, 알킬 그룹, 아세틸 및 프로피오닐과 같은 아실 그룹, 메탄설포닐, 및 p-톨루엔설포닐을 포함한다. 헤테로사이클릭 그룹은 플루오로, 요오도, 브로모, 클로로 및 사이클로프로필을 포함하는 저급 알킬을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는 어느 적당한 치환체로 치환될 수 있다.
용어 친지성 프로드럭은 뉴클레오사이드를 5'-하이드록실 그룹을 갖는 모 뉴클레오사이드 보다 더 친지성이게 하는 5'-하이드록실 위치의 공유결합 치환체를 함유하는 뉴클레오사이드를 가리킨다.
Ⅱ. 활성 화합물
숙주에서 B형 간염 표면항원(본 명세서에서 HBsAg라고 함)의 농도를 생체내 또는 시험관내에서 처리전 값에 비해 적어도 약 100배 이상, 바람직하게는 200 또는 500배로; 바람직하게는 생체내에서 밀리리터당 1 마이크로그램 이하, 바람직하게는 0.5 또는 0.1 마이크로그램으로 감소시키는 본 명세서에서 특정된 뉴클레오사이드, 뉴클레오사이드 유사체, 또는 특정 비-뉴클레오사이드 또는 그의 프로드럭 또는 약제학적으로 허용되는 염의 투여가 그 숙주에서 델타형 바이러스 감염의 치료에 유용하다는 것이 발견되었다. 뉴클레오사이드가 요구되는 최소 농도로 HBsAg 농도를 감소시키는 능력은 본 명세서에 상세히 기재된 방법 또는 기타 공지된 방법에 의해 용이하게 측정될 수 있다.
숙주에서 preS1 항원의 농도를 생체내 또는 시험관내에서 처리전 값에 비해 적어도 약 100배 이상, 바람직하게는 200 또는 500배로 감소시키는 뉴클레오사이 드, 뉴클레오사이드 유사체, 또는 특정 비-뉴클레오사이드 또는 그의 프로드럭 또는 약제학적으로 허용되는 염의 투여가 그 숙주에서 델타형 바이러스 감염의 치료에 유용하다는 것이 발견되었다. 뉴클레오사이드가 요구되는 최소 농도로 preS1 농도를 감소시키는 능력은 공지된 방법에 의해 용이하게 측정될 수 있다.
뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체가 델타형 간염 감염된 숙주에서 HBsAg 농도를 유의하게 감소시키지 못하면(예: 3TC(2',3'-디데옥시-3'-티아사이티딘), 그 뉴클레오사이드는 델타형 간염 바이러스 치료에 효과적이지 못하다는 것이 이미 알려져 있었다. 그러나, 반대, 즉 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체가 그 농도를 생체내 또는 시험관내에서 처리전 값에 비해 100배 이상으로 또는 표준 면역분석법(인간 HBsAg에 대한 상업적 분석법(AUSZYME™, Abbott Laboratories) 또는 Viral Immunology 6: 161, 169; Cote, P.J., C. Roneker, K. Cass, F. Schodel, D. Peterson, B. Tennant, F. DeNoronha, and J. Gerin 1993에 우드척 B형 간염 표면항원에 대해 기재된 것을 이용하여 혈청 또는 혈장에서 측정된 바로, 밀리리터당 1 마이크로그램 이하로 감소시키면, 델타형 간염 바이러스 치료에 유용하다는 것은 지금까지 전혀 확립되어 있지 않았다. 이것은 이제 최초로 패러다임 뉴클레오사이드 유사체, 및 비제한적 예인 L-FMAU를 통해 확립되었다.
Ⅲ. HDV 감염 치료에 있어서 L-FMAU의 용도
본 발명의 일례에서, 유효량의 화학식 Ⅰ의 화합물, 그의 약제학적으로 허용 되는 프로드럭 또는 염을 투여한다:
Figure 112002031869395-pct00001
상기 식에서, R은 5-메틸 우라실(티민이라고도 함)이고, R'는 수소, 아실, 알킬, 모노포스페이트, 디포스페이트, 트리포스페이트, 또는 5'-에테르 리피드 또는 5'-포스포리피드를 포함하는 안정화된 포스페이트 유도체이다.
Ⅳ. 활성 화합물의 프로드럭
활성 화합물은 수용자에게 투여시 모 화합물을 직접적으로나 간접적으로 제공할 수 있는 어떠한 유도체로서도 투여될 수 있다. 비제한적 예는 활성 화합물의 약제학적으로 허용되는 염, 및 5' 퓨린 또는 피리미딘 아실화되거나 알킬화된 유도체(뉴클레오사이드나 뉴클레오사이드 유사체인 경우)이다. 일례에서, 활성 화합물의 아실 그룹은 에스테르 그룹의 비-카보닐 부위가 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭 알킬, 메톡시메틸을 포함하는 알콕시알킬, 벤질을 포함하는 아르알킬, 페녹시메틸과 같은 아릴옥시알킬, 임의로 할로겐, C1 내지 C4알킬 또는 C1 내지 C4알콕시로 치환된 페닐을 포함하는 아릴, 메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아르알킬 설포닐과 같은 설포네이트 에스테르, 모노, 디 또는 트리포스페이트 에스테르, 트리틸 또는 모노메톡시트리틸, 치환된 벤질, 트리알킬실릴(예: 디메틸-t-부틸실릴) 또는 디페닐메틸실릴로부터 선택되는 카복실산 에스테르이다. 에스테르에 있는 아릴 그룹은 이상적으로 페닐 그룹을 포함한다. 알킬 그룹은 직쇄, 분지쇄 또는 사이클릭일 수 있으며, 이상적으로 C1 내지 C18 그룹이다.
활성 화합물은 뉴클레오사이드의 활성, 생체이용률, 안정성을 증가시키거나 뉴클레오사이드의 성질을 다르게 변화시키는 뉴클레오타이드 프로드럭(뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체인 경우)을 포함하는, 프로드럭으로서 투여될 수 있다. "프로드럭"은 숙주내에서 내재하는 효소 또는 기타 화학물질의 작용 및/또는 조건에 의해 활성형으로 전환되는 치료제이다. 수많은 뉴클레오타이드 프로드럭 리간드가 알려져 있다. 일반적으로, 뉴클레오사이드의 모노, 디 또는 트리포스페이트의 알킬화, 아실화 또는 기타 친지성 변형은 뉴클레오타이드의 안정성을 증가시킨다. 포스페이트 부위상의 하나 이상의 수소를 대체할 수 있는 치환체 그룹의 예는 알킬, 아릴, 스테로이드, 슈가를 포함한 탄수화물, 1,2-디아실글리세롤 및 알콜이다. 많은 것이 R. Jones and N. Bischofberger, Antiviral Research, 27 (1995) 1-17에 기재되어 있다. 이들중 어느 것도 원하는 효과를 얻기 위하여 개시된 뉴클레오사이드와 결합하여 사용될 수 있다.
