KR100713857B1

KR100713857B1 - 여로 추출물과 이로부터 분리된 베라트라민을 유효성분으로하는 농업용 살균제 조성물

Info

Publication number: KR100713857B1
Application number: KR1020050117663A
Authority: KR
Inventors: 김성욱; 이윤미; 박기덕; 강태훈; 김성은; 노문철; 문제선
Original assignee: 한국생명공학연구원
Priority date: 2005-12-05
Filing date: 2005-12-05
Publication date: 2007-05-10

Abstract

본 발명은 여로 추출물과 이로부터 분리된 베라트라민을 유효성분으로 하는 농업용 살균제 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 여로(Veratrum japonicum) 추출물과 이로부터 분리된 베라트라민(veratramine)이 식물 병원균에 대해 강한 항진균 활성을 나타냄을 밝힘으로써 여로 추출물과 이로부터 분리된 베라트라민을 유효성분으로 함유하는 환경친화적인 살균제 조성물에 관한 것이다.

여로(Veratrum japonicum), 베라트라민(veratramine), 식물 병원균, 살균제

Description

여로 추출물과 이로부터 분리된 베라트라민을 유효성분으로 하는 농업용 살균제 조성물{Fungicides compositions comprising the extract of Veratrum japonicum and veratramine isolated from them}

본 발명은 여로 추출물과 이로부터 분리된 베라트라민을 유효성분으로 하는 살균제 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 여로(Veratrum japonicum) 추출물과 이로부터 분리된 베라트라민(veratramine)이 식물 병원균에 대해 강한 항진균 활성을 나타냄을 밝힘으로써 여로 추출물과 이로부터 분리된 베라트라민을 유효성분으로 함유하는 환경친화적인 살균제 조성물에 관한 것이다.

식물 병원성 진균류를 대상으로 한 농업용 살균제의 개발 연구는 과거 수십 년 동안 유기합성 살균제들에 의존해 왔다[Tripathi, et al., Postharvest Biol. Tec., 32, 235-245, 2004; Dixit, S. N., et al., J. Stored Prod. Res., 31, 165-172, 1995]. 그러나, 이들은 우수한 방제 효과에도 불구하고 인축과 생태계에 미칠 수 있는 잠재적인 위험 때문에 그 사용이 제한되고 있다[Ragsdale, N. N., et al., Annu. Rev. Phytopathol., 32, 545-557, 1994; Wilson, C. L., et al., Annu. Rev. Phytopathol , 27, 425-441, 1989]. 뿐만 아니라 기존 살균제의 반복된 과다 사용으로 인한 식물병원균의 저항성 증가는 안정적이면서 친환경적인 살균제 개발에 대한 연구의 필요성을 요구하고 있다[Reimann, S., et al., Arch. Phytopathol. Plant Prot., 33, 329-349, 2000]. 특히, 식물체는 유기합성 살균제들에 비해 부작용이 낮아 식물체 추출물 및 식물체 유래의 물질들을 직접적으로 이용하여 환경친화적인 생물학적 살균제로 개발 가능성이 높기 때문에 폭넓은 연구가 진행되고 있다.

본 발명자들은 환경친화적인 농업용 살균제를 개발하기 위하여 천연자원으로부터 식물 병원성 진균류에 대해 생육 억제 활성을 나타내는 화합물을 탐색하는 과정에서 여로(Veratrum japonicum)를 선별하였다. 여로는 백합과에 속하는 다년생 초본식물로 우리나라 산지에 주로 분포하며 특히 고산지대의 물기 있는 풀밭에서 무리지어 자란다. 유독 식물로 알려져 있지만, 뿌리와 뿌리줄기는 민간이나 한방에서 간질병, 학질, 황달, 이질 등의 약재로 사용하고 있으며, 최토와 살충 작용을 하는 것으로 알려져 있다[이영노, 원색 한국 식물도감, 교학사, p.897, 2002]. 또한, 여로의 주성분인 알칼로이드 화합물들은 혈압을 낮춰주고 간에 쌓인 독을 풀어주는 작용을 한다는 보고가 있으며[Atta-ur-Rahman, et al., Nat. Prod. Rep., 14, 191-203, 1997], 특히 베라트라민 성분은 최근 들어 피부 미백[대한민국 특허등록 제45736호]과 비듬 방지 및 제거 기능[대한민국 특허출원 제1990-0010861호]이 밝혀지면서 이에 대한 연구도 활발히 진행되고 있다. 그러나, 현재까지 보고된 바에 따르면 여로를 대상으로 식물 병원성 진균류에 대한 항진균제로서의 이용 및 개발에 대한 연구는 발표된 바가 없다.

