KR100486146B1

KR100486146B1 - 치료용시스플라틴(cddp)를위한방법및조성물

Info

Publication number: KR100486146B1
Application number: KR10-1998-0703159A
Authority: KR
Inventors: 캐슬린 브이. 로스코스; 리챠드 이. 조운즈; 리챠드 마스키에비츠
Original assignee: 매트릭스 파마슈티칼, 인코포레이티드
Priority date: 1995-10-30
Filing date: 1996-10-29
Publication date: 2005-08-05
Also published as: WO1997016196A1; EP0861084A4; DE69621942T2; US6077545A; DK0861084T3; US6224883B1; PT861084E; JPH11514650A; EP0861084A1; KR20000064302A; ATE219370T1; ES2177817T3; AU7682096A; DE69621942D1; EP0861084B1; AU722687B2

Abstract

본 발명은 동결건조된 분말로부터 시스플라틴 현탁액을 제조하기 위한 개선되 희석제에 관한 것이다. 희석제는 약제학적으로 허용될 수 있는 비이온성 계면활성제를 함유하여, 치료용 제형의 정밀성 및 균일성을 개선시킨다. 현탁액은 직접 사용될 수 있거나, 종양 병변 또는 주변 조직 내로의 직접 주입을 위한 젤 제형을 제조하는 데에 사용될 수 있다.

Description

치료용 시스플라틴(ＣＤＤＰ)를 위한 방법 및 조성물 {IMPROVED PROCESS AND COMPOSITION FOR THERAPEUTIC CISPLATIN}

본 발명은 주사용 시스플라틴(시스-디암민디클로로플라티눔, CDDP) 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.

종래 기술의 설명

시스플라틴(시스-디암민디클로로플라티눔, CDDP)은 다년간 암의 화학요법에 사용되어 온 항종양제이다. 이것은 환약 주입으로서 또는 많은 시간에 걸친 주입을 통해, 수용액으로서 정맥내 투여되는 것이 전형적이다. 이것은 수용액 내로의 재구성을 위한 동결건조된 분말, 또는 바로 사용할 수 있는 수용액 둘 모두로서 시판되어 왔다. 정맥내 전달은 수용액, 또는 일부 경우에는, 액체 에멀젼 또는 리포좀계를 필요로 하는 것이 전형적이며, 여기에서 맥관 및 모세관을 폐색시킬 수 있는 고형 미립자를 함유하지 않아야 한다. 이러한 정맥내 주사 용액 중의 CDDP의 농도는 CDDP의 수중 용해도에 의해 1㎎/㎖ 정도로 제한된다.

시스플라틴은 또한, 간동맥 내로의 주사를 통해 간에 투여하는 것과 같이, 국소 전달을 위한 다양한 형태로 투여되어 왔다. 이들 경우에, 약제는 상기 용액 또는 에멀젼 형태로 투여될 수 있다 [참조예 : Campbell et al. (1983) J. Clin. Oncol. 1:755-762]. 약제는 또한, 표적 기관에서 색전증을 야기시키게 되는 물질과 함께 투여되어, 상기 기관을 통한 혈류를 차단하여 표적 기관으로부터의 CDDP의 제거를 억제할 수 있다. 이들 경우에, 시스플라틴은 수용액으로 투여되는 것이 전형적이지만, 또한 요오드화 오일(리피디올; [참조예 : Araki et al. (1989) Gastrointest. Radiol. 14:46-48 or Feun et al. (1994) Am. J. Clin. Oncol. 17:405-410]) 또는 폴리비닐 알코올 입자[Mavligit et al. (1993) Cancer 72:375-380]과 같은 다른 비수성 물질과 배합될 수 있다. 불행히도, 이러한 방법은 종종, 간의 정상 부분에 대한 혈류의 차단으로 인한 환자에 대한 상당한 독성 및 치사율과 관련된다.

고형 종양에 대한 시스플라틴의 전달에 대한 또다른 방법은 직접 병변내 주입을 수반한다. 단순 시스플라틴 수용액이 단순 오일/수중 에멀젼 및 수서 콜라겐 겔을 가짐에 따라 이러한 사용을 위해 보고되었다. 이들 시스템으로 달성될 수 있는 시스플라틴의 투여량은 상기와 같이, 시스플라틴의 수중 용해도(약 1.2㎎/㎖) 및 표적 조직에 성공적으로 투여될 수 있는 용액의 부피에 의해 제한된다. 더 높은 투여량은 향상된 치료적 효과를 발생시킬 수 있지만, 용액보다는 약제의 현탁액의 사용을 필요로 한다.

종양 조직, 또는 혈류와는 다른 조직 내로의 직접 주입을 위해, 주입 자리 또는 그 근처에서의 보다 높은 약제 로딩 및 개선된 약제 효율을 제공하기 위해 보다 높은 농도의 약제가 상당히 유익하고 바람직할 수 있다. 혈류 내로 투여되지 않기 때문에, 미립자의 존재는 배제되지 않는다. 용액보다는 현탁액으로 시스플라틴 분말을 재구성하는 것이 점점 관심을 끌고 있다.