포스페이트 부위 또는 하이드록실상의 하나 이상의 수소를 대체할 수 있는 치환체 그룹의 예는 알킬, 아릴, 스테로이드, 슈가를 포함한 탄수화물, 1,2-디아실글리세롤 및 알콜이다. 많은 것이 R. Jones and N. Bischofberger, Antiviral Research, 27 (1995) 1-17에 기재되어 있다. 이들중 어느 것도 원하는 효과를 얻기 위하여 개시된 뉴클레오사이드와 결합하여 사용될 수 있다.
활성 뉴클레오사이드 또는 기타 하이드록실 함유 화합물 또한 본 명세서에 참조로서 인용되는, 하기 참조문헌에 기재된 바와 같이 에테르 리피드(특히 뉴클레오사이드에 대해 5'-에테르 리피드)로서 제공될 수 있다:
Kucera, L.S., N. Iyer, E. Leake, A. Raben, Modest E.K., D.L.W., and C. Piantadosi. 1990. "Novel membrane-interactive ether lipid analogs that inhibit infectious HIV-1 production and induce defective virus formation." AIDS Res. Hum. Retro Viruses. 6:491-501; Piantadosi, C., J. Marasco C.J., S.L. Morris-Natschke, K.L. Meyer, F. Gumus, J.R. Surles, K.S. Ishaq, L.S. Kucera, N. Iyer, C.A. Wallen, S. Piantadosi, and E.J. Modest. 1991. "Synthesis and evaluation of novel ether lipid nucleoside conjugates for anti-HIV activity." J. Med. Chem. 34:1408.1414; Hosteller, K.Y., D.D. Richman, D.A. Carson, L.M. Stuhamiller, G.M. T. van Wijk, and H. van den Bosch. 1992. "Greatly enhanced inhibition of human immunodeficiency virus type 1 replication in CEM and HT4-6C cells by 3'-deoxythymidine diphosphate dimyristoylglycerol, a lipid prodrug of 3,-deoxythymidine." Antimicrob. Agents Chemother. 36:2025.2029; Hostetler, K.Y., L.M. Stuhmiller, H.B. Lenting, H. van den Bosch, and D.D. Richman, 1990. "Synthesis and antiretroviral activity of phospholipid analogs of azidothymidine and other antiviral nucleosides." J. Biol. Chem. 265:61127.
뉴클레오사이드 또는 기타 하이드록실 또는 아민 함유 화합물로 바람직하게 는 뉴클레오사이드 또는 친지성 제조물의 5'-OH 위치에 공유적으로 도입될 수 있는 적당한 친지성 치환체를 개시한 미국특허의 비제한적 예는 미국특허 제5,149,794호(1992. 9. 22, Yatvin 등); 제5,194,654호(1993. 3. 16, Hostetler 등, 제5,223,263호(1993. 6. 29, Hostetler 등); 제5,256,641호(1993. 10. 26, Yatvin 등); 제5,411,947호(1995. 5. 2, Hostetler 등); 제5,463,092호(1995. 10. 31, Hostetler 등); 제5,543,389호(1996. 8. 6, Yatvin 등); 제5,543,390호(1996. 8. 6, Yatvin 등); 제5,543,391호(1996. 8. 6, Yatvin 등); 및 제5,554,728호(1996. 9. 10; Basava 등)을 포함하며, 이들 모두 본 명세서에 참조로서 인용된다. 본 발명의 뉴클레오사이드에 결합할 수 있는 친지성 치환체, 또는 친지성 제조물을 개시한 외국 특허출원은 WO89/02733, WO90/00555, WO91/16920, WO91/18914, WO93/00910, WO94/26273, WO96/15132, EP 0 350 287, EP 93917054.4 및 WO91/19721를 포함한다.
뉴클레오타이드 프로드럭의 비제한적 예는 하기 참조문헌에 기재되어 있다:
Figure 112002031869395-pct00002
Figure 112002031869395-pct00003
Figure 112002031869395-pct00004
항-HIV 제제 AZT의 알킬 수소 포스페이트 유도체는 모 뉴클레오사이드 유사체보다 독성이 적을 수 있다.
Figure 112002031869395-pct00005
Figure 112002031869395-pct00006
Figure 112002031869395-pct00007
유용한 포스페이트 프로드럭 그룹의 예는 "SATE"로서 언급되는 S-아실-2-티오에틸 그룹이다.
Ⅴ. 병용 치료법
본 발명의 다른 일면으로, HDV 감염 치료는 L-FMAU 또는 다른 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체 또는 본 명세서에서 특정화된 요건을 충족시키는 유기 소분자를 숙주에서 B형 간염 표면 또는 preS1 항원의 수준을 감소시키는 다른 제제, 또는 델타형 간염 감염을 다르게 치료하는 것으로 공지된 것, 제한하는 것은 아니지만 라이보자임(참조 미국 특허 제 5,985, 621호), 인터루킨을 포함하는 사이토카인, 인터페론(α,β또는 γ포함), B형 간염 표면 또는 preS1 항원 또는 전사 인자 또는 다른 B형 표면 또는 preS1 항원 발현의 다른 매개체에 대한 항원(수동 면역을 위함); B형 간염 표면 또는 preS1 항원 또는 전사 인자 또는 다른 B형 표면 또는 preS1 항원 발현의 다른 매개체(능동 면역을 위함), 단백질-프레닐 트랜스퍼라제 저해제(Statutory Invention No. HI-345) 또는 펩티드 호르몬(예: 티모신-알파-1-)과 병용하거나 교대로 사용하여 수행될 수 있다.
통상 교대 치료법 수행시 유효량의 각 제제를 순차적으로 투여하는 반면, 병용 치료시에는 유효량의 두개 이상의 제제를 함께 투여한다. 용량은 흡수도, 생분해성, 대사 및 각 약물에 대한 방출 속도과 같은 인자 및 본 분야의 기술자에게 공지된 다른 인자에 따라 결정될 것이다. 투여량 값은 완화시키고자 하는 이상의 경중도에 따라 달라질 수 있다는 것에 주의하여야 한다. 또한 특정 대상자의 경우 특정 투여 요법 및 일정은 조성물을 투여하거나 조성물 투여를 감독하는 사람의 전문적인 판단 및 각자의 필요에 따라 시간에 따라 조절되어야 한다는 것을 이해하여야 한다. 기술된 병용 및 교대 요법이 HDV 감염 및 다른 관련된 이상의 예방 치료에 유용하다. 이 화합물 또는 제제를 사용하여 HDV에 노출된 개인에서 만성 질환의 진행을 예방학적으로 예방 또는 지연시킬 수 있다.
