KR100658511B1 - 케노데옥시콜린산의 정제 방법 - Google Patents

케노데옥시콜린산의 정제 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 하기 화학식 1의 케노데옥시콜린산(3α,7α-디히드록시-5β-콜린산)을 정제하는 방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로는 돼지 담즙 고형화물에 포함되어 있는 저급의 케노데옥시콜린산 혼합물로부터 고수율, 고순도로 케노데옥시콜린산을 정제하는 방법에 관한 것이다.
[화학식 1]
Figure 112005072442165-pat00001
케노데옥시콜린산, 케노데옥시콜린산-디아세테이트-메틸-에스테르

Description

케노데옥시콜린산의 정제 방법 {PURIFICATION PROCESS FOR CHENODEOXYCHOLIC ACID}
본 발명은 케노데옥시콜린산(3α,7α-디히드록시-5β-콜린산)을 정제하는 방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로는 돼지 담즙 고형화물에 포함되어 있는 저급의 케노데옥시콜린산 혼합물로부터 케노데옥시콜린산을 고수율 및 고순도로 정제하는 방법에 관한 것이다.
일반적으로 케노데옥시콜린산은 소, 돼지, 곰, 닭 또는 거위 등의 가금류 담즙에 포함되어 있으며, 인간의 담즙에도 포함되어 있다. 케노데옥시콜린산은 담도계 질환, 고지혈증, 담석증 및 만성 간질환의 개선에 효과를 가지고 있는 우루소데옥시콜린산의 출발 물질로 사용되며 다음과 같은 제조방법이 알려져 있다.
케노데옥시콜린산을 제조하기 위한 일반적인 방법은 콜산(3α,7α 12α-트리히드록시 콜산)을 메틸 에스테르화하는 단계; 무수초산을 이용하여 3α 및 7α 위 치의 수산기를 아세틸화하여 보호화하는 단계; 12α 위치의 수산기를 크롬산으로 산화하여 카보닐로 산화시킨 후 울프-키쉬너(Wolff-kichner) 환원반응으로 카보닐기를 제거하는 단계; 가수분해 및 탈보호화 하여 케노데옥시콜산을 수득하는 단계로 이루어진다. 상기 방법은 울프-키쉬너 환원반응시 200℃이상의 고온을 유지해야 하고, 광우병 등에 의해 원료 수급에 차질이 생길 수 있다.
가금류의 담즙에는 케노데옥시콜린산, 리토콜산(lithocholic acid) 및 미량의 콜산이 함유되어 있다. 따라서, 가금류로부터 케노데옥시콜린산을 분리하는 방법도 잘 알려져 있으나 원료수급 및 수율 저하로 인해 경제성이 크게 떨어진다 (Windhaus et al, I Physiol. Chem, 140, 177~185(1924) 참조).
천연 돼지 담즙의 케노데옥시콜린산 혼합물로부터 케노데옥시콜린산을 순수하게 분리 정제하는 방법은 미국 특허 제4186143호에 기재되어 있다. 상기 방법은 주요 단계로 담즙을 비누화하여 3α-히드록시-6-옥소-5β-콜린산을 제거하는 전처리 단계; 바일산의 에스테르화 단계; 바일산 에스테르의 아세틸화 단계; 비극성 유기용매를 이용한 중간 생성물 제거 단계; 아세틸화된 화학식 1의 에스테르 결정화 단계; 탈보호화 단계; 유기용매에서의 결정화에 의한 화학식 1의 화합물 수득 단계를 포함하고 있다. 그러나, 상기 방법은 아세틸화된 화학식 1의 에스테르의 HPLC 함량에 대한 언급이 없고, 비선광도가 [α]D 25 +13.8o(c=1, CHCl3)이고 융점이 119~121℃로서 순도가 크게 떨어진다(STD: [α]D 25 +15.2o(c=1, CHCl3), 융점 127~129℃). 또한, 목적 화합물 정제를 위한 결정화에 소요되는 시간이 16시간 내지 48시간으로 상당히 길고, 전체 단계가 8단계로서 공정이 복잡하다. 따라서, 상기 방법에 의해 화학식 1의 화합물을 정제하는 경우 수율이 저조하고, 전체 공정의 반응 시간이 12일로 지나치게 길어 경제성이 크게 떨어진다.