미합중국 특허 재발행 번호 33,375는 동결건조된 CDDP의 바이알을 먼저 약제의 농축된 현탁액 내로의 주입을 위해 물로 재구성하는 일례를 제공한다. 소량의 에피네프린 용액이 임의적으로 시스플라틴 용액에 첨가된 후, 현탁액의 일부가 바이알로부터 배출되고(주사기 및 바늘을 통해), 콜라겐 겔과 혼합되어, 바로 투여할 수 있는 최종 겔 제조물(시스플라틴의 현탁액 함유)을 수득할 수 있다.

문헌[Theon et al. (1993) J. Am. Vet. Med. Assoc. 202:261-267]에는, 동결건조된 CDDP를 물로 재구성하여 약제의 농축된 현탁액을 생성시킨 후, 참기름과 혼합시켜서 말의 종양 내로 직접 후속적으로 주입되는 유중수 에멀젼을 생성시키는 또다른 예가 제공되어 있다.

상기 방식으로 현탁액에 대한 동결건조된 CDDP를 물만으로 재구성하면, 비교적 큰 입자의 약제가 신속하게 침전되어, 불균일 현탁액을 생성시킨다. 이로 인해, 또한, 이론적 목표값 미만의 CDDP 함량을 갖고 최종 겔의 명목상으로 동일한 주사기들 사이의 상당한 가변성을 나타내는 CDDP 제조물이 생성된다. 따라서, 가변성을 감소시키고 현탁액 재구성 동안 회수율을 개선시키는 방법이 중요하다.

관계 문헌

화학요법용 약제의 전달을 위한 콜라겐 기재 겔의 사용이 미합중국 특허 재발행 번호 33,375에 기술되어 있다.

문헌[Araki et al. (1989) Gastrointest. Radiol. 14:46-48]에는 동맥 교차 화학적 색적증에 대한 리피오돌(등록상표)의 비수성 현탁액이 기술되어 있다. 문헌[Landrito et al. (1994) Cancer Chem. and Pharm. 34:323-330]에는 우로그라핀 및 리피오돌(등록상표) 중에 용해된 시스플라틴의 병변내 주입의 효과가 기술되어 있다. 문헌[Ichida et al. (1992) Cancer Chem. Pharm. 31:S51-S54]에는 CDDP-에피루비신-리피오돌(등록상표)에 의한 간세포 암종의 치료가 기술되어 있다.

문헌[Nagase et al. (1987) Cancer Treatment Reports 71:825-829]에는 시스플라틴의 병변내 투여 대 복강내 투여의 효과가 기술되어 있다. 문헌[Theon et al. (1993) JAVMA 202:261-267]에는 시스플라틴의 유성 에멀젼에 의한 종양내 화학요법이 기술되어 있다.

문헌[Sternlicht et al. (1989) Radiology 170:1073-1075]에서는 지혈제, 겔포움 및 에티오돌에 의한 직장 시스플라틴 화학요법이 연구되었다. 문헌[Yodono et al. (1989) Cancer Chem. and Pharm. 23:S42-S44]에는 간세포 암종에 대한 조합된 화학적 색전증 치료가 기술되어 있다. 문헌[Verrijk et al. (1992) Cancer Res. 52:6653-6656]에는, 폴리-락티드-코-글리콜리드 중의 캡슐화에 의한 시스플라틴의 전신 노출 및 독성의 감소가 기술되어 있다.

발명의 요약

CDDP 분말의 재구성을 위한 수성 재구성 비히클 중에 약제학적으로 허용될 수 있는 비이온성 계면활성제를 포함시키면 소립 현탁액이 제공된다. 상기 현탁액의 샘플링 및 주사용 제형은 주사를 위해 물만을 사용하는 경우보다 더 정확하게, 더 큰 회수율 및 더 적은 가변성으로 달성된다.

동결건조된 분말로부터 CDDP 현탁액을 제조하기 위한 개선된 희석제가 제공된다. 희석제는 현탁액이 특히 종양 병변 또는 주변 조직 내로의 직접 주입을 위한 겔 제형에서 약제의 용액보다 바람직한 경우에 유용하다. 약제학적으로 허용될 수 있는 비이온성 계면활성제를 포함하면, 치료용 제형의 효율 및 균일성이 개선된다.

주입용 제형의 제조를 위해 균일한 안정한 현탁액을 갖는 것이 바람직하며, 그 이유는 이것이 주입용 제형 중의 약제의 보다 높은 농도를 달성하여, 보다 많은 양의 약제를 전달하면서 주입 부피를 제한하기 때문이다. CDDP의 수중 용해도는 약 1㎎/㎖이다. 본 발명의 현탁액 중의 CDDP의 농도는 일반적으로 약 2㎎/㎖보다 높고, 더욱 일반적으로는 약 3.5㎎/㎖보다 높으며, 일반적으로 약 20㎎/㎖ 미만이고, 더욱 일반적으로는 약 8㎎/㎖ 미만일 것이다. CDDP의 현탁액은 또한 일정 기간에 걸쳐 주입 자리에서 약제를 방출시킨다. 약제는 입자가 용액이 됨에 따라 생체활성이 된다.