Ⅵ. HDV 감염 치료를 위한 다른 일례
본 발명의 다른 일례에서 HDV 감염을 B형 간염 표면 항원의 RNA 트랜스크립트에 표적화된 적어도 하나의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 단독 또는 L-FMAU와 병용으로 투여하여 숙주에서 치료할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바 용어 "올리고뉴클레오티드"는 자연에서 발견된 형태의 올리고 핵산 부위, 예를 들면, DNA 및 RNA의 데옥시리보뉴클레오티드 및 리보뉴클레오티드 구조, 및 자연에서 발견된 핵산에 결합할 수 있는 인공 유사체 모두를 포함한다. 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 포스포디에스테르 결합에 의해 연결된 리보뉴클레오티드 또는 데옥시뉴클레오티드 모노머, 또는 메틸 포스포네이트, 포스포로티오에이트, 또는 다른 결합에 의해 연결된 유사체에 기초할 수 있다. 또한 변형된 염기 구조 또는 다른 변형을 갖지만, 자연 발생된 DNA 및 RNA 구조에 결합하는 능력을 계속적으로 유지하는 모노머 부위를 포함할 수 있다. 상기 올리고뉴클레오티드는 예를 들면, 퍼킨-엘머/어플라이드 바이오시스템(Foster City, Calif.)으로부터 이용할 수 있는 상업적으로 이용할 수 있는 기기 및 시약을 사용하여 본 분야에 공지된 방법에 따라 제조할 수 있다.
포스포디에스테르-연결 올리고뉴클레오티드는 특히 혈청 또는 세포내에서 뉴클레아제의 작용을 받기 쉽고, 따라서 바람직한 일례에서 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 뉴클레아제-내성을 보이는 포스포로티오에이트 또는 메틸 포스포네이트-연결 유사체이다.
본 분야의 기술자는 본 발명의 사용을 위해 다른 결합을 선택할 수 있을 것이다.
특정 유전자에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 상대활성은 표적 유전자의 AUG 개시코돈에 대한 그의 위치에 일반적으로 반비례한다. 선행기술에 따르면 HBsAg-생산 PLC/PRF/5 세포에 염색체내로 삽입된 HBV 표면항원(HBsAg) 유전자(S 유전자) 서열의 AUG 개시코돈으로부터 60 염기 초과로 다운스트림에 위치하는 서열을 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드는, AUG의 20 염기내에 위치한 올리고뉴클레오타이드가 HBsAg 생산을 50% 내지 90%로 저해하는데 비해, HBsAg 생산을 저해하는데 효과적이지 못한 것으로 알려져 있다. 따라서, HBV 표면항원 유전자 서열을 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 올리고뉴클레오타이드 가 유전자의 AUG 개시코돈의 약 25 염기내에서 혼성화하도록 선택하는 것이 바람직하다. HBV 표면 항원 유전자에 대한 바람직한 올리고뉴클레오티드는 Korba 등에 의해 미국 특허 제 5,646,262호에 기재되어 있고 하기를 포함한다:
Figure 112002031869395-pct00008
HDV 감염 치료를 위한 안티센스 올리고뉴클레오티드의 다른 예는 Isis Pharmaceuticals, Inc.에 의한 미국 특허 제 5,985, 662 호에 기재되어 있고 하기를 포함한다:
Figure 112002031869395-pct00009
바람직한 길이의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 선별하기 위하여, 밸런스를 유지함으로써 가장 바람직한 특성을 획득하여야 한다. 길이가 더욱 짧은 10-15 염기의 올리고뉴클레오티드는 용이하게 세포내로 들어가지만 낮은 유전자 특이성을 갖는다. 반대로, 길이가 더욱 긴 20-30 염기의 올리고뉴클레티드는 더욱 우수한 유 전자 특이성을 제공하지만 세포내로의 흡수에 대하여 감소된 운동성을 보인다(참조, Stein 등., PHOSPHOROTHIOATE OLIGODEOXYNUCLEOTIDE ANALOGUES in "Oligodeoxynucleotides--Antisense Inhibitors of Gene Expression" Cohen, Ed. McMillan Press, London(1988)). 바람직한 일례로 본 발명은 약 14 내지 25개 뉴클레오티드 길이의 올리고뉴클레오티드를 사용하고자 한다.
Ⅶ. L-FMAU의 합성
본 명세서에 기재된 L-뉴클레오사이드를 하기에 상세히 기술되는 바와 같이, 또는 본 분야의 기술자에게 공지된 다른 방법으로 제조할 수 있다.
도 3을 참고로 하여 L-크실로오스(1a)로부터 출발하여 중요한 중간체 1-O-아세틸-2,3,5-트리-O-벤조일-α-L-리보푸라노오스(10)을 총 수율 20%로 합성하였다 (L. Vargha, Chem. Ber., 1954, 87, 1351; Holy, A., 등, Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry, V1, 163-67). 또한, 도 4에 나타낸 바와 같이, 화합물 10을 더욱 비싼 출발 물질 L-리보오스로부터 합성할 수 있다(Holy, A., 등, Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry, V1, 163-67). 도 3은 화합물 10(수율 53%)의 다른 합성법을 설명하고, 상기 화합물을 연속하여 화합물 10을 C2에서 플루오르화하여(J. Org. Chem. 1985, 50, 3644-47) 1,3,5-트리-O-벤조일-2-데옥시-2-플루오로-L-아라비노푸라노오스(13)를 수득하고 브로모당을 통해 실리화된 티민으로 축합하여 보호된 L-FMAU를 제공하였다.
1,2-디-O-이소프로필리덴-α-L-크실로푸라노오스(3)
650㎖의 무수 아세톤에 4㎖의 진한 황산, 5g의 몰레큘러시브(molecular sieve)(4A), 80g의 무수 황산제이구리 및 50g의 L-크실로오스에 가하고 혼합물을 36시간동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 아세톤을 사용하여 철저하게 세척하고 혼합된 여액을 수산화암모늄으로 중화시킨 후 증발건조시켰다. 에틸 아세테이트(200㎖)를 가한 후 여과하고 증발시켜 오일을 수득하고 250㎖의 0.2% HCl 용액에 용해시키고 2.5시간동안 실온에서 교반하였다. 포화된 NaHCO3을 사용하여 pH를 8로 조정한 후 증발건조시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 용매를 제거하여 황색 오일의 화합물 3(41.7g, 82.3%)을 수득하였다.
