KR100752613B1 - 신규 벤조푸란 유도체를 포함하는 부정맥 예방용 식품 - Google Patents

신규 벤조푸란 유도체를 포함하는 부정맥 예방용 식품 Download PDF

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Abstract

본 발명은 신규 벤조푸란 유도체와 이를 포함하는 부정맥 예방용 식품에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 다음 화학식 1로 표시되는 신규 벤조푸란 유도체가 사람 심방에 주로 발현하는 hKv1.5통로를 선택적으로 차단하는데 우수한 효과를 나타냄을 확인하고 이를 부정맥의 예방용 식품에 적용하고자 한다.
[화학식 1]
Figure 112007032903121-pat00001
상기 화학식 1에서, R1, R2 및 R3는 발명의 상세한 설명에 기재된 바와 같다.
벤조푸란 유도체, 부정맥, K+ 통로

Description

신규 벤조푸란 유도체를 포함하는 부정맥 예방용 식품{Foods for preventing arrhythmia comprising novel benzofuran derivatives}
도 1a는 hKv1.5 통로 유전자가 발현된 Ltk-세포에서 막전압을 -80 mV로 고정후 +60 mV에서 -80 mV까지 10 mV 간격으로 자극시 기록된 대조 K+ 전류를 나타낸 그래프다.
도 1b는 hKv1.5 통로 유전자가 발현된 Ltk-세포에서 막전압을 -80 mV로 고정후 +60 mV에서 -80 mV까지 10 mV 간격으로 자극시 기록된 K+ 전류에 대한 화합물13 (10 μM)의 효과를 나타낸 그래프이다.
도 1c는 hKv1.5 통로 유전자가 발현된 Ltk-세포에서 막전압을 -80 mV로 고정후 +60 mV에서 -80 mV까지 10 mV 간격으로 자극시 기록된 K+ 전류에 대한 화합물13 (10 μM)의 효과를, 각 막전압에서 대조전류에 대한 상대적 전류로 나타낸 그래프이다.
도 1d는 hKv1.5 통로 유전자가 발현된 Ltk-세포에서 막전압을 -80 mV에서 +50 mV로 자극시 마지막에 기록된 안정전류에 대한 화합물13의 용량반응곡선을 나타낸 그래프이다.
도 2a는 hKv1.5 통로 유전자가 발현된 Ltk-세포에서 hKv1.5 통로의 활성화에 대한 화합물13 (1 μM)의 효과를 나타낸 그래프이다.
도 2b는 hKv1.5 통로 유전자가 발현된 Ltk-세포에서 hKv1.5 통로의 비활성화에 대한 화합물13 (1 μM)의 효과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 hKv1.5 통로 유전자가 발현된 Ltk-세포에서 화합물13에 의한 hKv1.5 통로 억제 효과의 막전압 의존성을 나타낸 그래프이다.
도 4는 hKv1.5 통로 유전자가 발현된 Ltk-세포에서 화합물13 (1 μM)에 의한 hKv1.5 통로 억제 효과의 자극빈도수-의존성을 나타낸 그래프이다.
본 발명은 신규 벤조푸란 유도체를 포함하는 부정맥 예방용 식품에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 화학식 1로 표시되는 신규 벤조푸란 유도체가 사람 심방에 주로 발현하는 hKv1.5통로를 선택적으로 차단하는데 우수한 효과를 나타냄을 확인하고 이를 부정맥 예방용 식품에 적용하고자 하는 발명이다.
부정맥 (arrhythmia)이란, 다양한 원인에 의해 국소부위 심근의 전기생화학적 특성이 변하여 심장의 비정상적 전기충동 형성 또는 전기충동의 전파 장애가 일어나 심장의 비정상적인 리듬으로 심장의 펌프 기능에 이상이 나타나는 질환이며, 만일 이러한 이상에 의해 심박동수가 심하게 느려지면 서맥성 부정맥, 비정상적으로 빨라지면 빈맥성 부정맥, 심박동이 예정보다 한박자 빨리 나오는 경우는 조기 박동이라 한다.　 일반적으로 부정맥은 다양한 유형의 합병증을 유발하며, 따라서 이의 정확한 진단, 예방 및 치료는 필수적이다.
이러한 부정맥의 예방 및 치료를 위한 다양한 약물들이 현재 개발되어 있으나, 부작용들로 인하여 제한적인 범위에서만 사용되고 있다.　 부작용이 없는 이상적인 항부정맥제란, 비정상적으로 흥분성을 나타내는 심근세포 (또는 심장박동수가 비정상적인 세포)에만 작용하거나, 심장 내에서도 부정맥 발생원인 조직 (즉 심방, 심실, 퍼킨제섬유 등)에만 작용하는 약물이어야 하지만, 이러한 조건을 충족시키는 약물은 현재 개발되지 못했다.　 부작용이 없거나 적은 새로운 항부정맥제를 개발하기 위해서는 항부정맥제의 작용부위, 즉 이온통로에 대한 분자생물학적 수준의 새로운 이해가 뒤따라야 하며, 따라서 분자생물학적 클로닝 기법과 전기생리학적 기법을 병용하여 새로운 이상적 항부정맥제를 개발하기 위한 노력들이 시도되고 있다.
한편, 활동전위 기간은 여러 K+ 통로에 의해 조절되며, 심장 각 부위별로 발현하는 K+ 통로에 대한 다양한 유전자들이 공지되어 있다.　 심장에서 가장 다양한 이온 통로인 K+ 통로 전류는 크게 내향성 전류 (IK1, inward rectifying current; IKAch, acetylcholine-activated current; IKATP, ATP-sensitive K+ channel 등)와 막전압 의존성 (voltage-gated) K+ (Kv) 전류로 분류되는데, 대체로 내향성 K+ 전류는 안정막 전압조절에 관여하고 Kv 전류는 활동전위기간을 조절한다.
Kv 통로들은 세포의 재분극에 기여하여 활동전위 기간을 조절할 수 있다. 임상적으로, 심실근에서 발생되는 부정맥들은 손상조직부위의 재분극 장애로 초래된다고 알려져 있기에, 부정맥치료의 중요한 표적이 되고 있다.　 실제로, 퀴니딘, 베라파밀, 니페디핀, 소타롤, 아미오다론, 프레카니드, 크로피리움 등의 항부정맥제가 이러한 Kv 통로에 작용한다고 알려져 있다 (Katz AM. Selectivity and toxicity of antiarrhythmic drugs: molecular interactions with ion channels. Am J Med 1998, 104:179-195).　 그러나, 이러한 약물들은 이온 통로 선택성이 결여되어 많은 부작용을 초래한다고 알려져 있기 때문에 이온 통로 선택성을 갖는 새로운 약물 개발이 필요하다.