특히, 상기 방법에 따라 본 발명에 사용되는 케노데옥시콜린산 함량 5% 내지 35중량%의 돼지 담즙 고형화물로부터 아세틸화된 화학식 1의 에스테르를 정제시 에탄올 용매에서 두 번 재결정하여도 함량이 80%로 저조하였다.
상기 문제점을 해결하기 위하여, 본 발명의 목적은 전체 공정에 소요되는 시간을 단축시키면서도 고수율 및 고순도로 화학식 1의 화합물을 정제하는 방법을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 화학식 1의 화합물을 정제하는 방법을 제공한다:
돼지 담즙의 전처리 단계; 바일산의 에스테르화 단계; 바일산 에스테르의 아 세틸화 단계; 비극성 유기용매를 이용한 중간 생성물 제거 단계; 아세틸화된 바일산 에스테르의 결정화 단계; 및 탈보호화 단계를 포함하는 화학식 1의 화합물의 정제 방법에 있어서,
1) 전처리 단계에서, 염을 포함한 유기용매에 케노데옥시콜린산 함량 5% 내지 35중량%의 돼지 담즙 고형화물을 용해시키고;
2) 결정화 단계에서, 메탄올 또는 이소프로판올로 0 ~ 15℃에서 결정화시키며;
3) 탈보호화 단계에서, 결정화 단계의 수득물에 염기를 가하여 탈보호화하고, 산을 부가하여 물의 존재하에 결정화시키는 것을 특징으로 하는 화학식 1의 화합물 정제방법.
[화학식 5]
Figure 112005072442165-pat00002
[화학식 1]
Figure 112005072442165-pat00003
본 명세서에서 사용되는 용어, "돼지 담즙 고형화물"은 천연 돼지 담즙으로 부터 유래된 고형화물을 의미하며 하기 화학식 1 내지 4의 케노데옥시콜린산 혼합물을 포함하고 있다.
[화학식 1]
Figure 112005072442165-pat00004
[화학식 2]
Figure 112005072442165-pat00005
[화학식 3]
Figure 112005072442165-pat00006
[화학식 4]
Figure 112005072442165-pat00007
상기 식에서, 화학식 1의 화합물은 케노데옥시콜린산(3α,7α-디히드록시-5 β-콜린산, CDCA), 화학식 2의 화합물은 하이요데옥시콜린산(3α,6α-디히드록시-5β-콜린산, HDCA), 화학식 3의 화합물은 하이요콜린산(3α,6α,7α-트리히드록시-5β-콜린산, HCA), 화학식 4의 화합물은 3α-히드록시-6-옥소-5β-콜린산(keto)이다.
이하에서, 케노데옥시콜린산을 정제하기 위한 본원 발명의 각 단계를 상세하게 살펴보도록 한다.