Figure 112002031869395-pct00010
1,2-디-O-이소프로필리덴-3,5-디-O-o-톨릴설포닐-α-L-크실로푸라노오스(4)
TsCl(75g, 393mmol)을 100㎖의 CHCl3에 적가하여 용해시키면서 화합물 3(40g, 210mmol)을 0℃에서 500㎖의 무수 피리미딘중에서 교반하였다. 3시간후 50㎖의 CHCl3중 또다른 분량의 TsCl(50g, 262mmol)을 상기와 같이 동일하게 가하였다. 혼합물을 24시간동안 실온(r.t.)에서 냉각시킨 후, 0℃에서 냉각시키고 물(10㎖)을 가한 후, 30분동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 500㎖의 빙수에 붓고 CHCl3(150㎖ x 4)로 추출하고, 1.5M H2SO4(50㎖ x 4), 포화된 NaHCO3 (200㎖ x 2)으로 세척하고, 건조시켰다(MgSO4). 용매를 제거하여 갈색 시럽을 수득하고 EtOH로부터 결정화하여 백색 고체로서 4(103.8g, 99%)를 수득하였다.
Figure 112002031869395-pct00011
1,2-디-O-아세틸-3,5-디-O-p-톨릴설포닐-α,β-크실로푸라노오스(5)
50㎖의 진한 황산을 0℃에서 적가하면서 화합물 4(70g, 140.5mmol)를 700㎖의 빙 AcOH 및 100㎖의 AC2O에 용해시켰다. 생성된 용액을 밤새도록 실온에서 교반한 후 1ℓ이 빙수에 붓고, CHCl3(200㎖ x 4)로 추출하고, 포화된 NaHCO3로 세척하고 건조시켰다(MgSO4). 진공에서 용매를 제거한 후, 시럽으로서 5(84.2g, 조 수율 110%)를 수득하였다.
메틸-3,5-디-O-p-톨릴설포닐-α,β-크실로푸라노오스(6)
조 5(80g)을 30시간동안 실온에서 500㎖의 1% HCl/CH3에서 교반하였다. 용매를 감압하에 제거하고, 잔류물을 300㎖의 CHCl3에 용해시키고, 포화된 NaHCO3로 세척하고 건조시켰다(MgSO4). 용매를 제거하여 시럽으로서 6(60g, 4로부터 90%)을 수득하였다.
메틸-2-O-벤조일-3,5-디-O-p-톨릴설포닐-α,β-크실로푸라노시드(7)
벤조일 클로라이드(40㎖, 345mmol)를 적가하면서, 시럽 6(60g, 127mmol)을 200㎖의 피리미딘중에 용해시키고 0℃에서 교반하고, 생성된 용액을 17시간동안 실온에서 교반하였다. 약 50㎖로 농축시킨 후, 300㎖의 빙수에 붓고, CHCl3로 추출하고 3N H2SO4 및 포화된 NaHCO3로 세척하고 건조시켰다(MgSO4). 용매를 증발시킨 후 시럽으로서 7(71g, 90%)을 수득하였다.
메틸-2,3,5-트리-O-벤조일-α,β-L-리보푸라노시드(9)
시럽 7(70g) 및 소듐 벤조에이트(100g, 694mmol)를 1200㎖의 DMF중에 현탁시키고 16시간동안 환류하에 기계적으로 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후 1ℓ의 빙수에 붓고 에테르로 추출하고 건조시켰다(MgSO4). 용매를 증발시켜 시럽(50g, 8a 및 8b)을 수득하고, 이를 180㎖의 피리딘에 용해시키고 17시간동안 실온에서 벤조일화하였다(BzCl, 20㎖, 172mmol). 후처리한 후 갈색 시럽으로서 9(48g, 7로부터 83%)를 수득하였다.
1-O-아세틸-2,3,5-트리-O-벤조일-β-L-리보푸라노오스(10)
화합물 9(26g, 54.6mmol)를 17시간동안 0℃ 내지 실온에서 275㎖의 빙초산, 55㎖의 무수 아세트산 및 16㎖의 진한 황산으로 처리하였다. 이어서 1ℓ의 빙수에 붓고, 클로로포름(200㎖ x 4)으로 추출하였다. 혼합된 추출물을 포화된 NaHCO3로 세척하고 건조시켰다(MgSO4). 용매를 제거한 후 갈색 시럽을 수득하고 이를 에탄올로 처리하여 백색 고체로서 10을 수득하였다.
Figure 112002031869395-pct00012
Figure 112002031869395-pct00013
1-O-아세틸-2,3,5-트리-O-벤조일-β-L-리보푸라노오스(L-리보오스로부터)
투명한 용액을 수득하였을 때 L-리보오스(5g, 33.3mmol)를 120㎖의 1% HCl/MeOH중에 현탁시키고 3시간동안 실온에서 교반하였다. 30㎖의 무수 피리딘을 가하여 반응을 퀸칭한 후 감압하에 증발시켰다. 생성된 시럽을 피리딘(30㎖ x 2)과 공증발시킨 후 80㎖의 무수 피리딘에 용해시키고 벤조일 클로라이드(20㎖, 172mmol)를 적가하면서 0℃에서 교반하였다. 17시간동안 실온에서 교반한 후, 반응을 종결하였다. 물(10㎖)을 가하고 혼합물을 0.5시간동안 실온에서 교반한 후 약 50㎖로 농축시키고 150㎖의 빙수에 붓고 클로로포름(50㎖ x 4)으로 추출하고 3N H2SO4(30㎖ x 2), 포화된 NaHCO3(30㎖ x 3)로 연속하여 세척하고 건조시켰다(MgSO 4). 용매를 제거하여 시럽으로서 13g의 9를 수득하였다.
조 9를 80㎖의 HBr/AcOH(45%, w/v)에 용해시키고 1.5시간동안 실온에서 교반하였다. 34㎖의 물을 서서히 가하여 온도를 7℃ 이하로 유지시키면서 이 혼합물에 빙초산(50㎖)을 가하고 생성된 용액을 0℃에서 교반한 후 1시간동안 실온에서 교반하고 200㎖의 빙수에 붓고 클로로포름(50㎖ x 5)으로 추출하고 혼합된 추출물을 포화된 NaHCO3로 세척하고 건조시켰다(MgSO4). 용매를 제거하여 시럽(13g)을 수득하고 40㎖의 무수 피리딘에 용해시키고 아세트산 무수물(14㎖, 148.4mmol)을 적가할 때 0℃에서 교반하였다. 반응을 종결시킨 후, 150㎖의 빙수에 붓고 클로로포름(50㎖ x 4)으로 추출하고 3N H2SO4(30㎖ x 2), 포화된 NaHCO3(50㎖ x 2)로 연속하여 세척하고 건조시켰다(MgSO4). 용매를 제거하고 메탄올로 처리하여 백색 고체로서 10(9.2g, L-리보오스로부터 53.7%).
