ES2272460T3 - L-fmau para el tratamiento de la infeccion viral hepatitis delta. - Google Patents

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Abstract

El uso de un compuesto de nucleósido para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la infección por hepatitis delta, que comprende un compuesto de la fórmula: en la que R es 5-metil uracilo (también denominado como timina) y R'' es hidrógeno, acilo, alquilo, monofosfato, difosfato, trifosfato, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

L-FMAU para el tratamiento de la infección viral hepatitis delta.
Esta invención pertenece al área de composiciones para el tratamiento de un huésped infectado con el virus de la hepatitis delta (también denominado como "HDV") para administrar una cantidad efectiva de un compuesto, en particular un nucleósido o un análogo de nucleósido, que sustancialmente reduce el nivel de antígeno superficial de la hepatitis B. En una forma de realización, el análogo de nucleósido es 2'-fluoro-5-metil-\beta-L-arabinofuranosil-uridina (también denominado como "L-FMAU")
Antecedentes de la invención
La hepatitis tipo D, la forma más grave de hepatitis vírica, está causada por infección con el virus de la hepatitis D (delta) (HDV), un satélite subvírico del virus de la hepatitis B (HBV) (Smedile, A., y col. (1994) Prog Liver Dis 12, 157-75). Comparado con otros agentes de la hepatitis vírica, la infección aguda por HDV está más frecuentemente asociada con la hepatitis fulminante, una forma de la enfermedad de progresión muy rápida y a veces fatal, en la que se destruyen cantidades masivas del hígado. La hepatitis tipo D crónica se caracteriza habitualmente por lesiones necroinflamatorias, similares a la infección crónica por HBV, pero es más grave, y frecuentemente progresa con rapidez a cirrosis y fallo hepático, contabilizando la asociación desproporcionada de la infección por HDV con la enfermedad hepática terminal (Smedile, A., y col. (1994) Prog Liver Dis 12, 157-75; Rizzetto, M., y col. (1983) Ann Intern Med 98, 437-41). Aunque la infección por HDV afecta menos individuos que la infección por HBV, el fallo hepático agudo o crónico resultante es un indicador habitual de trasplante de hígado, tanto en Europa como en Norteamérica (Smedile, A. & Rizzetto, M. (1992) Int J Clin Lab Res 22, 211-215; Wright, T. L. & Pereira, B. (1995) Liver Transplant Surgery 1, 30-42). La enfermedad crónica afecta a 15 millones de personas en todo el mundo, de las cuales aproximadamente 70.000 viven en los Estados Unidos. Los Centros para el Control de enfermedades estiman unas 1.000 muertes anuales en los Estados Unidos atribuidas a la infección por HDV (Alter, M. J. & Hadler, S. C. (1993) Prog Clin Biol Res 382, 243-50; Alter, M. J. & Mast, E. E. (1994) Gastroenterol Clin North Am 23, 437-55).
En la actualidad, no existe terapia efectiva generalmente aceptada para la hepatitis tipo D, y el transplante de hígado es la única opción para el estado final asociado de la enfermedad hepática. Aunque el interferón alfa ha tenido un éxito moderado en el tratamiento de algunos casos de hepatitis tipo D, la necesidad de mejores opciones de tratamiento está indicada por la muy alta dosificación requerida, respuesta variable, recaídas frecuentes tras el cese del tratamiento, y dificultades en la administración del fármaco (Thomas, H. C. y col. (1987) Prog Clin Biol Res 234, 277-90; Hoofnagle, J. y col. (1987) Prog Clin Biol Res 234, 291-8; Rosina, F. y col. (1987) Prog Clin Biol Res 234, 299-303; Rosina, F. y col. (1991) Hepatology 13, 1052-6; Farci, P. y col. (1994) N Engl J Med 330, 88-94; Hadziyannis, S. J. (1991) J. Hepatol 13 Suplemento 1:S21-6; Di Marco, V. y col. (1996) J Viral Hepat 3, 123-8; Porres, J. C. y col. (1989) J Hepatol 9, 338-44).
Lamivudina (\beta-L-2',3'-dideoxi-3'-tiacitidina, 3TC) es un nucleósido sintético que ha demostrado eficacia en el tratamiento de la infección por HIV y HBV. Ver la Patente de los Estados Unidos Nº 5.539.116 de Liotta y col. Se sabe que la lamivudina causa una supresión mantenida de la replicación del HBV durante el tratamiento (Nevens, F. y col. (1997) Gastroenterology 113:1258-1263). Sin embargo, la lamivudina no mejora los niveles de enfermedad o los niveles disminuidos de HDV-ARN en pacientes con hepatitis delta crónica (Lau, D. T. y col. (1999) Hepatology 30, 546-9). Lamivudina se ha aprobado recientemente en los Estados Unidos y en otros países para el tratamiento de la infección crónica por HBV. El tratamiento prolongado de los vehículos HBV crónicos con lamivudina lleva a niveles disminuidos de HBV en el suero, y a una histología hepática mejorada (Lai, C. L. y col. (1998) N Engl J Med 339, 61-8; Tyrrell, D. y col. (1993) Hepatology 18, 112A; Nevens, F. y col. (1997) Gastroenterology 113, 1258-63; Dienstag, J. L. y col. (1995) N Engl J Med 333, 1657-61). A pesar de sus efectos dramáticos sobre el HBV, el tratamiento con lamivudina de pacientes infectados de manera crónica con ambos HBV y HDV tiene poco efecto sobre los niveles de HDV en circulación; de manera más importante, no se produce mejora en la actividad de la enfermedad incluso cuando se han suprimido los niveles de HBV (Honkoop, P. y col. (1997) Hepatology 24 (suplemento), 1219 (resumen); Lau, D. T. y col. (1999) Hepatology 30, 546-9).
Se han ensayado otras formas de tratamiento. Por ejemplo, suramina in vitro bloquea la entrada del virión en los hepatocitos, pero es demasiado tóxico para que pueda aceptarse para tratamiento a largo plazo en seres humanos (Smeditle, A., y col. (1994) Prog Liver Dis 12, 157-75). Aciclovir mejora la replicación de in vitro (Smedile, A., y col. (1994) Prog Liver Dis 12, 157-75). Ribavirina no afecta de forma significativa los parámetros víricos o bioquímicos, y tiene efectos secundarios graves (Smedile, A., y col. (1994) Prog Liver Dis 12, 157-75). Los análogos sintéticos de la timosina han resultado también ser inefectivos en el tratamiento de la infección por HDV (Smedile, A. y col. (1994) Prog Liver Dis 12, 157-75).
Ninguno de los tratamientos descritos para la infección por HDV se acepta como efectivo de manera general. El virión HDV está compuesto por un núcleo de ribonucleoproteína y una cápsula. El núcleo contiene HDV-ARN y el antígeno de la hepatitis delta (HDAg), que es la única proteína que codifica el virus (Wang, K. S. y col. (1986) Nature 323, 508-14). La cápsula está formada por la proteína del antígeno superficial (antígeno superficial de la hepatitis B, o HBsAg) o del virus auxiliar, hepatitis B. (Bonino, F. (1984) Infect Immun 43, 1000-5; Bonino, F. y col. (1981) Hepatology 1, 127-31; Bonino, F. y col. (1986) J Virol 58, 945-50). La cápsula es la única función auxiliar que proporciona el HBV. HDV es capaz de replicar su ARN en el interior de células en ausencia de HBV (Kuo, M. Y. y col. (1989) J Virol 63, 1945-50), pero requiere HBsAg para el empaquetamiento y liberación de los viriones HDV (Wu, J. C. y col. (1991) J Virol 65, 1099-104; Ryu, W. S. y col. (1992) J Virol 66, 2310-2315), así como para la infectividad (Sureau, C., y col. (1992) J Virol 66, 1241-5). Como resultado de la dependencia del HDV respecto del HBV, el HDV infecta individuos únicamente en asociación con el HBV.
Puesto que el virus de la hepatitis de la marmota (WHV) esta muy relacionado con él (cerca del 85% de homología del ácido nucleico), se ha usado ampliamente como modelo de la infección por HBV y de la enfermedad en su huésped natural, la marmota oriental (M. monax) (Gerin, J. L. (1990) Gastroenterol Jpn 25 (Suplemento), 38-42; Tennant, B. C. y col. (1988) Viral Hepatites unand Liver Disease, 462-464). También se han usado extensamente marmotas infectadas para el análisis y desarrollo de terapéuticas anti-HBV (Zahm, F. E. y col. (1998) Ital J Gastroenterol Hepatol 30, 510-6; Tennant, B. C. y col. (1998) Hepatology 28, 179-91; Mason, W. S. y col. (1998) Virology 245, _{18}-32; Korba, B. E. y col. (1996) Hepatology 23, 958-63; Hurwitz, S. y col. (1998) Antimicrob Agents Chemother 42, 2804-2809; Block, T. M. y col. (1998) Nat Med 4, 610-4; Cullen, J. M. y col. (1997) Antimicrob Agents Chemother 41, 2076-82; Fourel, G. y col. (1990) Nature 347, 294-8; Gangemi, J. y col. (1997) Antivir Therap 1, 64-70; Genovesi, E. V. y col. (1998) Antimicrob Agents Chemother 42, 3209-17; Korba, B. E. y col. (2000) Antiviral Res 45, 19-32; Korba, B. E. y col. (2000) Antiviral Therapy 55, 95-105; Korba, B. E. y col. (2000) Antimicrobial Agents and Chemotherapy 44, 19-32. La eficacia de varios agentes anti-HBV usados para tratar de manera experimental la infección crónica por WHV en marmotas (araAMP, ribavirina, AZT, ACV, 3TC, famciclovir, FTC, alfa-interferón, fialuridina, ganciclovir, timosina alfa-1, terapia de combinación con 3TC y alfa-interferón o 3TC y famciclovir) ha puesto en paralelo de manera precisa los perfiles de eficacia y toxicidad de estos agentes, administrados a pacientes de HBV tratados en el curso de ensayos clínicos. La eficacia similar observada en marmotas infectadas por WHV y personas infectadas por HBV pueden ser predictivas de terapias anti-HBV en el hombre (Zahm, F. E. y col. (1998) Ital J Gastroenterol Hepatol 30, 510-6; Tennant, B. C. y col. (1998) Hepatology 28, 179-91; Mason, W. S. y col. (1998) Virology 245, 18-32; Hurwitz, S. y col. (1998) Antimicrob Agents Chemother 42, 2804-09; Fourel, G. y col. (1990) Nature 347, 294-8; Gangemi, J. y col. (1997) Antivir Therap 1, 64-70; Genovesi, E. V. y col. (1998) Antimicrob Agents Chemother 42, 3209-17; Korba, B. E. y col. (2000) Antiviral Res 44, 19-32; Korba, B. E. y col. (2000) Hepatology 31, 1165-75; Korba, B. E. y col. (2000) Antiviral Therapy 5, 95-105; Korba, B. E. y col. (2000) Antimicrob Agents Chemother 44, 1757-60). Al igual que el HBV, el WHV puede soportar la formación e infección de partículas de HDV, y la marmota oriental ha sido un modelo útil para la infección por HDV (Negro, F. y col. (1989) J Virol 63, 1612-8; Parana, R., Gerard, F., Lesbordes, J. L., Pichoud, C., Vitvitski, L., Lyra, L. G. & Trepo, C. (1995) J Hepatol 22, 468-73; Ciccaglione, A. R. y col. (1993) Arch Virol Suplemento 8, 15-21; Bergmann, K. F. y col. (1989) J Immunol 143, 3714-21; Ponzetto, A. y col. (1984) Proc Natl Acad Sci USA 81, 2208-12; Ponzetto, A. y col. (1987) Prog Clin Biol Res 234,
37-46).