제1단계: 돼지 담즙 고형화물의 전처리
케노데옥시콜린산 함량 5% 내지 35중량%의 돼지 담즙 고형화물을 정제공정에 사용하기 위해, 상기 돼지 담즙 고형화물을 염을 포함한 유기용매에서 환류 교반하여 상기 돼지 담즙 고형화물을 유기용매에 모두 녹인다. 이후 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 1 내지 2시간 동안 교반한 후 여과지, 바람직하게는 여과지 및 규조토를 이용하여 여과함으로써 불용물을 제거한다. 유기용매는 감압하에 제거함으로써 다음 단계에 사용하기 위한 잔류물(CDCA, HDCA, HCA 및 keto)을 수득한다. 본 단계에 사용하는 염은 화합물에 영향을 미치지 않는한 자유롭게 선택될 수 있고, 염화나트륨, 무수황산마그네슘(MgSO4) 및 무수황산나트륨으로 구성된 그룹에서 선택된 1종 이상의 염이 바람직하며, 염화나트륨이 가장 바람직하다. 본 단계에 사용되는 염의 양은 상기 유기용매의 양을 기준으로 5 내지 10중량% 사용하는 것이 바람직하다. 염의 양이 5중량% 보다 적으면 돼지 담즙 고형화물 중의 지방산등의 불용물 및 수분이 충분히 제거되지 않아 여과가 어렵고 에스테르화 반응의 수율 및 속도가 저하된다. 염의 양이 10중량% 보다 많으면 이후의 정제단계에서 불순물로 잔존하여 정제를 어렵게 한다. 유기용매는 바람직하게는 돼지 담즙 고형화물에 들어있는 케노데옥시콜린산에 악영향을 주지 않으며 이들을 용해시킬 수 있는 용매 중에서 자유롭게 선택될 수 있으며, 보다 바람직하게는 에틸아세테이트, 아세톤이다.
2단계: 케노데옥시콜린산의 에스테르화
전단계에서 수득한 케노데옥시콜린산 혼합물 잔류물에 알콜을 가하여 완전히 녹을 때까지 환류 교반한다. 케노데옥시콜린산 혼합물이 완전히 용해된 후, 용액을 0 내지 5℃로 냉각한다. 상기 용액에 산촉매를 가하고, 케노데옥시콜린산 혼합물의 에스테르화 반응이 종결될 때까지 실온에서 용액을 교반한다. 반응이 종결되면 염기를 가하여 용액을 중화시키고, 반응액을 여과한다. 여과물을 알콜로 세척한 후 감압 농축하여 케노데옥시콜린산 에스테르 혼합물(CDCA-Me, HDCA-Me, HCA-Me 및 keto-Me)을 잔류물로 수득한다. 본 단계에 사용되는 알콜은 특별히 제한되지는 않으나, 에스테르화 반응의 용이성 등을 고려할 때 탄소수 1 내지 4의 저급알콜이 바람직하고, 메탄올인 것이 더욱 바람직하다. 본 단계에 사용되는 산촉매는 바람직하게는 황산, 파라톨루엔술폰산(PTSA)이고, 염기는 탄산수소나트륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨이 사용된다.
3단계: 케노데옥시콜린산 에스테르의 아세틸화
케노데옥시콜린산 에스테르 혼합물의 수산기를 아세틸화하기 위해, 전단계에서 수득한 잔류물에 무수 초산 및 약 염기를 가하고, 환류시켜 케노데옥시콜린산 에스테르 혼합물의 수산기를 모두 아세틸화시킨다. 반응이 종결된 뒤, 반응액에 톨루엔을 가하고 환류 교반 및 감압농축하여 반응 후 잔존하는 무수 초산, 아세트산 및 염기를 제거하고, 아세틸화된 케노데옥시콜린산 에스테르의 혼합물(CDCA-diAc-Me, HDCA-diAc-Me, HCA-triAc-Me 및 keto-Ac-Me)을 잔류물로 수득한다. 본 단계에 사용되는 바람직한 약 염기는 무수 초산나트륨 또는 피리딘이고, 보다 바람직하게는 무수 초산나트륨이다.
4단계: 화학식 3 및 4의 중간 생성물 제거
잔류물에 비극성 용매를 가하고, 잔류물이 모두 용해될 때까지 환류 교반 후 실온으로 냉각시킨다. 용매의 온도를 20 내지 25℃로 유지하면서 화학식 3 및 4의 중간 생성물과 화학식 2의 중간생성물 일부(HCA-triAc-Me, keto-Ac-Me 및 일부의 HDCA-diAc-Me)를 결정화하고, 여과하여 이를 제거한다. 여과물을 상기 비극성 용매를 이용하여 추가로 세척하고, 여과액과 세척액을 모아 감압 농축 또는 진공건조시킨다. 본 단계의 결정화에 사용되는 비극성 용매는 헥산, 헵탄, 옥탄 또는 이소옥탄 등이 바람직하고, 헥산 또는 헵탄이 더욱 바람직하다.