한편, Kv 통로는 8종류 (Kv1.1-Kv1.8) 이상이 알려져 있으며 (Grissner S. Potassium channels still hot. TiPS 1997, 18:347-350), 현재 심장조직에서 클로닝된 Kv 통로유전자는 Kv1.1, Kv1.2, Kv1.4, Kv1.5, Kv2.1, Kv4.2, Kv4.3 등 7종류이다 (Deal 등. Molecular physiology of cardiac potassium channels. Physiol Rev 1996, 76:49-67).　 이들 유전자 중 사람 심장에 발현하는 중요 Kv 통로 유전자는 hKv1.4, hKv1.5, Kv4.3 및 HERG 유전자이다.　 이러한 유전자들은 주로 심방과 심실에 모두 발현하나, hKv1.5 유전자는 사람 심방에 주도적으로 발현되며, 사람 심방에서 특징적으로 기록되는 IKur과 전기생리학적 및 약리학적 특성이 같다고 알려져 있다 (Fedid 등. The 1997 Stevenson Award Lecture. Cardiac K+ channel gating: cloned delayed rectifier mechanisms and drug modulation. Can J Physiol Pharmacol 1998, 76:77-89).　 따라서, hKv1.5 통로에 대한 선택적인 차단제를 개발할 수 있다면 효과적인 심방성 부정맥 치료제가 될 수 있다 할 것이다.
이에 본 발명의 발명자들은 사람 심방에 주도적으로 발현되는 hKv1.5 통로에 대한 선택적인 차단제를 개발하고자 연구를 거듭한 결과, hKv1.5 통로 전류를 효과적으로 억제하면서도, 심박수에 비례하여 그 효과가 증대되는 신규한 벤조푸란 유도체를 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명은 hKv1.5 통로에 대한 선택적인 차단제로서 작용함으로써, 부정맥의 예방 및 치료에 효과적으로 사용될 수 있는 신규한 벤조푸란 유도체를 포함하는 부정맥 예방용 식품을 제공하고자 하는 데에 그 목적이 있다.
본 발명은 다음 화학식 1로 표시되는 것을 특징으로 하는 벤조푸란 유도체를 유효성분으로 포함하는 부정맥 예방용 식품을 그 특징으로 한다.
[화학식 1]
Figure 112007032903121-pat00002
상기 화학식 1 에 있어서, R1은 메톡시기이고, R2는 메톡시기 또는 탄소수 2의 알릴옥시기이며, R3는 히드록시프로페닐, 히드록시프로필, 메톡시프로페닐, 탄소수 5의 알릴옥시프로페닐, 아세톡시프로페닐, 탄소수 6의 알릴아크릴레이트, 아크릴산 및 아크릴릭-(E)-N,N' -디사이클로헥실카바미미딕 안하이드라이드 중에서 선택된 것이다.
이하 본 발명을 상세하게 설명하면 다음과 같다.
본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 신규 벤조푸란 유도체가 사람 심방에 주로 발현하는 hKv1.5통로를 선택적으로 차단하는데 우수한 효과를 나타냄을 확인하고 이를 부정맥의 예방용 식품에 적용하고자 한다.
상기의 화학식 1로 표시되는 벤조푸란 유도체들 중에서 본 발명에 특히, 바람직하게 사용되는 화합물들은 하기 표 1에 나타낸 바와 같다.
화학식 화합물 명
화합물 1
Figure 112007032903121-pat00003
 (Z)-3-(6,7-디메톡시벤조푸란-5-일)프롭-2-엔-1-올
화합물 2
Figure 112007032903121-pat00004
 3-(6,7-디메톡시벤조푸란-5-일)프로판-1-올
화합물 3
Figure 112007032903121-pat00005
 (Z)-6,7-디메톡시-5-(3-메톡시프롭-1-에닐)벤조푸란
화합물 4
Figure 112007032903121-pat00006
 (Z)-5-(3-(알릴옥시)프롭-1-에닐)-6,7-디메톡시벤조푸란
화합물 5
Figure 112007032903121-pat00007
 (Z)-3-(6,7-디메톡시벤조푸란-5-일)알릴 아세테이트
화합물 6
Figure 112007032903121-pat00008
 (Z)-3-(6,7-디메톡시벤조푸란-5-일)아크릴-(E)-N,N'-디사이클로헥실카바미미딕 안하이드라이드
화합물 7
Figure 112007032903121-pat00009
 (Z)-알릴-3-(6-알릴옥시-7-메톡시벤조푸란-5-일)아크릴레이트
화합물 8
Figure 112007032903121-pat00010
 (Z)-3-(6-(알릴옥시)-7-메톡시벤조푸란-5-일)아크릴 산
화합물 9
Figure 112007032903121-pat00011
 (Z)-3-(6-(알릴옥시)-7-메톡시벤조푸란-5-일)프롭-2-엔-1-올
화합물 10
Figure 112007032903121-pat00012
 (Z)-6-(알릴옥시)-7-메톡시-5-(3-메톡시프롭-1-에닐)벤조푸란
화합물 11
Figure 112007032903121-pat00013
 (Z)-6-(알릴옥시)-5-(3-(알릴옥시)프롭-1-에닐)-7-메톡시벤조푸란
화합물 12
Figure 112007032903121-pat00014
 (Z)-3-(6-알릴옥시-7-메톡시벤조푸란-5-일)알릴 아세테이트
화합물 13
Figure 112007032903121-pat00015
 (Z)-3-(6-알릴옥시-7-메톡시벤조푸란-5-일)아크릴릭-(E)-N,N'-디사이클로헥실카바미미딕 안하이드라이드
본 발명의 신규 벤조푸란 유도체는 hKv1.5통로 전류를 억제하고, 심박수에 비례하여 그 효과가 증대되기 때문에 K+ 통로 매개 질환, 특히 부정맥의 예방 및 치료에 우수한 효과를 나타냄을 확인하고, 이를 부정맥 예방용 및 치료용 조성물로서 적용하고자 함에 그 특징이 있는바, 상기 표 1에 제시된 벤조푸란 유도체는 신규한 물질이다. 또한, 이들 벤조푸란 유도체가 K+ 통로 차단작용 및 항부정맥 효과가 있다는 사실은 어떠한 문헌에도 기재되거나 암시된 적이 없다.