La dependencia del HDV de su virus auxiliar HBV, podría sugerir que un tratamiento con éxito de la infección por HDV seguiría al tratamiento con éxito de la infección por HBV de soporte. Desafortunadamente, este no parece ser el caso, tal como ilustran los recientes resultados obtenidos con el fármaco lamivudina (Glaxo-Wellcome, Inc.) (Honkoop, P. y col. (1997) Hepatology 24 (Suplemento), 1219 (Resumen); Lau, D. T. y col. (1999) Hepatology 30, 546-9). La carencia de efecto de la lamivudina sobre la enfermedad en pacientes infectados con HBV-HDV subestima el papel directo del HDV en la gravedad de la enfermedad en dichos pacientes. Aunque la lamivudina inhibe la replicación de HBV y WHV, no afecta la produccion del antígeno vírico superficial (Lau, D. T. y col. (1999) Hepatology 30, 546-9; Doong, S. L. y col. (1991) Proc Natl Acad Sci USA 88, 8495-9; Korba y col. Hepatology, (2000) 31, 1165-75). El ciclo de vida del HBV y de otros representantes de esta familia de virus (por ejemplo, WHV) es único en que el procedimiento de replicación de copias genómicas del virus y de la produccion de proteínas víricas (por ejemplo, los antígenos superficiales de HBV o WHV) se regulan de manera diferente (Ganem, D. 1996, Hepadnaviridae; In "Fields Virology" Fields B N, Knipe D M, Howley P, ed. Lippincott-Raven, Filadelfia, p. 2703-2737). Por tanto, los agentes antivíricos, tales como los nucleósidos sintéticos (por ejemplo, lamivudina) que hacen diana en las polimerasas víricas, pueden inhibir de manera significativa la replicación del HBV (por ejemplo, tal como se determina mediante una reducción en la viremia), pero no afectan el nivel de ARN, vírico o de la produccion de proteínas víricas (por ejemplo, tal como se determina mediante los niveles de antígeno superficial del HBV en el plasma o suero). Dado que el ciclo de vida del HBV es único en la regulación diferencial de las proteínas víricas, y que se puede producir la HBsAg a partir de numerosos transcriptos alternativos, no se conoce hasta la fecha qué parámetros son esenciales para lograr un punto final terapéutico para el HDV.
La Patente de los Estados Unidos Nº 5.747.044 describe polipéptidos HDV inmunogénicos producidos de forma recombinante útiles como vacunas.
La Patente de los Estados Unidos Nº 5.932.219 de Chiron describe el genoma completo del virus de la hepatitis D, una familia de réplicas de ADNc del genoma completo del HDV, y muestra que partes de dichas secuencias de ADNc son útiles como sondas para diagnosticar la presencia del virus en muestras clínicas. La patente también describe proteínas codificadas por el ADNc que son útiles en la produccion de vacunas. En particular, la patente 5.932.219 describe una vacuna para la hepatitis D que incorpora los polipéptidos víricos p24 y p27. La Patente de los Estados Unidos Nº 5.750.350 de Chiron reivindica un kit útil en el análisis del virus de la hepatitis D que incluye un polipéptido codificado por el ORF 5 del genoma del HDV. La Patente de los Estados Unidos Nº 5.747.044 reivindica una partícula inmunogénica producida de forma recombinante que aumenta los anticuerpos frente al HDV, en el que la partícula incluye un polipéptido inmunogénico codificado por el ORF 5 de la secuencia de nucleótidos del HDV, o de su complemento.
La Patente de los Estados Unidos Nº 6.020.167 concedida 0a Medeva Holdings B. V. describe un procedimiento para tratar la hepatitis crónica y, de manera particular, la hepatitis B, que incluye administrar una composición que contiene antiHBsAg.
La Patente de los Estados Unidos Nº 5.770.584 describe un procedimiento para tratar una infección por el virus de la hepatitis mediante la administración de alquil lípidos o derivados de alquil lípidos.
La Patente de los Estados Unidos Nº 4.619.896 describe un procedimiento para desenmascarar el antígeno delta en la sangre de un animal, que incluye tratar el suero con un tensioactivo y, de manera opcional, con un agente disociador del anticuerpo - antígeno. El antígeno delta derivado de la sangre se usa como agente de diagnóstico en la detección y determinación de diferentes clases de anticuerpos respecto al virus de la hepatitis D.
El registro estatutario (United Status statutory invention) de invención H1.345 describe un procedimiento para evitar o tratar el virus de la hepatitis mediante la administración de un inhibidor de la proteína prenil transferasa
Sureau, y col., Production of Infectious Hepatitis Delta Virus In Vitro y Neutralization with Antibodies Directed against Hepatitis B Virus Pre-S Antigens, Journal of Virology, Febrero 1992, p 1241-1245 describen que las partículas de HDV producidas in vitro son infecciosas, y que (i) las partículas infecciosas están recubiertas con proteínas de la cápsula del HBV que contienen las regiones pre-S1 y pre-S2, (ii) los epitopos de las regiones pre-S1 y pre-S2 de la cápsula del HBV están expuestos a la superficie de las partículas de HDV, y que los anticuerpos dirigidos contra dichos epitopos tienen actividad neutralizante contra el HDV.
El análogo de nucleósido L-FMAU [2'-fluoro-5-metil-\beta-L-arabinofuranosil-uridina] es un compuesto conocido, y se ha demostrado que tiene una actividad antivírica significativa frente a la replicación del HBV en cultivos celulares, y contra el virus relacionado de la hepatitis B del pato, tanto en cultivos celulares como en patos infectados (Aguesse-Gennon, S. y col. (1998) Antimicrob Agents Chemother 42, 369-76; Balakrishna Pai, S. y col. (1996) Antimicrob Agents Chemother 40, 380-6; Chu, C. K. y col. (1995) Antimicrob Agents Chemother 39, 979-81; Fu, L. y col. (1999) Biochem Pharmacol 57, 1351-9; Kotra, L. P. y col. (1997) J Med Chem 40, 3635-44; Kukhanova, M. y col. (1998) Biochem Pharmacol 55, 1181-7; Ma, T. y col. (1997) J Med Chem 40, 2750-4; Ma, T. y col. (1996) J Med Chem 39, 2835-43; Xu, A. S. y col. (1998) Biochem Pharmacol 55, 1611-9; Yao, G. Q. y col. (1996) Biochem Pharmacol 51, 941-7); Peek, S. y col. (2001) Hepatology 33, 254-66; Zhu, Y. y col. (2001) J. Virol 75, 311-22.
Las Patentes de los Estados Unidos con números 5.587.362 y WO 95/20595 de Chu y col. describen y reivindican el L-FMAU y sus composiciones farmacéuticas para el tratamiento del HBV, y proporcionan una detallada descripción de la síntesis del compuesto. La Patente de los Estados Unidos Nº 5.567.688 de Chu y col. reivindica un procedimiento para el tratamiento del HBV usando L-nucleósidos entre los que se incluyen el L-FMAU. La Patente de los Estados Unidos Nº 5.565.438 de Chu y col. reivindica un procedimiento para tratar seres humanos infectados con el virus Epstein-Barr (EBV) con L-FMAU. Las Patentes de los Estados Unidos con números 5.808.040 y 5.753.789 describen el uso del L-FMAU para estabilizar un oligonucleótido incluyendo el compuesto en el 5'-terminal, 3'-terminal, o en el interior del oligonucleótido. El Documento WO 98/15375 describe un procedimiento para la fabricación del L-FMAU.
Se ha demostrado que el L-FMAU es un agente antivírico remarcablemente potente y de acción rápida frente al la replicación del WHV en marmotas infectadas de forma crónica (Korba, B. y col. (1999) Antivir. Res. 41, A54; Chu, C. y col. (1998) in Therapies for viral hepatitis, eds. Schinazi, R. & Sommadossi, J. (International Medical Press, Atlanta), Vol. pp 303-12; Peek, S. F. y col. (1997) Hepatology 26, 425A (Resumen 1_{18}7); Peek, S. F. y col. (2001) Hepatology 33, 254-66; Zhu, Y. y col. (2001) J. Virol 75, 311-22). Se ha descrito también que el L-FMAU induce la supresión del antígeno superficial del WHV en el suero (Korba, B. y col. (1999) Antivir. Res. 41, A54; Chu, C. y col. (1998) in Therapies for viral hepatitis, eds. Schinazi, R. & Sommadossi, J. (International Medical Press, Atlanta), Vol. pp 303-12; Peek, S. B. y col. (1997) Hepatology 26, 425A y Peek, S. B. y col. (2000) Hepatology 33, 254-66). Se ha demostrado que el L-FMAU tiene un perfil farmacocinético favorable, y suficiente biodisponibilidad oral en ratas y marmotas, lo que lo hace adecuado para una administración una vez al día (Wright, J. D. y col. (1995) Pharm Res 12, 1350-3; Wright, J. D. y col. (1996) Biopharm Drug Dispos 17, 197-207; Witcher, J. W. y col. (1997) Antimicrob Agents Chemother 41, 2184-7).
Debido al elevado número de personas infectadas con el virus de la hepatitis delta, los efectos devastadores de la infección por el virus de la hepatitis delta, y la falta de tratamientos efectivos, existe una necesidad crítica de procedimientos nuevos y efectivos para el tratamiento de la infección por el virus de la hepatitis delta.
Por tanto, es un objeto de la presente invención proporcionar composiciones para el tratamiento de un huésped, incluyendo un ser humano, infectado con el virus de la hepatitis delta.
