KR100881720B1 - 미생물을 나무토막에 배양하는 방법과 그 방법에 의해배양된 미생물배양목질칩 - Google Patents

미생물을 나무토막에 배양하는 방법과 그 방법에 의해배양된 미생물배양목질칩 Download PDF

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Abstract

본 발명은 미생물을 나무토막에 배양하는 방법에 있어서, 폐목, 벌목, 나무뿌리 등의 잡목을 수집하는 단계와, 수집된 잡목을 파쇄기에 투입하여 소정의 길이로 절단하는 절단단계와, 절단된 나무토막을 선별기에 투입하여 나무토막의 크기에 따라 선별하는 선별단계와, 선별된 나무토막에 쌀겨를 소정량 배합하는 배합단계와, 쌀겨가 배합된 배합물에 균주배양액을 소정의 수분함수율이 되도록 투입하는 단계와, 균주배양액이 투입된 배합물을 밀폐공간에 투입하고 산소를 공급하여 소정온도로 소정시간동안 발효시키는 단계와, 소정시간 발효 후 미생물 배양목질칩을 생산하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하며, 이와 같은 배양 단계에 의해 배양된 미생물배양목질칩을 특징으로 한다.
미생물, 배합물, 휴면상태, 미생물배양목질칩, 바실러스속 균주, 페디오코커스 애시디락티시 균주, 페이오코커스 펜토사세우스 균주

Description

미생물을 나무토막에 배양하는 방법과 그 방법에 의해 배양된 미생물배양목질칩{Method in which microorganisms is cultivated in the blocks of wood and the wood chips cultivated with the method}
도 1은 본 발명의 실시예로 미생물을 나무토막에 배양하는 과정을 설명하는 도면.
도 2는 본 발명에 사용한 페디오코커스 속(Pediococcus sp .) 균주의 아밀라아제, 프로테아제, 셀룰라아제, 자일라나아제 및 파이타아제 활성을 MRS 아가 플레이트 상에서 조사하여 나타낸 도면.
도 3은 본 발명에 사용한 페디오코커스 펜토사세우스 균주의 내산성을 pH 2.0 ~ 5.0 범위에서 조사하여 나타낸 도면.
도 4는 본 발명에 사용한 페디오코커스 펜토사세우스 균주의 내열성을 30 ~ 60℃ 범위에서 조사하여 나타낸 도면.
도 5는 본 발명에 사용한 페디오코커스 펜토사세우스 균주의 내담즙산성을 다양한 염 농도에서 조사하여 나타낸 도면.
도 6은 본 발명에 사용한 페디오코커스 펜토사세우스 균주의 MRS 배지를 이용한대장균 생육 억제 정도를 조사하여 나타낸 도면.
본 발명은 미생물을 나무토막에 배양하는 방법과 그 방법에 의해 배양된 미생물배양목질칩에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 수집된 잡목, 폐목, 벌목, 나무뿌리 등에 토착미생물을 접종해 유익한 토착 미생물을 배양하는 방법과 그 배양 방법에 의한 미생물배양목질칩에 관한 것이다.
자연 토양속에는 많은 원소들이 있고, 이 중에는 알려지지 않은 많은 성분들이 함께 존재하고 있다. 특히, 자연 토양 속에서 사는 토착 미생물은 수분과 산소를 공급하여 끊임없이 조건과 환경을 변형하며 맞추어 살아가는 데, 수분과 영양이 없으면 미생물은 활동하지 않고 휴면상태로 들어가게 된다.
토양을 미생물 분해에 의하여 완전히 효소화한 미네랄 효소는, 토양을 미생물에 의하여 300매시 이상 분해가 될 때까지 수분과 산소를 공급하면서 환경에 변화를 주어 분해시킨 흙 효소라고도 할 수 있는데, 우리 인체에도 흡수할 수 있고 작물에도 흡수할 수 있는 형태이다. 이와 같이 흙은 안정화를 이루어 미네랄 효소로 인한 분해를 진행하고 부패를 방지하며 악취를 제거하여 깨끗한 환경을 만든다.
실제로 토양 속에는 한 스푼에도 2억 마리 이상의 미생물이 살고 있고, 이러한 미생물들이 환경을 바꾸어 가면서 토양 자체를 효소화하는 과정을 진행하고 있다. 토양 속에 살고 있는 미생물을 잘 활성화시키면 300매시 이상의 미립자로 모든 물질을 분해할 수 있는 데, 기계를 이용한 어떠한 방법도 이와 같이 300매시 이상으로 분해할 수 없다.