본 발명의 화합물들은 하기 반응식 1 ~ 13의 합성과정으로 합성될 수 있다. 그러나, 이는 단지 예시를 들기 위한 것으로서, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
Figure 112007032903121-pat00016
8-메톡시솔라렌
8-메톡시솔라렌(8-Methoxypsolaren)을 소디움하이드라이드 염기 존재 하 무수 디메틸포름아미드 용액에서 요오드화메틸로 처리하여 오일상의 (Z)-메틸-3-(6,7-디메톡시벤조푸란-5-일)아크릴레이트를 얻는다.
Figure 112007032903121-pat00017
화합물 1
(Z)-메틸-3-(6,7-디메톡시벤조푸란-5-일)아크릴레이트를 테트라히드로퓨란 용액에서 환원제인 DIBAL-H로 처리하여 오일상의 불포화 알코올 화합물 1을 얻는다.
Figure 112007032903121-pat00018
화합물 2
(Z)-메틸-3-(6,7-디메톡시벤조푸란-5-일)아크릴레이트를 테트라히드로퓨란 용액에서 환원제인 보란-테트라히드로퓨란으로 처리하여 오일상의 알코올 화합물 2를 얻는다.
Figure 112007032903121-pat00019
화합물 1 화합물 3
화합물 1을 소디움하이드라이드 염기 존재 하 테트라히드로퓨란과 디메틸포름아미드 1 : 1 용액에서 요오드화메틸로 처리하여 오일상의 에테르 화합물 3을 얻는다.
Figure 112007032903121-pat00020
화합물 1 화합물 4
화합물 1을 소디움하이드라이드 염기 존재 하 테트라히드로퓨란과 디메틸포 름아미드 1 : 1 용액에서 브롬화알릴로 처리하여 오일상의 에테르 화합물 4를 얻는다.
Figure 112007032903121-pat00021
화합물 1 화합물 5
화합물 1을 트리에틸아민 염기 존재 하 디클로로메탄 용액에서 무수초산으로 처리하여 오일상의 에스테르 화합물 5를 얻는다.
Figure 112007032903121-pat00022
(Z)-메틸-3-(6,7-디메톡시벤조푸란-5-일)아크릴레이트를 메탄올 용액에서 2N 수산화나트륨 용액으로 처리하여 오일상의 산 화합물 (Z)-3-(6,7-디메톡시벤조푸란-5-일)아크릴산을 얻는다.
Figure 112007032903121-pat00023
화합물 6
(Z)-3-(6,7-디메톡시벤조푸란-5-일)아크릴산을 디클로로메탄 용액에서 무수디시크로헥실카보디이미드로 처리하여 화합물 6을 얻는다.
Figure 112007032903121-pat00024
8-메톡시솔라렌 화합물 7
8-메톡시솔라렌(8-Methoxypsolaren)을 소디움하이드라이드 염기 존재 하 디메틸포름아미드 용액에서 브롬화알릴로 처리하여 오일상의 화합물 7을 얻는다.
Figure 112007032903121-pat00025
화합물 7 화합물 8
화합물 7을 메탄올 용액에서 2N 수산화나트륨 용액으로 처리하여 오일상의 산 화합물 8을 얻는다.
Figure 112007032903121-pat00026
화합물 8 화합물 9
화합물 8을 테트라히드로퓨란 용액에서 환원제인 DIBAL-H로 처리하여 오일상의 불포화 알코올 화합물 9를 얻는다.
Figure 112007032903121-pat00027
화합물 9 화합물 10
화합물 9를 소디움하이드라이드 염기 존재 하 테트라히드로퓨란과 디메틸포름아미드 1 : 1 용액에서 요오드화메틸로 처리하여 오일상의 에테르 화합물 10 얻는다.
Figure 112007032903121-pat00028
화합물 9 화합물 11
화합물 9를 소디움하이드라이드 염기 존재 하 테트라히드로퓨란과 디메틸포름아미드 1 : 1 용액에서 브롬화알릴로 처리하여 오일상의 에테르 화합물 11을 얻는다.
Figure 112007032903121-pat00029
화합물 9 화합물 12
화합물 9를 트리에틸아민 염기 존재 하 디클로로메탄 용액에서 무수초산으로 처리하여 오일상의 에스테르 화합물 12를 얻는다.
Figure 112007032903121-pat00030
화합물 8 화합물 13
화합물 8을 디클로로메탄 용액에서 무수디시크로헥실카보디이미드로 처리하여 무색 고체의 화합물 13을 얻는다.
본 발명의 부정맥의 예방 및 치료용 조성물은 상기 화학식 1로 표시되는 신규 벤조푸란 유도체를 유효성분으로 포함하며, 이때 상기 유효성분은 각각의 단일 성분일 수 있으나, 사용목적 및 방법에 따라 적절히 조절하는 것이 바람직하다.
본 발명에서 제공하는 부정맥의 예방 및 치료용 조성물은 상기 화학식 1로 표시되는 신규 벤조푸란 유도체를 전체 조성물 중 통상 10 ~ 5000 mg/일이 바람직하고, 바람직하기로는 50 ~ 1000 mg/일이고, 잔량의 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 부정맥의 예방 및 치료용 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용가능한 담체로는, 부형제, 결합제, 활택제, 붕괴제, 피복제, 유화제, 현탁제, 용제, 안정화제, 흡수조제, 주사용수, 등장화제 등을 예시할 수 있으며, 본 발명에 따른 조성물은 이들 담체 중에서 선택된 1종 이상의 성분을 포함할 수 있다.
본 발명의 부정맥의 예방 및 치료용 조성물은 국소적 투여(주사제), 경구 투여 및 비경구 투여에 적합한 제제로 제형화할 수 있으며, 경구 투여형 제제가 보다 바람직한 바, 이러한 경구 제제로는, 과립제, 정제, 캅셀제, 액제 등을 예시할 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 다양한 식품류에도 이용될 수 있다. 본 발명의 조성물이 첨가될 수 있는 식품으로는 예컨대, 차, 건강보조 식품류 등을 들 수 있다.
본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 성인 기준으로 통상 10∼5000 mg/일이 바람직하고, 보다 바람직하게는 50∼1000 mg/일이다.
본 발명의 조성물은 K+통로 차단제 및 항부정맥제로 사용될 수 있으며, 쥐, 개, 토끼, 고양이, 닭 등의 온혈동물 치료에도 사용이 가능하다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하되, 본 발명의 범위가 하기 실시예로만 제한되는 것은 아니다.
