CN103360454B

CN103360454B - 一种从鹅胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法

Info

Publication number: CN103360454B
Application number: CN201310160479.0A
Authority: CN
Inventors: 李全阳; 李冠霖
Original assignee: Guangxi University
Current assignee: Sichuan Xin Gong Biological Science And Technology Group Co ltd
Priority date: 2013-05-06
Filing date: 2013-05-06
Publication date: 2015-12-09
Anticipated expiration: 2033-05-06
Also published as: CN103360454A

Abstract

本发明提供了一种从鹅胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法，具体是新鲜鹅胆汁经过皂化、钙沉、粗体、大孔树脂纯化得到鹅去氧胆酸纯品。本发明具有以下优点：1）扩大了鹅去氧胆酸的原料来源，提供了一种从鹅胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法；2）与传统提取工艺相比，不再使用乙酸乙酯，增加了实验的可重复性、降低了环境污染、提高了鹅去氧胆酸的回收率；3）与其他大孔树脂提取方法比，简化了操作，提高了鹅去氧胆酸的回收率。

Description

一种从鹅胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法

技术领域

本发明涉及生化分离提纯，尤其是涉及一种从鹅胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法。

背景技术

鹅去氧胆酸是一种具有溶石作用的药物。目前主要应用于临床治疗胆结石病以及转化为熊去氧胆酸来治疗胆结石。鹅去氧胆酸主要通过动物胆汁提取，目前大多数的生产厂家都是从鸡、鸭的胆汁以及猪胆汁当中提取，还缺少使用鹅胆汁提取鹅去氧胆酸的工艺方法，而我国随着养鹅业以及鹅屠宰加工技术的发展大大增加了鹅胆汁的来源，但是目前对于鹅胆汁的利用率还较低，故鹅胆汁可作为鹅去氧胆酸原料的新来源。

利用鸡胆汁与鸭胆汁提取鹅去氧胆酸的工艺已经较为成熟，例如CN102827234A提出了利用鸭胆汁作为原料经过溶解萃取、乙酸乙酯萃取、超滤等步骤提取鹅去氧胆酸的方法，存在着使用大量乙酸乙酯、工艺参数可重复性差、污染环境的缺点；而CN1775798A提出的利用禽类胆汁作为原料经过皂化、中和、柱层析、超滤等步骤提取鹅去氧胆酸的方法，因为该方法皂化之后直接进行大孔树脂分离，存在着大孔树脂分离效果差，后续又进行超滤纯化使得工艺较为复杂以及在提取过程中鹅去氧胆酸损失较多等缺点。

发明内容

本发明为了克服现有提取方法的缺点、扩大鹅去氧胆酸的来源，提供了一种针对从鹅胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法，在保证产率与纯度的同时简化了提取工艺。

本发明提供一种从鹅胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法，具体步骤如下：

1)皂化：向鹅胆汁中加入重量比为6%~8%的氢氧化钠固体，在90~95℃下水浴加热10~15h；

2)钙沉：向皂化液中加入胆汁重量8%~10%的氯化钙固体，离心得到总胆酸钙盐沉淀，收集沉淀后加入3倍量水搅拌50-60min，离心收集上清液;

3)粗体：用盐酸将上清液pH调至3.0~4.0，得沉淀，离心收集沉淀得到鹅去氧胆酸粗品。

4)纯化：鹅去氧胆酸粗品与氢氧化钠按1:1的比例在25倍水中加热溶解配成鹅去氧胆酸提取液，提取液注入装有大孔树脂的层析柱中，使用40~60%的乙醇溶液洗脱至流出液为无色透明，再使用提取液重量4~6倍的1~5%氢氧化钠溶液洗脱，收集洗脱液，洗脱液使用盐酸调pH至3.0~4.0，离心得到鹅去氧胆酸。

产品纯度采用高效液相（HPLC）色谱法测定，面积归一化法，纯度为95%（见图2）。HPLC条件：色谱柱：C₁₈，流动相：甲醇：0.5%醋酸=80∶20；检测波长：250nm；流速：0.8mL/min。产品核磁共振氢谱（见图3），核磁共振碳谱（见图4），红外吸收图（见图5）。

本发明具有以下优点

1)扩大了鹅去氧胆酸原料的来源，提供了一种从鹅胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法。

2)传统方法从动物胆汁中提取鹅去氧胆酸存在纯化过程使用乙酸乙酯这类有机试剂的缺点，并且提取出的鹅去氧胆酸含量较低，只有70%左右，利用本发明的方法成功的移除了使用乙酸乙酯纯化的步骤，并且提取的鹅去氧胆酸经过HPLC检测纯度达95%，达到了重复性高、节约成本、保护环境的目的。

3)其他使用大孔树脂提取鹅去氧胆酸的方法是将胆汁皂化之后直接使用大孔树脂分离鹅去氧胆酸然后使用超滤方法去除杂质，存在大孔树脂分离效果差、操作复杂、鹅去氧胆酸损失较多的缺点，本发明的方法将鹅胆汁先经过皂化与钙沉的步骤，利用鹅去氧胆酸钙盐在中性条件下溶于水而其他胆酸钙盐不溶于水的特性，将鹅去氧胆酸与胆汁中其他胆酸分开，再使用大孔树脂纯化，从而大大改善了分离纯化的效果，具有可重复性强、操作简便、回收率高的优点。