Resumen de la invención
Se ha descubierto en la actualidad que la administración de un compuesto de nucleósido como el que se define en la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, reduce de forma sustancial el nivel del antígeno superficial de la hepatitis B (denominado a partir de ahora en el presente documento como HBsAg) en un huésped es útil en el tratamiento de la infección por el virus de la hepatitis delta en dicho huésped. Por reducción sustancial del HBsAg en un huésped se entiende que el compuesto de nucleósido reduce el antígeno superficial de la hepatitis B en al menos aproximadamente 10 veces o más, y de manera preferible, en 200- o 500- veces relativos a los valores de pretratamiento in vivo o in vitro, o a no más de 1, y de manera preferible, 0,5 o 0,1 microgramo por mililitro in vivo, tal como se determina en suero o plasma usando cualquier inmunoensayo convencional, por ejemplo, el ensayo comercial para el HBsAg humano (AUSZYME^{TM}, Abbott Laboratories, o el que se describe para el antígeno superficial de la hepatitis B en marmotas en: Viral Immunology 6:161,169; Cote, P. J., C. Roneker, K. Cass, F. Schodel, D. Peterson, B. Tennant, F. DeNoronha, y J. Gerin. 1993).
Se sabía con anterioridad que si un nucleósido o análogo de nucleósido no reduce de manera significativa los niveles de HBsAg en un huésped infectado con la hepatitis delta, por ejemplo, 3TC (\beta-L-2',3'-dideoxi-3'-tiacitidina), entonces dicho nucleósido no es efectivo en el tratamiento del virus de la hepatitis delta. Sin embargo, dado que el ciclo de vida del HBV único en la regulación diferencial de las proteínas víricas, y que el HBsAg se puede producir a partir de numerosos transcriptos alternativos, no se conoce hasta la fecha qué parámetros son esenciales para lograr un punto final terapéutico para el HDV, incluyendo la reducción, como opuesta a la eliminación, del HBsAg, mediante un nucleósido o análogo de nucleósido se traduciría en cualquier efecto terapéutico sobre el HDV. Más aún, no existía con anterioridad información acerca del grado de supresión de HBsAg necesario para alcanzar el resultado deseado, tal como se mide por las concentraciones en suero, o la duración del tratamiento necesario para un efecto continuado. Los nucleósidos conocidos no apuntan todos los modelos de produccion de HBsAg, y no se sabe de ninguno que suprima de forma rutinaria los niveles de HBsAg en suero. Finalmente, una célula del hígado del huésped debe co-infectarse a la vez con HBV o un virus hepadna diferente del de la hepatitis B que apoye la infección por HDV y el virus de la hepatitis delta con el fin de que la supresión del HBsAg sea efectiva frente a la formación del virus de la hepatitis delta, y la proporción de células hepáticas que producen HBsAg pero que no están co-infectadas no es conocida en cada caso. Las células hepáticas infectadas únicamente con el HBV pueden contribuir a los niveles de HBsAg en el suero, por lo que la supresión del HBsAg en dichas células no tendrá consecuencias sobre la formación del virus de la hepatitis delta.
Se ha establecido en la actualidad por primera vez mediante el nucleósido paradigma, y una forma de realización no limitante, L-FMAU, que si un nucleósido suprime la produccion de HBsAg, de forma que afecte a una reducción sustancial y continua de los niveles de HBsAg en suero o plasma, es decir, en aproximadamente 100 veces o menos de los valores de pretratamiento in vivo o in vitro, será útil para el tratamiento del virus de la hepatitis delta.
Por tanto, la administración de un medicamento como el que se define en la reivindicación 1 reduce el HBsAg en un huésped infectado en al menos aproximadamente 100 veces o más, y de manera preferible, en 200- o 500- veces relativos a los valores de pretratamiento in vivo o in vitro, o a no más de 1, y de manera preferible, 0,5 o 0,1 microgramo por mililitro in vivo, tal como se determina en suero o plasma usando cualquier inmunoensayo convencional, por ejemplo, el ensayo comercial para el HBsAg humano (AUSZYME^{TM}, Abbott Laboratorios, o el que se describe para el antígeno superficial de la hepatitis B en marmotas en: Viral Immunology 6:161,169; Cote, P. J., C. Roneker, K. Cass, F. Schodel, D. Peterson, B. Tennant, F. DeNoronha, y J. Gerin. 1993).
Se ha descubierto también que la administración de un medicamento como el que se define en la reivindicación 1 que reduce de manera sustancial el nivel de antígeno preS1 en un huésped es útil en el tratamiento de la infección por virus de la hepatitis delta en dicho huésped. Por reducción de manera sustancial del nivel de antígeno preS1 en un huésped se entiende que el compuesto de nucleósido reduce el antígeno superficial de la hepatitis B en al menos aproximadamente 100 veces o más, y de manera preferible, en 200- o 500- veces relativos a los valores de pretratamiento in vivo o in vitro, usando un ensayo adecuado, entre los que se incluye el de Deepen R, Heermann K H, Uy A, Thomssen R, Gerlich W H. "Assay of preS epitopes and preS1 antibody in hepatitis B virus carriers and immune persons" Med Microbiol Immunol (Berl). 1990; 179(1):49-60.
Una cantidad efectiva de L-FMAU o de una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo se administra a un huésped necesitado del mismo para tratar una infección por el virus de la hepatitis delta. En una forma de realización preferida L-FMAU se administra a un huésped necesitado del mismo en ausencia de su correspondiente \beta-D enantiómero (es decir, en una forma enantioméricamente enriquecida o enantioméricamente pura).
En otra forma de realización, L-FMAU se administra en combinación con al menos otro agente que disminuya HBsAg o preS1, que puede ser otro nucleósido, un análogo de nucleósido o un no nucleósido para el tratamiento de un huésped infectado por el virus de la hepatitis delta. En otra forma de realización, el agente tratante de la hepatitis delta se administra en combinación con un agente que tenga actividad frente a la hepatitis B, aunque el agente anti-hepatitis B disminuya o no el antígeno superficial de la hepatitis B.
La invención está basada en el descubrimiento fundamental que L-FMAU, como compuesto activo modelo, suprime la expresión del antígeno superficial de la hepatitis B en cantidad suficiente para inhibir de manera efectiva el empaquetamiento y liberación de los viriones de HDV. Se presenta en el presente documento la evidencia de que L-FMAU produce una disminución sustancial en los niveles de viremia HDV suprimiendo la expresión del antígeno superficial de la hepatitis B.
Estos y otros aspectos, características y ventajas de la presente invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción de las actuales formas de realización preferida de la invención. Estas formas de realización se proporcionan a efectos de descripción.
Breve descripción de los dibujos
La Fig. 1 es una ilustración del L-FMAU (2'-fluoro-5-metil-\beta-L-arabino-furanosiluridina).
La Fig. 2 es una ilustración esquemática de la preparación de la 1-O-acetil-2,3,5-tri-O-benzoil-\beta-L-ribofuranosa (compuesto 10).
La Fig. 3 es una ilustración esquemática de una preparación alternativa de la 1-O-acetil-2,3,5-tri-O-benzoil-\beta-L-ribofuranosa (compuesto 10).
La Fig. 4 es una ilustración esquemática de un procedimiento para la preparación de 1,3,5-tri-O-benzoil-2-deoxi-2-fluoro-\beta-L-arabinofuranosa (compuesto 13).
La Fig. 5 es una ilustración esquemática de un procedimiento para la preparación del 2'-deoxi-2'-fluoro-\beta-L-arabinofuranosil]-5-metil uridina 5'-benzoil protegido y desprotegido (compuestos 17 y 18).
La Fig. 6A es un gráfico lineal de semanas de tratamiento con L-FMAU en marmotas frente a equivalentes genómicos por ml de ARN de HDV en suero, y demuestra la disminución del ARN de HDV en marmotas infectadas con HDV tratadas con L-FMAU durante veinte semanas. Las marmotas crónicamente infectadas con HDV se infectaron con un inóculo de HDV adaptado para marmotas derivado de un clon de laboratorio infeccioso. Se estableció la cronicidad por una viremia HDV detectable de al menos el 74% de fechas de sangrado durante al menos 11 meses antes del inicio del tratamiento. Los resultados indican que el tratamiento con L-FMAU origina una disminución significativa en el suero HDV-ARN.
La Fig. 6B es un gráfico lineal de semanas de tratamiento con L-FMAU en marmotas frente a WHV-ADN en suero de marmota en equivalentes genómicos por ml. Las marmotas crónicamente infectadas con WHV se infectaron con un inóculo de HDV adaptado para marmotas derivado de un clon de laboratorio infeccioso. Se estableció la cronicidad por una viremia HDV detectable de al menos el 74% de fechas de sangrado durante al menos 11 meses antes del inicio del tratamiento. Los resultados indican que el tratamiento con L-FMAU origina una disminución significativa en el WHV-ADN en suero.
La Fig. 6C es un gráfico lineal de semanas de tratamiento con L-FMAU en marmotas frente a WHsAg en suero de marmota en \mug/mL. Las marmotas crónicamente infectadas con WHV se infectaron con un inóculo de HDV adaptado para marmotas derivado de un clon de laboratorio infeccioso. Se estableció la cronicidad por una viremia HDV detectable de al menos el 74% de fechas de sangrado durante al menos 11 meses antes del inicio del tratamiento. Los resultados indican que el tratamiento con L-FMAU origina una disminución significativa en el WHsAg en suero.
La Fig. 7A es un gráfico lineal que muestra la presencia de ARN de HDV en el suero de marmotas infectadas por HDV a lo largo de veinte semanas en ausencia de L-FMAU.
La Fig. 7B es un gráfico lineal que muestra los niveles en suero de ADN de WHV en marmotas lo largo de veinte semanas en ausencia de L-FMAU.
La Fig. 7B es un gráfico lineal que muestra los niveles en suero de WHsAg en marmotas lo largo de veinte semanas en ausencia de L-FMAU.
La Fig. 8 es un gráfico lineal del ARN de HDV promedio en suero en equivalentes genómicos por ml frente a semanas. El gráfico compara el nivel medio de HDV en suero en las cinco marmotas no tratadas (puntos con círculos), con los de las marmotas 4878, 4879, y 4883 tratadas con L-FMAU (puntos con cuadrados), en donde los niveles de WHsAg cayeron más de 100 veces durante el tratamiento (ver la Fig. 6B). El gráfico muestra una bajada súbita en el ARN de HDV en estos tres animales tratados a las 8 semanas de tratamiento, comparado con el nivel de éste en los mismos animales al inicio del tratamiento, y comparados con los niveles de los cinco animales no tratados en cualquier momento.
Descripción detallada de la invención
La presente invención proporciona el uso de un compuesto de nucleósido como se define en la reivindicación 1, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la infección por el virus de la hepatitis delta (HDV) en un huésped, en particular un ser humano. La administración de dicho medicamento proporciona una reducción sustancial y continua en la expresión del antígeno superficial de la hepatitis B (HBsAg) o antígeno preS1. El inesperado fallo de la lamivudina, un compuesto conocido por suprimir la replicación del HBV, por reducir los niveles de HDV-ARN en pacientes, demuestra que el tratamiento con éxito del HBV no se correlaciona de manera necesaria con un tratamiento con éxito del HDV. La presente invención está basada en el sorprendente descubrimiento que compuestos que proporcionan una reducción sustancial y continua en la expresión del antígeno superficial de la hepatitis B (HBsAg) o antígeno preS1, entre los que se incluye el L-FMAU, son potentes inhibidores de la replicación del HDV. L-FMAU es un supresor particularmente fuerte de la expresión del antígeno superficial de la hepatitis B. De esta forma, esta invención presenta el descubrimiento fundamental de que la supresión sustancial y continua del HBsAg o del antígeno preS1 puede producir una reducción significativa en la viremia HDV en un huésped infectado con dichos virus. De manera alternativa, un huésped infectado con la hepatitis delta junto con un hepadnavirus diferente al de la hepatitis B que soporta la infección por HDV puede tratarse mediante la supresión sustancial de la expresión del antígeno superficial de la hepatitis B o del antígeno preS1.