실시예 1. (Z)-3-(6,7- 디메톡시벤조푸란 -5-일) 프롭 -2-엔-1-올 [(Z)-3-(6,7-dimethoxybenzofuran-5-yl)prop-2-en-1-ol] (화합물 1)의 제조
8-메톡시솔라렌(0.05g, 0.231mmol)을 디메틸포름아미드(1.5mL)에 녹인 후, 소디움하이드라이드(0.019g, 0.463mmol), 요오드화메틸 (0.06mL, 0.925mmol)을 차례로 가한다. 실온에서 24시간 동안 교반하고, 추출, 세척, 건조하여 컬럼 크로마토그래피 (헥산: 에틸아세테이트=8:1)를 행하여 0.05g(82%)의 (Z)-메틸-3-(6,7-디메톡시벤조푸란-5-일)아크릴레이트를 얻었다. (Z)-메틸-3-(6,7-디메톡시벤조푸란-5-일)아크릴레이트 (0.62g, 2.364mmol)을 메탄올(8mL)에 녹인 후, 2-노르말 수산화나트륨(1.2mL, 3.546mmol)을 가한다. 50~60℃에서 5.5시간 교반하고, 추출, 세척, 건조하여 컬럼 크로마토그래피 (클로로포름 : 메탄올=10:1)를 행하여 (Z)-3-(6,7-디메톡시벤조푸란-5-일)아크릴산 0.67g(100%)의 화합물을 얻었다. (Z)-3-(6,7-디메톡시벤조푸란-5-일)아크릴산 (0.3g, 1.146mmol)을 테트라히드로퓨란(6mL)에 녹인 후, 디이소프로필보란알루미늄하이드라이드(3.4mL, 3.438mmol)를 가한다. 실온에서 24시간 동안 교반하고, 추출, 세척, 건조하여 컬럼 크로마토그래피 (헥산 : 에틸아세테이트=2:1)를 행하여 0.26g(97%)의 화합물 1을 얻었다.
Rf : 0.27 (헥산 : 에틸아세테이트=2:1)
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 3.52 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 4.02 (d, 2H, J = 6.6 Hz), 5.65 (dt, 1H, J = 11.7, 6.6 Hz), 6.39 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 6.42 (d, 1H, J = 11.7 Hz), 6.71 (s, 1H), 7.29 (d, 1H, J = 2.4 Hz)
실시예 2. 3-(6,7- 디메톡시벤조푸란 -5-일)프로판-1-올 [3-(6,7- dimethoxybenzofuran-5-yl)propan-1-ol] (화합물 2)의 제조
(Z)-3-(6,7-디메톡시벤조푸란-5-일)아크릴산 (0.28g, 1.128mmol)을 테트라히드로퓨란(6mL)에 녹인 후, 보란-테트라히드로퓨란 콤플렉스(3.4mL, 3.384mmol)를 가한다. 실온에서 24시간 동안 교반하고, 추출, 세척, 건조하여 컬럼 크로마토그래피 (헥산 : 에틸아세테이트=2:1)를 행하여 0.25g(9.3%)의 화합물 2를 얻었다.
Rf : 0.27 (헥산 : 에틸아세테이트=2:1)
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.76-1.81 (br s, 1H), 1.88 (tt, 2H, J = 7.2, 6.3 Hz), 2.80 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 3.62 (t, 2H, J = 6.3 Hz), 3.91 (s, 3H), 4.19 (s, 3H), 6.67 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.05 (s, 1H), 7.57 (d, 1H, J = 2.4 Hz)
실시예 3. (Z)-6,7- 디메톡시 -5-(3- 메톡시프롭 -1- 에닐 ) 벤조푸란 [(Z)-6,7-dimethoxy-5-(3-methoxyprop-1-enyl)benzofuran] (화합물 3)의 제조
화합물 1 (0.05g, 0.213mmol)을 디메틸포름아미드(0.7mL)와 테트라히드로퓨란(0.7mL)에 녹인 후, 소디움하이드라이드(0.017g, 0.427mmol), 요오드화메틸(0.026mL, 0.427mmol)을 차례로 가한다. 실온에서 3시간 동안 교반하고, 추출, 세척, 건조하여 컬럼 크로마토그래피 (헥산 : 에틸아세테이트=12:1)를 행하여 0.044g(83%)의 화합물 3을 얻었다.
Rf : 0.25 (헥산 : 에틸아세테이트=12:1)
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 3.35 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 4.17 (dd, 2H, J = 6.3, 1.8 Hz), 4.19 (s, 3H), 5.91 (dt, 1H, J = 11.7, 6.3 Hz), 6.72 (d, 1H, J = 2.1 Hz), 6.81 (d, 1H, J = 11.7 Hz), 7.01 (s, 1H), 7.59 (d, 1H, J = 2.1 Hz)
실시예 4. (Z)-5-(3-( 알릴옥시 ) 프롭 -1- 에닐 )-6,7- 디메톡시벤조푸란 [(Z)-5-(3-(allyloxy)prop-1-enyl)-6,7-dimethoxybenzofuran] (화합물 4)의 제조
화합물 1 (0.05g, 0.213mmol)을 디메틸포름아미드(0.7mL)와 테트라히드로퓨란(0.7mL)에 녹인 후, 소디움하이드라이드(0.017g, 0.427mmol), 알릴브로마이드(0.036mL, 0.427mmol)을 차례로 가한다. 실온에서 3시간 동안 교반하고, 추출, 세척, 건조하여 컬럼 크로마토그래피 (헥산 : 에틸아세테이트=15:1)를 행하여 0.042g(72%)의 화합물 4를 얻었다.
Rf : 0.25 (헥산 : 에틸아세테이트=15:1)
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 3.84 (s, 3H), 3.99 (dt, 2H, J = 5.7, 1.8 Hz), 4.19 (s, 3H), 4.23 (dd, 2H, J = 6.9, 2.4 Hz), 5.16 (dd, 1H, J = 10.2, 1.2 Hz), 5.26 (dd, 1H, J = 15.9, 1.2 Hz), 5.88-5.98 (m, 2H), 6.71 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 6.81 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 7.03 (s, 1H), 7.59 (d, 1H, J = 2.4 Hz)
실시예 5. (Z)-3-(6,7- 디메톡시벤조푸란 -5-일)알릴 아세테이트 [(Z)-3-(6,7- dimethoxybenzofuran-5-yl)allyl acetate ] (화합물 5)의 제조
화합물 1 (0.07g, 0.213mmol)을 염화메틸렌(1.5mL)에 녹인 후, 트리에틸아민(0.12mL, 0.852mmol), 무수초산(0.04mL, 0.426mmol)을 차례로 가한다. 실온에서 3시간 동안 교반하고, 추출, 세척, 건조하여 컬럼 크로마토그래피 (헥산 : 에틸아세테이트=10:1)를 행하여 0.074g(85%)의 화합물 5를 얻었다.