본 발명자는 자연 환경 속에서 각자 자기 역할을 하는 미생물들을 그대로 훈련 배양시키는 오염원의 처리방법을 수행한 결과, 악취가 제거되는 것은 물론, 기타 분해효과도 탁월한 점을 발견하고 자연에 순응하는 단순한 방법이 부작용이 없는 환경에 적응하여 미생물에 의한 2차 오염과 병원균의 발생을 효과적으로 억제시킬 수 있음을 확인한 바 있었다.
최근 축산물 개발에 있어서, 집약적 사육방식으로 인해 각종 병원균의 감염 가능성 및 항병력 약화, 질병 예방을 위한 항생제 과용의 위험성, 축산물 내 환경 호르몬 및 잔류 항생제 축적의 증가 그리고 환경오염으로 인한 사료 자원의 오염 등이 큰 문제가 되고 있다.
따라서 기능성 축산의 생산에 대한 필요가 증가하여 미생물의 대량 증식 및 생산이 요구되고 있다.
상기한 문제점을 해결하기 위해서 본 발명은 미생물 배양액을 나무토막에 접종하고 발효시켜서 미생물의 대량 증식 및 생산할 수 있는, 미생물을 나무토막에 배양하는 방법을 제공하는데 있다.
또한, 미생물의 대량 증식 및 생산에 의해 누구나 쉽게 미생물을 대량 보관하고, 이를 사용하여 환경개선제 또는 각종 효소제품으로서 활용할 수 있는 미생물배양목질칩을 제공하는데 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에 따른 미생물을 나무토막에 배양하는 방법은,
폐목, 벌목, 나무뿌리 등의 잡목을 수집하는 단계;
상기 수집된 잡목을 파쇄기에 투입하여 일정한 길이로 절단하는 절단단계;
상기 절단된 나무토막을 선별기에 투입하여 나무토막의 크기에 따라 선별하는 선별단계;
상기 선별된 나무토막에 쌀겨를 소정량 배합하는 배합단계;
상기 쌀겨가 배합된 배합물에 균주배양액을 소정의 수분함수율이 되도록 투입하는 단계;
상기 균주배양액이 투입된 배합물을 밀폐공간에 투입하고 산소를 공급하여 소정온도로 소정시간동안 발효시키는 단계;
상기 소정시간 발효 후 미생물 배양목질칩을 생산하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 생산단계 후, 상기 미생물 배양목질칩의 수분을 제거하여 미생물을 휴면시키는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명은 휴면된 미생물에 수분 및 배지를 공급하여 미생물을 회복시키는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 상기 균주배양액은 바실러스속(Bacillus sp .) 균주, 페디오코커스 애시디락티시(Pediococcus acidilactici) 균주, 페디오커커스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus) 균주들 중 어느 하나인 것을 특징으로 한다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에 따른 미생물을 나무토막에 배양하는 방법에 의해 배양된 미생물배양목질칩을 특징으로 한다.
이하, 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예들은 본 발명을 예시하는 것으로 본 발명의 내용이 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
도 1은 본 발명의 실시예로 미생물을 나무토막에 배양하는 과정을 설명하는 도면이고, 도 2는 본 발명에 사용한 페디오코커스 속(Pediococcus sp .) 균주의 아밀라아제, 프로테아제, 셀룰라아제, 자일라나아제 및 파이타아제 활성을 MRS 아가 플레이트 상에서 조사하여 나타낸 도면이며, 도 3은 본 발명에 사용한 페디오코커스 펜토사세우스 균주의 내산성을 pH 2.0 ~ 5.0 범위에서 조사하여 나타낸 도면이고, 도 4는 본 발명에 사용한 페디오코커스 펜토사세우스 균주의 내열성을 30 ~ 60℃ 범위에서 조사하여 나타낸 도면이고, 도 5는 본 발명에 사용한 페디오코커스 펜토사세우스 균주의 내담즙산성을 다양한 염 농도에서 조사하여 나타낸 도면이며, 도 6은 본 발명에 사용한 페디오코커스 펜토사세우스 균주의 MRS 배지를 이용한대장균 생육 억제 정도를 조사하여 나타낸 도면이다.