1,3,5-트리-O-벤조일-α-L-리보푸라노오스(11)
HBr(3.2g, 30.5mmmol)을 포함하는 70㎖의 CH2Cl2를 1분량 가하면서 0℃에서 화합물 10(9g, 17.84mmol)을 100㎖의 CH2Cl2중에서 교반하였다. 혼합물을 3.5시간동안 0℃에서 교반하고, 물(55㎖)을 가하고 혼합물을 18시간동안 실온에서 교반하였다. 유기층을 분리하고, 포화된 NaHCO3로 세척하고 건조시켰다(MgSO4). 증발시켜 용매를 제거한 후, 기포(foam)를 수득하고, CH2Cl2 및 n-헥산으로부터 재결정하여 백색 고체로서 11(6.2g, 75.5%)를 수득하였다.
Figure 112002031869395-pct00014
Figure 112002031869395-pct00015
1,3,5-트리-O-벤조일-2-O-이미다졸설푸릴-α-L-리보푸라노오스(12)
화합물 11(5.94g, 12.84mmmol)을 -15℃(건빙-CCl4)에서 50㎖의 무수 CH2Cl2중에 교반하였다. 무수 DMF(15㎖) 및 설푸릴 클로라이드(3.2㎖, 3.98mmol)을 연속적으로 가하였다. 용액믈 30분동안 -15℃에서 교반한 후 4시간동안 실온에 방치하였 다. 반응 혼합물을 얼음 배쓰에서 냉각시키면서 이미다졸(8.7g, 12.78mmol)을 3분량 가한 후, 17시간동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 150㎖의 빙수에 붓고 수성 상을 CH2Cl2(50㎖ x 3)으로 추출하였다. 혼합된 유기층을 물로 세척하고, 건조시켰다(MgSO4). 칼럼상에서 정제(헥산: EtOAc/5:1-1:1)한 후 백색 고체로서 12를 수득하였다.
Figure 112002031869395-pct00016
Figure 112002031869395-pct00017
1,3,5-트리-O-벤조일-2-데옥시-2-플루오로-α-L-아라비노푸라노오스(13)
30㎖의 2,3-부탄디올중 KHF2(1.76g, 22.56mmol), 12(3.33g, 5.62mmol) 현탁액을 아르곤하에 교반하였다. 1㎖의 HF/H2O(48%, 27.6mmol)을 가하면서 150℃으로 가열하고 혼합물을 1.5시간동안 160℃에서 교반하였다. 빙염수를 가하여 반응을 퀸칭한 후 메틸렌 클로라이드(50㎖ x 4)로 추출하고 혼합된 추출액을 염수, 물, 포화된 NaHCO3로 세척하고 무수 황산마그네슘 및 활성탄(Carco-60)상에서 건조시켰다. 실리카 겔 패드(5cm x 5cm)상에 붓고, 메틸렌 클로라이드 이어서 EtOAc로 세척하여 시럽을 수득하고 95% EtOH로부터 결정화하여 13(1.3g, 49.8%)을 수득하였다. m.p.77-78℃; lit.: 82℃
Figure 112002031869395-pct00018
1.4㎖의 HBr/AcOH(45% w/v)를 가하면서 화합물 13(464mg, 1mmol)을 10㎖의 메틸렌 클로라이드에 용해시켰다. 용액을 24시간동안 실온에서 교반시킨 후, 증발건조시키고, 잔류물을 20㎖의 메틸렌 클로라이드중에 용해시키고, 물, 포화된 NaHCO3로 세척하고 건조시켰다(MgSO4). 여과 및 증발시켜 브로모당 14(100%, TLC 기초)를 수득하였다.
N 1 -(2'-데옥시-2'-플루오로-3',5'-디-O-벤질-β-L-아라비노푸라노실)-티민(17)
무수 CH2Cl2(10㎖)중 13(400mg, 0.86mmol) 용액에 아세트산(45% w/v, 1.5㎖)중 브롬화수소를 가하고, 생성된 용액을 17시간동안 실온에서 교반하였다. 용매를 증발시키고 톨루엔과 공증발시킨 후, 14를 수득하였다.
동시에 티민(215mg, 1.72mmol)을 17시간동안 질소하에 HMDS(25㎖)중에서 환류시켜 균질액을 수득하였다. 용매를 증발시킨 후, 실릴화된 티민을 수득하였다.
디클로로에탄(50㎖)중 14 용액을 실릴화된 티민에 가하고 생성된 용액을 3일동안 질소하에 환류시켰다. 물을 가한 후 CHCl3으로 추출하였다. 유기층을 물, 염수로 세척하고 건조시켰다(MgSO4). 용매를 증발시켜 조 생성물을 수득하고, 2% MeOH/CHCl3을 사용하는 분취용 TLC상에서 정제하여 17(235mg, 58%)을 수득하였다.
Figure 112002031869395-pct00019
Figure 112002031869395-pct00020
N 1 -(2'-데옥시-2'-플루오로-β-L-아라비노푸라노실)-티민(18)
화합물 17(145mg, 0.309mol)을 18시간동안 실온에서 NH3/CH3OH로 처리하였다. 용매를 증발시키고 분취용 TLC(15% MeOH/CHCl3)상에서 정제하여 18(70mg, 87.5%)를 수득하였다.
Figure 112002031869395-pct00021
Figure 112002031869395-pct00022
L-FMAU의 5'-알킬 및 모노-디 및 트리-포스페이트 유도체
5'번 위치에 알킬 그룹이 존재는 L-FMAU의 유도체는 수소화나트륨 및 t-부틸-디-페닐-실로 보호 그룹을 사용하여 티민 염기의 보호화에 의해 제조할 수 있다. 5-하이드록실 그룹의 벤조일화는 벤조일 하이드라이드로 수행될 수 있다. 테트라부틸암모늄 플루오라이드를 사용하여 생성된 화합물을 탈실릴화할 수 있다. 수소화나트륨 및 알킬 브로마이드를 사용하여 5'번 위치에 알킬 그룹을 도입할 수 있고, 벤조일 그룹을 염기로 제거할 수 있다.