동결건조된 CDDP는 현탁액보다는 용액으로 재구성되게 된다. 이러한 용액 재구성을 위한 표준 비히클은 주사용 물(WFI)이다. 그러나, 이러한 비히클이 동결건조된 CDDP를 용액으로 재구성되는 경우, 개별적 입자 또는 결정의 미세 분산액보다는 CDDP 결정 또는 입자의 큰 응집체가 생성된다. 이러한 응집체는 신속하게 침전되어, 불균일 물질을 생성한다. 따라서, 바이알로부터의 CDDP의 회수는 불완전하고, 현탁액 제거를 위해 사용되는 니들에 접근하기 어려운 바이알 부분 내로 전테 현탁된 투여량이 얼마나 많이 침전되는 가에 의존하여 변할 수 있다.

큰 입자보다는 작은 입자가 바람직하다. 작은 입자는 치료용 제형에 골고루 더욱 균일하게 분산되어, 더욱 정확하고 정밀한 농도를 갖는 최종 현탁액을 제공한다. 작은 입자는 덜 신속하게 침전되고, 균일한 분산액으로서 더욱 쉽게 유지된다. 이로 인해, 제조 및 투여 동안 약제 투여량의 전달이 더욱 정확하고 정밀해진다. 작은 입자의 더 큰 표면 대 부피비는 또한 더 고도의 용해율을 제공하여, 약제가 생물학적 활성이 되는 속도를 증가시킨다.

CDDP의 수성 현탁액은 병변내 주입을 위해 특히 유용하다. 생리학적으로 허용되는 수성 매질 중에 분산된 생리학적으로 허용되는 겔 매트릭스, 예를 들어 콜라겐, 피브리노겐 또는 이들의 유도체 및 조합물 중의 실질적으로 균일한 분산액을 사용함으로써, 고형 종양, 또는 종양 세포를 함유할 수 있는 인접 조직의 치료에서 부가적 잇점이 얻어진다. 겔은 신생물 병변, 예를 들어 종양, 또는 병변 부위, 예를 들어 주변 조직, 또는 종양 덩어리가 제거된 위치에서, 이미 제거된 종양에 인접한 조직 및/또는 종양의 제거 후에 잔류하는 공동 내의 조직 내로 주입된다. 겔은 주입을 위해 유동성이지만, 조직 내로 주입되면 약제의 안정한 위치선정 및 보유를 제공한다. 주입 후에, 약제는 중간 환경으로 방출되면서, 약제의 순환 혈액 수준을 낮게 유지시킨다. 향상된 치료적 잇점은 민감성 정상 세포와 비교하여 악성 세포의 자리에서 더 고농도의 CDDP를 가짐으로써 달성된다. 일부 경우에는, 수성 CDDP 현탁액 또는 겔을 근내 또는 복강내 주입하는 것이 또한 바람직할 수 있다.

동결건조된 CDDP의 재현탁에 도움을 주기 위한 약제학적으로 허용될 수 있는 계면활성제의 사용은 균일한 작은 입자 현탁액을 제공한다. 적합한 비이온성 계면활성제로는, 폴리소르베이트, 소르비탄 에스테르, 폴록사머, 폴리에톡실화 알코올, 에를 들어 Brij(등록상표), 폴리에톡실화 지방산 에스테르, 예를 들어 Myrj(등록상표) 등이 있다. 폴리소르베이트, 예를 들어 폴리소르베이트 20 및 폴리소르베이트 80이 특히 중요하다. 폴리소르베이트는 신속하게 침전되는 큰 입자로서 응집되어 잔류하는 CDDP 결정 클러스터를 분산시키는 데에 도움을 준다. 계면활성제는 약 0.01 %(중량/부피) 초과, 일반적으로 약 0.05% 초과, 더욱 일반적으로 약 0.1% 초과, 및 일반적으로 0.75% 미만, 더욱 일반적으로 0.25% 미만의 농도에서 수성 희석제 중에 존재하는 것이 일반적일 것이다.

최종 치료용 제형은 임의적으로, 주입된 투여량의 국소적 보유를 증가시키고 따라서 항종양 효율을 증가시키는 것으로 입증된 에피네프린을 포함할 것이다. 희석제 내로의 에피네프린의 포함은 제형 제조를 단순화시키는 데에 잇점을 준다. 에피네프린은 약 0.01㎎/㎖ 초과, 더욱 일반적으로는 약 0.05㎎/㎖ 초과, 및 일반적으로 약 0.5㎎/㎖ 미만, 더욱 일반적으로는 약 0.25㎎/㎖ 미만의 농도로 희석제 중에 존재하는 것이 일반적일 것이다.

에피네프린이 포함되는 경우, 희석제의 조성물을 제형화시켜서 에피네프린 안정성을 최대화시키는 것이 바람직하다. 희석제 중에 약 0.01㎎/㎖ 초과 및 약 0.5㎎/㎖ 미만, 더욱 일반적으로는 약 0.1㎎/㎖의 농도의 EDTA, 및 약 0.02㎎/㎖ 초과 및 약 0.5㎎/㎖ 미만, 더욱 일반적으로는 약 0.2㎎/㎖의 농도의 나트륨 메타비설파이트를 포함시키면, 에피네프린의 안정한 용액이 제공된다. 임의적으로, 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨이 또한 약 0.01%(중량/부피) 초과, 일반적으로 약 0.05% 초과, 및 일반적으로 0.5% 미만, 더욱 일반적으로 0.25% 미만의 농도로 포함되어 현탁액 안정성을 향상시킬 수 있다.

