KR100844520B1 - Ｌｈｒｈ 길항제 합성용 중간체, 그 제조 방법 및ｌｈｒｈ 길항제의 제조 방법 - Google Patents

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Abstract

신규의 트리펩타이드 Ac-D-2Nal-D-4ClPh-D-3Pal-OH 및 Boc-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH는, 적합한 헵타펩타이드, 특히 헵타펩타이드 P1-Ser(P2)-NMeTyr(P 3)-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(iPr,P4)-Pro-D-AlaNH2 및 P1-Ser(P2)-NMeTyr(P 3)-D-Asn-Leu-Lys(iPr,P4)-Pro-D-AlaNH2와 결합함으로써 LHRH 동족체를 합성하는 데 유용한 중간체이다.
LHRH 길항제, 중간체, 트리펩타이드, 헵타펩타이드, 아미노산, 양성 전립선 비대증, 월경불순, 자궁내막증

Description

ＬＨＲＨ 길항제 합성용 중간체, 그 제조 방법 및 ＬＨＲＨ 길항제의 제조 방법{INTERMEDIATES FOR LHRH ANTAGONIST SYNTHESIS, PROCESS FOR THEIR PRODUCTION, AND PROCESS FOR LHRH ANTAGONIST PRODUCTION}
본 발명은 LHRH 길항제 합성용 중간체, 이들 중간체의 제조 방법 및 LHRH 길항제의 제조 방법에 관한 것이다.
황체형성 호르몬-방출 호르몬, LHRH(luteinizing hormone-releasing hormone)은 여포자극 호르몬(follicle stimulating hormone; FSH) 및 황체형성 호르몬(LH)의 분비를 조절한다. LHRH 길항제는 FSH 및 LH의 분비를 차단할 수 있는 화합물이다. 이들 물질은 일반적으로 하나 이상의 아미노산이 다른 천연 아미노산 및/또는 천연산이 아닌 아미노산으로 교체된 LHRH 구조의 일부 또는 전부를 포함하는 노나펩타이드 및 데카펩타이드(다소 짧거나 길 수도 있음)이다.
합성 LHRH 길항제는 피임용 및 양성 전립선 비대증, 유방과 난소의 호르몬 의존성 종양, 월경불순, 자궁내막증, 기타 증상의 치료에 이용될 수 있다. 이들 합성 LHRH 길항제는 하기 일반식을 가진다:
Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-Ser-X-NH2,
상기 식에서 X는 5 내지 6개의 천연 및/또는 합성 아미노산 잔기이다. 보다 구체적으로, 합성 LHRH 길항제는 상기 일반식을 가지되, X가 AA1-AA2--Leu-AA3-Pro-D-Ala이고 여기서 AA1은 천연 또는 합성 아미노산이고 AA2는 천연 또는 합성 아미노산이거나 제로이고, AA3는 천연 또는 합성 아미노산이다.
LHRH 동족체를 제조하기 위한 몇 가지 합성 방법이 종래 기술에 공지되어 있지만, 공지 방법으로 제조된 LHRH 동족체의 총 수율이 높지 않고, 더 나아가 그 생성물이 광범위한 정제를 필요로 할 수 있으므로 개선에 대한 요구가 있다. 또한, 종래 기술에 공지된 LHRH 동족체의 합성 방법은 비용이 매우 많이 든다.
미국특허 제5,710,246호에 개시된 데카펩타이드 또는 나노펩타이드 LHRH 길항제를 만들기 위한 합성 전략은, 아미노 잔기가 1∼3개(펩타이드의 아미노 말단에서부터의 수)인 중간체 트리펩타이드를 아미노산 잔기가 각각 4∼10개 및 4∼9개인 헵타펩타이드 또는 헥사펩타이드와 결합시키는 단계를 포함한다. 상기 특허문헌 US 5710246 A에 개시되어 있는 중간체 트리펩타이드는 에스테르, Boc-D-2Nal-D-4ClPhe-D-2Pal-O-Me 또는 그에 대응하는 벤질 또는 알릴 에스테르이다.