L-FMAU의 모노, 디, 및 트리-포스페이트 유도체를 하기 기술한 바와 같이 제 조할 수 있다. Imai 등의 방법[J. Org. Chem., 34(6), 1547-1550(June 1969)]에 따라 모노포스페이트를 제조할 수 있다. 예를 들면, 약 4시간동안 약 0℃에서 약 8㎖의 건성 에틸 아세테이트중에서 약 100mg의 L-FMAU 및 약 280㎕의 포스포릴 클로라이드를 교반하면서 반응시킨다. 얼음으로 반응을 퀸칭한다. 수성 상을 1:1의 에탄올 및 물 혼합물중 5% 수산화암모늄으로 용출시키는 활성화된 목탄 칼럼상에서 정제하였다. 용리제를 증발시켜 암모늄 L-FMAU-5'-모노포스페이트를 수득한다.
Davisson 등의 방법[J. Org. Chem., 52(9), 1794-1801(1987)]에 따라 디포스페이트를 제조할 수 있다. 예를 들면, 약 24시간동안 실온에서 피리딘중 토실 클로라이드와 뉴클레오사이드를 반응시키고 통상의 방법(예: 세척, 건조, 및 결정화)으로 생성물을 후처리하여 상응하는 토실레이트로부터 L-FMAU 디포스페이트를 제조할 수 있다.
Hoard 등의 방법[J. Am. Chem., Soc., 87(8), 1785-1788(1965)]에 따라 트리포스페이트를 제조할 수 있다. 본 분야의 기술자에게 공지된 방법에 따라 이미다졸리드를 제조하고 DMF중 트리부틸 암모늄 피로포스페이트로 처리하여 L-FMAU를 활성화시킨다. 상기 반응에 의해 약간의 비반응 모노포스페이트 및 약간의 디포스페이트와 함께, 주로 뉴클레오사이드의 트리포스페이트를 수득한다. DEAE 칼럼의 음이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제한 후 트리포스페이트, 예로서 테트라소듐 염을 분리한다.
Ⅷ. 설명 실시예
HDV 복제에 대한 L-FMAU 치료법의 효능을 평가하기 위하여 만성 HDV 감염의 실험 모델로서 우드척(woodchuck)을 사용하였다. 만성적으로 WHV로 감염된 우드척을 실험 감염 클론으로부터 유래된 우드척-적응성 HDV 접종물로 감염시켰다. 11마리의 감염 동물중 9마리가 치료 개시전 적어도 11개월 동안 적어도 74%의 채혈일동안 RT/PCR-검출가능한 HDV 바이러스혈증(Niro 등(1997) Hepatology 25, 728-734)에 의해 정의되는, 만성 HDV 감염을 갖는 것으로 확인되었다. 연구를 시작하기 앞서 바이러스혈증의 지속기간 범위는 11.4-20개월이고; 양성 채혈일의 범위는 74% 내지 100%였다. 처리군(4)의 동물에게 10mg/kg L-FMAU를 매일 투여하고; 대조군(5)의 동물에게는 위약을 투여하였다. 치료 시작전, 및 2주, 4주, 8주, 12주, 16주 및 20주째 혈청 샘플을 수득하였다. 혈청 샘플을 WHV DNA, WHV 표면 황원, 및 HDV RNA에 대하여 분석하였다.
본 화합물로 앞서 관찰된 바와 같이(Peek, S. 등, (2001) Hepatology 33, 254-66) 처리 4주째까지 처리된 모든 동물의 혈청내 WHV DNA가 현저하게 감소(>107배 감소)하였다(도 6B). 12주째까지 한마리(동물 4543)를 제외한 처리된 모든 동물에서 표면 항원 수준이 거의 1,000배 감소된 것이 관찰되었다(도 6C). 처리 16주째까지 3/4의 처리된 동물에서 HDV RNA를 검출할 수 없었다(도 6A). 대조군에서는 이들 바이러스 마커중 어느 것에 대하여 실질적인 변화가 관찰되지 않았다(도 7A, 도 7B, 도 7C, 도 8).
특히 HDV 바이러스혈증의 감소는 혈청내 표면 항원 수준의 감소와 관련성을 갖고 있다. B형 간염 표면 항원의 농도가 100배 이상 감소된 후, 특히 1㎍/㎖ 미만 으로 감소된 후 HDV 바이러스혈증을 검출할 수 없었다. 이 효과는 남은 치료 기간동안 유지되었다. 표면 항원 수준이 감소된 모든 동물에서 HDV RNA를 검출할 수 없었다. 처리군중 한 동물, 동물 4543에서는 표면 항원 수준이 감소하지 않았고(WHV DNA 수준이 감소된 경우에도), 이 동물에서는 HDV 바이러스혈증이 높게 남아있었다.
WHsAg가 감소된 3마리의 L-FMAU-처리 동물(WHsAg 반응자)을 함께 그룹화하였을 때, 처리전 수준 및 모든 시점에서 대조군의 수준과 비교하여 HDV RNA 수준이 현저하게 감소되었음을 명백히 알 수 있다(도 8). 스튜던트의 t-검증(Student's t-test)에 의한 통계학적 분석은 이 현저한 감소는 통계학적으로 매우 유의함을 보여준다(쌍으로 하는 경우 P=0.02, WHsAg 반응자에서 0주째 대 20주째의 1-테일(1-tail) 비교, 및 쌍으로하지 않는 경우 P=0.02, 비처리군 대 WHsAg 반응자에서 20주째 수준의 1-테일 비교).
L-FMAU가 부분적으로 표면 항원 발현을 강력하게 저해하기 때문에 만성적으로 감염된 동물에서 HDV의 강력한 저해제임이 발견되었다. 선행 연구를 통해 만성 HDV 바이러스혈증 수준과 질환의 경중도가 밀접하게 상관된다는 것이 나타났다(Smedile, A. 등(1986) Hepatology 6, 1297-302; Smedile, A. 등(1987) Prog Clin Biol Res 234, 235-41; Niro, G.A.등(1997) Hepatology 25, 728-734; Shakil, A.O.등(1997) Virology 234, 160-7). HBV와 같이 HDV에 대한 장기간 지속형 세포내 저장소(repository)가 존재하지 않고(즉, 공유결합된 폐쇄환상 DNA가 존재하지 않음), HDV-감염 세포의 반감기는 2주정도로 단기(Netter, H. J. 등, (1993) J. Virol 67, 3357-62) 일 수 있기 때문에, 이 결과에 기초하여 낮은 수준으로의 바이러스혈증의 감소 지연으로 인하여 치료받는 환자에서 L-FMAU 및 다른 뉴클레오사이드, 비뉴클레오사이드, 및 뉴클레오사이드 유사체를 사용하여 HDV 감염을 제거할 수 있다.
