KR100742712B1

KR100742712B1 - 인삼과 화기삼 간의 종간 다형성을 나타내는마이크로새틀라이트 마커, 및 이를 증폭하기 위한 프라이머

Info

Publication number: KR100742712B1
Application number: KR1020070044317A
Authority: KR
Inventors: 정기화; 조범호; 김준기
Original assignee: 공주대학교 산학협력단
Priority date: 2007-05-07
Filing date: 2007-05-07
Publication date: 2007-07-25

Abstract

본 발명은 인삼(Panax ginseng)과 화기삼(Panax quinquefolius)에서 종간 다형성(interspecific polymorphism)을 나타내는 14종의 새로운 마이크로새틀라이트 마커(microsatellite markers), 및 이를 증폭하기 위한 프라이머(primers)에 관한 것으로서, 인삼과 화기삼 간의 식별을 가능하게 하여 외래종에 비해 약리효과가 월등히 우수한 토종 인삼에 대한 유전자원을 보존하고 정확한 변별력을 확보함으로써 정확한 품질관리 및 신뢰성 있는 원재료의 공급으로 관련 농가 및 생물소재산업을 활성화하는데 널리 활용될 수 있을 뿐만 아니라, 인삼의 염색체 지도 작성 및 새로운 유용 유전자의 동정은 물론, 유전 육종이나 질병 및 분자생물학적 연구에 유용하게 사용될 수 있다.

인삼, Panax ginseng, 화기삼, Panax quinquefolius, 마이크로새틀라이트 마커, 근연종 동정, 종간 다형성

Description

인삼과 화기삼 간의 종간 다형성을 나타내는 마이크로새틀라이트 마커, 및 이를 증폭하기 위한 프라이머{Interspecific polymorphic microsatellite markers in Panax ginseng and Panax quinquefolius, and primers for amplification thereof}

도 1은 인삼과 화기삼 간에서 다형성을 나타내는 마이크로새틀라이트 마커의 5% 변성 폴리아크릴아마이드 젤 전기영동 사진이고(A: PQ49, B: PG307, C: PG465, D: PG525, E: PG557, F: PG578, G: PG1129, H: PG628, I: PQ656, J: PG785, K: PQ1058, L: PG1306, M: PG1335, N: PG1886);

도 2a 내지 2d는 각 마이크로새틀라이트 마커의 염기서열을 나타낸 도면이다.

본 발명은 인삼(Panax ginseng)과 화기삼(Panax quinquefolius) 간의 종간 구분이 가능한 신규 마이크로새틀라이트 마커(microsatellite markers)에 관한 것으로서, 보다 상세하게는, 인삼과 화기삼 간에서 다형성(polymorphism)을 나타내는 14종의 마이크로새틀라이트 마커, 및 이를 증폭하기 위한 프라이머(primers)에 관 한 것이다.

단순 서열 반복체(SSRs; simple sequence repeats)로도 불리는 마이크로새틀라이트 마커에 대한 연구는 1980년대 인간 게놈 연구에서부터 비롯되었다. 인간의 게놈에는 10만개 이상의 마이크로새틀라이트가 존재하는 것으로 알려져 있으며, 높은 다형성을 나타내므로 혈액형, 동위효소(isozyme) 및 단백질 다형에 비해 비교할 수 없을 만큼 높은 식별력과 정보력(informativity)을 갖는다. 따라서 마이크로새틀라이트 마커들은 개인 식별이나 친자 확인 등 법의학적 활용은 물론, 염색체 지도 작성 및 질병 관련 유전자들의 탐색에 매우 유용하게 활용되고 있다. 그 후, 마우스의 질병 관련 유전자의 지도 작성 등 다른 동물의 연구에 활용되기 시작하였으며, 현재 소, 돼지, 닭, 양, 사슴, 개, 고양이 등과 같은 주요 가축들에 대한 상당한 마이크로새틀라이트 마커들이 개발되어 있다.