본 발명의 목적은 생성물의 수율 및/또는 순도가 향상된 LHRH 동족체의 3+7 및 3+6 합성을 위한 트리펩타이드 중간체를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 트리펩타이드 중간체의 제조 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 트리펩타이드가 헵타펩타이드 또는 헥사펩타이드 에 결합되어 있는 LHRH 동족체의 제조 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 추가적 목적은 이하에 제시되는 발명의 요약, 바람직한 실시예의 설명 및 첨부된 특허 청구의 범위로부터 명백해질 것이다.
[정의 및 약어]
본 명세서에 사용되며 본 발명의 관련 분야에서 일반적으로 수용되는 정의 및 약어는 특허문헌 US 5710246 A에 기재되어 있다.
[발명의 요약]
본 발명에 따르면, LHRH 길항제의 1∼3개의 아미노산을 나타내는 트리펩타이드가 제공되며, 그의 말단 아미노기는 Boc-보호되거나 Ac-보호되고, 그의 말단 카르복시기(즉, 제3 아미노산의 말단기)는 보호되지 않는다.
본 발명에 따르면 하기 트리펩타이드 (I)가 개시되며:
Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH (I)
이것은 하기 일반식 (II)의 LHRH 길항제의 합성 공정에서의 유용한 중간체이다:
Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-Ser-X-NH2 (II)
상기 식에서 X는 5 내지 7개의 천연 및/또는 합성 아미노산 잔기이고, 보다 바람직하게는 AA1-AA2--Leu-AA3-Pro-D-Ala이고, 여기서 AA1은 천연 또는 합성 아미노산이고 AA2는 천연 또는 합성 아미노산이거나 제로이고, AA3는 천연 또는 합성 아미노산이다.
더욱 바람직하게는, 하기 일반식 (IIa)의 펩타이드의 합성에서 트리펩타이드 (I)를 이용하는 것이다:
Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-Ser-AA1-AA2-Leu(iPr)-Pro-D-Ala-NH2 (IIa),
상기 식에서 AA1 및 AA2는 위에서 주어진 의미, 특히 하기 일반식 (Ⅲ)의 LHRH 길항제:
Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-Ser-MeTyr-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(iPr)-Pro-D-Ala-NH2 (Ⅲ)
또는, 더욱 바람직하게는, 하기식 (Ⅲa)의 LHRH 길항제이다:
Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-Ser-MeTyr-D-Asn-Leu-Lys(iPr)-Pro-D-Ala-NH2 (Ⅲa).
본 발명에 따르면 또한 동일하게 이용되는 하기 트리펩타이드가 개시된다:
Boc-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH (Ⅸ).
또한, 본 발명에 따르면 하기 일반식 (I):
Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH (I)
또는 하기 일반식 (Ⅸ):
Boc-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH (Ⅸ)
의 트리펩타이드의 제조 방법으로서,
일반식 (I)의 트리펩타이드를 제조하기 위해, 연속되는 하기 단계:
(a) Boc-D-4ClPhe-OH를 HONSu와 반응시켜 Boc-D-4ClPhe-OSu (VII)를 형성하 는 단계;
(b) Boc-D-4ClPhe-OSu (VII)를 H-D-3Pal-OH와 반응시켜 Boc-D-4ClPhe-D-3Pal-OH (Ⅷ)를 형성하는 단계;
(c) Boc-D-4ClPhe-D-3Pal-OH (Ⅷ)를 Boc-D-2Nal-OH와 HONSu의 반응에 의해 제조된 Boc-D-2Nal-OSu와 반응시켜 Boc-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH (Ⅸ)를 형성하는 단계;
(d) Boc-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH (Ⅸ)를 아세트산과 반응시켜 Ac-D-2Nal-4ClPhe-D-3Pal-OH (I)를 형성하는 단계
를 포함하거나, 또는 일반식 (IX)의 트리펩타이드를 제조하기 위해, 연속되는 상기 단계 (a) 내지 (c)를 포함하는 제조 방법이 개시된다.