Ⅸ. 약제학적 조성물의 제조
HDV 감염에 의해 유발된 질환으로부터 고생하는 인간을 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제의 존재하에 표준 면역분석법을 사용하여 혈청 또는 혈장중에서 측정된 바, 생체 또는 시험관내에서 숙주내 B형 간염 표면 또는 preS1 항원의 수준을 전처리 값과 비교하여 대략 100배 이상, 및 바람직하게는 200- 또는 500배 미만으로, 또는 생체내에서 HBsAg와 관련하여 1 이하, 및 바람직하게 0.5 또는 1 ㎍/㎖ 미만으로 감소시키는 유효량의 뉴클레오사이드 또는 뉴클레오사이드 유사체 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 프로드럭을 환자에게 투여하여 치료할 수 있다. 바람직한 일면으로 뉴클레오사이드는 2'-플루오로-5-메틸-β-L-아라비노푸라노실우리딘 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 프로드럭 또는 염이다. 활성 화합물(또는 그의 프로드럭형)을 액상 또는 고체 형태로 적절한 경로, 예를 들면, 경구, 비경구, 정맥내, 진피내, 피하, 또는 국소로 투여할 수 있다.
활성 화합물(또는 그의 프로드럭)은 치료받은 환자에서 심각한 독성 부작용을 일으키지 않고 생체내에서 HDV 바이러스혈증 또는 그의 증상을 감소시키기 위한 치료학적 유효량의 화합물을 환자에게 투여하기에 충분한 양으로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제중에 포함된다. "감소량"은 예를 들면 본 명세서에 기재 된 것 또는 공지된 다른 방법과 같은 분석법에 의해 측정된 HDV 바이러스혈증 수준을 감소시키기 충분한 활성 성분의 양을 의미한다.
상기 언급된 모든 이상에 대하여 화합물의 바람직한 투여량은 체중 1kg당 1일 약 1 내지 50mg/kg, 바람직하게 1 내지 20mg/kg, 더욱 통상적으로 수령자의 체중 1kg당 1일 0.1 내지 약 100mg/kg 범위일 것이다. 약제학적으로 허용가능한 유도체의 유효량 범위는 투여되는 모(parent) 뉴클레오사이드의 중량에 기초하여 산출될 수 있다. 유도체 스스로 활성을 나타내는 경우 유도체의 중량을 사용하여 상기와 같이, 또는 본 분야의 기술자에게 공지되어 있는 다른 방법에 의해 추정될 수 있다.
본 화합물은 제한하는 것은 아니지만 단위 제형당 7 내지 3000mg, 바람직하게 70 내지 1400mg의 활성성분을 포함하는 것을 포함하는 적절한 단위 제형으로 용이하게 투여된다. 50-1000mg의 경구용 제형이 통상 사용하기 쉽다.
이상적으로는 활성 성분 약 0.2 내지 70μM, 바람직하게 약 1.0 내지 10μM의 최대 혈장 농도를 얻기 위하여 활성 성분을 투여하여야 한다. 예를 들면, 임의로 식염수중 0.1 내지 5%의 활성 성분 용액을 정맥내 주사하거나, 활성 성분을 볼루스(bolus)로서 투여하여 수행될 수 있다.
약제 조성물중 활성 화합물의 농도는 흡수도, 비활성화, 및 약물의 방출 속도 및 본 분야의 기술자에게 공지된 다른 요소에 따라 결정될 것이다. 또한 투여량 값은 완화시키는 이상의 경중도에 따라 달라질 수 있다는 것에 주의하여야 한다. 추가로 특정 대상자에 대하여 조성물을 투여하거나 조성물 투여를 감독하는 사람의 전문적인 판단 및 각자의 필요에 따라 특정 투여 요법을 시간에 따라 조절하여야 하고, 본 명세서에 설명된 농도 범위는 단지 예시적인 것이며 청구된 조성물의 범위 또는 실시를 제한하고자 하는 것이 아님을 이해하여야 한다. 활성 성분은 한꺼번에 투여될 수 있거나 수개의 소량의 투여량으로 분할되어 다른 시간 간격으로 투여될 수 있다.
활성 화합물의 바람직한 투여 방식은 경구 투여이다. 경구용 조성물은 통상적으로 불활성 희석제 또는 식용가능한 담체를 포함할 것이다. 젤라틴 캡슐내로 봉입되거나 정제로 압축될 수 있다. 치료를 위한 경구 투여 목적을 위해 활성 화합물을 부형제와 함께 혼입할 수 있고, 정제, 트로키(troch), 또는 캡슐제 형태로 사용할 수 있다. 약제학적으로 적절한 결합제, 및/또는 어쥬번트 물질을 조성물의 일부로서 포함할 수 있다.
정제, 환제, 캡슐제, 트로키 등은 하기 성분중 어느 하나, 또는 유사한 성질의 화합물; 결합제 예로서, 마이크로크리스탈린 셀룰로오스, 트래건스고무 또는 젤라틴; 부형제, 예로서 전분 또는 락토오즈; 붕해제, 예로서 알긴산, 프리모겔(Primogel), 또는 옥수수 전분; 윤활제, 예로서 마그네슘 스테아레이트 또는 스테로테스(Sterotes); 활택제, 예로서 콜로이드성 실리콘 디옥사이드; 감미제, 예로서 수크로오스 또는 사카린; 또는 향미제, 예로서 페파민트, 메틸 살리실레이트, 또는 오렌지 향미제를 포함할 수 있다. 단위 제형이 캡슐제인 경우, 상기 형태의 물질외에도 지방성 오일과 같은 액상 담체를 포함할 수 있다. 또한, 단위 제형은 단위 제형의 물리적 형태를 변형시키는 다양한 다른 물질, 예를 들면 당의(coating of sugar), 셀락 또는 다른 장용제를 포함할 수 있다.
화합물은 엘릭시르, 현택제, 시럽제, 와퍼, 추잉껌 등의 성분으로서 투여될 수 있다. 시럽제는 활성 성분외에 감미제로서 수크로오스 및 특정 방부제, 염료 및 착색제 및 향미제를 포함할 수 있다. 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 유도체 또는 염은 또한 원하는 작용을 손상시키지 않는 다른 활성 물질, 또는 항생제, 항진균제, 소염제, 또는 뉴클레오사이드 항-HIV 화합물을 포함하는 다른 항바이러스제와 같이 원하는 작용을 보충하는 물질과 혼합할 수 있다. 비경구, 진피내, 피하, 또는 국소 투여용 액제 또는 현탁액제는 하기 성분을 포함할 수 있다: 물과 같은 주사용 멸균 희석제, 식염수, 비휘발성 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 합성 용매; 항생제 예로서 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤; 항산화제 예로서 아스코르브산 또는 소듐 바이설파이트; 킬레이트제 예로서 에틸렌디아민테트라아세트산; 완충액 예로서 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트 및 긴장성(tonicity) 조절을 위한 제제 예로서 염화나트륨 또는 덱스트로스를 포함할 수 있다. 비경구용 제제는 앰플, 처리가능한 주사기 또는 글래스 또는 플라스틱으로 제조된 다중 투여 바이알내로 봉입될 수 있다.