5단계: 케노데옥시콜린산-디아세테이트-메틸-에스테르 수득
화학식 1의 중간 생성물인 화학식 5의 케노데옥시콜린산-디아세테이트-메틸-에스테르(CDCA-diAc-Me)를 수득하기 위해, 전단계의 수득물에 알콜 용매를 가하고 0℃ 내지 15℃, 바람직하게는 0℃ 내지 5℃에서 2 내지 3 시간 정치시켜 화학식 5의 화합물을 결정화한다. 0℃보다 온도가 낮으면 화학식 5의 화합물의 함량이 감소하고, 15℃보다 온도가 높으면 결정화가 잘 이루어지지 않는다. 화학식 5의 화합물이 결정화되면 이를 여과하여 화학식 2의 중간 생성물을 용매로부터 제거한다. 여과물을 알콜 용매로 세척하고 진공 건조하여 화학식5의 케노데옥시콜린산-디아세테이트-메틸-에스테르를 조생성물로 수득한다. 화학식 5의 화합물을 고순도로 정제하기 위해, 화학식 5의 화합물 함량이 98.5% 이상, 바람직하게는 99% 이상이 될 때까지 동일한 조건으로 재결정화를 반복한다. 99% 이상의 함량을 얻기 위해서는 전체 결정화 횟수가 3회 이상인 것이 바람직하다. 결정화에 사용되는 알콜 용매는 저급 알콜인 것이 바람직하고, 메탄올, 이소프로판올이 더욱 바람직하며, 화학식 5의 화합물의 함량면에서 메탄올이 가장 바람직하다. 결정화에 사용되는 알코올의 양은 잔류물의 양을 기준으로 0.5 내지 3배, 바람직하게는 1.5 내지 3배인 것이 좋다. 0.5배보다 적으면 결정이 엉겨서 여과가 되지 않으며, 3배보다 많아져도 화학식 5의 화합물 함량에 영향을 주지 않는다.
6단계: 탈보호화 및 케노데옥시콜린산 결정화
전단계에서 수득한 화학식 5의 화합물을 염기 존재 하에서 탈 보호화하고 산 조건에서 pH를 4이하, 바람직하게는 2~3으로 조절하여 화학식 1의 케노데옥시콜 린산을 형성시킴과 동시에 35~45℃, 바람직하게는 35~40℃로 정치시켜 물의 존재하에 화학식 1의 화합물을 결정화시킨다. 반응액을 여과하고, 여과물을 물로 세척 및 진공건조시켜 케노데옥시콜린산을 순수하게 정제한다. 탈 보호화에 사용되는 염기는 특별히 제한되지는 않으나, 수산화나트륨 또는 수산화칼륨을 사용하는 것이 후 처리 과정을 위해 바람직하다. pH가 4보다 높으면 결정이 형성되지 않으며, pH가 2보다 낮으면 과량의 산으로 인해 최종 산물의 순도가 떨어지게 된다. 물에서의 결정화 온도가 35℃보다 낮으면 화학식 1의 화합물의 순도가 떨어지고, 45℃보다 높으면 화학식 1의 화합물의 결정이 엉겨서 여과가 잘 되지 않는다. 반응액을 중화시키는데 사용되는 산 역시 특별히 제한되지는 않으나 염산 또는 황산을 사용하는 것이 후 처리 과정을 위해 바람직하다. 본 발명은 전단계에서 수득한 잔류물에 화학식 5의 화합물이 98.5% 이상, 바람직하게는 99% 이상 함유되어 있으므로, 불순물 함량이 적어 유기용매를 이용한 추가의 결정화 과정 없이도 화학식 1의 화합물을 순수하게 정제할 수 있다. 본 발명에 따라 물에서 결정화된 화학식 1의 화합물은 유기용매에서 결정화된 화학식 1의 화합물에 비해 녹는 점이 약 20℃ 이상 높고 부피가 작아 공업적 생산공정에 적합하다.