희석제는 약제학적으로 허용될 수 있는 완충계로 완충되어, 산성 pH, 일반적으로 약 2 초과 및 약 5 미만의 pH, 더욱 일반적으로 약 pH 4를 달성시킬 수 있다. 완충제 쌍, 특히 아세트산-아세트산 나트륨, 숙신산-숙신산 나트륨 및 시트르산-시트르산 나트륨과 같은 카르복실산 및 이들의 염이 사용될 수 있다. 희석제 중의 완충제 쌍의 조합된 농도는 일반적으로 약 5mM 초과 및 약 50mM 미만, 더욱 일반적으로는 약 10mM일 것이다.

동결건조된 CDDP는 완충제로 재구성되어, 안정한 현탁액을 형성시킨다. CDDP 현탁액을 겔로 제형화시키려는 경우, 이것은 겔화제, 예를 들어 콜라겐과 혼합되어, 미합중국 특허 재발행 번호 33,375에 제공된 바와 같이 비정질 겔을 형성시킨다. 사용되는 콜라겐은 천연 콜라겐이거나, 트로포콜라겐, 아트로포콜라겐 등과 같은 변형된 콜라겐일 수 있다. 콜라겐은 비면역원성, 면역원성 또는 약간 면역원성일 수 있다. 콜라겐 또는 이것의 유도체를 포유동물 숙주에 투여하기 위한 정제된 형태로 제조하기 위한 다양한 방법은 관련 문헌에 기술되어 있다. 정제는 다양한 매질로부터의 분산 또는 침전을 수반하는 것이 일반적일 것이다. 편리하게는, 소 또는 돼지 콜라겐이 쉽게 이용될 수 있다. 콜라겐은 약 1%(중량/부피) 초과, 더욱 일반적으로는 약 2% 초과 및 일반적으로 약 8% 미만의 농도의 수성 겔 형태로 존재하는 것이 일반적일 것이다.

본 발명의 조성물은 종양에 투여되어, 종양 자리에서 세포독성량의 약제를 제공할 것이다. 종양의 다양성, 종양의 성질, 약제의 유효 농도, 상대적 이동성 등의 관점에서, 정의된 범위는 특정화될 수 없다. 각각의 종양에서, 실험은 최적 수준을 제공할 것이다. 종양 자리에서의 약제의 수명 및 약제에 대한 종양의 반응에 따라, 1회 이상의 투여가 사용될 수 있다. 투여는 주사기, 카테테르 또는 종양 내로의 유동성 조성물의 도입을 위한 다른 편리한 수단에 의해 이루어질 수 있다. 투여는 매 3일마다, 매주, 또는 2주마다 또는 매월 간격과 같이 덜 종종 이루어질 수 있다. 계면활성제의 %는 세포독성 활성에 악영향을 주지 않는다.

본 발명의 방법은 임상적으로 관련된 종양 또는 병변에 특정 장점이 있다. 조성물은 부피가 100㎣보다 크고, 더욱 구체적으로는 150㎣보다 큰 종양에 대해 치료적 잇점을 제공한다. 종양의 예로는, 기초 세포 암종과 같은 암종, 육종 및 흑색종, 편평상피 세포 암종, 흑색종, 연조직 육종, 일광 각화증, 카포시 육종, 피부 악성 림프종, 보웬병, 윌름 종양, 간종양, 머리-목 암, 고환 및 난소암, 방광암, 결장직장암, 뇌종양, 균상식육종, 호지킨 림프종, 진성 적혈구 증가증, 림프종, 귀리세포 흑색종 등이 있다.

임상 실험실의 필요성을 다루기 위해, 본 발명을 수행하기 위해 필요한 시약 및 장치를 갖는 킷이 제공될 수 있다. 이러한 킷은 동결건조된 CDDP의 바이알, CDDP 재현탁액용 희석제, 콜라겐 겔, 및 혼합 및 투여용 주사기를 포함할 수 있다. 희석제 중에는 에피네프린이 포함될 수 있다.

하기의 실시예는 본 발명을 예시하기 위해 제공되며, 본 발명을 제한하지는 않는다.

실시예

실시예 1

WFI 또는 통상적 희석제를 갖는 CDDP 현탁액의 제조

카르복시메틸셀룰로오스 나트륨의 존재하에서만 상이한 2가지의 통상적 희석제를 제형화시켰다. 조성은 하기와 같다 :

통상적 희석제 희석제 A 희석제 B ㎖당 ㎖당
에피네프린, USP	0.160㎎^*	0.160㎎^*
폴리소르베이트 80, NF	1.00㎎	1.00㎎
에테테이트 이나트륨(이수화물), USP	0.10㎎	0.10㎎
카르복시메틸셀룰로오스 나트륨, USP	-	0.50㎎
나트륨 메타비설파이트, NF	0.20㎎	0.20㎎
빙초산, USP	0.49㎎	0.49㎎
아세트산 나트륨 무수물, USP	0.15㎎	0.15㎎
WFI, USP	1.00㎖가 될 때까지의 양	1.00㎖가 될 때까지의양
필요한 경우, HCl 및/또는 NaOH를 첨가하여 pH를 4.0으로 조절함 * 5% 과량을 포함함

희석제의 제조

에피네프린을 제외한 상기 언급된 성분들을 모두 적합한 부피의 주입용 물 중에 용해시킴으로써, 0.152㎎/㎖(및 5% 과량)의 명목상 에피네프린 농도로 희석제를 제조하였다. 용액에 30분 동안 질소를 살포하고, 필요한 양의 에피네프린을 첨가하고, 혼합물을 에피네프린이 용해될 때까지 질소 블랭킷 하에 교반시켰다. 필요한 경우, pH를 조절하고, 추가의 WFI를 첨가하여 바람직한 최종 부피를 만들었다. 용액에 추가로 30분 동안 질소를 살포한 후, 0.22 미크론 필터를 통해 살균 여과시켰다. 여과된 용액을 5㎖ 바이알로 충전시키고, 바이알 헤드스페이스를 질소로 세척하고, 바이알을 막고 크림핑시켰다.