도 1에 도시되어 있는 바와 같이, 폐목, 벌채목, 간벌목, 과수원 전지목, 나무뿌리 등 잡목을 수거하여 파쇄기에 투입한다(S10,S20). 투입된 잡목을 지름 2 ~ 10cm, 길이 5 ~ 60cm로 절단하여 절단된 나무토막을 선별기에 투입한 다음 지름 2 ~ 10cm, 길이 5 ~ 60cm의 나무토막을 선별한다(S30). 상기 크기의 범위 이외의 나무토막은 본 발명의 효과가 충분히 달성되지 않을 수 있을 뿐만 아니라, 나무토막의 칩이 너무 크면 이송시에 컨베어 벨트 등에 걸리고 너무 작으면 칩 처리가 복잡해진다.
상기 선별된 나무토막에 쌀겨와 7 : 3으로 배합하고(S40), 이 배합물에 균주배양액을 소정의 수분함수율이 되도록 투입한다(S50). 이 때 수분함수율은 50 ~ 70%가 되도록 하며, 본 실시예에서는 60%로 하는 것이 바람직하다.
본 발명의 균주배양액으로 사용하는 미생물은 토양에서 자연적으로 존재하는 미생물 또는 토양에서 배양되는 미생물인 것이 바람직하다.
토양속에는 많은 원소들이 있고, 이 중에는 알려지지 않은 많은 성분들이 함께 존재하고 있다. 특히, 자연 토양 속에는 토양속에 사는 토착 미생물은 수분과 산소를 공급하여 끊임없이 조건과 환경을 변형하며 맞추어 살아가는 데, 수분과 영양이 없으면 미생물은 활동하지 않고 휴면 상태로 들어가게 된다.
따라서 오염되지 않은 각 지역의 토양지표면에서 5 ~ 10㎝ 깊이의 토양을 채취하여 3종류의 방선균 분리용 배지를 사용하여 방선균을 분리하였다.
상기 분리된 미생물을 어떠한 환경 조건에서도 자체적으로 살아가도록 훈련시킨다. 토양속의 유익균 강력배양 즉, 토착미생물에 게르마늄이 다량 함유된 미네랄을 배지로 이용하여 음이온이 다량 발생하는 미생물 배양체를 활용한다.
우선 배양 온도를 37℃에 맞추어 밀폐된 드럼을 이용하여 산소를 공급하면서 7시간 동안 교반시키고, 다시 밀폐된 공간에서 에어브러를 사용하여 산소를 공급하면서 수분이 20% 이하로 감소될 때까지 반복적으로 배양하여 미생물은 활동하지 않은 조건에 이르도록 유도하였다.
그 다음 미생물에 다시 수분을 공급하여 활성화를 유도하고 상기와 같은 과정으로 교반 배양하고 밀폐된 공간에서 산소 공급하는 과정을 3회 정도 반복하였다.
그 결과 수분을 제거하고 휴면시킨 다음 미네랄 배지로 배양한 미생물은 분리 후 바로 미네랄 배지로 배양한 미생물 보다 2차 오염이 현저히 감소하고 악취와 부패 정도가 더 낮은 것을 확인할 수 있었다. 병원균의 발생도 적어서 이를 사료에 첨가한 경우, 첨가하지 않은 사료보다 사육 동물의 병원균 감염을 감소시키는 점도 알 수 있었다.
상기 배양된 미생물을 보관하기 위해서 섬유질이 풍부한 나무조각, 나무뿌리에 미생물을 투입하여 밀폐된 공간에서 보관한다.
이와 같이 미네랄 배지로 배양한 미생물들인 바실러스속 균주, 페디오코커스 애시디락티시 균주, 페디오코커스 펜토사세우스 균주 중 어느 하나의 균주를 본 발명의 일례의 실시예의 미생물로서 사용한다.
상기 바실러스속(Bacillus sp.) 균주, 페디오코커스 애시디락티시(Pediococcus acidilactici) 균주, 페디오코커스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus) 균주들 중 페디오코커스 펜토사세우스 균주에 대한 균질특성을 설명하기로 한다.
토양으로부터 페디오코커스 속 균주의 분리 및 동정
본 발명은 토양으로부터 페디오코커스 속(Pediococcus sp .) 미생물을 분리하 기 위하여, 토양 시료를 0.02% NaN3 가 포함되어 있는 MRS 아가 배지에 뿌리고, 37℃에서 24시간 동안 배양하여 5개의 균주를 1차적으로 선발하였다.