이에, 본 발명자들은 여로의 추출물 및 그 유래의 화합물인 베라트라민의 항진균 활성을 실험실 수준에서 조사하였을 뿐만 아니라 벼 도열병, 벼 잎집얼룩병, 토마토 역병에 대한 항진균 활성을 온실에서 재배한 식물체를 이용하여 조사한 후 식물 병원성 진균류 살균제로서 여로의 이용 가능성을 검증하고자 연구한 결과, 상기 식물 병원성 진균류에 대한 항진균 효과가 탁월함을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명은 환경친화적인 새로운 농업용 살균제를 개발하기 위하여 식물체 상에서 병반을 유발하는 식물 병원성 진균류에 대한 항진균 활성을 나타내는 여로의 뿌리 또는 뿌리줄기 추출물 및 그 유래의 화합물인 베라트라민을 포함하는 농업용 살균제 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.

본 발명은 여로 추출물을 유효성분으로 포함하는 식물 병원성 진균류에 대한 살균제 조성물을 그 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 추출물로부터 분리된 화합물인 베라트라민을 포함하는 농업용 살균제 조성물을 또 다른 특징으로 한다.

본 발명에 따르는 농업용 살균제 조성물의 유효성분으로 함유되는 베라트라 민은 다음 화학식 1로 표시된다.

이와 같은 본 발명을 더욱 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명은 여로(Veratrum japonicum) 추출물과 이로부터 분리된 베라트라민(veratramine)이 식물 병원균에 대해 강한 항진균 활성을 나타냄을 밝힘으로써 여로 추출물과 이로부터 분리된 베라트라민을 유효성분으로 함유하는 환경친화적인 농업용 살균제 조성물에 관한 것으로서, 여로 추출물이 식물 병원성 진균류에 대해 항진균 활성이 있음을 식물체 상에서 최초로 밝혀낸 발명이고, 이러한 특정 조성의 추출물을 효과적인 환경친화적인 농업용 살균제로 상품화할 수 있는 실질적인 기틀을 마련한 것이다.

본 발명에서는 여로 추출물과 그 유래의 베라트라민(veratramine)의 살균력을 조사하기 위하여 온실에서 재배 중인 여러 종류의 식물체에 각종 병반을 유발하는 검은 무늬병(Alternaria kikuchiana), 잿빛 곰팡이병(Botrytis cinerea), 탄저병(Colletotrichum lagenarium), 시들음병(Fusarium oxysporum), 벼 도열병(Magnaporthe grisea), 뿌리 썩음병(Pythium ultimum), 토마토 역병(Phytophthora infestans) 및 벼 잎집얼룩병(Rhizoctonia solani)균들을 이용하였으며, 이중에서 토마토 역병(Phytophthora infestans)균과 벼 잎집얼룩병(Rhizoctonia solani)균에대해서는 실험실 내에서 강한 항진균 활성을 나타내었으며, 특히 토마토 역병(Phytophthora infestans)균은 식물체를 대상으로 한 실험에서도 강한 항진균 활성을 나타내어 이를 대상으로 한 농업용 살균제 조성물로 제공되어질 수 있다.