이하, 본 발명을 실시예에 의거하여 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명의 보호범위가 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
분석방법
각 단계에서 분리되는 중간 생성물을 확인하기 위해 HPLC를 이용하였으며, 시험 조건은 다음과 같다.
칼럼: Capcell pak UG120 C18 (4.6 X 250mm, Shiseido)
이동상: 아세토니트릴/물 (85:15)
검출기: 자외부 흡광광도계 (210nm)
유속: 1.0ml/분
주입량: 20㎕
실시예
1단계: 돼지 담즙 고형화물의 전처리
케노데옥시콜린산 함량 30% 내지 35중량%의 돼지 담즙 고형화물 150g과 소금 60g을 에틸 아세테이트 600ml로 1시간 동안 환류 교반하여 돼지 담즙 고형화물을 모두 녹였다. 이후, 혼합물의 온도를 20 내지 25℃로 냉각하고 1시간 교반 후 규조토에 여과하였고, 여과물을 에틸아세테이트 60ml로 세척하였다. 여과액을 모아 감압하에 농축하여 유기용매를 제거하여 케노데옥시콜린산 혼합물(CDCA, HDCA, HCA 및 keto)을 잔류물로 수득하였다.
2단계: 케노데옥시콜린산의 에스테르화
전단계에서 수득한 잔류물에 메탄올 375ml를 가하여 완전히 녹을 때까지 30분간 환류 교반하였다. 이 용액을 0 내지 10℃로 냉각하고 교반하면서 황산 4.88ml를 적가하고 20 내지 25℃에서 2시간 교반하여 케노데옥시콜린산 혼합물의 에스테르화 반응을 완결시켰다. 에스테르화 반응이 종결된 뒤에 탄산 수소 나트륨 53.9g을 가하여 용액을 중화시켜 여과하였다. 여과물을 메탄올 150ml로 세척하고 감압 농축하여 134g의 케노데옥시콜린산 에스테르 혼합물(CDCA-Me, HDCA-Me, HCA-Me 및 keto-Me)을 잔류물로 수득하였다.
3단계: 케노데옥시콜린산 에스테르의 아세틸화
전단계에서 수득한 케노데옥시콜린산 에스테르 혼합물 134g에 무수초산나트륨 20g 과 무수 초산 200ml를 가하고, 120 내지 140℃에서 5시간 동안 환류시킨 다음 반응액을 바로 감압 농축하였다. 반응액에 톨루엔 25ml를 가하고 15분간 환류 교반 후 감압 농축하여 무수초산 및 아세트산을 완전히 제거하고, 아세틸화된 케노데옥시콜린산 에스테르 혼합물(CDCA-diAc-Me, HDCA-diAc-Me, HCA-triAc-Me 및 keto-Ac-Me)을 잔류물로 수득하였다. 잔류물의 HPLC 결과(RT): HCA-triAc-Me (8.76분), keto-Ac-Me (9.05분), CDCA-diAc-Me (12.21분) 및 HDCA-diAc-Me (12.81분)
4단계: 화학식 3 및 4의 중간 생성물 제거
전단계에서 수득한 잔류물에 비극성 용매인 헥산 400ml을 가하고 30분 동안 환류 교반하였다. 이후, 헥산용매를 냉각하고 25 내지 35℃에서 3시간 동안 교반하고 여과하였다. 여과물(HCA-triAc-Me, keto-Ac-Me 및 일부 HDCA-diAc-Me)은 헥 산 65ml을 이용하여 추가로 세척하였고, 여과액 및 세척액을 모아 감압 농축하여, 화학식 1 및 2의 중간 생성물을 잔류물(CDCA-diAc-Me, HDCA-diAc-Me)로 수득하였다. 잔류물의 HPLC 결과(RT): CDCA-diAc-Me (12.21분) 및 HDCA-diAc-Me (12.81분).