상기에서 선발된 균주를 이용하여 다시 콜로니(colony) 형태 및 그램 양성 등을 기준으로 하여 2차적으로 5개의 균주를 분리하였다. 이들 중 생육이 뛰어난 1개 균주를 선택한 다음 API 50 CHL 키트 (바이오메리우, 프랑스)를 사용하여 당 발효 실험을 수행하고 페디오코커스 속 균주로 동정하였다. 이와 같이 선택한 페디오코커스 속 균주는 다시 3 ~ 4회 걸친 계대 배양으로 활성화시켰다. 상기 균주는 MRS 배지를 사용하여 배양하였고, 37℃에서 24시간 동안 배양하여 다음 실험을 위하여 글리세롤 저장법 (glycerol stock)으로 보존하였다.
구체적으로, 본 발명에서 분리한 페디오코커스 속 균주는 통상의 혐기성 균주이면서 그램 양성 구균인 것으로 확인되었다. 또한, 이 페디오코커스 속 균주 중에서도 페디오코커스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus) (99.9%)인 것으로 확인되었다 (표 1 참조).
또한 상기 페디오코커스 속 균주의 16S rRNA 서열을 분석한 결과, 페디오코커스 속 균주의 1,501개의 염기 서열로부터 페디오코커스 펜토사세우스 균주인 것으로 다시 확인되었다. 따라서, 본 발명의 페디오코커스 속 균주는 미생물 제제로서 사용할 수 있는 안전성이 탁월한 젖산균인 것을 알 수 있었다.
API 50 CHL 키트를 사용한 페디오코커스 속 균주의 당 발효 실험 결과
당 기질 결과 당 기질 결과
대조군 - 에스큘린 +
글리세롤 - 살리신 +
에리트리톨 - 셀로바이오스 +
D-아라비노스 - 말토스 +
L-아라비노스 + 락토스 +
리보스 + 멜리바이오스 -
D-자일로스 + 슈크로스 -
L-자일로스 - 트레할로스 +
아도니톨 - 인린 -
β-메틸-D-자이로스 - 멜레지토스 -
갈락토스 + 라피노스 -
글루코스 + 스타치 -
과당 + 글리코겐 -
만노스 + 자일리톨 -
소보스 - 젠티오바이오스 +
람노스 + D-튜라노스 -
둘시톨 - D-라이조스 -
이노시톨 - D-타가토스 +
만니톨 - D-퓨코스 -
소비톨 - L-퓨코스 -
α-메틸-D-만노사이드 - D-아라비톨 -
α-메틸-D-글루코사이드 - L-아라비톨 -
N-아세틸-글루코사민 + 글루코네이트 -
아미그달린 + 2-케토-글루코네이트 +
아부틴 + 5-케토-글루코네이트 -
페디오코커스 속 균주의 성장 특성 조사
본 발명은 상기 페디오코커스 속(Pediococcus sp .) 균주의 성장 곡선을 조사하기 위하여, MRS 배지를 사용하여 발효기 (jar fermenter)에서 pH 를 조절하지 않고 37℃에서 6시간 가격으로 시료를 모아 (sampling) 48시간 동안 배양하였다.
또한 상기 페디오코커스 속 균주의 총 생균수를 측정하기 위하여, 시간별로 배양액을 0.85% NaCl 용액을 사용하여 10배 연속적으로 희석시킨 다음 MRS 아가 플레이트에 0.1 mL씩 분주하여 도말하였다. 그 다음 상기 균주의 배양 플레이트를 37℃에서 24시간 동안 배양하고 이로부터 콜로니 형성 단위 (colony forming unit)를 측정하였다.
상기 페디오코커스 속 균주의 최적의 성장 조건을 조사한 결과, 도 1에서 나타난 바와 같이 24시간 동안 배양하면 최고점, 즉 4.3 × 109 CFU/ml 농도에 이르는 것으로 조사되었다. 그러나, 최대 성장기인 6시간부터 12시간 사이에 균주를 사용하는 것이 여러 가지 활성의 측면에서 바람직할 것으로 판단되었다.
페디오코커스 속 균주의 효소 생성 조사
본 발명은 페디오코커스 속(Pediococcus sp .) 균주의 효소 생성 여부를 조사하기 위하여, 상기 균체를 하기 표 1 및 표 2 에서 제시한 바와 같이 검색 배지를 이용하여 나타나는 투명환(clear zone)의 유무로 특정 효소의 분비 여부를 검사하였다.
구체적으로, 프로테아제(protease), 자일라나아제(xylanase) 및 파이타아제(phytase)는 상기 균체 배양 직후 바로 투명환의 유무를 확인할 수 있었고, 셀룰라아제(cellulase)의 경우는 0.2%(w/v) 콩고 레드(congo red)액으로 염색하고 1 M NaCl 로 씻어내어 투명환을 확인하였다. 또한, α-아밀라제(α-amylase)의 경우는 0.2%(w/v) I2 와 4%(w/v) KI 를 포함하는 용액으로 염색하여 투명환의 생성 여부를 확인하였다.