최근에는 마이크로새틀라이트 마커가 식물의 유전 육종이나 질병 및 분자생물학적 연구에 매우 유용한 것으로 확인되었다. 일부 국가에서는 자국의 주요 농작물에 대한 마이크로새틀라이트 연구가 상당히 진행되어 있는 바, 예를 들면, 미국에서는 옥수수, 독일에서는 보리나 감자, 이탈리아에는 포도에 대한 연구가 이루어져 이에 대한 데이터베이스가 구축되어 있다. 최근 2~3 년간 식물에서 마이크로새틀라이트를 염색체 지도 작성과 새로운 유용 유전자 동정, 및 유전 육종에 활용하는 연구가 매우 활발히 진행되고 있으며, 세계적인 식량자원으로 중요한 벼와 옥수수 등에 대한 연구가 특히 활발히 수행되고 있다.

한편, 국내에서 생산되는 인삼은 미국의 화기삼 등에 비해 약리효과가 월등 히 뛰어난 것으로 알려져 있다. 약재시장에서는 국내 인삼을 가장한 유사 상품이 상당히 유통되고 있는 것으로 추정되므로, 이들에 대한 정확한 품종 구분은 매우 중요한 일이다. 지금까지는 생화학적 성분의 차이나, rRNA 유전자 서열 및 RAPD(random amplified polymorphic DNA) 등의 유전적 마커를 이용하여 구분하고자 시도하였으나, 이들은 종간 또는 종내 구분에 한계를 나타내었다. 문헌 [Hon et al (2003), Genetic authentication of ginseng and other traditional Chinese medicine, Acta. Pharmacol. Sin, 24, 841-846]에서는, 인삼을 비롯한 홍콩에서 거래되는 약재에 RAPD, RFLP(restriction fragment length polymorphism), AFLP(amplified fragment length polymorphism) 및 마이크로새틀라이트의 유전적 마커를 이용한 동정을 시도한 바, 마이크로새틀라이트로 고려인삼과 화기삼을 구분할 수 있음을 시사하고 있다. 이는 게놈의 도처에 산재하는 마이크로새틀라이트 마커가 유전 육종을 위한 교배실험이나 염색체 지도 작성뿐만 아니라, 인삼과 같은 약용 작물을 근연종으로부터 엄격히 구분할 수 있는 마커로 사용될 수 있음을 의미하는 것이다. 이에 비해, 지금까지 국내에서는 인삼의 마이크로새틀라이트에 대한 연구개발은 전무한 실정으로, 향후 토종 작물에 대한 유전자원을 보존하고 외래종과의 정확한 변별력을 확보하여 관련 농가 및 생물소재산업을 활성화하기 위하여 이에 대한 연구개발이 절실히 요청된다 할 것이다.

이에, 본 발명자들은 인삼과 근연종 간의 동정을 가능하게 하는 새로운 마이크로새틀라이트 마커를 개발해내기 위하여 지속적인 연구를 수행한 결과, 인삼의 동종 및 근연종 간의 식별에 적합한 13종의 마이크로새틀라이트 마커를 밝혀내고, 이를 2007. 2. 28자 출원번호 제10-2007-0020509호로 출원한 바 있다.

본 발명자들은 상기 출원번호 제10-2007-0020509호에 이어서 인삼과 화기삼간의 식별에 적합한 새로운 14종의 마이크로새틀라이트 마커를 밝혀내고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

따라서 본 발명의 목적은 인삼과 근연종인 화기삼 간의 동정을 위한 마이크로새틀라이트 마커를 제공하기 위한 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 마이크로새틀라이트 마커를 증폭하기 위한 프라이머를 제공하기 위한 것이다.

본 발명의 제1면은 서열번호 1 내지 31 중 어느 하나의 염기서열로 이루어지는 인삼(P. ginseng) 또는 화기삼(P. quinquefolius)의 마이크로새틀라이트 마커에 관한 것이다.

본 발명의 제2면은 서열번호 32 내지 59 중 어느 하나의 염기서열로 이루어지는 인삼 또는 화기삼의 마이크로새틀라이트 마커를 증폭하기 위한 프라이머에 관한 것이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 명세서에서, '인삼'은, 특별한 언급이 없는 한, 고려인삼(Panax ginseng)을 가리키는 것이다.