5단계: 케노데옥시콜린산-디아세테이트-메틸-에스테르 수득
전단계에서 수득한 잔류물에 메탄올 270ml을 가하고 30분 동안 환류 교반하고 0 내지 10℃로 냉각하여 2시간 동안 교반하고 여과하였다. 여과물(CDCA-diAc-Me)을 메탄올 70ml로 세척하고 60℃에서 진공 건조하여 함량 85%의 조생성물을 수득하였다. 이후 메탄올 72ml을 가하고 온도를 0 내지 5℃에서 2시간 동안 재결정하였다. 재결정을 추가로 1회 실시하여 함량 99%의 케노데옥시콜린산-디아세테이트-에스테르를 수득하였다. 수득량은 24.5g(19.5g+모액 5g)이었다. m.p.: 128~129℃. 수득물의 HPLC 결과(RT): CDCA-diAc-Me (12.21분).
6단계: 탈보호화 및 케노데옥시콜린산 결정화
케노데옥시콜린산-디아세테이트-에스테르 24.5g과 수산화나트륨 29.5g을 물 220ml에 가하고 4시간 동안 환류 교반시켰다. 물 370ml을 추가하고 염산 59ml를 사용하여 pH를 2.0~3.0로 조절하고, 35 내지 45℃에서 1시간 교반 후 여과하였다. 여과물을 물 24.5ml로 세척하고 70℃에서 진공 건조하여 순수한 케노데옥시콜린산 을 19.5g 수득하였다. m.p.: 160~161℃, [α]D 25 +13.0o(c=1, CHCl3)
비교예
1단계: 담즙의 전처리
농축한 돼지 담즙 150g을 뜨거운 물 1000ml에 녹였다. 이후 수산화 나트륨 100g을 가하고 20시간 동안 환류 교반하였다. 이 용액을 25℃로 냉각하고 물 1500ml를 가하여 하루 동안 냉장 방치하였다. 반응용액에 규조토 10g을 가하고 교반 및 여과하여 침전된 화학식 4의 소디움 3α-히드록시-6-케토콜라네이트를 제거하였다. 여액을 진한 황산을 이용하여 pH 8로 조절하고 차아황산나트륨 5g을 가하고 15분간 교반하였다. 이후 에틸 아세테이트 400ml을 가하고 묽은 황산으로 pH를 5로 조절하여 30분 교반하고 층 분리하여 수용액 층을 제거하였다. 규조토 7g과 활성탄 7g을 유기 층에 가하고 30분간 교반 및 여과하고 여과물을 에틸 아세테이트 50ml로 세척하고 감압 농축하였다.
2단계: 바일산의 에스테르화
전단계에서 수득한 잔류물을 메탄올 300ml에 녹이고 진한 황산 4.0ml를 가하여 실온에서 하루 교반하였다. 이후 탄산수소나트륨으로 중화하여(pH 7) 여과하고 감압 농축하였다.
3단계: 화학식 2의 메틸 에스테르 제거
전단계에서 수득한 잔류물을 320ml의 뜨거운 벤젠에 녹이고 225ml로 농축한 후 하루 동안 냉장 방치 하였다. 이후 여과하고 여과물(화학식 2의 메틸 에스테르 벤젠 어덕트)을 벤젠으로 세척하고, 벤젠 여과액과 세척액을 감압 농축하였다.
4단계: 바일산 에스테르의 아세틸화
전단계에서 수득한 잔류물에 무수초산 75ml와 무수초산나트륨 7.5g을 가하고 5시간 동안 환류 교반하였다. 남은 무수초산을 증류시키고 메탄올 35ml를 가하여 15분간 환류 교반하고 감압 증류하여 남아있는 무수초산을 제거하였다.