상기 연구에 사용되는 다른 물질은 하기와 같다. 주입용 시스플라틴, USP(플라티놀(Platinol)(등록상표), 10㎎ 바이알)은 브리스톨 래버러토리스(Bristol Laboratories)에 의해 제조되는 시판 제품이다. 대안적으로, 폴딩(Faulding)에 의해 제조된 동결건조된 CDDP(데이비드 불 래버러토리스(David Bull Laboratories), 오스트레일리아)가 사용된다. 1㎖ 플라스틱 주사기 중의 명목상 0.3㎖ 충전물인 수성 콜라겐 겔 6.5%를 콜라겐 코포레이션(Collagen Corporation)(캘리포니아, 팔로 알토)로부터 입수하였다. 겔은 고정제 텔로펩티드 비함유 소 타입 I 콜라겐 6.5%(w/w); 인산 나트륨 0.100 M 및 염화 나트륨 0.045 M을 포함하고, 명목상 pH가 7.2이다. 에피네프린 용액(1㎎/㎖), 30㎖ 바이알을 입수하였다 [아드레날린(Adrenalin)(등록상표) 염화물 용액, 파르케-데이비스(Parke-Davis)]. 폴리소르베이트 80을 PPG 인더스트리즈로부터 입수하였다. 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨(NaCMC)를 아쿠알론(Aqualon)으로부터 입수하였다. 0.9% 염화 나트륨 주사액, USP(10㎖ 바이알)는 애보트 코포레이션(Abbott Corporation)의 제품이다. 주입용 살균수, USP(10㎖ 바이알)는 애보트 코포레이션의 제품이다.

동결건조된 CDDP의 재구성

10㎎ 또는 25㎎의 동결건조된 CDDP를 함유하는 바이알을 1.6㎖ 또는 4.0㎖의 희석제를 각각 첨가함으로써 재구성하여, CDDP의 현탁액을 수득하였다. CDDP를 함유하는 겔을 2.0 ㎖ 또는 5.0㎖의 최종 부피로 제조하였다. "2㎖" CDDP/에피네프린 겔을 1.4㎖의 CDDP 현탁액을 10㎎ 바이알로부터 주사기 내로 배출시키고, 다중 주사기간 전달을 통해 0.6㎖의 6.5% 콜라겐 겔과(또한 주사기 내에서) 혼합시킴으로써 제조하였다. "5㎖" CDDP/에피네프린 겔을 3.5㎖의 CDDP 현탁액을 25㎎ 바이알을 통해 주사기 내로 배출시키고, 다중 주사기간 전달을 통해 1.5㎖의 콜라겐 겔과(또한 주사기 내에서) 혼합시킴으로써 제조하였다. 최종 겔 혼합물을 투여에 사용하기 위한 주사기 중 하나에 전달하였다. 최종 겔은 둘 모두 2% 콜라겐 매트릭스 중에 4.0㎎/㎖의 CDDP 및 0.1㎎/㎖의 에피네프린을 함유하였고, 바로 사용할 수 있다.

통상적 희석제 대신에 WFI를 사용하여 초기 CDDP 현탁액을 제조하기 위해, CDDP 함유 겔의 제조를 위해 유사한 방법을 사용하였다. 이 경우에, 1.2㎖의 WFI를 CDDP의 10㎎ 바이알에 첨가한 후, 0.2㎖ 부피의 시판용 주사용 에피네프린 용액(10㎎/㎖)을 첨가하였다. 생성된 현탁액을 상기와 같이 추가 처리하였다.

CDDP 농도에 대한 겔의 분석

상기에서 제조한 최종 겔의 분취량을 수성 염산에 의한 처리에 의해 용해시키고, 계속해서 염화나트륨을 함유하는 메탄올:물 이동상으로 희석시켰다. 샘플을 강한 음이온 교환 HPLC 방법에 의해 CDDP 함량에 대해 분석하였다. 최종 겔의 분취량을 CDDP/에피 겔의 개별적으로 제조한 다중 주사기로부터 수득하였다. 또한, 주어진 주사기로부터의 겔의 분취량을 수득하고 분석하였다.

통상적 희석제 또는 WFI를 사용하여 제조한 최종 겔의 개별적 주사기에 대해 측정한 CDDP 함량을 표 1에 기재하였다. 데이터는 통상적 희석제가 재구성을 위해 사용되는 경우에 더욱 고농도의 CDDP가 관찰되고, 보다 효력이 약한 CDDP 농도가 물만을 사용하여 제조한 CDDP 현탁액으로부터 제조되는 겔에서 관찰됨을 나타낸다.