본 발명은 인삼과 화기삼 간의 유전적 변이를 확인할 수 있는 마이크로새틀라이트 마커의 개발에 관한 것이다. 본 발명에서는, 마이크로새틀라이트 마커를 개발하기 위하여, 인삼 시료를 수집하고 게놈 DNA를 추출하여, 인삼의 마이크로새틀라이트-농축 라이브러리(microsatellite-enriched library)를 제작하였다. 인삼으로부터 많은 좌위의 마이크로새틀라이트를 분리하기 위해서는 마이크로새틀라이트-농축 게놈 라이브러리를 제작하는 것이 필수적이다. 마이크로새틀라이트 프로브(probes)로는 다른 식물체에서 흔히 나타나는 2~4 bp 반복 서열 12 종류를 선택하여 사용하였다(하기 표 1 참조).

제작된 인삼의 라이브러리로부터 스크리닝을 수행하여 최소 2×10⁵ cfu 이상의 양성 클론을 분리하였다. 라이브러리 스크리닝으로부터 얻어진 각 양성 클론으로부터 플라스미드를 추출한 후 삽입 단편의 직접적인 염기서열 분석을 통해 특정 마이크로새틀라이트 서열이 포함된 클론만을 분리하였다(하기 표 2 참조). 마이크로새틀라이트 서열을 포함하는 단편을 기초로, 각각 5'과 3'-말단에서 각 마이크로새틀라이트에 특이적인 프라이머를 설계하였다. 이때 프라이머의 길이는 20~25 bp, T_m은 58 ℃ 이상, 특히 58~65 ℃, PCR 단편의 길이는 80~200 bp 범위 내에 있도록 조정하였다(하기 표 3 참조). 이어서, 게놈 DNA를 주형으로 하여 각 마이크로새틀라이트의 증폭을 위한 최적의 PCR 조건을 확립하였다: 95 ℃ 5 분 예비가열 후, 94 ℃ 30 초, 58~65 ℃ 30 초, 72 ℃ 1 분의 35 주기를 실시하고, 72 ℃에서 7 분간 최종 연장 반응시킴. 각 마커의 다형성 상태를 결정하기 위하여 PCR 산물을 5% 변성 폴리아크릴아마이드 젤 전기영동한 후 은 염색 방법에 의해 가시화하였다(도 1 참조). 마이크로새틀라이트 유전자형을 자동 서열분석기 프로그램으로 분석하여 대립형질의 종류 및 유전자형을 분석하고, 인삼과 화기삼을 식별할 수 있는 유전적 마커를 선별하였다(하기 표 4 및 도 2a 내지 2d 참조).

이하, 본 발명을 실시예에 의해 보다 구체적으로 설명하나, 이는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위를 어떤 식으로든 제한하고자 하는 것은 아니다.

실시예 1: 인삼 시료의 준비 및 게놈 DNA 추출

배양된 인삼의 시료를 한국의 금산, 서울, 공주, 대구 및 대전의 몇몇 시장에서 구입하였다. 화기삼 시료는 한국의 KT&G 중앙연구소로부터 수득하였다. 인삼 시료를 액체질소로 급속냉동한 후 멸균된 분쇄도구를 이용하여 완전히 가루가 될 때까지 분쇄하였다. DNA 분리용 키트(DNeasy plant isolation kit, 퀴아젠(QIAGEN), USA)를 제조자의 지시에 따라 사용하여 DNA를 분리하였다.

실시예 2: 마이크로새틀라이트-농축 라이브러리의 제작

인삼 마이크로새틀라이트-농축 라이브러리를 문헌 [Hamilton et al (1999) Universal linker and ligation procedures for construction of genomic DNA libraries enriched for microsatellites, Biotechniques 27, 500-502, 504-507] 및 [Fischer and Bachman (1998) Microsatellite enrichment in organisms with large genomes (Allium cepa L.) Biotechniques 24, 796-800, 802]로부터 변형된 방법을 이용하여 제조하였다.

실시예 1에서 얻은 인삼의 게놈 DNA를 Sau3A1 제한효소를 이용하여 분해하고 Sau3A1 특이적 어댑터로 결찰하였다. 어댑터는 두 올리고뉴클레오타이드 A 및 B를 어닐링하여 제조하였다(올리고-A: 5'-GGCCAGAGACCCCAAGCTTCG-3'(서열번호 60); 올리고-B: 5'-GATCCGAAGCTTGGGGTCTCTGGCC-3'(서열번호 61)). 어댑터-결찰된 DNA 단편을 아가로스 젤 용출에 의해 크기-분획화(0.2~1.0 kb)한 후, 표 1에 나타낸 바와 같은 각각 특이적인 반복 서열을 갖는 12종의 5'-바이오티닐화된 올리고뉴클레오타이드와 혼성화하였다.