본 발명에서 여로 추출물을 제조하기 위해서는 여로의 뿌리 또는 뿌리줄기 부위를 증류수 중탕 또는 유기용매로 추출하는 방법이 적용될 수 있으며, 상기 유기용매로는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올을 포함하는 지방족 알콜 또는 알콜 수용액, 클로로포름, 에틸아세테이트 등이 사용될 수 있다.

또한, 여로로부터 상기 화학식 1로 표시되는 활성 화합물의 분리 정제방법은 다음과 같은 실험단계로 구성된다;

1) 여로(Veratrum japonicum)의 뿌리와 뿌리줄기 부위를 지방족 알콜 또는 알콜 수용액, 클로로포름 및 에틸아세테이트 중에서 선택된 용매로 추출하여 유기층을 분리하는 단계;

2) 상기 유기층을 칼럼 크로마토그래피(실리카 또는 C18 또는 Sephadex LH-20)에 흡착시킨 후 용출시켜 활성 분획을 분리하는 단계; 및

3) 상기 활성 분획을 고속액체크로마토그래피(HPLC)를 이용하여 정제하는 단계.

상기 실험과정을 상세히 설명하면 다음과 같다.

여로의 뿌리 또는 뿌리줄기 부위를 지방족 알콜 또는 알콜 수용액, 클로로포름 및 에틸아세테이트 중에서 선택된 용매를 이용하여 추출한 후 여과하여 액상의 추출액을 얻는다. 이 추출액을 감압 농축한 다음 증류수로 용해하여 헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 분획한 후 식물 병원성 진균류에 대한 항진균 활성을 확인하여 활성이 강한 클로로포름 층을 분리한다. 클로로포름 층의 활성 분획은 여러 단계의 컬럼 크로마토그래피(실리카켈, C₁₈, Sephadex LH-20)를 단계별로 실시하여 분리하였고, 최종단계에서 항진균 활성이 높은 화합물을 고속 액체크로마토그래피(HPLC)로 정제하여 얻는다.

이렇게 얻은 화합물은 ¹H-NMR, ¹³C-NMR 및 ESI-MS 등의 분석기기를 이용하여 구조 분석한 결과, 최종적으로 무정형의 하얀색 화합물로서 분자식이 C₂₇H₃₉NO₂이고, 분자량이 409이며, 상기 화학식 1로 표시되는 베라트라민(veratramine)으로 식물 병원성 진균류에 대하여 우수한 항진균 활성을 나타내었으며, 베라트라민의 이화학적 성질은 다음 표 1에 나타내었다.

베라트라민의 이화학적 성질
구분	이화학적 성질
외형	무정형 흰색
분자식	C₂₇H₃₉NO₂
분자량	409

본 발명에서 제공하는 농업용 살균제 조성물은 유효성분으로 여로 추출물 또는 여로 유래 화합물을 포함하며, 이때 유효성분은 각각의 단일 성분일 수 있으나, 사용목적 및 방법에 따라 2종 이상의 혼합물일 수도 있다. 혼합물의 혼합비는 방제하고자 하는 식물 병원균의 활성도에 따라 적절히 조절하는 것이 바람직하며, 예컨대 각 혼합물의 구성성분은 동일 중량비율일 수 있다.

본 발명에서 제공하는 살균제용 조성물은 유효성분만을 단독으로 포함할 수 있으며, 유효성분을 0.001 내지 99 중량%, 바람직하기로는 0.005 ~ 30 중량%로 포함하고 잔량의 부형제를 더욱 포함할 수 있다. 상기 부형제는 통상의 미생물 제제, 살균제, 항균 효과 증진제, 희석제 또는 담체일 수 있다.

농업용 살균제용 조성물은 적용하는 식물 또는 적용방법에 따라 적절한 제형으로 제조할 수 있으며, 예컨대 액제, 유제, 훈증제, 도포제 또는 입제로 사용할 수 있다. 상기 살균제용 조성물은 식물에 통상의 방법으로 적용할 수 있다. 구체적인 적용방법은 도포 처리, 침지 처리, 훈증 처리 또는 살포 처리이며, 예컨대 살균제용 조성물을 토양, 식물의 잎, 줄기, 종자, 꽃 또는 열매에 살포할 수 있으며, 이때 물 또는 그 외 희석제에 상기 조성물을 희석하여 사용할 수 있다.