또한, 주사기간 가변성의 일관된 감소가 통상적 희석제를 사용하여 제조한 CDDP 겔에 대해 명백하다. 최종 겔의 수가지 세트의 주사기(각각의 세트는 3 내지 12개의 주사기로부터의 데이터를 나타냄)에서 CDDP 함량을 비교하면, WFI를 사용하여 제조한 겔에 대한 상대적 표준 편차(RSD)는 2.9 내지 8.6%인 반면, 통상적 희석제를 사용하여 제조한 겔 샘플 세트는 1.2 내지 4.6%의 RSD를 나타낸다.

최종 겔의 개별적 주사기에 대한 CDDP 함량 및 투여량 재생성의 증가가 또한, 폴리소르베이트 80 이외에 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨(NaCMC)을 함유하는 통상적 희석제를 사용하여 달성될 수 있다. 0.05% NaCMC를 추가로 함유하는 통상적 희석제에 대한 표 1의 데이터는 최종 겔의 주사기 중의 CDDP의 농도가 WFI를 사용하여 제조한 샘플에 비해 증가하고, 통상적 희석제를 함유하는 NaCMC를 사용하여 제조한 겔 샘플의 세트(주사기)에 대한 RSD가 WFI 중의 시스플라틴 현탁액으로부터 유도된 최종 겔의 샘플 세트에 대한 RSD보다 작음을 나타낸다.

표 I

CDDP 겔 이식물에서의 CDDP 약제 함량 및 주사기간 투여량 재생성에 대한 다양한 희석제의 효과

희석제	CDDP 함량(㎎/㎖)	RSD(상대적 표준 편차)	n
WFI	3.52±0.21	6.0%	12
WFI	3.78±0.11	2.9%	3
WFI	3.64±0.31	8.6%	3
희석제 A	4.43±0.09	2.0%	3
희석제 A	4.31±0.20	4.6%	3
희석제 A	4.14±0.16	3.8%	3
희석제 A	4.20±0.09	2.1%	3
희석제 A	3.94±0.05	1.2%	3
희석제 B	4.20±0.14	3.3%	9
희석제 B	4.27±0.16	3.7%	11

표 2에 기재된 데이터는 통상적 희석제의 사용이 모든 제형에 대한 동결건조된 바이알로부터의 시스플라틴의 회수를 증가시키고 투여량 재생성을 개선시킴을 나타낸다. WFI로 재구성한 플라티놀(등록상표)의 바이알을 사용하여 제조한 CDDP 겔 중의 측정된 CDDP 함량의 평균은 최종 겔의 3.54±0.28㎎/㎖이며, 이는 목표값의 단지 80%이다. 플라티놀의 바이알을 통상적 희석제로 재구성하면, 최종 생성물이 3.94±0.005㎎/㎖의 CDDP를 함유하게 되어 회수율을 목표값의 89% 까지 증가시킨다. CDDP의 10㎎ 및 25㎎ 폴딩 바이알을 통상적 희석제로 재구성하면, 최종 농도가 목표값의 94 내지 96%가 된다. WFI 대신에 통상적 희석제를 사용하면, CDDP 함량이 개선될 뿐만 아니라, 주사기들 사이의 CDDP 용량의 가변성이 감소한다. 표 2에 기재한 바와 같이, 개별적 주사기 사이의 CDDP 투여량의 가변성은 바이알의 재구성을 위해 WFI 대신에 통상적 희석제를 사용할 경우에 7.9%의 RSD를 약 1.3% 내지 3.8%의 RSD로 감소시킨다.

표 2

혼합 정밀성에 대한 재구성 희석제의 효과

제형	샘플(주사기) #	CDDP 함량(㎎/㎖)
WFI/10㎎ 플라티놀(등록상표)	1		3.35
WFI/10㎎ 플라티놀(등록상표)	2		3.27
WFI/10㎎ 플라티놀(등록상표)	3		3.89
WFI/10㎎ 플라티놀(등록상표)	4		3.79
WFI/10㎎ 플라티놀(등록상표)	5		3.42
		평균SD	3.54±0.28
		%RSD	7.91
		%목표값^*	80.1
통상적 희석제/10㎎ 플라티놀(등록상표)	1		3.97
통상적 희석제/10㎎ 플라티놀(등록상표)	2		3.97
통상적 희석제/10㎎ 플라티놀(등록상표)	3		3.88
		평균±SD	3.94±0.05
		%RSD	1.27
		%목표값^*	89.1
CD/10㎎ 폴딩	1		3.73
CD/10㎎ 폴딩	2		3.61
CD/10㎎ 폴딩	3		3.96
CD/10㎎ 폴딩	4		3.78
CD/10㎎ 폴딩	5		3.72
		평균±SD	3.76±0.13
		%RSD	3.46
		%목표값^**	93.7
CD/25㎎ 폴딩	1		3.95
CD/25㎎ 폴딩	2		3.82
CD/25㎎ 폴딩	3		3.82
CD/25㎎ 폴딩	4		3.85
CD/25㎎ 폴딩	5		3.73
		평균±SD	3.83±0.08
		%RSD	2.09
		%목표값^**	95.5

* 4.4㎎/㎖ CDDP

** 4.0㎎/㎖ CDDP

희석제 또는 WFI를 함유하는 에피네프린을 사용하여 제조한 최종 겔을 함유하는 주사기의 다양한 부분 내에서의 CDDP 함량이 표 3에 기재되어 있다. 통상적 희석제를 사용하여 제조한 겔은 동결건조된 CDDP에 대한 희석제로서 WFI를 사용하여 제조한 겔과 동등한 것으로 발견되었으며, 이는 주사기 내에서의 균일성에 대한 악영향이 없음을 나타낸다.