5단계: 아세틸화된 화학식 3의 에스테르 제거
전단계에서 수득한 잔류물을 헥산 용매 200ml에서 환류하고 이 용액을 20℃에서 하루 방치하였다. 이 현탁액을 여과하고 여과물(조결정 HDCA-triAc-Me)을 헥산으로 세척하고, 여과액과 세척액을 모아 감압 증류하였다.
6단계: 화학식 5의 화합물 분리
전단계에서 수득한 잔류물을 뜨거운 에탄올 46ml에 녹인 뒤 하루 동안 냉장 방치하였다. 현탁액을 여과하고 여과물을 차가운 에탄올 27ml로 세척하고 60℃에서 진공 건조시켰다. 화학식 5의 화합물 21.5g을 에탄올 3배로 재결정하여 18.5g 의 생성물을 수득하였다: m.p. 119~121oC; [α]D 25 +10.4o(c=1, Dioxane); [α]D 25 +13.8o(c=1, CHCl3).
7단계: 비누화 및 중화
케노데옥시콜린산-디아세테이트-메틸-에스테르 18.5g와 수산화나트륨 18.5g을 물 185ml에 가하고 14시간 동안 환류 교반하였다. 이후 진한 황산으로 pH를 4.5로 조절하였다.
8단계: 화학식 1의 화합물 수득
전단계의 반응액을 에틸아세테이트로 추출하고, 수용액 층을 버렸다. 에틸아세테이트 층을 6% 소금물로 세척하고 약 90ml로 증류하였다. 이 용액을 냉각하고 헥산 90ml를 가하여 하루 동안 냉장 방치하였다. 이 현탁액을 여과하고, 여과물을 헥산 20ml로 세척하여 60℃에서 진공 건조시켜 12.7g의 케노데옥시콜린산을 수득하였다. m.p. 142~5oC; [α]D 25 +13.0o(c=1, CHCl3).
본 발명은 돼지 담즙 고형화물로부터 화학식 1의 케노데옥시콜린산을 고수율 및 고순도로 정제하는 효과가 있다. 또한, 본 발명은 정제시간을 단축함으로써 공 업적 정제에 적합한 효과가 있다.

Claims (8)

  1. 돼지 담즙의 전처리 단계; 바일산의 에스테르화 단계; 바일산 에스테르의 아세틸화 단계; 비극성 유기용매를 이용한 중간 생성물 제거 단계; 아세틸화된 바일산 에스테르의 결정화 단계; 및 탈보호화 단계를 포함하는 화학식 1의 화합물의 정제 방법에 있어서,
    1) 전처리 단계에서, 염을 포함한 유기용매에 케노데옥시콜린산 함량 5% 내지 35중량%의 돼지 담즙 고형화물을 용해시키고;
    2) 결정화 단계에서, 메탄올 또는 이소프로판올로 0 ~ 15℃에서 결정화시키며;
    3) 탈보호화 단계에서, 결정화 단계의 수득물에 염기를 가하여 탈보호화하고, 산을 부가하여 물의 존재하에 결정화시키는 것을 특징으로 하는 화학식 1의 화합물 정제방법.
    Figure 112005072442165-pat00008
    Figure 112005072442165-pat00009
  2. 제1항에 있어서, 전처리 단계에 사용되는 염은 염화나트륨, 무수황산 마그네슘, 무수황산 나트륨으로 구성된 그룹에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제2항에 있어서, 염의 양은 전체 유기용매를 기준으로 5 내지 10중량%인 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제1항에 있어서, 결정화 단계의 수득물에 화학식 5의 화합물이 98.5% 이상 함유된 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제1항에 있어서, 결정화 단계를 0~5℃에서 수행하는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제1항에 있어서, 결정화 단계에 사용되는 메탄올 또는 이소프로판올의 양은 전단계에서 얻은 잔류물의 양을 기준으로 0.5 내지 3배인 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제1항에 있어서, 탈보호화 단계의 pH는 4이하인 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제1항에 있어서, 물의 존재하에 결정화시키는 것이 35 내지 45℃에서 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
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