농업용 살균제용 조성물의 적용 시기는 식물병원균의 증식이 원활한 시기에 하는 것이 좋으며, 이는 식물병원균이 발병하는 식물의 종류에 따라 다를 수 있으므로, 식물의 종류에 따라 적절한 시기에 적용하는 것이 바람직하다. 통상적인 적용시기는 식물의 파종, 재배 및 수확 중이다.

농업용 살균제용 조성물의 적용량은 각 식물의 종류, 병원균 및 적용방법에 따라 적절히 조절할 수 있다. 일례로, 살균제용 조성물은 농지 m² 면적당 0.5 ~ 5 g을 시비하거나, 유효성분 기준으로 50 ~ 500 ㎍/plant를 적용할 수 있다.

이하, 실시예를 들어 본 발명을 상세히 기술할 것이나 본 발명의 범위를 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 여로 조추출물의 제조

본 발명에 사용한 여로는 대전에 있는 약재상으로부터 건조된 여로의 뿌리와 뿌리줄기 부위를 구입하였다. 건조된 여로의 뿌리와 뿌리줄기 4 kg을 잘게 분쇄한 후, 여기에 메탄올 15 L를 가하여 실온에서 48 시간 동안 방치한 다음 여과하여 모은 액상 부분을 진공농축기로 농축하여 메탄올 조추출물을 얻었다.

실시예 2: 여로 조추출물로부터 유기용매 추출물 제조

상기 실시예 1에서 얻어진 메탄올 조추출물 349 g을 1 L 증류수에 완전히 용해한 후 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트를 차례로 가하고 분획하여 유기용매층을 각각 13.8 g, 32.7 g 및 14.9 g 씩 얻었다. 용해된 유기용매 층은 아래 실험예 1의 방법에 따라 항진균 활성을 측정하여 클로로포름 층에 활성물질이 포함되어 있음을 확인하였다.

상기 실시예 1 및 실시예 2에서 얻은 메탄올 조추출물 및 유기용매 추출물 각각에 대한 항진균 활성을 측정한 결과는 다음 표 2에 나타내었다.

여로 추출물의 식물 병원성 진균류에 대한 생육 억제 활성^*
식물병원균	메탄올	헥산	클로로포름	에틸아세테이트	증류수
Magnaporthe grisea	10	-	11	-	-
Pythium ultimum	15	-	12	10	-
Phytophthora infestans	22	-	20	15	10
Rhizoctonia solani	46	-	32	21	19
* 각각의 추출물 농축액을 페이퍼 디스크(직경: 8 mm)당 0.5 mg을 올려놓은 다음 2-5일 배양한 후 생육 저지환의 직경을 측정하여 mm 단위로 표시하였다.

실시예 3: 여로의 클로로포름 추출물로부터 베라트라민의 분리

활성물질이 포함된 클로로포름 층을 모아 감압 하에서 농축하고 순상 크로마토그래피 컬럼(Merck, Kiesegel 60, 230~400 mesh)에 흡착시킨 후, 헥산과 클로로포름(5:5 ~ 1:9) 및 클로로포름과 에틸아세테이트(9:1 ~ 5:5)의 비율을 변화시키면서 용출되는 분획을 각각 모은 후, 항진균 활성을 측정하여 클로로포름과 에틸아세테이트 8:2 에서 용출되는 분획에서 항진균 활성을 확인하였다. 얻어진 활성 분획을 역상 크로마토그래피 컬럼(Merck, Lichroprep RP-18, 40~63 ㎛)에 흡착시킨 다음, 아세토니트릴과 물을 이용한 혼합용매를 30%, 50%, 70%, 90% 순으로 단계별로 용출시킨 후 이 중에서 벼 잎집얼룩병 원인균(Rhizoctonia solani)에 강한 항진균 활성을 나타낸 50 % 분획을 모았다. 다시 이 분획을 100% 메탄올을 용매로 하여 겔 필터 크로마토그래피(Sephadex LH-20)를 실시하여 가장 높은 항진균 활성을 나타내는 분획 235.9 mg을 얻었으며, 최종적으로 고압 액체 크로마토그래피(HPLC)를 통해 순수한 단일 화합물임을 확인하였다. 이때 HPLC 컬럼으로는 Daiso사(일본)의 Watchers ODS-4103 AP(5μ, 4.6×250 mm) 컬럼을 사용하였다.