표 3

WFI 또는 통상적 희석제를 사용하여 제조한 CDDP 겔 이식물 중의 주사기내 CDDP 균일성

희석제	주사기내 CDDP 함량		명목상 %
	평균±SD (㎎/㎖)	RSD
WFI	3.62±0.006	1.66%	90.5
WFI	3.48±0.11	3.16%	87.0
WFI	3.37±0.14	4.15%	84.3
WFI	3.43±0.05	1.38%	85.5
통상적 희석제	4.17±0.15	3.59%	104.2
통상적 희석제	4.02±0.29	7.21%	100.5
통상적 희석제	4.02±0.04	0.99%	100.5
통상적 희석제	3.97±0.05	1.20%	99.3
통상적 희석제	3.97±0.01	0.25%	99.3

실시예 II

CDDP/에피네프린 겔의 종양내 투여 후에 마우스에서의 RIF-1 섬유육종 중의 CDDP의 보유

본 연구는 종약 약제 보유에 대한 CDDP/에피네프린 주입용 겔의 제조에 사용되는 다양한 희석제의 효과를 조사하는 것이다. 희석제는 주이용 물(WFI) 또는 0.1% 폴리소르베이트 80을 함유하는 통상적 희석제를 포함한다. 최종 겔 제조물 중의 콜라겐 겔의 농도는 2%이다. 시험 제형을 RIF-1 선천적 종양이 옆구리에서 피부에 성장해 있는 C3H 동종번식 마우스 암컷에 단일 투여량으로 종양내에 투여하였다. 종양내 주입 부피는 20㎕이다. 18마리의 동물을 각각의 처리군(시점당 3마리 및 총 6시점, 즉, 0.5, 1, 1.5, 2, 6 및 24시간)으로 분할하였다. 절제 후에, 종양 샘플을 원자 흡수 분광법을 통해 중에 함량에 대해 검정하였다. 종양 중의 중에 보유율을 종양 1중량당 중에의 중량(㎍/g), 및 또한 전체 투여량의 %로서 나타내었다. 종양 중의 국소적 보유에 대해 곡선 아래의 면적(AUC 0.5 내지 24시간)을 사다리꼴 방식에 의해 계산하고, ㎍/g hr로 나타내었다 (표 4).

종양 중의 중에의 보유율은 WFI(195㎍ h/g)를 사용하여 제조한 겔을 사용하는 것보다 폴리소르베이트 함유 희석제(288㎍/g hr)을 사용하여 제조한 최종 주입용 겔을 사용하는 경우에 더욱 우수하다.

표 4

WFI 또는 통상적 희석제 중의 CDDP 현탁액을 사용하여 제조한 CDDP 겔의 병변내 투여 후에 RIF-1 종양에 걸린 마우스에서의 시간 적분 종양내 중에 농도

희석제	AUC_{0.5 내지 24시간}(㎍/g hr)
WIF	195±35
통상적 희석제	288±46

실시예 III

C3H 마우스에서 성장한 RIF-1 종양에 대한 CDDP/에피네프린 겔의 효율에 대한 희석제의 효과

항종양 효율에 대한 CDDP/에피네프린 주입용 겔 제형의 제조에 사용되는 희석제 중의 변수의 효과를 측정하였다. 희석제는 주입용 물(WFI)만을 포함하고, 현탁 보조제로서 폴리소르베이트 80을 함유하는 특정 희석제를 포함한다. 2가지 생성된 시험 제형을 RIF-1 선천적 종양이 옆구리에서 피부에 성장하여 있는 정상 C3H/Sed 동종번식 마우스 암컷에 단일 투여량으로 종양내에 투여하였다. 종양내 주입 부피는 25 또는 50㎕이다. 각각의 동물에서 내부 대조군으로서 비처리 대측성 종양을 사용하였다. 겔 제형은 4㎎/㎖의 CDDP 및 0.1 내지 0.04㎎/㎖의 에피네프린을 함유한다. 10마리의 동물을 각각의 처리군으로 분할하였다. 다른 대조군(1군당 5마리, 또는 10개의 종양)은 포지티브 대조군(동일한 총 약제 투여량에서 CDDP 용액의 복강내 주입, 즉 동물 1마리당 200㎍) 및 비처리 동물군을 포함한다. 종양 크기를 한달 이하 동안 주당 3회 측정하였다. 종양이 처리 개시로부터 부피가 4배로 성장하는 데에 필요한 시간으로서 정의되는 종양 성장 지연을 검정 종말점으로서 사용하였다.

수가지의 독립적 연구에서 시험한 2개의 겔 제형은 생체내 종양 효율이 서로 현저히 다르다. 종양 성장 지연 결과를 표 5에 기재하였다. 비처리 대조 동물에서의 종양 성장은 예측된 바와 같이 매우 빠르게 일어나며, 4X 종말점은 평균 6.4일째에 도달되었다. 주입용 겔계를 통한 종양내 CDDP의 투여는 9.4일로부터 27.4일 이상 까지 연장한 종양 성장의 지연을 제공하였다. 이들 군에서 비처리 측면에서의 종양 성장이 또한 약간 지연되었으며(6.6 내지 13.7일), 이는 CDDP의 일부 전신 이용성을 제시하는 것이다.