La presente invención se puede usar para suprimir de forma sustancial la expresión del antígeno superficial de la hepatitis B o del antígeno preS1.
La presente invención se puede usar para tratar un huésped infectado por HDV, que comprende la etapa de administrar una cantidad efectiva de L-FMAU, o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable, de manera opcional en un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En otra forma de realización adicional, se puede usar L-FMAU, u otro nucleósido o análogo de nucleósido que actúe de manera similar, o un profármaco o sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, de manera opcional en un vehículo farmacéuticamente aceptable, para la fabricación de un medicamento que se suministra a un huésped necesitado del mismo, en combinación con al menos otro compuesto que reduzca el nivel del antígeno superficial de la hepatitis B o del antígeno preS1.
I. Definiciones
Tal como se usan en el presente documento, los términos "HBsAg" y "antígeno superficial de la hepatitis B" se refieren a la proteína del antígeno superficial de cualquier miembro de la familia de los hepadnavirus, en particular incluye el virus de la hepatitis B humana (HBV) y el virus de la hepatitis de la marmota (WHV).
Tal como se usa en el presente documento, el término "enantioméricamente puro" se refiere a una composición de nucleósido que incluye al menos aproximadamente un 95%, y de manera preferible aproximadamente un 97%, 98%, 99% o 100% de un único enantiómero de dicho nucleósido.
Tal como se usa en el presente documento, el término "huésped" se refiere a cualquier animal capaz de ser infectado por el virus de la hepatitis delta, incluyendo pero no limitándose a los seres humanos y otros mamíferos.
El término "sal farmacéutica" se refiere a una sal que retiene la actividad biológica del compuesto padre, y que proporciona efectos biológicos indeseables al anterior. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las derivadas de bases y ácidos orgánicos e inorgánicos farmacéuticamente aceptables. Entre las sales adecuadas se incluyen las derivadas de metales alcalinos tales como sodio y potasio, metales alcalinotérreos tales como sales de calcio, magnesio y amonio, entre otros numerosos ácidos bien conocidos en la técnica farmacéutica.
Tal como se usa en el presente documento, el término "nucleósido" se refiere a una base nitrogenada heterocíclica, de manera preferible una purina o pirimidina, con un enlace n-glicosídico con un carbohidrato o pseudo carbohidrato, de manera preferible una pentosa, o un análogo de azúcar o un sistema de anillos de carbono modificado que incluya uno o más heteroátomos, y al cual se enlaza cualquier sustituyente deseado, y en el que el compuesto puede ser natural o sintético, y en el que el nucleósido puede mostrar cualquier estereoquímica deseada que consiga el resultado adecuado.
Tal como se usa en el presente documento, el término "análogo de nucleósido" se refiere a una base nitrogenada heterocíclica, de manera preferible una purina o pirimidina, con un enlace N-glicosídico o carbocíclico con una cadena de carbono acíclica que puede incluir heteroátomos, y que puede incluir sustituyentes en la cadena cíclica o acíclica, incluyendo un grupo hidroxilo.
Tal como se usa en el presente documento, el término base de purina o pirimidina incluye, pero no se limita a, 6-alquilpurina y N6-alquilpurinas, N6-acilpurinas, N6-bencilpurina, 6-halopurina, N6-vinilpurina, N6- purina acetilénica, N6-acil purina, N6-hidroxialquil purina, N6-tioalquil purina, N2-alquilpurinas, N4-alquilpirimidinas, N4-acil-pirimidinas, 4-bencilpirimidina, N4-halopirimidinas, N4-pirimidinas acetilénicas, 4-acil y N4-acil pirimidinas, 4-hidroxialquil pirimidinas, 4-tioalquil pirimidinas, timina, citosina, 6-azapirimidina, incluyendo 6-azacitosina, 2- y/o 4-mercapto-pirimidina, uracilo, C5-alquilpirimidinas, C5-bencilpirimidinas, C5-halopirimidinas, C5-vinilpirimidina, C5-pirimidina acetilénica, C5-acil pirimidina, C5-hidroxialquil purina, C5-amidopirimidina, C5-cianopirimidina, C5-nitropirimidina, C5-amino-pirimidina, N2-alquilpurinas, N2-alquil-6-tiopurinas, 5-azacitidinil, 5-aza-uracililo, triazolopiridinil, imidazolopiridinil, pirrolopirimidinil, y pirazolopirimidinil. Los grupos funcionales con oxigeno y nitrógeno de la base se pueden proteger según se necesite o desee. Los grupos protectores adecuados son bien conocidos de las personas expertas en la técnica, e incluyen trimetilsililo, dimetilhexilsililo, t-butildimetilsililo, y t-butil-difenilsililo, tritilo, grupos alquilo, grupos acilo tales como acetilo y propionilo, metanosulfonilo, y p-toluenesulfonilo. Entre los ejemplos de dichas bases se incluye citosina, 5-fluorocitosina, 5-bromocitosina, 5-yodocitosina, uracilo, 5-fluorouracilo, 5-bromo-uracilo, 5-yodouracilo, 5-metiluracilo, timina, adenina, guanina, inosina, xantina, 2,6-diaminopurina, 6-aminopurina, 6-cloropurina y 2,6-dicloropurina, 6-bromo-purina, 2,6-dibromopurina, 6-yodopurina, 2,6-di-yodopurina, 5-bromovinilcitosina, 5-bromoviniluracilo, 5-bromoetenilcitosina, 5-bromoeteniluracilo, 5-trifluorometil-citosina, 5-trifluorometiluracilo.
El término "protegido" tal como se usa en el presente documento y a no ser que se defina de forma diferente, se refiere a un grupo que se añade a un átomo de oxígeno o nitrógeno para evitar su reacción adicional en el curso de la derivatización de otras fracciones en la molécula en la que se localiza el oxígeno o nitrógeno. Las personas expertas en la técnica de la síntesis orgánica conocen una amplia variedad de grupos protectores del oxígeno o nitrógeno.
El término alquilo, tal como se usa en el presente documento, a no ser que se defina de forma diferente, se refiere a un hidrocarburo primario, secundario, o terciario, saturado, lineal, ramificado o cíclico, comprendido normalmente entre C_{1} y C_{18}, y de manera específica incluye metil, etil, propil, isopropil, butil, isobutil, t-butil, pentil, ciclopentil, isopentil, neopentil, hexil, isohexil, ciclohexil, ciclohexilmetil, 3-metilpentil, 2,2-dimetilbutil, y 2,3-dimetilbutil. El grupo alquilo puede estar sustituido de manera opcional con una o más fracciones seleccionadas entre el grupo constituido por hidroxilo, amino, alquilamino, arilamino, alcoxi, ariloxi, nitro, ciano, ácido sulfónico, sulfato, ácido fosfónico, o fosfato o fosfonato, ya estén desprotegidos, o protegidos según sea necesario, tal como conocen las personas expertas en la técnica, por ejemplo, como se enseña en Greene, y col., "Protective Groups in Organic Synthesis," John Wiley and Sons, Segunda Edición, 1991.
El término alquilo inferior, tal como se usa en el presente documento, y a no ser que se defina de forma diferente, se refiere a un grupo alquilo saturado lineal o ramificado comprendido entre C_{1} y C_{4.}
El término arilo, tal como se usa en el presente documento, y a no ser que se defina de forma diferente, se refiere a fenilo, bifenilo, o naftilo, y de manera preferible fenol- El grupo arilo se puede sustituir de manera opcional con una o más fracciones seleccionadas entre el grupo constituido por hidroxilo, amino, alquilamino, arilamino, alcoxi, ariloxi, nitro, ciano, ácido sulfónico, sulfato, ácido fosfónico, o fosfato o fosfonato, ya estén desprotegidos, o protegidos según sea necesario, tal como conocen las personas expertas en la técnica, por ejemplo, como se enseña en Greene, y col., "Protective Grupos in Organic Synthesis," John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991.
El término alcarilo o alquilarilo se refiere a un grupo alquilo con un sustituyente arilo.
El término aralquilo o arilalquilo se refiere a un grupo arilo con un sustituyente alquilo.
El término halo, tal como se usa en el presente documento, incluye cloro, bromo, yodo y fluoro.
Tal como se usa en el presente documento, el término acilo se refiere a una fracción de fórmula -C(O)R', en la que R' es alquilo; arilo, alcarilo, aralquilo, heterociclo, alcoxialquilo incluyendo metoximetilo; arilalquilo incluyendo bencilo; ariloxialquilo tal como fenoximetilo; arilo incluyendo fenilo sustituido de manera opcional con halógeno, alquilo C_{1} a C_{4} o alcoxilo C_{1} a C_{4}, o el residuo de un aminoácido.
El término aminoácido incluye aminoácidos naturales y sintéticos, e incluye alanilo, valinilo, leucinilo, isoleucinilo, prolinilo, fenilalaninilo, triptofanilo, metioninilo, glicinilo, serinilo, treoninilo, cisteinilo, tirosinilo, asparaginilo, glutaminilo, aspartoilo, glutaroilo, lisinilo, argininilo, y histidinilo.
El término heterociclo, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una fracción de anillo que incluye al menos un azufre, oxígeno o nitrógeno en el sistema de anillo. Los ejemplos son furil, piridil, pirimidil, tienil, isotiazolil, imidazolil, tetrazolil, pirazinil, benzofuranil, benzotiofenil, quinolil, isoquinolil, benzotienil, isobenzofuril, pirazolil, indolil, isoindolil, benzimidazolil, purinil, carbazolil, oxazolil, tiazolil, isotiazolil, 1,2,4-tiadiazolil, isooxazolil, pirrolil, quinazolinil, piridazinil, pirazinil, cinnolinil, ftalazinil, quinoxalinil, xantinil, hipoxantinil, y pteridinil. Los grupos funcionales de oxígeno y nitrógeno en la base heterocíclica se pueden proteger según sea necesario o deseado. Los grupos protectores adecuados con bien conocidos de las personas expertas en la técnica, en incluyen trimetilsililo, dimetilhexilsililo, t-butildimetilsililo, y t-butildifenilsililo, tritilo o tritilo sustituido, grupos alquilo, grupos acilo tal como acetilo y propionilo, metanosulfonilo, y p-toluenosulfonilo. El grupo heterociclo se puede sustituir con cualquier sustituyente apropiado, incluyendo fluoro, yodo, bromo, cloro y alquilo, incluyendo ciclo-
propilo.