마이크로새틀라이트-농축 라이브러리 제작을 위한 5'-바이오티닐화 올리고뉴클레오타이드

반복 단위	올리고머 서열(5'-바이오틴→3')
디-nt 반복	(AT)₁₅,(AC)₁₅,(AG)₁₅
트리-nt 반복	(ACC)₁₀,(TAA)₁₀,(CAA)₁₀,(GAA)₁₀,(ACG)₁₀
테트라-nt 반복	(AAAG)₇,(AGAT)₇,(AAAT)₇,(ACAT)₇

혼성화 후, 혼합물을 스트렙타비딘으로 코팅된 마그네틱 비드(프로메가(Promega) Z5200, USA)와 33 ℃에서 2 시간 동안 온화하게 진탕하면서 인큐베이션하였다. 비드를 아래 순서로 세척하였다: 실온에서 낮은 엄격도(stringency) 완충액(6×SSC, 0.1% SDS)으로 2회, 40 ℃에서 높은 엄격도 완충액(1×SSC, 0.1% SDS)으로 2회 및 50 ℃에서 동일한 완충액으로 2회 반복. 그 후, 95 ℃에서 2 분간 가열하여 마그네틱 비드로부터 마이크로새틀라이트 모티프를 갖는 DNA 단편을 용출하였다(10 mM Tris, pH 7.5). 용출된 DNA 단편을 pGEM-T 이지 벡터(프로메가, USA)로 클로닝하여, E. 콜라이(E. coli) DH10B(집코 BRL(Gibco BRL), USA)의 형질전환에 사용하였다.

실시예 3: 라이브러리 스크리닝

실시예 2에서 얻은 형질전환체를 LB 브로쓰, 1.5% 아가, 앰피실린(50 ㎎/㎖), X-gal(20 ㎎/㎖) 및 IPTG(isopropylthio-β-D-galactoside)(200 ㎎/㎖)를 함유하는 150 ㎜ 플레이트 상에 도말하였다. 플라스미드 DNA를 플라스미드 미니-프렙 키트(솔젠트(SolGent), 한국)를 이용하여 백색 콜로니의 각 배양액으로부터 분리하였다. 각 플라스미드 DNA를 EcoRⅠ으로 분해하고 1.5% 아가로스 젤에서 가시화하여 삽입체 DNA의 크기를 결정하였다. 각 삽입체를 T7 및 SP6 유니버설 프라이머를 이용하는 ABI 3100 자동 서열분석기(어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems), USA)를 이용하여 서열분석하였다. 인삼 마이크로새틀라이트-농축 게놈 라이브러리의 스크리닝 과정을 요약하여 나타내면 표 2와 같다.

인삼 마이크로새틀라이트-농축 게놈 라이브러리 스크리닝의 요약

스크리닝 단계	시료 수	비고
라이브러리 제작	2×10⁵ cfu	독립적 콜로니
백색 콜로니로부터의 플라스미드 정제	2,119	무작위 선별
삽입체 분리(EcoRⅠ 분해)	1,944	삽입체 검출율: 91.7%
플라스미드 서열분석	1,944
마이크로새틀라이트 모티프의 동정	642	마이크로새틀라이트 포함 비율: 33.0%
비-중복 마이크로새틀라이트 모티프	251
유전자형 분석	94

실시예 4: 마이크로새틀라이트 -특이적 프라이머 설계 및 PCR 증폭

반복 모티프의 연결(flanking) 서열을 특이적 프라이머를 설계하는데 사용하였다. 마이크로새틀라이트 특이적 프라이머 쌍을 아래 기준에 따라 설계하였다: 길이 20~25 bp, 용융점 58 ℃ 이상, PCR 산물길이 80~200 bp. PCR을 0.5 유닛 Taq DNA 중합효소, 2.5 mM dNTP, 1.5 mM MgCl₂, 20 ng 게놈 DNA, 10 pmol 프라이머 및 1× 공급 완충액(pH 9.0)을 함유하는 20 ㎕의 반응 혼합물에서 써멀 사이클러(퍼킨-엘머(Perkin-Elmer) 9700, USA)를 이용하여 실시하였다. PCR 반응 조건으로는 95 ℃ 5 분 예비가열 후, 94 ℃ 30 초, 58~65 ℃ 30 초, 72 ℃ 1 분의 35 주기를 실시하고, 72 ℃에서 7 분간 최종 연장 반응시켰다. PCR 반응이 완료된 후, 1.2% 아가로스 젤에서 전기영동하여 증폭상태를 확인하였다.