Rf : 0.23 (헥산 : 에틸아세테이트=10:1)
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 2.08 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 4.20 (s, 3H), 4.83 (dd, 2H, J = 6.6, 1.5 Hz), 5.87 (dt, 1H, J = 11.7, 6.6 Hz), 6.72 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 6.86 (d, 1H, J = 11.7 Hz), 7.03 (s, 1H), 7.60 (d, 1H, J = 2.4 Hz)
실시예 6. (E)-N, N' - 디사이클로헥실카바미미딕 (Z)-3-(6,7- 디메톡시벤조푸란 -5-일) 아크릴릭 안하이드라이드 [(E)-N, N' - dicyclohexylcarbamimic (Z)-3-(6,7-dimethoxybenzofuran-5yl)acrylicanhydride] (화합물 6)의 제조
(Z)-3-(6,7-디메톡시벤조푸란-5-일)아크릴산 (0.04g, 0.161mmol)을 염화메틸렌(1.6mL)에 녹인 후, 디클로로헥실카보디이미드(0.1g, 0.483mmol)를 가하여 실온에서 2시간 동안 교반한다. 추출, 세척, 건조하여 컬럼 크로마토그래피 (헥산 : 에틸아세테이트=4:1)를 행하여 0.020g(27%)의 화합물 6을 얻었다.
Rf : 0.23 (헥산 : 에틸아세테이트=4:1)
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.07-1.47 (m, 4H), 1.65-1.83 (m, 4H), 1.55-1.99 (m, 2H), 2.21-2.25 (m, 2H), 3.52 (br s, 1H), 3.66-3.77 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 4.21 (s, 3H), 6.22 (d, 1H, J=12.3 Hz), 6.72 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.02 (d, 1H, J = 12.3 Hz), 7.33 (s, 1H), 7.61 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 8.03 (br s, 1H)
실시예 7. (Z)-알릴 3-(6- 알릴옥시 -7- 메톡시벤조푸란 -5-일) 아크릴레이트 [(Z)-allyl 3-(6- allyloxy -7- methoxybenzofuran -5- yl ) acrylate ] (화합물 7)의 제조
8-메톡시소라렌 (1g, 4.625mmol)을 디메틸포름아미드(15.4mL)에 녹인 후, 소디움하이드라이드(0.56g, 13.875mmol), 알릴브로마이드(1.57mL, 18.501mmol)을 차례로 가한다. 실온에서 24시간 동안 교반하고, 추출, 세척, 건조하여 컬럼 크로마토그래피 (헥산 : 에틸아세테이트=12:1)를 행하여 1.1g(76%)의 화합물 7을 얻었다.
Rf : 0.26 (헥산 : 에틸아세테이트=12:1)
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 4.16 (s, 3H), 4.53 (dt, 2H, J = 5.7, 1.2 Hz), 4.59 (dt, 2H, J = 5.7, 1.2 Hz), 5.16-5.39 (m, 4H), 5.94 (ddt, 1H, J = 15.9, 10.5, 5.7 Hz), 6.03 (d, 1H, J = 12.6 Hz), 6.15 (ddt, 1H, J = 15.9, 10.5, 5.7 Hz), 6.71 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.27 (d, 1H, J = 12.6 Hz), 7.57 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.59 (s, 1H)
실시예 8. (Z)-3-(6-( 알릴옥시 )-7- 메톡시벤조푸란 -5-일) 아크릴 산 [(Z)-3-(6-(allyloxy)-7-methoxybenzofuran-5-yl)acrylic acid ] (화합물 8)의 제조
화합물 7 (1g, 3.181mmol)을 메탄올(8mL)에 녹인 후, 2N 산화나트륨(1.6mL, 4.472mmol)을 가한다. 50~60℃에서 3.5시간 교반하고, 추출, 세척, 건조하여 컬럼 크로마토그래피 (클로로포름 : 메탄올=10:1)를 행하여 0.55g(92%)의 화합물 8을 얻었다.
Rf : 0.17 (헥산 : 에틸아세테이트=2:1)
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 4.16 (s, 3H), 4.54 (dt, 2H, J = 5.7, 1.5 Hz), 5.31 (dd, 1H, J = 10.5, 1.5 Hz), 5.38 (dd, 1H, J = 17.4, 1.5 Hz), 6.02 (d, 1H, J = 12.3 Hz), 6.11 (ddt, 1H, J = 17.4, 10.5, 5.7 Hz), 6.71 (d, 1H, J = 2.1 Hz), 7.33 (d, 1H, J = 12.3 Hz), 7.54 (s, 1H), 7.58 (d, 1H, J = 2.1Hz)
실시예 9. (Z)-3-(6-( 알릴옥시 )-7- 메톡시벤조푸란 -5-일) 프롭 -2-엔-1-올 [(Z)-3-(6-(allyloxy)-7-methoxybenzofuran-5-yl)prop-2-en-1-ol] (화합물 9)의 제조
화합물 7 (0.3g, 0.954mmol)을 테트라히드로퓨란(5mL)에 녹인 후, 디이소프로필보란알루미늄하이드라이드(3mL, 2.863mmol)을 가한다. 실온에서 24시간 동안 교반하고, 추출, 세척, 건조하여 컬럼 크로마토그래피 (헥산 : 에틸아세테이트=2:1)를 행하여 0.24g(97%)의 화합물 9를 얻었다.
Rf : 0.29 (헥산 : 에틸아세테이트=2:1)
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.68-1.70 (br s, 1H), 4.18 (s, 3H), 4.33 (dd, 2H, J = 5.7, 1.2 Hz), 4.50 (dt, 2H, J = 5.7, 1.5 Hz), 5.24 (dd, 1H, J = 10.5, 1.2 Hz), 5.37 (dd, 1H, J = 17.1, 1.2 Hz), 5.96 (dt, 1H, J = 11.7, 5.7 Hz), 6.10 (ddt, 1H, J = 17.1, 10.5, 5.7 Hz), 6.71 (d, 1H, J = 2.1 Hz), 6.75 (d, 1H, J = 11.7 Hz), 7.03 (s, 1H), 7.59 (d, 1H, J = 2.1 Hz)
실시예 10. (Z)-6-( 알릴옥시 )-7- 메톡시 -5-(3- 메톡시프롭 -1- 에닐 ) 벤조푸란 [(Z)-6-(allyloxy)-7-methoxy-5-(3-methoxyprop-1-enyl)benzofuran] (화합물 10)의 제조
화합물 9 (0.05g, 0.192mmol)를 디메틸포름아미드(0.7mL)와 테트라히드로퓨란(0.7mL)에 녹인 후, 소디움하이드라이드(0.015g, 0.384mmol), 요오드화메틸(0.024mL, 0.384mmol)을 차례로 가한다. 실온에서 3시간 동안 교반하고, 추출, 세척, 건조하여 컬럼 크로마토그래피 (헥산 : 에틸아세테이트=12:1)를 행하여 0.04g(75%)의 화합물 10을 얻었다.