El término profármaco lipófilo se refiere a un nucleósido que contiene un sustituyente covalente en la posición del 5'-hidroxilo que vuelve al nucleósido más lipófilo que el nucleósido padre con una grupo 5'-hidroxilo.
II. Compuestos activos
Se ha descubierto que la administración de un compuesto de nucleósido definido en la reivindicación 1, o profármaco o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que reduce el nivel del antígeno superficial de la hepatitis B (denominado a partir de ahora en el presente documento como HBsAg) en un huésped en al menos aproximadamente 100 veces o más, y de manera preferible, en 200- o 500- veces relativos a los valores de pretratamiento in vivo o in vitro, o a no más de 1, y de manera preferible, 0,5 o 0,1 microgramo por mililitro in vivo, es útil en el tratamiento de la infección viral de la hepatitis delta en un huésped. La capacidad de un nucleósido para reducir el nivel de HBsAg al mínimo nivel necesario se puede evaluar de manera sencilla mediante los procedimientos que se describen en detalle en el presente documento, o por otros procedimientos conocidos.
Se ha descubierto que la administración de un compuesto de nucleósido definido en la reivindicación 1, o profármaco o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que reduce el nivel del antígeno preS1 en un huésped en al menos aproximadamente 100 veces o más, y de manera preferible, en 200- o 500- veces relativos a los valores de pretratamiento in vivo o in vitro, o a no más de 1, y de manera preferible, 0,5 o 0,1 microgramo por mililitro in vivo. La capacidad de un nucleósido para reducir el nivel de antígeno preS1 al mínimo nivel necesario se puede evaluar de manera sencilla mediante procedimientos conocidos.
Se sabía con anterioridad que si un nucleósido o análogo de nucleósido no reduce de manera significativa los niveles de HBsAg en un huésped infectado con la hepatitis delta, por ejemplo, 3TC (\beta-L-2',3'-dideoxi-3'-tiacitidina), entonces dicho nucleósido no es efectivo en el tratamiento del virus de la hepatitis delta. Sin embargo, el inverso no se ha establecido nunca, es decir, si un nucleósido o análogo de nucleósido reduce el nivel en al menos aproximadamente 100 veces o más, relativos a los valores de pretratamiento in vivo o in vitro, o a no más de 1 microgramo por mililitro in vivo tal como se determina en suero o plasma usando cualquier inmunoensayo convencional, por ejemplo, el ensayo comercial para el HBsAg humano (AUSZYME^{TM}, Abbott Laboratorios, o el que se describe para el antígeno superficial de la hepatitis B en marmotas en: Viral Immunology 6:161,169; Cote, P. J., C. Roneker, K. Cass, F. Schodel, D. Peterson, B. Tennant, F. DeNoronha, y J. Gerin. 1993), es efectivo para el tratamiento del virus de la hepatitis delta. Se ha establecido en la actualidad por vez primera a partir del análogo de nucleósido paradigma, y una forma de realización, L-FMAU.
III. Uso de L-FMAU en el tratamiento de la infección por HDV
En una forma de realización de la invención, una cantidad efectiva de un compuesto de Fórmula I, o una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo se administra con la estructura:
1
en la que R es 5-metil uracil (también denominado como timina) y R' es hidrógeno, acil, alquil, monofosfato, difosfato, trifosfato, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
IV. Profármacos de los compuestos activos
El compuesto activo se puede administrar en forma de cualquier derivado que, tras la administración al paciente, sea capaz de proporcionar de manera directa o indirecta, el compuesto padre. Los ejemplos son las sales farmacéuticamente aceptables y lo derivados 5' y purina o pirimidina acilados o alquilados del compuesto activo (si es un nucleósido o análogo de nucleósido). En una forma de realización, el grupo acilo del compuesto activo es un éster de ácido carboxílico, en el que la fracción de no carbonilo del grupo éster se selecciona entre alquilos lineales, ramificados o cíclicos, alcoxialquilo incluyendo metoximetilo, aralquilo incluyendo bencilo, ariloxialquilo tal como fenoximetilo, arilo incluyendo fenilo sustituido de manera opcional con halógeno, alquilo C_{1} a C_{4} o alcoxi C_{1} a C_{4}, ésteres de sulfonato tales como alquil o aralquil sulfonilo incluyendo metanosulfonilo, el éster mono, di o trifosfato, tritilo o monometoxitritilo bencilo, sustituido, trialquilsililo (por ejemplo, dimetil-t-butilsililo) o difenil-metilsililo. Los grupos arilos en los ésteres comprenden de manera óptima un grupo fenilo. El grupo alquilo puede ser lineal, ramificado o cíclico, y de manera optima es un grupo C_{1} a C_{18}.
V. Terapia de combinación
En otras formas de realización de la invención, el tratamiento de la infección por HDV se puede llevar a cabo usando L-FMAU u otro nucleósido o análogo de nucleósido como se define en las reivindicaciones, en combinación o alternancia con otros agentes que reducen el nivel de los antígenos superficial de la hepatitis B o preS1 en el huésped, o de los que se sepa que tratan de cualquier otra manera la infección por hepatitis delta, incluyendo una ribozima (ver la Patente de los Estados Unidos Nº 5.985.621), citoquina que incluye interleuquinas, interferón (incluyendo \alpha, \beta, o \gamma), un anticuerpo de los antígenos superficial de la hepatitis B o preS1 o un factor de trascripción u otro mediador de la expresión de los antígenos superficial de la hepatitis B o preS1 (para impartir inmunidad pasiva), un antígeno superficial de la hepatitis B o un antígeno preS1 o un factor de trascripción u otro mediador de la expresión del antígeno superficial de la hepatitis B (para impartir inmunidad activa, un inhibidor de la proteína prenil transferasa (Invención Estatutaria Nº HI-345), o un péptido hormona (por ejemplo, timosín-alfa-1).
En general, durante la terapia alternante, se administra en serie una dosificación efectiva de cada agente, mientras que en la terapia de combinación, se administra de manera conjunta una dosificación efectiva de uno o más agentes. Las dosificaciones dependerán de factores tales como la absorción, biodistribución, metabolismo y tasa de excreción de cada fármaco, así como otros factores conocidos de aquellas personas expertas en la técnica. Debe tenerse en cuanta que los valores de dosificación variarán también con la gravedad de la enfermedad a tratar. Debe entenderse de manera adicional que, para cualquier sujeto concreto, se deben ajustar de forma específica los regímenes especiales y calendarios de dosificación con el tiempo de acuerdo con la necesidad individual y el juicio profesional de la persona que administra o supervise la administración de las composiciones. Los regímenes descritos de combinación y alternancia son útiles en la prevención y tratamiento de las infecciones por HDV, y otras enfermedades relacionadas. Además, estos compuestos o formulaciones se pueden usar de forma profiláctica para evitar o retrasar la progresión de la enfermedad clínica en individuos que hayan estado expuestos al HDV.
VI. Síntesis del L-FMAU
Los L-nucleósidos descritos en el presente documento se pueden preparar como se describe en detalle más adelante, o mediante otros ensayos conocidos de las personas expertas en la técnica.
Haciendo referencia a la Fig. 3, partiendo de la L-xilosa (1a), se sintetiza el intermedio clave 1-O-acetil-2,3,5-tri-O-benzoil-\alpha-L-ribofuranosa (10) con un rendimiento total del 20% (L. Vargha, Chem. Ber., 1954, 87, 1351; Holy, A., y col., Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry, V1, 163-67). Tal como se muestra en la Fig. 4, el compuesto 10 se puede sintetizar también a partir del material de partida mucho más caro L-ribosa (Holy, A., y col., Synthetic Procedures in Nucleic Ácido Chemistry, V1, 163-67). La Fig. 3 ilustra una síntesis alternativa del compuesto 10 (rendimiento del 53%), que se fluoró posteriormente en el C_{2} (J. Org. Chem. 1985, 50, 3644-47) para obtener la 1,3,5-tri-O-benzoil-2-deoxi-2-fluoro-L-arabinofuranosa (13), que se condensó usando timina sililada a través del bromoazúcar para dar el L-FMAU protegido.
1,2-Di-O-isopropilideno-\alpha-L-xilofuranosa (3)
A 650 mL de acetona anhidra se añadieron 4 mL de ácido sulfúrico conc., 5 g de tamiz molecular (4A), 80 g de sulfato cúprico anhidro y 50 g de L-xilosa y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 36 horas. La mezcla de reacción se filtró y lavó completamente con acetona, el filtrado combinado se neutralizó con hidróxido de amonio, y se evaporó a continuación hasta sequedad. Se añadió acetato de etilo (200 ml), y a continuación se filtró y evaporó, dando como resultado un aceite que se disolvió en 250 ml de solución HCl al 0,2% y se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 horas. Se ajustó el pH a 8 con NaHCO_{3}, a continuación se evaporó hasta sequedad, el residuo se extrajo con acetato de etilo. La eliminación del solvente proporcionó un aceite amarillo del compuesto 3 (41,7 g, 82,3%).
^{1}H-RMN(CDCl_{3}): \delta 5,979 (d, J = 3,78 Hz, 1H, H-1); 4,519 (d, J = 3,6 Hz, 1H, H-2); 4,308 (bd, 1H, H-3); 4,080 (m, 3H, H-4 y H-5); 1,321 (s, 3H, CH_{3}); 1,253 (s, 3H, CH_{3}).
1,2-Di-O-isopropilideno-3,5-O-di-(o-tolilsulfonil)-\alpha-L-xilofuranosa (4)
El compuesto 3 (40 g, 210 mmol) se agitó en 500 ml de piridina anhidra a 0ºC, a la vez que se añadía gota a gota TsCl (75 g, 393 mmol) disuelto en 100 ml de CHCl_{3}. Después de 3 horas, se añadió otra porción de TsCl (50 g, 262 mmol) en 50 ml de CHCl_{3} como anteriormente. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 24 h, a continuación se enfrió hasta 0ºC, se añadió agua (10 mL), a continuación se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reacción se vertió sobre 500 mL de agua - hielo, se extrajo con CHCl_{3} (150 mL X 4), se lavó con H_{2}SO_{4} 1,5M (150 mL X 4), NaHCO_{3} saturado (200 mL X 2), se secó (MgSO_{4}). La eliminación del solvente proporcionó un jarabe marrón, que tras cristalización en EtOH, proporcionó 4 en forma de un sólido blanco (103,8 g, 99%).
^{1}H-RMN(CDCl_{3}): \delta 7,282, 7,836 (m, 8H, OTs); 5,849 (d, J = 3,51 Hz, 1H, H-1); 4,661, 4,779 (m, 2H, H-3 y H-4); 4,193 (dd, 1H, H-2); 4,011 (d, 2H, H-5); 2,448, 2,478 (2s, 6H, -OTs); 1,261, 1,320 (2s, 6H, CH_{3}).