실시예 5: 마이크로새틀라이트의 유전자형 분석

100종의 인삼 시료를 각 마커의 다형성 상태를 결정하기 위하여 유전자형 분석하였다. PCR 산물을 동일 부피의 2× STR 로딩 완충액(프로메가, USA)과 혼합하였다. 이들 혼합물을 95 ℃에서 2 분간 가열한 직후, 얼음에 담가 신속하게 냉각시켰다. 전기영동을 1× TBE 완충액 중 7 M 우레아를 함유하는 5% 변성 폴리아크릴아마이드(아크릴아마이드:비스아크릴=19:1) 젤(T: 0.4 ㎜×L: 40 ㎝)을 이용하여 1600 V의 일정한 전압에서 2~4 시간 동안 수행하였다. DNA 밴드를 DNA 은 염색 키트(프로메가, USA)를 이용하여 은 염색 방법에 의해 가시화하였다. 즉, 전기영동 완료 후, 젤을 10% 에탄올에 20 분간 고정시키고 1% HNO₃ 용액에 10 분간 담근 후, 염색 용액(질산은 1 g, 37% 포름아마이드 1.5 ㎖/ℓ)에 30 분간 부드럽게 흔들어 주면서 둔 후 증류수로 가볍게 헹구어 주었다. 그 후 현상 용액(탄산나트륨 30 g, 37% 포름알데히드 900 ㎕, 1% 티오황산나트륨 500 ㎕/ℓ)을 처리하여 밴드가 나타날 때까지 둔 후, 10% 아세트산으로 반응을 중단시켰다.

인삼 시료의 유전자형 분석 결과, 14종의 마커 PQ49(서열번호 1), PG307(PG307a: 서열번호 2, PQ307: 서열번호 3, PQ307a: 서열번호 4), PG465(PG465a: 서열번호 5, PQ465: 서열번호 6), PG525(PG525a: 서열번호 7, PQ525: 서열번호 8), PG557(PG557a: 서열번호 9, PQ557: 서열번호 10, PQ557a: 서열번호 11), PG578(PG578: 서열번호 12, PQ578: 서열번호 13), PG628(PG628: 서열번호 14, PQ628: 서열번호 15), PQ656(서열번호 16), PG785(PG785: 서열번호 17, PG785a: 서열번호 18, PQ785: 서열번호 19), PQ1058(서열번호 20), PG1129(PG1129a: 서열번호 21, PQ1129: 서열번호 22, PQ1129a: 서열번호 23, PQ1129b: 서열번호 24), PG1306(PG1306a: 서열번호 25, PQ1306: 서열번호 26), PG1335(PG1335: 서열번호 27, PQ1335: 서열번호 28, PQ1335a: 서열번호 29) 및 PG1886(PG1886: 서열번호 30, PQ1886: 서열번호 31)이 인삼과 화기삼 간에 유전적 변이를 나타내었다. 이들 다형성 마커의 프라이머 서열, 어닐링 온도, PCR 산물 크기를 표 3에 나타내었다.

