CN1528779A

CN1528779A - 一种鹅去氧胆酸的制备方法

Info

Publication number: CN1528779A
Application number: CNA031514758A
Authority: CN
Inventors: 曹学君
Original assignee: East China University of Science and Technology
Current assignee: East China University of Science and Technology
Priority date: 2003-09-29
Filing date: 2003-09-29
Publication date: 2004-09-15
Anticipated expiration: 2023-09-29
Also published as: CN1283654C

Abstract

本发明涉及从家禽及动物胆汁中提取纯化鹅去氧胆酸的工业化制备方法。其过程包括通过碱液皂化胆汁、制备总胆汁酸的钙盐沉淀、双氧水及活性碳脱色、碳酸钠及盐酸转化鹅去氧胆酸钙盐沉淀及大孔吸附树脂纯化等步骤。整个工艺具有环境友好，安全无毒，低成本，易于大规模操作的优点。

Description

一种鹅去氧胆酸的制备方法

技术领域

本发明涉及一种鹅去氧胆酸(3α，7α-二羟基-5β-胆甾烷酸)的制备方法，尤其涉及一种从家禽或动物的胆汁中提取鹅去氧胆酸的方法。

背景技术

鹅去氧胆酸(3α，7α-二羟基-5β-胆甾烷酸)Chenodeoxycholic Acid(简称CDCA)，是一种治疗胆结石的药物。1848年首次发现在鹅胆汁中，1924年定名为鹅去氧胆酸。其通过减少胆固醇吸收、合成，使胆汁内胆固醇下降，从而阻抑胆固醇结石形成和促其溶解，并且能有效降低胆固醇饱和度。

鹅去氧胆酸除本身的药用外，还可作为制取熊去氧胆酸(3α，7β-二羟基-5β-胆烷酸，简称UDCA)的原料。熊去氧胆酸是名贵中药熊胆所含的主要有效成分，在临床上用于治疗各种胆疾及消化道疾病。但是中药熊胆来源有限，而且有违于动物保护原则。所以，天然熊胆的来源日趋减少，不能满足医疗要求。因此，制备鹅去氧胆酸对于进一步制备熊去氧胆酸也具有重要的意义。

CDCA主要由家禽的胆汁或动物胆汁中提取，过去的提取方法由于涉及有毒化学品(动物生化制药学，1981，人民卫生出版社，P259；医药工业，1987，18(2)：75-76；)或使用大量不安全有机溶剂(中国生化药物杂志，1996，17(1)：17；应用技术，1998，4：9-10；US Patent，3,965,131；US Patent，4,331,607；USPatent，4,163,017)，不能适应现代工业的要求，而且制备的CDCA纯度低，成本高。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺陷，采用安全无毒、简单实用的方法，得到纯度较高的鹅去氧胆酸，本发明提供了一种可用于大规模制备高纯度鹅去氧胆酸的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

以家禽胆汁为例，本发明的制备方法包括以下步骤：

(1)总胆汁酸的钙盐制备

取新鲜或冷冻鸭胆汁或其它家禽胆汁，按其体积以1-3mol/L在胆汁中加入工业氢氧化钠，加热煮沸3-24小时，进行皂化，按胆汁体积12-20％加入CaCl₂搅拌30-60分钟，离心过滤，收集沉淀。

(2)脱色与沉淀转化

将滤饼悬浮于3-10量倍量的水中，加入双氧水使浓度达到混悬液体积的0.1-2％，然后按胆汁重量的6-12％加入碳酸钠固体，使沉淀转化，过滤，收集滤液；滤饼用少量水洗涤，合并滤液与洗涤液，加盐酸至pH1-5之间，搅拌30分钟，放置，充分沉淀，离心过滤，收集滤饼，即得粗制鹅去氧胆酸。将粗品按湿重加3-10倍水混悬，用NaOH调至固体物溶解，按粗品湿重的1∶0.1-0.5加入无水氯化钙使之形成钙盐沉淀，过滤，将其沉淀悬于3-10倍体积的1-6mol/LHCl中，使钙盐沉淀转化为游离的CDCA。

(3)大孔吸附剂层析纯化

将前述制得的初步纯化的CDCA粗品按1∶4-1∶8的比例，用95％(V/V^-)酒精溶解，调整酒精浓度至30-50％，上经相同浓度酒精平衡的过大孔吸附树脂(所用大孔吸附树脂是指具有苯乙烯-二乙烯苯，丙烯酸-甲基丙烯酸酯型结构的各型树脂)，流速按层析柱液体流动线性速度1.0-5.0cm/分控制，接着用2-5倍柱体积的50％酒精溶液洗涤，继之用60％乙醇洗脱，其间不断用薄层层析检测，待出现外观纯一的CDCA斑点时开始收集洗脱液直至完毕。将经薄层检定外观为CDCA纯点的洗脱液合并，加0.1-1％活性碳脱色后，于真空下蒸发回收酒精，得到无定型CDCA结晶，将此无定型结晶置60-80℃水浴中培育24小时，取出后置于60℃真空干燥16-20小时，可得到纯度为95％左右，熔点在120-140℃ CDCA结晶。该结晶可使用公知的方法，进一步制备熔点在160-170℃的CDCA结晶(USPatent，4,213,911；US Patent，4,022,806；US Patent.4,163,017)。