1,2-Di-O-acetil-3,5-di-O-p-tolilsulfonil \alpha-\beta-xilofuranosa (5)
El compuesto 4 (70 g, 140,5 mmol) se disolvió en 700 mL de AcOH glacial y 100 mL de Ac_{2}O a la vez que se añadían gota a gota 50 mL de ácido sulfúrico conc. A 0ºC. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche, y a continuación se vertió sobre 1 L de agua - hielo, se extrajo con CHCl_{3} (200 mL X 4), se lavó con saturado NaHCO_{3}, se secó (MgSO_{4}). Tras eliminar el solvente a vacío, se consiguió 5 en forma de un jarabe (84,2 g, rendimiento crudo 110%).
Metil-3,5-di-O-p-tolilsulfonil-\alpha,\beta-xilofuranosa (6)
El producto crudo (80 g) se agitó en 500 mL de HCl/CH_{3}OH al 1% a temperatura ambiente durante 30 horas. El solvente se eliminó a presión reducida, el residuo se disolvió en 300 mL de CHCl_{3}, se lavó con NaHCO_{3} saturado, se secó (MgSO_{4}). La eliminación del solvente proporcionó 6 en forma de un jarabe (60 g, 90% a partir de 4).
Metil-2-O-benzoil-3,5-di-O-p-tolilsulfonil-\alpha,\beta-xilofuranósido (7)
El jarabe 6 (60 g, 127 mmol) se disolvió en 200 mL de piridina, y se agitó a 0ºC, a la vez que se añadía gota a gota cloruro de benzoílo (40 mL, 345 mmol), la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 17 horas. Se concentró hasta aproximadamente 50 mL, a continuación se vertió sobre 300 ml de agua - hielo, se extrajo con CHCl_{3}, se lavó con H_{2}SO_{4} 3 N y NaHCO_{3} saturado, se secó (MgSO_{4}). Tras la evaporación del solvente, se consiguió 7 en forma de un jarabe (71 g, 97%).
Metil-2,3,5-tri-O-benzoil-\alpha-\beta-L-ribofuranósido (9)
El jarabe 7 (70 g) y benzoato de sodio (100 g, 694 mmol) se suspendieron en 1200 ml de DMF y se agitaron mecánicamente a reflujo durante 16 horas. Se refrigeró a temperatura ambiente, y a continuación se vertió sobre 1 l de agua - hielo, se extrajo con éter, y se secó (MgSO_{4}). La evaporación del solvente proporcionó un jarabe (50 g, 8a y 8b), que se disolvió en 180 mL de piridina y se benzoaciló (BzCl, 20 mL, 172 mmol) durante 17 h a temperatura ambiente. Tras trabajarlo, proporcionó o en forma de un jarabe marrón (48 g, 83% a partir de 7).
1-O-acetil-2,3,5-tri-O-benzoil-\beta-L-ribofuranosa (10)
El compuesto 9 (26 g, 54,6 mmol) se trató con 275 mL de ácido acético glacial, 55 ml de anhídrido acético y 16 ml de ácido sulfúrico conc. a 0ºC a temperatura ambiente durante 17 horas. A continuación se vertió sobre 1 l de agua - hielo, se extrajo con cloroformo (200 mL X 4). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con NaHCO_{3} saturado y se secaron (MgSO_{4}). La eliminación del solvente proporcionó un jarabe marrón que se trató con etanol para dar 10 en forma de un sólido blanco (8,8 g, 32%). PF 124,7ºC, lit.129º - 130ºC; D a partir de 130º-131ºC D: [\alpha]_{D} = -45,613 (C 1,0, CHCl_{3}), forma D: [\alpha]_{D} = +44,2.
^{1}H-RMN(CDCl_{3}): \delta 7,317, 8,134 (m, 15H, OBz); 6,437 (s, 1H, H-1); 5,835 (m, 2H, H-2 y H-3); 4,649 (m, 3H, H-4 y H-5); 2,003 (s, 3H, CH_{3} COO-).
1-O-acetil-2,3,5-tri-O-benzoil-\beta-L-ribofuranosa (a partir de L-ribosa)
L-Ribosa (5 g, 33,3 mmol) se suspendió en 120 mL de HCl/MeOH al 1% y se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas, momento en que se obtuvo una solución transparente. La reacción se detuvo bruscamente añadiendo 30 mL de piridina anhidra, a continuación se evaporó bajo presión reducida. El jarabe resultante se coevaporó con piridina (30 ml X 2), a continuación se disolvió en 80 ml de piridina anhidra, y se agitó a 0ºC a la vez que se añadía gota agota cloruro de benzoílo (20 ml, 172 mmol). Tras agitar a temperatura ambiente durante 17 horas, la reacción fue completa. Se añadió agua (10 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas, a continuación se concentró hasta aproximadamente 50 mL, se vertió sobre 150 ml de agua - hielo, se extrajo con cloroformo (50 ml X 4), se lavó sucesivamente con H_{2}SO_{4} 3 N (30 mL X 2), NaHCO_{3} saturado (30 mL X 3), se secó (MgSO_{4}). La eliminación del solvente proporcionó 9 en forma de un jarabe de 13 g.
El producto crudo 9 se disolvió en 80 mL de HBr/AcOH (45%, w/v) y se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas. A esta mezcla se añadió ácido acético glacial (50 mL) y la solución resultante se agitó a 0ºC, a la vez que se añadieron lentamente 34 mL de agua para mantener la solución por debajo de 7ºC, a continuación se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se vertió sobre 200 ml de agua - hielo, se extrajo con cloroformo (50 mL X 5), los extractos combinados se lavaron con NaHCO_{3} saturado, se secaron (MgSO_{4}). La eliminación del solvente proporcionó dio lugar a un jarabe (13 g), que se disolvió en 40 mL of piridina anhidra, se agitó a 0ºC, momento en el que se añadió gota a gota anhídrido acético (14 mL, 148,4 mmol). Tras finalizar la reacción, se vertió sobre 150 ml de agua - hielo, se extrajo con cloroformo (50 mL X 4), se lavó sucesivamente con H_{2}SO_{4} 3 N (30 mL X 2), NaHCO_{3} saturado (30 mL X 2), se secó (MgSO_{4}). La eliminación del solvente y el tratamiento con metanol proporcionaron 10 en forma de un sólido blanco (9,2 g, 53,7% a partir de L-ribosa).
1,3,5-Tri-O-benzoil-\alpha-L-ribofuranosa (11)
El compuesto 10 (9 g, 17,84 mmol) se agitó en 100 mL de CH_{2}Cl_{2} a 0ºC a la vez que se añadieron 70 mL de CH_{2}Cl_{2} que contenía HBr (3,2 g, 30,5 mmol) en una única porción. La mezcla se agitó a 0ºC durante 3,5 h, se añadió agua (55 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. Se separó la capa orgánica, se lavó con NaHCO_{3} saturado, se secó (MgSO_{4}). Tras la evaporación del solvente se obtuvo una espuma, que tras recristalización en CH_{2}Cl_{2} y n-hexano dio 11 en forma de un sólido blanco (6,2 g, 75,5%). PF 137º-138ºC, lit. 140º-141ºC, [\alpha]_{D} = -81,960 (C 0,55, CHCl_{3}; forma D: [\alpha]_{D} = +83,71.
^{1}H-RMN(CDCl_{3}): \delta 7,312, 8,187 (m, 15H, OBz); 6,691 (d, J = 4,59 Hz, H-1); 5,593 (dd, J_{4-3} = 6,66 Hz; J_{2-3} = 1,8 Hz, 1H, H-30; 4,637, 4,796 (m, 4H, H-2, H-4 y H-5); 2,3 (b, OH).
1,3,5-Tri-O-benzoil-2-O-imidazosulfuril-\alpha-L-ribofuranosa (12)
El compuesto 11 (5,94 g, 12,84 mmol) se agitó en 50 mL de CH_{2}Cl_{2} anhidro a -15ºC (hielo seco - CCl_{4}). Se añadieron en secuencia DMF (15 mL) y cloruro de sulfurilo (3,2 mL, 3,98 mmol). La solución se agitó a -15ºC durante 30 minutos y después se dejó a temperatura ambiente durante 4 h. Se añadió imidazol (8,7 g, 12,78 mmol) en tres porciones, a la vez que la mezcla de reacción se enfriaba en un baño de hielo, a continuación se agitó a temperatura ambiente durante 17 horas. La mezcla se vertió sobre 150 ml de agua - hielo, y la fase acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (50 mL X 3). La capa orgánica combinada se lavó con agua, se secó (MgSO_{4}). Tras purificación en columna (Hexano: EtOAc/5:1-1:1) se consiguió 12 en forma de un sólido blanco (3,7 g, 49%). PF 124,5º - 125,5ºC, lit: 129ºC; [\alpha]_{D} = -68,976; forma D: +66,154.
^{1}H-RMN(CDCl_{3}): \delta 6,9, 8,2 (m, _{18}H, Ar-H); 6,67 (d, J = 4,4 Hz, 1H, H-1); 5,59 (dd, 1H, H-3), 5,21 (dd, 1H, H-2); 4,5, 4,8 (m, 3H, H-4 y H-5).
1,3,5-Tri-O-benzoil-2-deoxi-2-fluoro-\alpha-L-arabinofuranosa (13)
Una suspensión de 12 (3,33 g, 5,62 mmol), KHF_{2} (1,76 g, 22,56 mmol) en 30 mL de 2,3-butanodiol se agitó bajo argón. Se calentó hasta 150ºC a la vez que se añadía 1 mL de HF/H_{2} O (48%, 27,6 mmol), y la mezcla se agitó a 160ºC durante 1,5 horas. Se añadió salmuera - hielo para detener súbitamente la reacción, a continuación se extrajo con cloruro de metileno (50 mL X 4), los extractos combinados se lavaron con salmuera, agua, NaHCO_{3} saturado, se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y carbón activo (Darco-60). Se vertió sobre un paño de gel de sílice (5 cm X 5 cm), se lavó con cloruro de metileno y a continuación con EtOAc, para dar un jarabe que a partir de EtOH al 95% se cristalizó 13 (1,3 g, 49,8%).PF 77º-78ºC; lit.: 82ºC.
^{1}H-RMN(CDCl_{3}): \delta 7,314, 8,146 (m, 15H, OBz); 6,757 (d, J = 9,1 Hz, 1H, H-1); 5,38 (d, J = 48,5 Hz, 1H, H-2); 5,630 (dd, J = 22,5Hz, 1H, H-3); 4,768 (m, 3H, H-4 y H-5).