그 결과 도 2에 나타난 바와 같이, 각 효소의 기질로 첨가한 검색 배지 상의 투명환의 크기로 볼 때 본 발명의 페디오코커스 속 균주는 아밀라아제, 셀룰라아제, 프로테아제, 자일라나아제 및 파이타아제의 활성을 포함하고 있는 것으로 나타났다. 특히 프로테아제 및 아밀라아제 그리고 인을 분해하는 파이타제의 활성이 탁월하여 상업적으로 이용이 가능할 것으로 판단되었다.
효소 생성 여부를 조사하기 위한 검색 배지 및 염색약
효소 기질 (기초 배지: PDA) 염색약 확인법
프로테아제 2%(w/v) 스킴 밀크 투명환
셀룰라아제 1%(w/v) CM 셀룰로스 0.2%(w/v) 콩고 레드 투명환
아밀라아제 1%(w/v) 수용성 전분 0.2%(w/v) I2 + 4%(w/v) KI 투명환
자일라나아제 1%(w/v) 오트 스펠트 자일란 투명환
검색 배지의 조성
성분 함량 (g/L)
포도당 15
파이틱산, 칼슘 염 5
NH4NO3 5
MgSO4 · 7H2O 0.5
KCl 0.5
FeSO4 · 7H2O 0.01
MnSO4 · 4H2O 0.01
아가 15
페디오코커스 속 균주의 내산성 , 내열성 및 내담즙산성 특성 조사
본 발명은 페디오코커스 속(Pediococcus sp .) 균주의 다양한 특성을 조사하기 위하여, 먼저 상기 균체를 MRS 배지에 1% 되도록 접종하고 37℃에서 24시간 동안 배양한 다음 0.1 N HCl 을 사용하여 pH 5.0, 4.0, 3.0 및 2.0 에서 30분 동안 정치시키고 잔존한 미생물 수를 측정하여 내산성 여부를 조사하였다.
또한, 상기 균체를 배양하고 그 배양액을 각각 30℃, 40℃, 50℃ 및 60℃에서 10분 동안 정치시킨 다음 생존한 미생물 수를 측정하여 내열성을 분석하였다. 또한, 담즙 염 (bile salt)을 각각 0, 0.1, 0.3, 0.5 및 1%(w/v) 농도로 첨가한 MRS 배지에 상기 균주를 접종하고 37℃에서 6시간 동안 방치한 다음 각 배지 0.1 mL 을 MRS 아가 플레이트에 도말하여 나타난 미생물 수를 측정하여 내담즙산성을 조사하였다.
그 결과 도 3에 나타난 바와 같이, 본 발명의 페디오코커스 속 균주는 pH 2에서는 사멸하지만, pH 3 에서도 3.38 × 106 CFU/ml의 균수가 측정되었으므로 활용 가능성이 있다고 판단되었다. 또한, 도 4 에 나타난 바와 같이 60℃에서도 2.67 × 104 CFU/ml의 균수가 측정되어 내열성에 있는 것으로 확인되었다. 또한, 도 5에 나타난 바와 같이 담즙 염 1% 에서도 높은 균수를 나타내어 내담즙산성이 우수한 것으로 조사되었다.
페디오코커스 속 균주의 대장균 생육 억제 효과 조사
본 발명은 페디오코커스 속 균주의 대장균 생육 억제 효과를 조사하기 위하여, 대장균 생육억제 효과를 측정하기 위해 사용할 균주인 페디오코커스 속(Pediococcus sp.) 및 대장균(Escherichia coli)를 각각 해당되는 배지를 사용하여 24시간 동안 배양한다. 이 때 영양 배지(nutrient broth)에는 대조군인 대장균만 접종하고, MRS 배지에는 페디오코커스 속 균주 및 대장균을 각각 1% 씩 혼합 접종하였다. 접종된 액상 배지를 37℃에서 150 rpm으로 진탕 배양하면서 3시간 간격으로 배양액을 채취하였고, 이렇게 얻은 채취액은 다시 멸균 생리식염수로 희석하여 영양 아가 배지에 도말하였다. 이 배지를 37℃에서 24시간 동안 배양하여 나타난 균락으로부터 대장균 수를 측정하여 대장균 생육 억제 정도를 조사하였다.