정맥내 투여하는 경우, 바람직한 담체는 생리학적 식염수 또는 인산 완충처리된 식염수(PBS)이다.
바람직한 일면으로 임플란트 및 마이크로캡슐화된 투여 시스템을 포함하는 조절형 방출 제제와 같이 활성 화합물은 신체로부터 화합물이 신속하게 제거되는 것을 방지하는 담체와 함께 제조된다. 생분해성, 생체적합성 폴리머, 예를 들면, 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리안하이드라이드, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 및 폴리락트산을 사용할 수 있다. 상기 제제를 제조하는 방법은 본 분야의 기술자에게 명백할 것이다. 또한 물질은 Alza Corporation으로부터 상업적으로 구입할 수 있다.
리포좀 현탁제(바이러스 항원에 대한 모노클로날 항체로 감염된 세포에 표적되는 리포좀 포함) 또한 약제학적으로 허용가능한 담체로서 바람직하다. 본 분야의 기술자에게 공지된 방법, 예를 들면, 미국 특허 제 4,522,811 호(본 내용은 본 명세서에서 참고문헌으로 인용된다)에 기술된 바와 같이 제조될 수 있다. 예를 들면 리포좀 제제는 적절한 지질(들)(예로서 스테아로일 포스파티딜 에탄올아민, 스테아로일 포스파티딜 콜린, 아르아카도일 포스파티딜 콜린, 및 콜레스테롤)을 무기 용매에 용해시킨 후 상기 무기 용매를 증발시키고 용기의 표면상에 박층의 건조된 지질을 남겨둠으로써 제조할 수 있다. 활성 화합물 또는 그의 모노포스페이트, 디포스페이트, 및/또는 트리포스페이트 유도체의 수용액을 용기에 넣었다. 이후 용기를 손으로 휘적어 지질 물질을 용기 측면으로부터 떼어내고 지질 응집물을 분산시켜 리포좀 현탁액을 형성하였다.
본 발명은 그의 바람직한 일면을 참고로 하여 기술되었다. 본 발명에 대한 상기의 상세한 설명으로부터 본 분야의 기술자는 본 발명의 변형 및 수정을 명백히 이해할 것이다. 첨부된 청구범위의 범위내에 모든 변형 및 수정을 포함시키고자 한다.
<110> Casey, John L. <120> METHOD OF TREATING HEPATITIS DELTA VIRUS INFECTION <130> UGA 875 PCT <140> PCT/US01/09987 <141> 2001-03-29 <150> US 60/193,135 <151> 2000-03-29 <160> 20 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 1 cttaggacta cactacaaga g 21 <210> 2 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 2 gactacacta caagag 16 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 3 aggactacac tacaagaggt a 21 <210> 4 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 4 tacactacaa gaggta 16 <210> 5 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 5 tcttccccag gatcct 16 <210> 6 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 6 tttggggcgg acattg 16 <210> 7 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 7 cctaagaaca gttgtt 16 <210> 8 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 8 gtacaagtcg cgtcccagg 19 <210> 9 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 9 taggagctct tctaac 16 <210> 10 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 10 tattccctag tcttgt 16 <210> 11 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 11 caagaggtac aagtc 15 <210> 12 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 12 cgaccacctt tctaagacgg g 21 <210> 13 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 13 cctttctaag acggg 15 <210> 14 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 14 taagacgggg ta 12 <210> 15 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 15 gacggggtac gacat 15 <210> 16 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 16 gtacgacatc tagaa 15 <210> 17 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 17 cctgatgtga tgttctccat 20 <210> 18 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 18 gaactggagc caccagcagg 20 <210> 19 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 19 gaaagattcg tccccatgc 19 <210> 20 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 20 ccactgcatg gcctgaggat g 21

Claims (38)

  1. 약제학적으로 허용되는 담체 및 유효량의 하기 화학식의 β-L 뉴클레오사이드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는, 델타형 간염 감염 치료용 약제학적 조성물:
    Figure 112008042080174-pct00033
    상기 식에서,
    R은 5-메틸 우라실(티민이라고도 함)이고,
    R'는 수소; C1-18알킬; CO-C1-18알킬, CO-아릴, CO-C1-18알콕시C1-18알킬, CO-아릴C1-18알킬, CO-C1-18알킬-아릴, 또는 CO-아릴옥시-C1-18알킬, 여기서 아릴은 페닐, 비페닐 또는 나프틸이고; 모노포스페이트, 디포스페이트 또는 트리포스페이트이다.
  2. 제1항에 있어서, 화합물이 2'-플루오로-5-메틸-β-L-아라비노퓨라노실-우리딘인 약제학적 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 화합물이 2'-플루오로-5-메틸-β-L-아라비노퓨라노실-우리딘의 약제학적으로 허용되는 염인 약제학적 조성물.
  4. 제2항에 있어서, 화합물의 95% 이상이 단일 에난티오머 형태인 약제학적 조성물.
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  22. 제1항에 있어서, R'이 모노포스페이트, 디포스페이트 또는 트리포스페이트인 약제학적 조성물.
  23. 제2항에 있어서, 화합물의 97% 이상이 단일 에난티오머 형태인 약제학적 조성물.
  24. 제1항에 있어서, R'이 C1-18알킬; CO-C1-18알킬, CO-아릴, CO-C1-18알콕시C1-18알킬, CO-아릴C1-18알킬, CO-C1-18알킬-아릴, 또는 CO-아릴옥시-C1-18알킬, 여기서 아릴은 페닐, 비페닐 또는 나프틸인 약제학적 조성물.
  25. 제1항 또는 제2항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체가 경구 투여용인 약제학적 조성물.
  26. 제1항 또는 제2항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체가 정맥내 투여용인 약제학적 조성물.
  27. 제1항 또는 제2항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체가 비경구 투여용인 약제학적 조성물.
  28. 제1항 또는 제2항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체가 진피내 투여용인 약제학적 조성물.
  29. 제1항 또는 제2항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체가 피하 투여용인 약제학적 조성물.
  30. 제1항 또는 제2항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체가 국소 투여용인 약제학적 조성물.
  31. 제1항 또는 제2항에 있어서, 단위 제형인 약제학적 조성물.
  32. 제31항에 있어서, 단위 제형이 화합물을 10-1500mg 함유하는 약제학적 조성물.
  33. 제31항에 있어서, 단위 제형이 정제 또는 캡슐인 약제학적 조성물.
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