El compuesto 13 (464 mg, 1 mmol) se disolvió en 10 mL de cloruro de metileno a la vez que se añadía 1,4 mL de HBr/AcOH (45% w/v). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 24 h, a continuación se evaporó hasta sequedad, el residuo se disolvió en 20 mL de cloruro de metileno, se lavó con agua, NaHCO_{3} saturado, se secó (MgSO_{4}). La filtración y evaporación proporcionó el bromoazúcar 14 (100%, en base TLC).
N_{1}-(2'-Deoxi-2'-fluoro-3',5'-di-O-benzil-\beta-L-arabinofuranosil)-timina (17)
A una solución de 13 (400 mg, 0,86 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro (10 mL) se añadió bromuro de hidrógeno en ácido acético (45% w/v, 1,5 mL), y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 17 h. Tras evaporación del solvente y coevaporación con tolueno, se obtuvo 14.
Al mismo tiempo, se mantuvo a reflujo timina (215 mg, 1,72 mmol) en HMDS (25 ml) bajo nitrógeno durante 17 h, para conseguir una solución homogénea. Tras evaporación del solvente, se consiguió una timina sililada.
Se añadió una solución de 14 en dicloroetano (50 mL) a la timina sililada, y la solución resultante se mantuvo a reflujo bajo nitrógeno durante 3 días. Se añadió agua, y a continuación se extrajo con CHCl_{3}, La capa orgánica se lavó con agua, salmuera, y se secó (MgSO_{4}). La evaporación del solvente proporcionó el producto crudo, que se purificó mediante TLC preparativo usando MeOH/CHCl_{3} al 2% para dar 17 (235 mg, 58%). PF 99º-101ºC UV (Metanol): 230, 264 nm [\alpha]_{D} = +22,397.
^{1}H-RMN(CDCl_{3}): \delta 7,343-8,389 (m, 12H, Ar--H, NH); 6,34 (dd, J_{H-H} = 2,97 Hz, J_{F-H} = 28,32 Hz, 1H, H-1'); 5,383 (dd, J_{H-H} = 2,7 Hz, J_{F-H} = 63,27 Hz, 1H, H-2'); 5,565 (dd, 1H, H-3'); 4,812 (d, 2H, H-5'); 4,466 (m, 1H, H-4'); 1,775 (s, 3H, CH_{3}) Anal. (C_{24}H_{21}N_{2}O_{7}F), C: 61,01; H, 4,57; N: 5,73; F: 3,92.
N_{1}-(2'-Deoxi-2'-fluoro-\beta-L-arabinofuranosil)-timina (18)
El compuesto 17 (145 mg, 0,309 mmol) se trató con NH_{3}/CH_{3}OH a temperatura ambiente durante 18 h. Tras la evaporación del solvente y purificación mediante TLC preparativo MeOH/CHCl_{3} al 15% (70 mg, 87,5%) se obtuvo PF 174º-175ºC UV: 264 nm, [\alpha]_{D} = -104,36.
^{1}H-RMN(CDCl_{3}): \delta 11,401 (s, 1H, NH); 7,575 (s, 1H, H-6); 6,093 (dd, J_{H-H} = 4,41 Hz, J_{F-H} = 15,6 Hz, H-1'); 5,844 (d, 1H, 3'-OH); 5,019 (dt, J_{F-H} = 53,3 Hz, 1H, H-2'); 5,087 (t, 1H, 5'-OH); 4,194 (dq, 1H, H-3'); 3,647 (m, 3H, H-4' y H-5'); 1,781 (s, 3H, CH_{3}). Anal. (C_{10}H_{13}N_{2}FO_{5}), C: 44,80; H: 4,97; N: 10,04; F: 7,03.
Derivados de 5'-alquilo y mono, -di- y tri-fosfato de L-FMAU
El derivado de L-FMAU en el que hay un grupo alquilo en la posición 5' se puede preparar mediante la protección de la base de timina usando hidruro de sodio y un grupo protector de t-butil-di-fenil sililo. La benzoilación del grupo 5'-hidroxilo se puede conseguir con hidruro de benzoílo. El compuesto resultante se puede desililar usando fluoruro de tetrabutilamonio. La introducción de grupos alquilo en la posición 5’ se lleva a cabo usando hidruro de sodio y bromuro de alquilo, el grupo benzoílo se puede eliminar mediante una base.
El mono, di y trifosfato derivado del L-FMAU se puede preparar como se describe más adelante. El monofosfato se puede preparar de acuerdo con el procedimiento de Imai y col., J. Org. Chem., 34(6), 1547-1550 (junio de 1969). Por ejemplo, aproximadamente 100 mg of L-FMAU y aproximadamente 280 mL de cloruro de fosforilo se hacen reaccionar con agitación en aproximadamente 8 mL de acetato de etilo seco, a aproximadamente 0ºC durante aproximadamente cuatro horas. La reacción se detuvo bruscamente con hielo. La fase acuosa se purificó en una columna de carbón activo, eluyendo con hidróxido de amonio al 5% en una mezcla 1:1 de etanol y agua. La evaporación del eluyente proporcionó el L-FMAU-5'-monofosfato de amonio.
El difosfato se puede preparar de acuerdo con el procedimiento de Davisson y col., J. Org. Chem., 52(9), 1794-1801 (1987). El L-FMAU difosfato se puede preparar a partir del tosilato correspondiente, que se puede preparar, por ejemplo, haciendo reaccionar el nucleósido con cloruro de tosilo en piridina a temperatura ambiente durante aproximadamente 24 horas, trabajando el producto de la forma habitual (por ejemplo, por lavado, secado y cristalización del mismo).
El trifosfato se puede preparar de acuerdo con el procedimiento de Hoard y col., J. Am. Chem. Soc., 87(8), 1785-1788 (1965). El L-FMAU se active (fabricando el imidazol, de acuerdo con procedimientos conocidos de las personas expertas en la técnica) y se trata con tributil amonio pirofosfato en DMF. La reacción proporciona en primer lugar el trifosfato del nucleósido, con parte de monofosfato sin reaccionar y algo de difosfato. La purificación mediante cromatografía de intercambio aniónico en una columna DEAE va seguida por el aislamiento del trifosfato, por ejemplo, en forma de sal de tetrasodio.
VII. Ejemplo ilustrativo
Se usó la marmota como un modelo experimental de la infección por HDV crónica para evaluar el efecto del tratamiento con L-FMAU sobre la replicación del HDV. Las marmotas crónicamente infectadas con WHV se infectaron con un inóculo de HDV adaptado para marmotas derivado de un clon infeccioso de laboratorio. Se determinó que nueve de once animales tenían una infección por HDV crónica, tal como se define mediante la viremia HDV detectable mediante RT/PCR (Niro y col. (1997) Hepatology 25, 728-734) durante al menos el 74% de las fechas de sangrado durante al menos 11 meses antes del inicio del tratamiento. El intervalo de duración de la viremia antes del inicio del estudio fue de 11,4 - 20 meses; el intervalo de fechas de sangrado positivo fue entre 74% y 100%. Se proporcionó a los animales del grupo de tratamiento (4) 10 mg/kg de L-FMAU diariamente; Se proporcionó a los animales del grupo de control (5) placebo. Se obtuvieron muestras de suero antes del inicio del tratamiento, y en las semanas 2, 4, 8, 12, 16 y 20. Las muestras de suero se analizaron respecto de WHV ADN, WHV antígeno superficial y HDV ARN.
Todos los animales tratados mostraron marcados descensos de WHV ADN en el suero a las cuatro semanas de tratamiento (reducción>10^{7}), tal como se había observado con anterioridad para este compuesto (Peek, S. y col. (2001) Hepatology 33, 254-66) (Fig. 6B). Se observó una disminución de casi 1.000 veces en los niveles de antígeno superficial a las 12 semanas en todos los animales tratados, excepto en uno (animal 4543) (Fig. 6C). El HDV ARN se volvió indetectable en los ¾ de los animales tratados a las 16 semanas de tratamiento (Fig. 6A). No se observaron cambios sustanciales en ninguno de estos marcadores víricos en el grupo de control (Fig. 7A, Fig. 7B, Fig. 7C,
Fig. 8).
De manera notable, la menor HDV viremia se correlaciona con menores niveles en suero del antígeno superficial. La viremia HDV resultó indetectable tras la reducción de las concentraciones del antígeno superficial de la hepatitis B en 100 veces o más, y de manera notable, tras la reducción a menos de 1 microgramo/mL. Este efecto fue continuado durante el resto del periodo de tratamiento. El HDV ARN resultó indetectable en todos los animales que mostraron menores niveles en suero del antígeno superficial. Un animal del grupo tratado, el animal 4543, no mostró menor nivel en suero del antígeno superficial (aunque los niveles de WHV ADN disminuyeron) y la viremia HDV permaneció elevada en dicho animal.
Cuando los tres animales tratados con L-FMAU en los que el WHsAg disminuyó se agruparon conjuntamente (respondedores a WHsAg), resultó claro que los niveles de HDV ARN disminuyen de forma dramática en comparación con los niveles de pretratamiento y en comparación con los niveles del grupo de control para cualquier tiempo (Fig. 8). En análisis estadístico mediante el test de la t de Student indicó que esta disminución dramática es altamente significativa desde el punto de vista estadístico (P = 0,02 para comparación de dos pares y una cola en la semana 0 frente a la semana 20 en los respondedores a WHsAg, y P = 0,02 para comparación desparejada con 1 cola de los niveles en la semana 20 en los animales no tratados frete a los respondedores a WHsAg).
Se descubrió que L-FMAU es un potente inhibidor del HDV en animales infectados de manera crónica, en parte debido a la fuerte supresión de la expresión del antígeno superficial. Los estudios anteriores habían demostrado una correlación clara entre los niveles crónicos de viremia HDV y la gravedad de la enfermedad (Smedile, A. y col. (1986) Hepatology 6, 1297-302; Smedile, A. y col. (1987) Prog Clin Biol Res 234, 235-41; Niro, G. A. y col. (1997) Hepatology 25, 728-734; Shakil, A. O. y col. (1997) Virology 234, 160-7). Puesto que no hay un buen depósito celular del HDV como existe para el HBV (es decir, no hay ADN circular cerrado de manera covalente) y la semivida de las células infectadas con HDV puede ser tan corta como dos semanas (Netter, H. J. y col. (1993) J Virol 67, 3357-62,), basándose en estos resultados, se pueden usar L-FMAU y otros nucleósidos, no nucleósidos, y análogos de nucleósidos para eliminar la infección por HDV en pacientes tratados mediante una prolongada reducción en la viremia hasta niveles bajos.