그 결과 도 6에 나타난 바와 같이, 본 발명의 페디오코커스 속 균주를 12시간 동안 배양하는 경우 대장균은 완전히 사멸되었으며, 따라서, 페디오코커스 속 균주는 대장균의 생육 억제 효과가 우수한 것으로 판단되었다.
계속해서, 배합물에 균주배양액을 투입하는 단계에 이어서 설명한다.
쌀겨가 배합된 배합물에 페디오코커스 속 균주배양액을 60% 수분함수율이 되도록 투입한 후, 이 균주 배양액이 투입된 배합물을 바로크공법으로 밀폐공간에 투입하고 산소를 공급하여 3일정도 경과하면 온도가 60℃ 정도로 올라가고, 이로부터 또한 3일정도 경과하면 70 ~ 80℃ 정도로 되게 된다. 이때, 목질칩의 리그닌과 셀룰로스(celluiose)가 고호열성에 의해 스스로 분해 발효되는데, 이 분해 발효되는 과정에서 2차로 바실러스속(Bacillus sp.) 균주, 페디오코커스 애시디락티시(Pediococcus acidilactici) 균주, 페디오커커스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus) 균주들 중 어느 하나의 균주를 접종한다(S60).
이와 같이 배양과정을 걸쳐, 분해 발효된 미생물 배양목질칩이 생산된다(S70).
또한, 상기 생산된 미생물 배양목질칩의 수분을 제거하면 접종된 미생물이 휴면상태(마취상태)로 더 이상 활동하지 않게 된다(S80).
상기 휴면된 미생물에 수분 및 배지를 공급하면 미생물이 휴면상태에서 활동상태로 되어 배양목질칩을 분해 발효하게 된다(S90).
본 발명에 의하면, 미생물 배양액을 나무토막에 접종하고 발효시켜서 미생물의 대량 증식 및 생산할 수 있다.
또한, 미생물 배양액을 나무토막에 접종하고 발효시킨 미생물배양목질칩으로서, 보다 쉽게 미생물을 대량 보관할 수 있을 뿐만 아니라 환경개선제 등으로 사용하고자 하는 경우에는 휴면상태의 미생물을 회복시키는 단계를 걸쳐, 발효 미생물을 이용한 기능성 식품, 영양제, 기능성 사료 첨가제, 환경 개선제 및 각종 효소제 등으로 개발되어 산업적으로 널리 이용될 수 있다. 더욱이 현재 문제가 심각하게 부각되는 조류 독감 및 환경 오염문제 등을 해결하는데 응용될 수 있다.

Claims (9)

  1. 폐목, 벌목, 나무뿌리 등의 잡목을 수집하는 단계;
    상기 수집된 잡목을 파쇄기에 투입하여 일정한 길이로 절단하는 절단단계;
    상기 절단된 나무토막을 선별기에 투입하여 나무토막의 크기에 따라 선별하는 선별단계;
    상기 선별된 나무토막에 쌀겨를 7 : 3으로 배합하는 배합단계;
    상기 쌀겨가 배합된 배합물에 페디오코커스 펜토사세우스 균주배양액을 수분함수율이 50 ~ 70%가 되도록 투입하는 단계;
    상기 페디오코커스 펜토사세우스 균주배양액이 투입된 배합물을 밀폐공간에 투입하고 산소를 공급하여 50 ~ 80℃ 온도로 3 ~ 6일 동안 발효시키는 단계;
    상기 발효 후 페디오코커스 속(Pediococcus sp.) 미생물 배양목질칩을 생산하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 미생물을 나무토막에 배양하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 생산단계 후, 상기 페디오코커스 속(Pediococcus sp.) 미생물 배양목질칩의 수분을 제거하여 페디오코커스 속(Pediococcus sp.) 미생물을 휴면시키는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 미생물을 나무토막에 배양하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 휴면된 페디오코커스 속(Pediococcus sp.) 미생물에 수분 및 배지를 공급하여 페디오코커스 속(Pediococcus sp.) 미생물을 회복시키는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 미생물을 나무토막에 배양하는 방법.
  4. 삭제
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한항에 있어서, 상기 나무토막의 크기는 지름이 2~10㎝이고, 길이가 5~60㎝인 것을 특징으로 하는 미생물을 나무토막에 배양하는 방법.
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 청구항 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 방법에 의해 배양되고, 나무토막의 크기는 지름이 2~10㎝이고, 길이가 5~60㎝인 미생물배양목질칩.
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