실시예 4: 여로로부터 분리된 베라트라민의 구조분석

본 실험을 통해 분리된 화합물의 분자량 및 분자식을 결정하기 위해, 핵자기 공명(Varian UNITY 300 MHz, 500 MHz NMR)을 이용하여 ¹H, ¹³C, COSY, HMQC 및 HMBC 스펙트럼을 얻었으며, 또한 질량분석기(Finnigan LCQ Advantage MAX ion trap mass spectrometer)를 이용하여 분자량 및 분자식을 결정하여 활성 물질이 다음 화학식 1인 베라트라민(veratramine)이라는 것을 확인하였다.

분자량 : m/z 410 [M+H]⁺

분자식 : C₂₇H₃₉NO₂

¹H-NMR (CD₃OD)δ: 1.24(td), 1.85(br d), 2.60(ddd), 2.83(dd), 3.42(tt), 1.28(dd), 2.35(br dd), 5.49(br d), 2.10(br dd), 2.13(m), 3.10(dt), 1.82(m), 1.99(dd), 2.60(dd), 7.05(d), 7.10(d), 2.35(s), 1.14(s), 3.78(m), 1.45(d), 3.10(dd), 3.49(dt), 1.59(q), 1.84(br d), 1.85(m), 2.60(t), 3.14(br d), 0.97(d)

¹³C-NMR (CD₃OD)δ: 39.4, 31.4, 72.5, 42.6, 144.2, 122.7, 42.7, 42.6, 58.7, 38.1, 31.4, 137.7, 134.9, 146.5, 121.8, 126.5, 145.0, 16.1, 20.9, 35.6, 19.6, 67.4, 68.3, 32.0, 28.4, 52.2, 18.4

[화학식 1]

실시예 5: 식물 병원성 진균류에 대한 베라트라민의 항진균 활성 검정

여로로부터 분리된 상기 화학식 1로 표시되는 베라트라민의 식물 병원균에 대한 항진균 활성을 조사하기 위하여 다음 (1)과 같이 고체 배지 상에서의 균사 생육 억제 활성을 측정하였으며, 또한 다음 (2)와 같이 온실의 식물체 상에서 직접 방제 효과를 조사하였다. 이때, 사용된 식물체에 대한 병명과 식물 병원성 진균류는 표 3에 나타내었다.

실험에 사용한 식물체의 병명과 병을 일으키는 병원성 진균
약자	병명	병원균
RCB	벼 도열병(Rice Blast)	Magnaporthe grisea
RSB	벼 잎집얼룩병(Rice Sheath Blight)	Corticium sasaki
TGM	토마토 잿빛 곰팡이병(Tomato Gray Mold)	Botrytis cinerea
TLB	토마토 역병(Tomato Late Blight)	Phytophthora infestans
WLR	밀 녹병(Wheat Leaf Rust)	Puccinia recondita

(1) 고체 배지 상에서의 식물 병원균을 이용한 항진균 활성 검정( MIC )