LHRH 길항제를 제조하기 위한 본 발명의 프로세스는 트리펩타이드 (I)를 하기 일반식의 헵타펩타이드 (IV):
P1-Ser(P2)-AA1-AA2-Leu-Lys(iPr,P4)-Pro-D-AlaNH2 (IV)
(여기서, P4는 H 또는 Boc와 같은 아미노 보호기이고, AA1 및 AA2는 전술한 의미를 가짐), 특히 일반식 P1-Ser(P2)-NMeTyr(P3)-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(iPr,P4)-Pro-D-AlaNH2 (V)(여기서, P1은 H 또는 아미노 보호기로부터 선택되고, P2 와 P3는 독립적으로 H 및 -OH 보호기로부터 선택되고, P4는 전술한 의미를 가짐)와 결합시켜 LHRH 길항제, Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-Ser-MeTyr-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(iPr)-Pro-D-Ala-NH2 (Ⅲ)를 제조하는 단계를 포함하고, 보다 특별하게는 일반식 P1-Ser(P 2)-NMeTyr(P3)-D-Asn-Leu-Lys(iPr,P4)-Pro-D-AlaNH2(Va)(여기서, P1 은 H 또는 아미노 보호기로부터 선택되고, P2와 P3는 독립적으로 H 및 -OH 보호기로부터 선택되고, P 4는 전술한 의미를 가짐)와 결합시켜 LHRH 길항제, Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-Ser-MeTyr-D-Asn-Leu-Lys(iPr)-Pro-D-Ala-NH2 (Ⅲ)를 제조하는 단계를 포함한다.
헵타펩타이드 (V)는 특허문헌 US 5710246 A에 설명되어 있다. 상기 헵타펩타이드 (Va)를 포함하는 일반식 (IV)의 헵타펩타이드는, LHRH 길항제 (Ⅲ)도 개시되어 있는 특허문헌 WO 94/40757에 설명되어 있는 바와 같이, (V)의 합성 방법의 기계적 변형 또는 대응하는 Boc-아미노산을 펩타이드 합성기(peptide synthesizer) (Beckman 모델 990) 상에서 결합시킴으로써 합성할 수 있다.
이와 다르게, LHRH 길항제를 제조하기 위한 본 발명의 프로세스는 트리펩타이드 (IX):
Boc-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH (IX)
를 하기 일반식의 헵타펩타이드 (IV):
P1-Ser(P2)-AA1-AA2-Leu-Lys(iPr,P4)-Pro-D-AlaNH2 (IV)
(여기서, P1, P2, P4, AA1 및 AA2는 전술한 의미를 가짐)
특히 하기 일반식의 펩타이드 (V):
P1-Ser(P2)-NMeTyr(P3)-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(iPr,P4)-Pro-D-AlaNH 2 (V)
또는 보다 바람직하게, 하기 일반식의 펩타이드 (Va):
P1-Ser(P2)-NMeTyr(P3)-D-Asn-Leu-Lys(iPr,P4)-Pro-D-AlaNH 2 (Va)
(여기서, P1은 H 또는 아미노 보호기로부터 선택되고, P2와 P3는 독립적으로 H 및 -OH 보호기로부터 선택되고, P4는 전술한 의미를 가짐)와 결합시키는 단계, 및 이어서 N-말단 Boc기를 아실기, 특히 아세틸기로 치환하는 단계를 포함한다.
보다 특별하게, 일반식 (V)의 헵타펩타이드는 하기 헵타펩타이드 (VI):
H-Ser(tBu)-NMeTyr-D-Lys(Nic)-Leu-Lys(iPr,Boc)-Pro-D-AlaNH2 (VI), 또는 보다 바람직하게는 하기 헵타펩타이드 (VIa):
H-Ser(tBu)-NMeTyr-D-Asn-Leu-Lys(iPr,boc)Pro-D-AlaNH2 (VIa)이다.