Rf : 0.29 (헥산 : 에틸아세테이트=12:1)
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 3.35 (s, 3H), 4.15 (dd, 2H, J = 6.6, 1.8 Hz), 4.18 (s, 3H), 4.50 (dt, 2H, J = 6.0, 1.2 Hz), 5.22 (dd, 1H, J = 10.5, 1.5 Hz), 5.33 (dd, 1H, J = 17.4, 1.5 Hz), 5.90 (dt, 1H, J = 11.7, 6.6 Hz), 6.10 (ddt, 1H, J = 17.4, 11.7, 6.6 Hz), 6.72 (d, 1H, J = 2.1 Hz), 6.82 (d, 1H, J = 11.7 Hz), 7.02 (s, 1H), 7.59 (d, 1H, J = 2.1 Hz)
실시예 11. (Z)-6-( 알릴옥시 )-5-(3-( 알릴옥시 ) 프롭 -1- 에닐 )-7- 메톡시벤조푸란 [(Z)-6-(allyloxy)-5-(3-(allyloxy)prop-1-enyl)-7-methoxybenzofuran](화합물 11)의 제조
화합물 9 (0.05g, 0.213mmol)를 디메틸포름아미드(0.7mL)와 테트라히드로퓨란(0.7mL)에 녹인 후, 소디움하이드라이드(0.015g, 0.384mmol), 알릴브로마이드(0.032mL, 0.384mmol)을 차례로 가한다. 실온에서 3시간 동안 교반하고, 추출, 세척, 건조하여 컬럼 크로마토그래피 (헥산 : 에틸아세테이트=15:1)를 행하여 0.045g(78%)의 화합물을 얻었다.
Rf : 0.28 (헥산 : 에틸아세테이트=15:1)
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 4.00 (dt, 2H, J = 5.7, 1.2 Hz), 4.18 (s, 3H), 4.23 (dd, 2H, J = 6.6, 1.5 Hz), 4.50 (dt, 2H, J = 5.7, 1.2 Hz), 5.16-5.34 (m, 4H), 5.89-5.97 (m, 2H), 6.11 (ddt, 1H, 17.4, 11.1, 5.7 Hz), 6.72 (d, 1H, J = 2.1 Hz), 6.83 (d, 1H, J = 11.7 Hz), 7.05 (s, 1H), 7.60 (d, 1H, J = 2.1 Hz)
실시예 12. (Z)-3-(6- 알릴옥시 -7- 메톡시벤조푸란 -5-일)알릴 아세테이트 [(Z)-3-(6-allyloxy-7-methoxybenzofuran-5-yl)allyl acetate ] (화합물 12)의 제조
화합물 9 (0.05g, 0.192mmol)를 염화메틸렌(1.5mL)에 녹인 후, 트리에틸아민(0.11mL, 0.768mmol), 무수초산(0.036mL, 0.384mmol)을 차례로 가한다. 실온에서 3시간 동안 교반하고, 추출, 세척, 건조하여 컬럼 크로마토그래피(핵산 : 에틸아세테이트=10:1)를 행하여 0.05g(86%)의 화합물 12를 얻었다.
Rf : 0.27 (헥산 : 에틸아세테이트=10:1)
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 2.08 (s, 3H), 4.24 (s, 3H), 4.50 (dt, 2H, J = 5.7, 1.2 Hz), 4.81 (dd, 2H, J = 6.6, 1.8 Hz), 5.21 (dd, 1H, J = 10.5, 1.8 Hz), 5.35 (dd, 1H, J = 17.1, 1.8 Hz), 5.86 (dt, 1H, J = 11.7, 6.6 Hz), 6.09 (ddt, 1H, J = 17.1, 10.5, 5.7 Hz), 6.72 (d, 1H, J = 2.1 Hz), 6.86 (d, 1H, J = 11.7 Hz), 7.02 (s, 1H), 7.59 (d, 1H, J = 2.1 Hz)
실시예 13. (Z)-3-(6- 알릴옥시 -7- 메톡시벤조푸란 -5-일) 아크릴릭 (E)-N, N' - 디사이클로헥실카바미미딕 안하이드라이드 [(Z)-3-(6-( allyloxy -)7- methoxybenzofuran -5-yl)acrylic (E)-N, N' - dicyclohexylcarbamimidic anhydride ] (화합물 13)의 제조
화합물 8 (0.04g, 0.146mmol)을 염화메틸렌(1.5mL)에 녹인 후, 디클로로헥실카보다이이미드(0.09g, 0.438mmol)를 가한다. 실온에서 2시간 동안 교반하고 추출, 세척, 건조하여 컬럼 크로마토그래피 (핵산 : 에틸아세테이트=5:1)를 행하여 0.019g(27%)의 화합물을 무색 고체로 얻었다.
Rf : 0.24 (헥산 : 에틸아세테이트=5:1)
m.p. : 132 - 133o
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.22-1.46 (m, 5H), 1.65-1.83 (m, 5H), 1.95-1.99 (m, 1H), 2.18-2.29 (m, 1H), 3.66-3.76 (m, 1H), 3.99-4.07 (m, 1H) 4.19 (s, 3H), 4.61 (d, 2H, J=5.7 Hz), 5.29 (d, 1H, J = 10.5 Hz), 5.43 (d, 1H, J = 18.9 Hz), 6.08-6.19 (m, 1H), 6.20 (d, 1H, J = 12.3 Hz), 6.72 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.07 (s, 1H, J = 12.3 Hz), 7.35 (s, 1H), 7.61 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 8.04 (br s, 1H)
실험예 1: 벤조푸란 유도체들의 hKv1 . 5통로 전류에 미치는 영향
1) 선택적 이온통로 발현 세포주(cell line)의 제조
심장에 발현하는 K+통로 유전자를 각각 선택적으로 하나씩만 발현하는 세포주를, 논문(Yang, et al., Inhibition of cardiac potassium currents by the vesnarinone analog OPC-18790: comparison with quinidine and dofetilide. J Pharmacol Exp Ther 1997, 280:1170-1175; Kwak, et al ., Phosphorylation is required for alteration of Kv1.5 K+ channel function by the Kvbeta 1.3 subunit. J Biol Chem 1999, 274:25355-25361)에 기재된 방법을 사용하여 제작하였다.