对于动物胆汁，将胆红素提取后的残渣，按湿重1∶4加水悬浮，照家禽胆汁相同的方法进行皂化，其后的步聚完全相同。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本方法作进一步说明。

实施例1：

取新鲜或冷冻鸭胆汁，鹅胆汁或其它家禽胆汁，按其体积加入工业氢氧化钠至2mol/L，加热煮沸5小时，进行皂化，按胆汁体积15％加入CaCl₂搅拌30钟，离心过滤，收集沉淀。

将滤饼悬浮于8量倍量的水中，加入双氧水使浓度达到混悬液体积的1％，然后按胆汁重量的10％加入碳酸钠固体，使沉淀转化，过滤，收集滤液，滤饼用少量水洗涤，合并滤液与洗涤液，加盐酸至pH3，搅拌30分钟，放置，充分沉淀，离心，收集滤饼，即得粗制鹅去氧胆酸。将粗品按湿重加5倍水混悬，用NaOH调至固体物溶解，按粗品湿重的1∶0.4加入无水氯化钙使形成钙盐沉淀，过滤，将沉淀悬于8倍体积的2 mol/L HCl中，使钙盐沉淀转化为游离的CDCA。

将前述制得的初步纯化的CDCA粗品按1∶8用95％(V/V)酒精溶解，调整酒精浓度至40％，上经相同浓度酒精平衡的过大孔吸附树脂，流速按层析柱液体流动线性速度1.0cm/分控制，接着用2-5倍柱体积的50％酒精溶液洗涤，继之用60％乙醇洗脱，其间不断用薄层层析检测，待出现外观纯一的CDCA斑点时开始收集洗脱液直至完毕。将经薄层检定外观为CDCA纯点的洗脱液合并，加1％活性碳脱色后，于真空下蒸发回收酒精，得到无定型CDCA结晶，纯度为95％左右，熔点在120-140℃。

实施例2

取猪牛羊动物胆汁，按胆红素提取方法提取胆红素，将胆红素提取后的残渣，按湿重1∶4加水悬浮，照家禽胆汁相同的方法进行皂化，其后的步聚完全相同。可得到纯度为93％左右的鹅去氧胆酸。

Claims

1、一种鹅去氧胆酸(3α，7α-二羟基-5β-胆甾烷酸)的制备方法，其特征是，所用的胆汁为家禽胆汁或动物来源的胆汁，包括以下步骤：(1)总胆汁酸的钙盐制备：按胆汁体积以加入1-3mol/L的比例加入工业氢氧化钠，加热煮沸3-24小时，皂化结束后按胆汁体积12-20％加入CaCl₂；(2)脱色与沉淀转化：将钙盐滤饼悬浮于3-10倍量的水中，加入工业双氧水使浓度达到混悬液体积的0.1-2％进行脱色，然后按胆汁重量的6-12％加入碳酸钠固体，使之沉淀转化；将CDCA粗品加水混悬，用NaOH调至固体物溶解，按粗品湿重的1∶0.1-0.5加入无水氯化钙使形成钙盐沉淀，将CDCA钙盐沉淀悬于1-6mol/L HCl中，使钙盐沉淀转化为游离的CDCA；(3)大孔吸附剂层析纯化：将初步纯化的CDCA的粗品用酒精溶解，调整酒精浓度至30-50％，上大孔吸附树脂层析柱，用50％酒精溶液洗涤，继之用60％乙醇洗脱；用薄层层析检测外观纯一的CDCA斑点，将经薄层检定为外观CDCA纯点的洗脱液合并，获得纯度为95％CDCA；

2、如权利要求1所述的制备方法，其特征是，在总胆汁酸的钙盐制备中，按所用胆汁体积加入工业氢氧化钠至2mol/L，加热煮沸5小时，进行皂化，按胆汁体积15％加入CaCl₂搅拌30钟，离心过滤，收集沉淀。

3、如权利要求1所述的制备方法，其特征是，在脱色与沉淀转化步骤中，将滤饼悬浮于8量倍量的水中，加入双氧水使浓度达到混悬液体积的1％，然后按胆汁重量的10％加入碳酸钠固体进行脱色；将粗品按湿重加5倍水混悬，用NaOH调至固体物溶解，按粗品湿重的1∶0.4加入无水氯化钙使形成钙盐沉淀，过滤，将沉淀悬于8倍体积的2mol/L HCl中，使钙盐沉淀转化为游离的CDCA。

4、如权利要求1所述的制备方法，其特征是，在大孔吸附剂层析纯化步骤中，将初步纯化的CDCA粗品按1∶8比例用95％(V/V)酒精溶解，调整酒精浓度至40％。

5、如权利要求1所述的制备方法，其特征是，所用大孔吸附树脂是指具有苯乙烯-二乙烯苯，丙烯酸-甲基丙烯酸酯型结构的各型树脂。