본 발명의 방법에 따른 특별한 이점은 에스테르 H-Pal-ORㆍ2HCl 대신에 저가인 출발 물질, H-D-Pal-OHㆍ2HCl을 사용할 수 있으며, 상기 출발 물질의 보호기를 제거하지 않아도 되는 점이다. 따라서, 본 발명의 합성 방법은 1단계가 단축됨으로써 추가 단계에서의 재료의 손실을 피할 수 있다. 또 다른 이점은 비누화 단계에서의 불순물 형성을 피할 수 있는 점이다. 그러한 불순물의 형성은 잘 알려진 사실이다. 예를 들면, 에스테르 가수분해 단계에서의 염기성 조건은 D-Pal의 부분 적 라세미화(racemization)를 일으킨다. 촉매 방식 수소첨가 반응(알릴 또는 벤질 에스테르기의 경우)에 의해 에스테르기를 제거하는 종래의 다른 대안적 방법은 4ClPHe로부터 Cl의 손실을 야기하여 Phe를 생성하게 될 우려가 있다. 알릴기는 다른 반응제에 의해 제거될 수 있지만, 완전한 제거는 제어가 어렵다.
이하에서, 바람직한 실시예를 참조하여 본 발명의 더욱 구체적으로 설명한다.
Ac-D-2Nal-4ClPhe-D-3Pal-OH (I)의 합성
실시예 1. Boc-D-4ClPhe-OSu.
Boc-D-4ClPhe-OH(299.75g; 1.0 당량) 및 HONSu(184.1g; 1.6 당량)을 2-프로판올(4.5ℓ) 중에 용해시킨다. 상기 혼합물을 0℃로 냉각하고 DIC(164.1g; 1.3 당량)를 첨가한다. 상기 혼합물을 실온까지 온도를 올리면서 16시간 동안 교반한다. 생성물을 여과하고, 2-프로판올(1.5ℓ)로 세척하고 건조한다. 수율: 85%. HPLC 순도: 98.8%
실시예 2. Boc-D-4ClPhe-D-3Pal-OH.
H-D-3Pal-OH, 2HCl(251.1g; 1.05 당량) 및 Boc-D-4ClPhe-OSu(396.8g; 1.0 당량)을 DMSO(3.33ℓ)에 용해하고 NMM(318.8g; 3.15 당량)을 첨가한다. 상기 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한다. 물(17ℓ)을 첨가하고 생성물이 침전되도록 pH를 4∼4.5 범위로 조절한다. 혼합물을 여과하고, 생성물을 물(3×5ℓ)로 세척하여 미량의 DMSO, H-D-3Pal-OH 및 Boc-D-4ClPhe-OH를 제거한다. 얻어진 생성물을 건조 한다. 수율: 80%. HPLC 순도: 97.8%.
실시예 3. Boc-D-2Nal-OSu.
Boc-D-2Nal-OH(315.4g; 1.0 당량)을 -10℃에서 2-프로판올(6.8ℓ)에 용해하고, IBC(157g; 1.15 당량) 및 NMM(116g; 1.15 당량)을 첨가한다. 5∼10분간 교반한 후, 2-프로판올(1.4ℓ) 중의 HONSu(230.1g; 2.0 당량)의 혼합물을 첨가한다. 추가로 NMM(10.1g; 0.1 당량)을 첨가한다. 30분 후, 침전된 NMMㆍHCl을 용해하기 위해 물(0.82ℓ)을 첨가한다. 여과에 의해 생성물을 분리하고, 2-프로판올(1ℓ)로 세척한 후 건조한다. 수율: 90%. HPLC 순도: 98.3%.
실시예 4. Boc-Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH.
(a) 탈보호(deprotection)
Boc-D-4ClPhe-D-3Pal-OH(447.93g; 1.0 당량)을 0℃에서 에틸아세테이트(3.4ℓ), 아세트산(675ml) 및 MSA(454ml; 7.0 당량)의 혼합물 중에 용해시키고, 이 온도에서 2시간 동안 유지시킨다. TEA(1669ml; 12 당량)을 첨가한다.
(b) 축합
실온에서, Boc-D-Nal-OSu(412.4g; 1.0 당량)을 중화시킨 탈보호 혼합물에 첨가한다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 2∼4시간 동안 유지한다. NH3 25% 수용액(154ml; 2.0 당량)을 첨가하여 잔류한 하이드록시숙신이미드 에스테르를 희석시킨다. 이어지는 추출 과정에서 침전을 방지하기 위해 1-부탄올(4.5ℓ)을 첨가한다.