즉, 덱사메타손(dexamethasone)에 의해 유도되는 마우스 유암 바이러스 프로 모터(murine mammary tumor virus promotor)를 갖고 있는 pMSVneo에 hKv1.5를 끼워 넣어 마우스 Ltk-세포(mouse Ltk-cell)에 리포펙타민(lipofectamine)으로 감염시킨 후, 24 시간 후 G418 0.5 ㎍/㎖을 함유한 DMEM 배지에 단일 콜로니(colony)를 형성할 때까지 2주간 세포를 배양하였다. 개개의 콜로니를 분리하여 G418 0.25 ㎍/㎖를 함유한 배지에 배양하여 노던(northern)블롯 및 홀-셀 전압고정(whole-cell voltage clamp) 방법으로 각 이온통로 발현수준을 검토하여 다음 실험에 사용하였다. 이렇게 선택된 세포주는 G418 0.25 ㎍/㎖를 함유한 배지에서 실험에 사용할 때까지 배양하였다. 안정 세포주(stable cell line)가 아닌 일시 유전자발현(transient transfection)용 세포들은 DMEM 배지에서 배양하였다.
2) 전류기록
사람 심방세포 및 세포주에서 전류는 막전압고정(gigaohm-seal patch clamp) 방법 중 홀-셀(whole cell) 방법으로 기록하는데(Kwak, et al ., Phosphorylation is required for alteration of Kv1.5 K+ channel function by the Kvbeta 1.3 subunit. J Biol Chem 1999, 274:25355-25361), 전기적인 신호를 패취 고정(patch clamp) 증폭기(Axon Instruments, Axopatch-1D, Foster, USA)로 증폭 후, 전류의 신호를 신호변환기(Digidata 1200, Axon Instruments)로 디지털신호로 변환하여 컴퓨터에 저장하였다. 그리고, 전류기록에 사용한 미세전극(Kimax-51, 1.5-1.8 x 100 mm)은 2-단계 미세전극 제조기(2-stage pipette puller: Narishige, PP-83)로 뽑아서 미세전극 말단을 열처리하여 사용하는데, 이때 저항이 1-2 MΩ정도되는 피펫을 사용하였다. 한편, 홀 셀 모드(whole cell mode)의 미세전극 내 용액은 100 mM KCl, 10mM HEPES, 5 mM K4BAPTA, 5 mM K2ATP 및 1 mM MgCl2 (pH 7.2)을 함유하고, 세포외용액은 130 mM NaCl, 4 mM KCl, 1.8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 10 mM HEPES 및 10 mM 글루코스(pH 7.35)를 함유하였다.
상기에서 제조한 세포주(Ltk-cell)에, 세포막 전압을 -80 ㎷로 고정하고 +50 ㎷로 250 ms 동안 탈분극 자극을 가한 후 -50 ㎷로 재분극하면서 전류를 기록하였다. 각 화합물의 용량-의존적 hKv1.5통로 전류 억제효과는 화합물이 존재하지 않을 때의 +50 mV로 탈분극 자극 말기에 측정된 안정전류에 대한 상대적 크기로 표시하여 비교하였다.
도 1a ~ 1d는 hKv1.5 통로 유전자가 발현된 Ltk-세포에서 막전압을 -80 mV로 고정후 +60 mV에서 -80 mV까지 10 mV 간격으로 +50 mV로 자극시 기록된 K+ 전류에 대한 벤조푸란 유도체들 (10 μM)의 hKv1.5 통로 차단효과를 상대적으로 비교한 그래프이다. 여러 유도체중 화합물 2, 5, 6, 7, 10, 12 및 13은 개방통로 차단작용을 보였으나, 나머지 유도체는 닫혀진 통로 차단 효과를 보였다. 더불어, 검색한 유도체중 화합물 13이 대조전류의 95 ± 8 %를 차단함으로써 가장 강력한 차단효과를 보여 화합물 13의 상세한 작용기전을 규명하였다.
도 1a는 hKv1.5 통로를 발현시킨 Ltk-세포에서 기록된 대조전류를 나타내고, 도 1b는 Ltk-세포에 발현시킨 hKv1.5 통로 전류에 대한 화합물 13의 효과를 나타낸 다.　 도 1c는 각 막전압에서 화합물 13의 통로억제 효과를 평균적으로 나타낸 도면이고, 도 1d는 탈분극 자극의 마지막에 기록된 안정전류에 대한 화합물 13 효과의 용량반응곡선을 나타낸 도면이다.
도 1a 내지 도 1d로부터, 화합물 13은 Ltk-세포에 발현시킨 hKv1.5 통로 전류를 농도-의존적으로 억제하는 것을 알 수 있으며, 열려진 이온통로를 우선적으로 차단한다는 사실을 알 수 있다.
50 mV로 탈분극시 화합물 13의 hKv1.5 통로 억제작용에 대한 IC50은 0.17 ± 0.2 μM (n=6)이었다.　 더불어 용량반응곡선을 힐 (Hill) 방정식으로 피팅 (fitting)시 화합물 13의 힐 (Hill) 상수값은 2.12 이었다.
상기 화합물들, 즉 화합물 1 ~ 13(10 μM)의 hKv1.5통로 전류 억제작용에 대한 효능을 비교한 결과는 표 2에 나타난 바와 같다.
시 료 차단율 (%)
화합물 1 20 ± 5
화합물 2 75 ± 8
화합물 3 55 ± 6
화합물 4 91 ± 9
화합물 5 71 ± 8
화합물 6 90 ± 5
화합물 7 66 ± 7
화합물 8 26 ± 5
화합물 9 37 ± 6
화합물 10 77 ± 9
화합물 11 51 ± 6
화합물 12 93 ± 9
화합물 13 95 ± 8
실험예 2. 화합물 13에 의한 hKv1 .5 통로의 활성화 및 비활성화
도 2a로부터 활성화 중간 전압은 대조군에서 -13.2 ± 3.0 mV (n=6), 화합물 13 1 μM 존재하에서 -21.2 ± 3.9 mV (n=6) 이었으며, 도 2b로부터 비활성화 중간 전압은 대조군에서 -24.2 ± 4.5 mV (n=6), 화합물 13 1 μM 존재하에서 -33.3 ± 4.6 mV (n=6)임을 알 수 있다.