附图说明

图1为鹅去氧胆酸标品HPLC图。

图2为鹅去氧胆酸样品HPLC图。

图3为鹅去氧胆酸样品核磁共振氢谱图。

图4为鹅去氧胆酸样品核磁共振碳谱图。

图5为鹅去氧胆酸样品红外吸收图。

具体实施方式

以下实例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围

实施例1

鹅胆汁制备鹅去氧胆酸粗品

取鹅胆汁200g(体积为200mL)置于烧杯中，加入胆汁重量6%的氯化钠固体，在90℃下加热10h进行皂化，冷却后加入胆汁重量8%的氯化钙固体后得到沉淀，使用离心分离收集沉淀，用3倍沉淀体积的蒸馏水溶解沉淀，搅拌50min后使用离心分离收集上清液，使用盐酸调pH至3.0得到沉淀，使用离心分离收集沉淀，沉淀干燥后得到土黄色鹅去氧胆酸固体5.32g。

实施例2

鹅胆汁制备鹅去氧胆酸粗品

取鹅胆汁500g(体积为500mL)置于烧杯中，加入胆汁重量8%的氯化钠固体，在95℃下加热15h进行皂化，冷却后加入胆汁重量10%的氯化钙固体后得到沉淀，使用离心分离收集沉淀，用3倍沉淀体积的蒸馏水溶解沉淀，搅拌60min后使用离心分离收集上清液，使用盐酸调pH至4.0得到沉淀，使用离心分离收集沉淀，沉淀干燥后得到土黄色鹅去氧胆酸固体12.03g。

实施例3

鹅去氧胆酸的纯化

取实施例1或2中所得的鹅去氧胆酸粗品与氢氧化钠按1:1的比例在25倍水中加热溶解配成鹅去氧胆酸提取液，提取液注入装有711型大孔树脂的层析柱中，使用40%的乙醇溶液洗脱至流出液为无色透明，再使用提取液重量4倍的5%氢氧化钠溶液洗脱，收集洗脱液，洗脱液使用盐酸调pH至3.0，离心得到鹅去氧胆酸，干燥，鹅去氧胆酸收率为1.32%，纯度为95%（见图1）。

实施例4

鹅去氧胆酸的纯化

取实施例1或2中所得的鹅去氧胆酸粗品与氢氧化钠按1:1的比例在25倍水中加热溶解配成鹅去氧胆酸提取液，提取液注入装有717型大孔树脂的层析柱中，使用50%的乙醇溶液洗脱至流出液为无色透明，再使用提取液重量6倍的1%氢氧化钠溶液洗脱，收集洗脱液，洗脱液使用盐酸调pH至4.0，离心得到鹅去氧胆酸，干燥，鹅去氧胆酸收率为1.21%，纯度为95.2%。

实施例5

鹅去氧胆酸的纯化

取实施例1或2中所得的鹅去氧胆酸粗品与氢氧化钠按1:1的比例在25倍水中加热溶解配成鹅去氧胆酸提取液，提取液注入装有D201型大孔树脂的层析柱中，使用60%的乙醇溶液洗脱至流出液为无色透明，再使用提取液重量5倍的3%氢氧化钠溶液洗脱，收集洗脱液，洗脱液使用盐酸调pH至3.0，离心得到鹅去氧胆酸，干燥，鹅去氧胆酸收率为1.44%，纯度为95.4%。

Claims

1.一种从鹅胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法，具体操作步骤如下

1）皂化：向鹅胆汁中加入重量比为6%~8%的氢氧化钠固体，在90~95℃下水浴加热15~20h；

2）钙沉：向皂化液中加入胆汁重量8%~10%的氯化钙固体，离心得到总胆酸钙盐沉淀，收集沉淀后加入3倍量水搅拌50-60min，离心收集上清液；

3）粗提：用盐酸将上清液pH调至3.0~4.0，得沉淀，离心收集沉淀得到鹅去氧胆酸粗品；

4）纯化：鹅去氧胆酸粗品与氢氧化钠按1:1的比例在25倍水中加热溶解配成鹅去氧胆酸提取液，提取液注入装有大孔树脂的层析柱中，使用40~60%的乙醇溶液洗脱至流出液为无色透明，再使用提取液重量4~6倍的1~5%氢氧化钠溶液洗脱，收集洗脱液，洗脱液使用盐酸调pH至3.0~4.0，离心得到鹅去氧胆酸。

2.根据权利要求1所述的一种从鹅胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法，其特征在于：所述步骤4）纯化步骤中，所述大孔树脂为：碱性大孔树脂。

3.根据权利要求2所述的一种从鹅胆汁中分离提纯鹅去氧胆酸的方法，其特征在于：所述步骤4）纯化步骤中，所述碱性大孔树脂为：711型、717型、D201型。