(c) 정제 및 분리
상기 반응 혼합물을 pH 6에서 2회 추출(2×4.5ℓ 물)하여 TEA를 제거하고, pH 9에서 추출(4.5ℓ 물)하여 MSA를 제거하고, 마지막으로 pH 7에서 추출(4.5ℓ 물)한다. 상기 추출 과정은 침전을 방지하기 위해 40∼45℃에서 실행한다. 얻어진 유기상에 아세트산(4.5ℓ; 1 vol.)을 첨가하고 혼합물을 진공 중에 농축하고, 아세트산(4.5ℓ)과 함께 공증발(co-evaporation)시켜 고체를 얻는다.
실시예 5. Boc-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-ONa.
(a) 탈보호
상기 고체 Boc-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH에 물(90ml), 아세트산(1.8ℓ) 및 MSA(454ml; 7.0 당량)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1∼2시간 동안 교반한다. 혼합물을 0℃로 냉각하고 TEA(1071ml; 7.7 당량)로 중화시킨다. 상기 용액을 진공 중에서 농축하고 톨루엔(2×2.5ℓ)과 함께 2회 공증발시켜 오일을 얻는다.
(b) 아세틸화
상기 탈보호 단계에서 얻어진 오일을 톨루엔(2.0ℓ) 중에 용해하고 아세틸이미다졸(132.14g)을 첨가한다. 상기 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음 물(100ml)을 첨가하여 잔류하는 아세틸이미다졸을 희석시킨다.
(d) 정제
상기 아세틸화 단계에서 얻어진 혼합물을 30∼35℃로 가열하고, 침전을 방지하기 위해 1-부탄올(4.5ℓ)을 첨가한다. 혼합물을 pH 5에서 2회(2×2.6ℓ 물) 추출하고, NaOH를 사용하여 pH를 11로 조절하여 pH 11에서 2회(2×2.6ℓ 물) 추출한다. 침전을 방지하기 위해 최종 추출물에 메탄올(2.25ℓ)을 첨가한다. 수상에서 의 생성물 손실을 최소로 하기 위해 1차 추출액 및 최종 추출액에 NaCl(130g)을 첨가한다.
(e) 분리
상기 추출 과정에서 얻어진 유기상을 강하게 교반하면서 헵탄(15ℓ)을 첨가하고, 얻어지는 현탁액을 교반하면서 실온에서 1시간 동안 방치한다. 상기 혼합물을 여과하고 생성물을 헵탄으로 2회(2×3.5ℓ) 세척한 후 건조한다. 수율: 75%(Boc-D-4ClPhe-D-3Pal-OH로부터). HPLC 순도: 92%. 아미노산 분석: 2Nal: 1.1; 4ClPhe: 1.0; 3Pal: 0.9. MS: MW 586. Na: 4.6%
실시예 6. Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OHㆍDCHA.
(a) 탈보호
고체 Boc-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH에 물(90ml), 아세트산(1.8ℓ) 및 MSA(454ml; 7.0 당량)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1∼2시간 동안 교반한다. 혼합물을 0℃로 냉각하고 TEA(1071ml; 7.7 당량)로 중화시킨다. 상기 용액을 진공 중에서 농축하고 톨루엔(2×2.5ℓ)과 함께 2회 공증발시켜 오일을 얻는다.
(b) 아세틸화
상기 탈보호 단계에서 얻어진 오일을 톨루엔(2.0ℓ) 중에 용해하고 아세틸이미다졸(132.14g)을 첨가한다. 상기 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음 물(100ml)을 첨가하여 잔류하는 아세틸이미다졸을 희석시킨다.