VIII. Preparación de composiciones farmacéuticas
Los seres humanos que padecen enfermedades causadas por la infección por HDV se pueden tratar por administración al paciente de una cantidad efectiva de un nucleósido o análogo de nucleósido o una sal o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable, en presencia de un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable, que reduzca el nivel de los antígenos superficial de la hepatitis B o preS1 en el huésped a no más de aproximadamente 100 veces o más, y de manera preferible, 200- o 500 veces relativo a los valores de pretratamiento in vivo o in vitro, o con respecto al HBsAg, hasta no más de 1, y de manera preferible, 0,5 o 0,1 microgramos por mililitro in vivo, tal como se determina en suero o plasma usando inmunoensayos convencionales. En una forma de realización preferida, el nucleósido es 2'-fluoro-5-metil-\beta-L-arabinofuranosil-uridina o una sal o profármaco del mismo farmacéuticamente aceptable del mismo. El compuesto activo (o sal o profármaco del mismo) se puede administrar por cualquier ruta adecuada, por ejemplo, de manera oral, parenteral, intravenosa, intradermal, subcutánea, o tópica, en forma líquida o sólida.
El compuesto activo (o profármaco del mismo) se incluye en el vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable en cantidad suficiente para suministrar al paciente una cantidad efectiva del compuesto para reducir la viremia HDV o los síntomas de la misma in vivo son causar efectos tóxicos serios en el paciente tratado. Un "cantidad reductora" significa una cantidad de ingrediente activo suficiente para disminuir los niveles de viremia HDV tal como se determina, por ejemplo, mediante un ensayo como los que se describen en el presente documento u otros procedimientos conocidos.
Una dosis preferida del compuesto para todas las enfermedades arriba indicadas estará comprendida en el intervalo de aproximadamente entre 1 y 50 mg/kg, de manera preferible entre 1 y 20 mg/kg, de peso corporal por día, de manera más general entre generalmente 0,1 y aproximadamente 100 mg por kilogramo de peso corporal del paciente por día. En intervalo de dosis efectiva de los derivados farmacéuticamente aceptables se puede calcular basándose el peso de nucleósido padre a suministrar. Si el derivado muestra actividad por sí mismo, la dosis efectiva se puede estimar como más arriba usando el peso del derivado, o mediante otros procedimientos conocidos de aquellas personas expertas en la técnica.
El compuesto de suministra de manera conveniente en unidades de cualquier forma de dosificación adecuada, entre las que se incluye una que contiene entre 7 y 3000 mg, de manera preferible entre 70 y 1400 mg de ingrediente activo por forma de dosificación unitaria. Es usualmente conveniente una dosificación oral de 50-1000 mg.
De manera ideal, el ingrediente activo se debería administrar para conseguir concentraciones punta en el plasma del compuesto activo comprendidas entre aproximadamente 0,2 y 70 \muM, de manera preferible entre aproximadamente 1,0 y 10 \muM. Esto se puede conseguir, por ejemplo, mediante inyección intravenosa de una solución a entre 0,1 y 5% del ingrediente activo, de manera opcional en solución salina, o suministrarse en forma de pastilla gruesa de ingrediente activo.
La concentración del compuesto activo en la composición de fármaco dependerá de las velocidades de absorción, inactivación y excreción, así como de otros factores conocidos de las personas expertas en la técnica. Debe tenerse en cuenta que los valores de dosificación variarán también con la gravedad de la enfermedad a tratar. Debe entenderse de manera adicional que, para cualquier sujeto concreto, los regímenes especiales de dosificación deben ajustarse con el tiempo de acuerdo con la necesidad individual y el juicio profesional de la persona que administra, o que supervisa la administración, de las composiciones, y que los intervalos de concentración definidos en el presente documentos son únicamente de ejemplo.
El ingrediente activo se puede suministrar de una vez, o se puede dividir en un número de dosis más pequeñas a administrar a diferentes intervalos de tiempo.
Un procedimiento de administración preferido del compuesto activo es el oral. Las composiciones orales incluyen por lo general un diluyente inerte o vehículo comestible. Puede encerrarse en capsulas de gelatina o comprimirse en comprimidos. A efectos de la administración terapéutica oral, el compuesto activo se puede incorporar junto con excipientes y usarse en forma de comprimidos, píldoras o cápsulas. Se pueden incluir como parte de la composición agentes ligantes farmacéuticamente compatibles, y/o materiales coadyuvantes.
Los comprimidos, píldoras, cápsulas, píldoras gruesas y similares pueden contener cualquiera de los siguientes ingredientes, o compuestos de naturaleza similar: un ligante tal como celulosa microcristalina, goma tragacanto o gelatina; un excipiente tal como almidón o lactosa, un agente desintegrante tal como ácido algínico, Primogel, o almidón de maíz; un lubricante tal como estearato de magnesio o Sterotes; un abrillantador tal como dióxido de silicio coloidal; un agente endulzante tal como sacarosa o sacarina; o un agente aromatizante tal como piperita, salicilato de metilo o aroma de naranja. Cuando la forma de dosificación unitaria es una cápsula, puede contener, además del material del tipo anterior, un vehículo líquido tal como un aceite graso. Además, las formas de dosificación unitaria pueden contener otros materiales diferentes que modifican la forma física de la forma de dosificación unitaria, por ejemplo, recubrimiento de azúcar, laca, u otro agente entérico.
El compuesto se puede administrar en forma de un componente de un elixir, suspensión, jarabe, galleta, chicle o similar. Un jarabe puede contener, además de los ingredientes activos, sacarosa como agente endulzante y algunos conservantes, tintes y colorantes y aromas. El compuesto o un derivado o sales farmacéuticamente aceptables del mismo se pueden mezclar también con otros materiales activos que no proporcionan la acción deseada, o con materiales que complementen la acción deseada, tales como antibióticos, antifúngicos, anti-inflamatorios u otros antivíricos, ente los que se incluyen compuestos de nucleósido anti-HIV. Las soluciones o suspensiones usadas para aplicación parenteral, intradérmica, subcutánea o tópica pueden incluir los siguientes componentes: un diluyente estéril tal como agua para inyección, solución salina, aceites de fijación, polietilén glicoles, glicerina, propilén glicol u otros solventes sintéticos; agentes antibacterianos tales como alcohol de bencilo o metil parabenos; antioxidantes tales como ácido ascórbico o bisulfito de sodio; agentes quelantes tales como el ácido etilén diamino tetraacético; tampones tales como acetatos; citratos o fosfatos y agentes para el ajuste de la tonicidad tales como cloruro de sodio o dextrosa. La preparación parenteral puede encerrarse en ampollas, jeringas desechables o viales de dosis múltiple fabricados en vidrio o plástico.
Si se administra por vía intravenosa, los vehículos preferidos son suero salino fisiológico o suero salino tamponado con fosfato (PBS).
En una forma de realización preferida, los compuestos activos se preparan con vehículos que protegerán el compuesto contra la eliminación rápida del cuerpo, tal como una formulación de dosificación controlada, entre las que se incluyen implantes y sistemas de suministro microencapsulados. Se pueden usar polímeros biodegradables y biocompatibles, tales como vinil acetato de etileno, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, y ácido poliláctico. Los procedimientos de preparación de dichas formulaciones serán evidentes para las personas expertas en la técnica. Los materiales se pueden obtener también de manera comercial de Alza Corporation.
Las suspensiones liposomiales (entre las que se incluyen los liposomas que hacen diana en las células infectadas con anticuerpos monoclonales respecto de antígenos virales) son también vehículos farmacéuticamente aceptables. Estos se pueden preparar de acuerdo con procedimientos conocidos de las personas expertas en la técnica, por ejemplo, tal como se describen en la Patente de los Estados Unidos Nº 4.522.811.
Por ejemplo, se pueden preparar las formulaciones liposomiales disolviendo los lípidos apropiados (tal como esteroil fosfatidil etanolamina, esteroil fosfatidil colina, araquidoil fosfatidil colina, y colesterol) en un solvente inorgánico que se evapora a continuación, dejando tras de si una película delgada de lípido seco sobre la superficie del contenedor. Una solución acuosa del compuesto activo, o de sus derivados de monofosfato, difosfato, y/o trifosfato se introduce a continuación en el contenedor. A continuación, el contenedor se agita con la mano para liberar el material lipídico de las paredes del contendor y para dispersar los agregados lipídicos, formando de esta manera la suspensión liposomial.

Claims (19)

1. El uso de un compuesto de nucleósido para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la infección por hepatitis delta, que comprende un compuesto de la fórmula:
2
en la que R es 5-metil uracilo (también denominado como timina) y R' es hidrógeno, acilo, alquilo, monofosfato, difosfato, trifosfato, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. El uso de la reivindicación 1, en el que el compuesto es 2'-fluoro-5-metil-\beta-L-arabinofuranosil-uridina o su sal farmacéuticamente aceptable.
3. El uso de la reivindicación 1, en el que el compuesto es una sal farmacéuticamente aceptable de 2'-fluoro-5-metil-\beta-L-arabinofuranosil-uridina
4. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el compuesto es una forma enantioméricamente enriquecida.
5. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el compuesto tiene al menos un 95% de la forma enantiomérica designada.
6. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el compuesto está en un vehículo farmacéuticamente aceptable.
7. El uso de la reivindicación 6, en el que el vehículo farmacéuticamente aceptable es adecuado para administración oral.
8. El uso de la reivindicación 6, en el que el vehículo farmacéuticamente aceptable es adecuado para administración intravenosa.
9. El uso de la reivindicación 6, en el que el vehículo farmacéuticamente aceptable es adecuado para administración parenteral.
10. El uso de la reivindicación 6, en el que el vehículo farmacéuticamente aceptable es adecuado para administración intradérmica.
11. El uso de la reivindicación 6, en el que el vehículo farmacéuticamente aceptable es adecuado para administración subcutánea.
12. El uso de la reivindicación 6, en el que el vehículo farmacéuticamente aceptable es adecuado para administración tópica.
13. El uso de la reivindicación 6, en el que el medicamento está en forma de dosificación unitaria.
14. El uso de la reivindicación 13, en el que la dosificación unitaria contiene entre 50 y 1000 mg del compuesto.
15. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 13 ó 14, en el que la dosificación unitaria está en forma de comprimido o cápsula.
16. El uso de la reivindicación 1, que comprende de manera adicional, en combinación, otro agente o agentes que reducen el nivel de los antígenos HBsAg o preS1 en el huésped, o que se sabe que tratan de cualquier otra forma la infección por hepatitis delta.
17. El uso de la reivindicación 16, en el que el otro agente se selecciona entre el grupo que consiste de una ribozima, una citoquina que incluye interleuquina, interferón, un anticuerpo del HBsAg o un factor de trascripción u otro mediador de la expresión del HBsAg, un inhibidor de la proteína prenil transferasa o timosín-alfa-1.
18. El uso de un compuesto de nucleósido como se define en la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la infección por hepatitis delta, que comprende una cantidad del compuesto efectiva para reducir el nivel del antígeno preS1 en el huésped 100 veces o más en relación con el valor de pretratamiento.
19. El uso de un compuesto de nucleósido como se define en la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la infección por hepatitis delta, que comprende una cantidad del compuesto efectiva para reducir el nivel del HBsAg en el huésped hasta no más de aproximadamente 1 microgramo por mililitro, tal como se mide en el suero o en el plasma.
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