실험예 3. 화합물 13에 의한 hKv1 .5 통로 전류억제의 막전압 의존성
이온 통로에 작용하는 많은 약물들의 막전압의존성 여부는 약물의 응용가치를 평가하는 데 중요하다.　 도 1a ~ 1d 및 도 2a ~ 2b에서 관찰한 억제효과를 전압-전류 관계곡선으로부터 각 막전압에서 약물이 존재하지 않을 때의 대조전류에 대한 화합물 13 (0.3 μM) 존재하에서의 전류의 상대적인 크기로 비교하여 도 3을 얻었다.　 도 3에 나타난 바와 같이, 화합물 13 는 -30 ㎷에서 0 ㎷사이에서는 강한 막전압 의존성을 보이고, 0 ㎷와 +60 ㎷사이에서는 막전압 의존성이 소실되었다.　 즉, hKv1.5 통로가 열리기 시작하는 막전압에서 약물이 작용이 나타나기 시작하여 최대로 열렸을 때, 그 억제효과가 최고에 달하였다.
실험예 4.　 화합물 13에 의한 hKv1 .5 통로차단 효과의 자극빈도수 의존성
도 4는 화합물 13 의 hKv1.5 통로차단 효과와 자극빈도수와의 관계를 나타낸 도면이다.　 도 4는 -80 mV로 막전압 고정 후 +50 mV로 1Hz, 2Hz 및 3Hz로 각각 20번씩 자극하였을 때 기록되는 안정전류를 처음 자극시의 전류의 크기로 표준화하여 비교하였다.　 대조군에 비해 화합물 13 (0.3 μM) 존재하에서 차단 정도가 증가되었고, 자극이 반복될수록 화합물 13 의 차단효과는 더욱 증가되었다.　 즉, 자극빈도수가 증가하였을 때 약물의 차단효과도 증대되었다.　 이는 화합물 13 이 심장박동수가 증가할수록 hKv1.5 통로에 더 잘 결합하여 억제효과가 증대됨을 시사하는 것이다.
실험예 5. 　　 실험용 쥐에 대한 경구 투여 급성 독성실험
6주령의 특정병원부재(SPF) SD계 실험용 흰쥐(rat)를 사용하여 급성독성실험을 실시하였다.　　군당 3 마리씩의 동물에 화합물 13을 각각 0.5% 메틸셀룰로즈 용액에 현탁하여 500 mg/kg을 단회 경구투여하였다.　　시험물질 투여 후 동물의 폐사여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상여부를 관찰하였다.　　시험결과, 시험물질을 투여한 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다.　　이상의 결과 실험된 화합물은 모두 랫트에서 500 mg/kg까지 독성변화를 나타내지 않으며 경구 투여 최소치사량(LD50)은 500 mg/kg이상인 안전한 물질로 판단되었다.
실험예 6. 　 실험용 쥐에 대한 비경구 투여 독성실험
상기 경구 투여 독성실험과 동일한 실험용 쥐를 사용하여, 본 발명의 실시예에 따라 제조된 화합물 13을 2 mg씩 근육주사 방법으로 투여하였다.　　실험용 흰쥐에 2주 간격으로 2번, 다른 한 마리의 실험쥐에는 2 주 간격으로 2회 투여 후, 1 개월의 간격을 둔 다음 다시 2 주 간격으로 3회 투여를 실시하였다.　　　　
처음 주사 후 6 개월간 질병 유무(clinical sign), 체중, 체온 등 외관(physical examination), 혈액세포의 이상(haematology), 배설물의 이상(urinalysis)을 관찰하였으나 모두 정상치의 값을 나타내었다.
제제화 예
상기에서 확인된 바와 같은 특성을 가지는 본 발명의 신규 벤조푸란 유도체는 부정맥 예방 및 치료용 조성물로 제제화할 수 있으며, 또한 건강보조식품으로 제조할 수 있다.
제조예 1: 정제
하기의 조성에 따라, 통상의 정제 제조방법으로 제제화하였다.
정제 조성물
화합물 13 500.0 ㎎
유당 500.0 ㎎
탈크 5.0 ㎎
마그네슘 스테아레이트 1.0 ㎎
제조예 2: 캡슐제
하기와 같은 방법에 따라, 다음과 같은 조성으로 캡슐제를 제조하였다. 화합물 13 을 체질하여 부형제와 혼합한 후, 젤라틴 캡슐중에 충전하여 캡슐을 제조하였다.
캡슐제 조성물
화합물 13 500.0 ㎎
전분 1500 10.0 ㎎
스테아르산마그네슘 100.0 ㎎
제조예 3: 산제
하기의 성분을 통상의 산제의 제조방법으로 혼합하고, 봉지에 넣어 밀봉한 후 산제를 제조하였다.
산제 조성물
화합물 13 500.0 ㎎
유당 100.0 ㎎
탈크 5.0 ㎎
제조예 4: 주사제
하기의 성분을 통상의 주사제의 제조방법으로 2.0 ㎖의 용량의 앰플에 충전하고, 멸균시켜 주사제를 제조하였다.
주사제 조성물
화합물 13 50.0 ㎎
산화방지제 1.0 ㎎
트윈 80 1.0 ㎎
주사용 증류수 to 2.0 ㎖
제조예 5 : 　 건강보조 음료의 제조
하기의 성분으로 통상의 음료 제조방법으로 혼합하여 전량을 100 ㎖로 만들어 음료용 조성물을 제조하였다.
건강보조음료 조성물
화합물 13 500.0 ㎎
비타민 C 적량
구연산 적량
구연산 나트륨 적량
올리고당 적량
나트륨 벤조에이트 적량
증류수 to 100.0 ㎖
상술한 바와 같이, 본 발명에 따른 벤조푸란 유도체들은 사람 심방에서 발현하는 K+통로를 선택적으로 차단하여 심장박동수가 빨라졌을 때 그 효과가 증대되고 낮은 박동수에서는 그 효과가 거의 없어 부정맥의 예방 및 치료제로서 우수한 효과를 갖는다.

Claims (1)

  1. 다음 화학식 1로 표시되는 것을 특징으로 하는 벤조푸란 유도체를 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 부정맥 예방용 식품;
    [화학식 1]
    Figure 112007032903121-pat00031
    상기 화학식 1 에 있어서, R1은 메톡시기이고, R2는 메톡시기 또는 탄소수 2의 알릴옥시기이며, R3는 히드록시프로페닐, 히드록시프로필, 메톡시프로페닐, 탄소수 5의 알릴옥시프로페닐, 아세톡시프로페닐, 탄소수 6의 알릴아크릴레이트, 아크릴산 및 아크릴릭-(E)-N,N' -디사이클로헥실카바미미딕 안하이드라이드 중에서 선택된 것이다.
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