각 마이크로새틀라이트 마커의 증폭에 사용된 프라이머 서열, 어닐링 온도 및 PCR 산물 크기

위치	프라이머 서열(5' → 3')		Tm(℃)	크기(bp)
PQ49	F R	TATGGAAGACCACACCTGCA (서열번호 32) GAGCCCCTTACTGCTAGTTTAC (서열번호 33)	62	92
PG307	F R	CATTACATACTACTCTCCCAC (서열번호 34) TATCTATACATTAATCTCCAAC (서열번호 35)	55	120-130
PG465	F R	CATTTAAATACAAACCCCCTTCTTC (서열번호 36) CAGAGCTATATTACATTACACCCAA (서열번호 37)	60	99-116
PG525	F R	GCAACATACAACAGCAACAACC (서열번호 38) CCTGTACATCATATGACCAAGGG (서열번호 39)	60	95-111
PG557	F R	CCAGCCAAATGAGGTGTACTTTG (서열번호 40) GAGGAGAAAGAAGAAAGATACTCCG (서열번호 41)	60	154-166
PG578	F R	GCAACTCCAGGCATAGAAAAATAC (서열번호 42) GCTGAAGTGCCGTTGGTGTG (서열번호 43)	60	180-182
PG628	F R	CAGAATTACTGTGGAGGAGGAG (서열번호 44) GGCTGTGGCTTGTGCTTTTGCT (서열번호 45)	62	113-125
PQ656	F R	ATGAGAAGAGTGAGTAGATGATTA (서열번호 46) TGATGTTATTGATGATATGAGAGA (서열번호 47)	56	164
PG785	F R	GTGATAACATTCAATAAGAAAGTG (서열번호 48) GACTGTACATAGATACGTTCCATC (서열번호 49)	58	89-101
PQ1058	F R	CATTTTAACTCGTTGCAGGCGCATC (서열번호 50) GTGGGACTGAGATTTTAAACACACA (서열번호 51)	60	119
PG1129	F R	GTTGGATGAACCTGAGCAAAG (서열번호 52) CCTAGTTGGCTTGTCCCGTTC (서열번호 53)	60	88-111
PG1306	F R	GTAAGGAAGAAGCTCCTTAACAG (서열번호 54) GATAAGGAATAGAGTTAATTGGGG (서열번호 55)	60	138-153
PG1335	F R	AGAGACAAAGTGAAGCACCAACGG (서열번호 56) CGTGATTGCCTGAATGCACGTATT (서열번호 57)	58	174-178
PG1886	F R	CCAATCAACTCAGTATGTGTCAT (서열번호 58) GAATTAACATTGCTCTTATATCCC (서열번호 59)	60	168-180

실시예 6: 대립형질 구조의 결정

정확한 대립형질 크기 및 반복 구조를 은 염색된 젤로부터 각각 용출된 DNA를 서열분석하여 결정하였다. 대립형질 명칭은 기본적으로 반복체의 수에 의해 정해졌다. 각 마커의 대립형질의 명칭과 반복 구조를 표 4에 나타내었다.

도 1에 인삼과 화기삼간에서 다형성을 나타내는 마이크로새틀라이트 마커의 5% 변성 폴리아크릴아마이드 젤 전기영동 사진을 나타내었다(A: PQ49, B: PG307, C: PG465, D: PG525, E: PG557, F: PG578, G: PG1129, H: PG628, I: PQ656, J: PG785, K: PQ1058, L: PG1306, M: PG1335, N: PG1886). 각 도면의 좌측에 나타낸 숫자는 마이크로새틀라이트 마커의 반복 구조에 따른 대립형질 명칭을 나타낸다. 레인 1~5는 각각의 독립적인 인삼에서 나타나는 각 마커의 양상을 보여주며, 레인 6은 화기삼에서 나타나는 마커의 양상이다. 또한, 도 2a 내지 2d에 각 마이크로새틀라이트 마커의 염기서열을 나타내었다(적색: 프라이머 부분).

본 발명은 인삼과 근연종인 미국 화기삼간의 식별을 가능하게 하는 마이크로새틀라이트 마커를 제공하여, 외래종에 비해 약리효과가 월등히 뛰어난 토종 인삼에 대한 유전자원을 보존하고 정확한 변별력을 확보함으로써 정확한 품질관리 및 신뢰성 있는 원재료의 공급으로 관련 농가 및 생물소재산업을 활성화하는데 널리 활용될 수 있다. 또한, 인삼의 염색체 지도 작성 및 새로운 유용 유전자의 동정은 물론, 유전 육종이나 질병 및 분자생물화학적 연구에 유용하게 사용될 수 있다.

서열목록 전자파일 첨부

Claims

서열번호 1 내지 31 중 어느 하나의 염기서열로 이루어지는 인삼(Panax ginseng) 또는 화기삼(Panax quinquefolius)의 마이크로새틀라이트 마커(microsatellite marker).
서열번호 32 내지 59 중 어느 하나의 염기서열로 이루어지는 인삼 또는 화기삼의 마이크로새틀라이트 마커를 증폭하기 위한 프라이머(primer).