포테이토 텍스트로스 한천 배지에 검은 무늬병균(Alternaria kikuchiana), 잿빛 곰팡이병균(Botrytis cinerea), 탄저병균(Colletotrichum lagenarium), 시들음병균(Fusarium oxysporum), 벼 도열병균(Magnaporthe grisea), 뿌리 썩음병균(Pythium ultimum), 토마토 역병균(Phytophthora infestans) 및 벼 잎집얼룩병균(Rhizoctonia solani)을 25 ℃에서 7 ~ 14 일 동안 충분히 배양하여 접종원으로 사용하였다. 여로 추출물 및 여로 추출물로부터 유래된 베라트라민을 멸균된 증류수를 이용하여 2배 희석 계열을 만든 후, 멸균하여 50 ℃로 유지시킨 포테이토 텍스트로스 한천 배지와 화합물을 9:1의 비율로 혼합하여 최종 농도가 128 ~ 0.5 ㎍/㎖이 되도록 5 ㎖씩 각 평판에 분주하였다. 배지가 고형화되면 왕성하게 자라고 있는 균체 선단부로부터 지름 5 mm의 균사체 덩어리를 떼어 각 평판 위에 접종하여 25 ~ 30 ℃에서 1 ~ 2일 동안 배양한 후 육안으로 관찰하여 균의 생육이 억제된 농도를 최소 생육저지 농도(MIC)로 정하였다.

다음 표 4의 결과에 의하면 뿌리 썩음병(Pythium ultimum)과 토마토 역병(Phytophthora infestans)균 및 벼 잎집얼룩병(Rhizoctonia solani)을 일으키는 진균류에 대한 최소 생육 저지 농도(MIC)가 각각 64, 8, 0.5 ㎍/㎖ 으로 강한 항진균 활성을 나타내었다.

고체 배지 상에서 베라트라민의 항진균 효과
식물병원균	MIC(㎍/ml)
Alternaria kikuchiana	>128
Botrytis cinerea	>128
Colletotrichum lagenarium	>128
Fusarium oxysporum	>128
Magnaporthe grisea	>128
Pythium ultimum	64
Phytophthora infestans	8
Rhizoctonia solani	0.5

(2) 온실의 식물체에 접종한 식물 병원성 진균류를 이용한 방제 효과 검정

벼 도열병(Rice Blast), 벼 잎집얼룩병(Rice Sheath Blight), 토마토 잿빛 곰팡이병(Tomato Gray Mold), 토마토 역병(Tomato Late Blight) 및 밀 녹병(Wheat Leaf Rust) 등의 5가지 식물 병원성 진균류에 대한 방제 효과를 조사하기 위하여 대상 식물병당 2 포트씩 처리하였다. 벼(Oryza sativa L., cv. Nakdong), 토마토(Lycopersicon esculentum Mill., cv. Seokwang) 및 밀(Triticum aestivum L., cv. Chokwang) 등의 식물체는 각각 지름 4.5 cm 플라스틱 포트에 원예용 상토 또는 수도용 상토를 70% 정도 담고 온실(25± 5 ℃)에서 1 주에서 3 주정도 재배하였다. 화합물은 디메틸설폭사이드에 용해한 후, Tween 20을 250 ㎍/㎖ 수준으로 포함하고 있는 증류수로 희석하였으며, 디메틸설폭사이드의 최종 농도는 10%였다. 대조구는 10% 디메틸설폭사이드와 250 ㎍/㎖ Tween 20을 포함하고 있는 증류수를 사용하였다. 이렇게 제조한 화합물들을 병원균 접종 24시간 전에 식물체 옆면에 분무처리한 후 상온에서 건조한 다음 접종하였다. 벼 도열병과 밀 녹병은 7일 후, 벼 잎집얼룩병은 8일 후, 그리고 토마토 잿빛곰팡이병과 토마토 역병은 각각 3일과 4일 후에 병반 면적율을 조사하였다.

다음 표 5의 결과와 같이 온실의 식물체 상에서도 높은 방제 효과를 나타내었다.