(c) 정제
상기 혼합물을 30∼35℃로 가열하고, 침전을 방지하기 위해 1-부탄올(4.5ℓ) 을 첨가한다. 혼합물을 pH 7에서 2회(2×2.6ℓ 물) 추출하되, 한 번은 pH 9∼9.5에서(2.6ℓ 물), 또 한 번은 pH 7(2.6ℓ 물)에서 행한다. DCHA(디사이클로헥실아민)을 첨가하고 혼합물을 진공 중에서 농축한다. 생성물을 50℃에서 1-부탄올(4.5ℓ) 중에 현탁시키고, 강하게 교반하는 헵탄(27ℓ)에 서서히 첨가한다. 혼합물을 0℃에서 철야 교반하고, 여과하여 생성물을 1-부탄올/헵탄으로 2회(1:3; 2×4.8ℓ) 세척하고, 헵탄으로 2회(2×4.5ℓ) 세척한다. 수율: 65%(Boc-D-4ClPhe-D-3Pal-OH로부터). HPLC 순도: 94.2%. 아미노산 분석: 2Nal: 1.1; 4ClPhe: 1.0; 3Pal: 0.9. MS: MW 586 (유리 펩타이드).
실시예 7. Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH.
(a) 탈보호
고체 Boc-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH에 물(90ml), 아세트산(1.8ℓ) 및 MSA(454ml; 7.0 당량)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1∼2시간 동안 교반한다. 혼합물을 0℃로 냉각하고 TEA(1071ml; 7.7 당량)로 중화시킨다. 상기 용액을 진공 중에서 농축하고 톨루엔(2×2.5ℓ)과 함께 2회 공증발시켜 오일을 얻는다.
(b) 아세틸화
상기 탈보호 단계에서 얻어진 오일을 톨루엔(2.0ℓ) 중에 용해하고 아세틸이미다졸(132.14g)을 첨가한다. 상기 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음 물(100ml)을 첨가하여 잔류하는 아세틸이미다졸을 희석시킨다.
(c) 정제
상기 아세틸화 공정에서 얻어진 혼합물을 30∼35℃로 가열하고, 침전을 방지 하기 위해 1-부탄올(4.5ℓ)을 첨가한다. 혼합물을 pH = 7에서 2회(2×2.6ℓ 물) 추출하되, 한 번은 pH = 9∼9.5에서(2.6ℓ 물), 또 한 번은 pH = 7(2.6ℓ 물)에서 행한다. 상기 혼합물을 진공 중에서 농축하여 오일을 얻고, 아세트산(750ml)에 용해시켜 농축하고, 다시 아세트산(750ml)에 용해시켜 강하게 교반되고 있는 헵탄/에틸아세테이트(3:1; 3.6ℓ)에 서서히 첨가한다. 상기 혼합물을 0℃에서 철야 교반한다. 혼합물을 여과하고, 생성물을 에틸아세테이트/헵탄으로 2회(1:3; 2×3.6ℓ), 헵탄으로 2회(2×3.6ℓ) 세척한다. 수율: 70%(Boc-D-4ClPhe-D-3Pal-OH로부터). HPLC 순도: 93.9%. 아미노산 분석: Nal: 1.1; 4ClPhe: 1.0; 3Pal: 0.9. MS: MW 586(유리 펩타이드).

Claims (13)

  1. 하기 일반식 (IX):
    Boc-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH (Ⅸ)
    의 트리펩타이드 및 그의 염을 제조하는 방법으로서,
    상기 일반식 (IX)의 트리펩타이드를 제조하기 위해, 연속되는 하기 단계:
    (a) Boc-D-4ClPhe-OH를 HONSu와 반응시켜 Boc-D-4ClPhe-OSu (VII)를 형성하는 단계;
    (b) Boc-D-4ClPhe-OSu (VII)를 H-D-3Pal-OH와 반응시켜 Boc-D-4ClPhe-D-3Pal-OH (Ⅷ)를 형성하는 단계; 및
    (c) Boc-D-4ClPhe-D-3Pal-OH (Ⅷ)를, Boc-D-2Nal-OH와 HONSu의 반응에 의해 제조된 Boc-D-2Nal-OSu와 반응시켜 Boc-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH (Ⅸ)를 형성하는 단계
    를 포함하는 제조 방법.
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  13. 제1항의 방법에 의해 제조된 트리펩타이드 Boc-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-OH (IX) 또는 그의 염.
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