식물체를 대상으로 한 베라트라민의 방제 효과(%)^*
농도(ppm)	병명
농도(ppm)	RCB	RSB	TGM	TLB	WLR
500	25	40	75	98	80
200	7	23	32	95	44
100	0	15	0	94	3
50	0	20	0	91	0
25	0	5	0	71	13

* RCB;벼 도열병, RSB;벼 잎집얼룩병, TGM;토마토 잿빛 곰팡이병,

TLB;토마토 역병, WLR;밀 녹병

실시예 6: 여로 추출물 및 베라트라민의 급성 독성시험

여로 추출물 및 화학식 1의 베라트라민에 대해서 급성 독성시험을 수행하기 위하여 체중 25 g 정도의 6 주령 ICR 마우스(♂, 대한 바이오)를 군당 2 마리씩 4군으로 나누어 온도 22± 3℃, 습도 55±10%, 조명 12L/12D의 동물실 내에서 사육하였다. 마우스는 실험에 사용되기 전 1주일 정도 순화시켰다. 실험동물용 사료((주)제일사료, 마우스 및 랫트용) 및 음수는 멸균한 후 공급하였으며 자유 섭취시켰다.

여로 추출물 및 베라트라민을 소량의 디메틸설폭사이드(DMSO)에 녹인 후 1% 카르복실메틸셀룰로오스 용액으로 희석하여 각 군당 90 mg/kg, 30 mg/kg, 10 mg/kg, 3 mg/kg의 용량으로 조제하여 단회 경구 투여하였으며, 대조군은 1% 카르복실메틸셀룰로오스 용액을 사용하였다. 투여 후 7일 동안 다음과 같이 부작용 또는 치사 여부를 관찰하였다. 즉, 투여당일은 투여 후 1시간, 4시간, 8시간, 12시간 뒤에, 그리고 투여 익일부터 7일째까지는 매일 오전, 오후 1회 이상씩 일반증상의 변화 및 사망동물의 유무를 관찰하였다.

또한, 투여 7일째에 동물을 치사시켜 해부한 후 육안으로 내부 장기를 검사하였다. 투여 당일부터 1일 간격으로 체중의 변화를 측정하여 여로 추출물 및 베라트라민 화합물에 의한 동물의 체중 감소 현상을 관찰하였다.

그 결과, 시험물질을 투여한 모든 특기할만한 임상 증상은 없었으나, 270 mg/kg 투여 동물에서 폐사가 일어났으며, 90 mg/kg 투여군 1례에서 동물이 사망하여 경구 투여 최소 치사량(LD₅₀)은 90 mg/kg 부근일 것으로 추정되었으며, 부검소견의 경우 사망동물 및 생존 동물에서 시험 관련 물질과 관련된 특이 소견은 관찰되지 않았다.

상술한 바와 같이, 본 발명에 따른 여로 추출물과 여로 추출물로부터 분리된 알칼로이드 화합물인 베라트라민은 식물 병원성 진균류에 대한 우수한 항진균 활성을 나타내며, 특히 토마토 역병(Phytophthora infestans)에 대해서는 식물체 상에서 우수한 방제 효과를 나타내어 이를 유효성분으로 하는 환경친화적인 농업용 살균제로 사용될 수 있다.

Claims

메탄올, 클로로포름 및 에틸아세테이트 중에서 선택된 용매로 추출된 여로(Veratrum japonicum) 추출물을 유효성분으로 함유하며, 벼 도열병(Magnaporthe grisea), 뿌리 썩음병(Pythium ultimum), 토마토 역병(Phytophthora infestans) 및 벼 잎집얼룩병(Rhizoctonia solani)균 중에서 선택된 진균에 대한 항진균 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 농업용 살균제 조성물.
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다음 화학식 1로 표시되는 알칼로이드 화합물인 베라트라민을 유효성분으로 함유하며, 벼 도열병(Magnaporthe grisea), 토마토 역병(Phytophthora infestans) 및 벼 잎집얼룩병(Rhizoctonia solani)균 중에서 선택된 진균에 대한 항진균 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 농업용 살균제 조성물.

[화학식 1]
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