표 5

CDDP/에피네프린 겔 효율에 대한 희석제의 효과 (WFI 또는 통상적 희석제를 사용하여 제조한 겔; 마우스에서 RIF-1 종양 성장 지연을 통해 측정한 효율)

				4X 종양 성장
종양	CDDP 농도(㎎/㎖)	주입 부피(㎕)	CDDP 희석제	처리 측면	비처리 측면
RIF-1	4.0/0.1	50	WFI	>27.1±1.6	13.7±2.2
			통상적 희석제 A	23.4±1.4	12.5±1.2
			통상적 희석제 B	>26.7±1.5	12.0±1.0
SCCVII	4.0/0.1	50	WFI	12.4	10.1
SCCVII			통상적 희석제 A	15.1	10.8
SCCVII	4.0/0.1	25	WFI	12.7	7.4
SCCVII			통상적 희석제 A	13.2	7.6
SCCVII	4.0/0.1	25	WFI	11.4	7.1
SCCVII			통상적 희석제 B	9.4	6.6

실시예 IV

생체외 안정성

에피네프린의 단기 안정성을 희석제 조성의 함수로서 시험하였다. 실시예 1에서와 같이 제조한 희석제의 바이알을 대상으로 60℃에서의 저장에 의해 촉진된 안정성 시험을 하였다. 시판용 주입용 에피네프린 용액(아드레날린 클로라이드 용액, 파르케 데이비스)의 바이알을 대조군으로 유사하게 처리하였다. 7일 및 15일 후에, 샘플을 에피네프린 함량에 대해 분석하였다. 결과를 표 6에 기재하였다. 에피네프린은 시판 제품에서보다는 특정 희석제 중에서 더욱 안정한 것으로 입증되었다.

표 6

에피네프린의 안정성

제형	% 잔류 활성 (60℃)
	7일	15일
통상적 희석제	91.9%	88.7%
아드레날린(등록상표) 클로라이드	82.4%	74.9%

상기 결과로부터, 본 발명이 개선된 시스플라틴 함유 주입용 겔을 유도하는 개선된 CDDP 현탁액을 제공함을 명백하다. 통상적 희석제를 사용하여제조한 비경구용으로 허용될 수 있는 CDDP 현탁액은 주입용 물을 사용하여 제조한 현탁액보다 더 양호한 투여량 회수 및 투여량 재생성을 나타낸다. 이러한 현탁액으로부터 제조한 시스플라틴 함유 겔은 더 높은 CDDP 농도 및 더 낮은 주사기 대 주사기 가변성을 나타낸다. 시험된 성능의 모든 양태에서, 통상적 희석제로 제조한 겔은 주입용 물로 제조한 겔보다 우수하거나 동등하다.

본 명세서에 인용된 모든 공보 및 특허 출원은, 각각의 개별적 공보 또는 특허 출원이 상세하게 및 개별적으로 참고문헌인 것으로 제시된 바와 같이, 본원에 참고문헌으로 인용된다.

본 발명은 이해의 명료함을 위해 예시 및 실시예에 의해 어느정도 상세히 설명되었지만, 본 발명의 설명에 비추어, 첨부된 청구의범위의 사상 및 범위로부터 벗어남이 없이 본 발명의 특정 변형 및 변화가 이루어질 수 있음이 당업자들에게 쉽게 인지될 것이다.

Claims

약제학적으로 허용되는 겔 매트릭스 중의 수성 분산액 형태로 0.05 내지 0.75% 비이온성 계면활성제 및 2 내지 8mg/㎖의 시스플라틴 분말을 포함하는 시스플라틴 제형.
제 1항에 있어서, 겔 매트릭스가 0.5 내지 8.0% w/v 콜라겐임을 특징으로 하는 제형.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 0.01 내지 0.25%의 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨을 추가로 포함함을 특징으로 하는 제형.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 비이온성 계면활성제가 폴리소르베이트임을 특징으로 하는 제형.
제 4항에 있어서, 폴리소르베이트가 폴리소르베이트 80임을 특징으로 하는 제형.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 0.02 내지 0.2mg/㎖의 에피네프린을 추가로 포함함을 특징으로 하는 제형.
수성 비히클 중에 0.05 내지 0.75%의 폴리소르베이트 80, 0.05 내지 0.2mg/㎖의 에피네프린, 1.5 내지 6.5mg/㎖의 시스플라틴 분말 및 0.5 내지 8% w/v 콜라겐을 포함하는, 환자의 신생물 병변에 시스플라틴을 전달하는 데에 유용한 겔 제형.
제 7항에 있어서, 0.01% 내지 0.25%의 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨을 추가로 포함함을 특징으로 하는 제형.
시스플라틴 분말을 현탁시켜서, 0.05 내지 0.75%의 비이온성 계면활성제를 포함하는 수성 희석제 중의 2 내지 8mg/㎖의 시스플라틴의 현탁액을 형성시키는 단계; 및

상기 현탁액을 콜라겐 겔과 혼합시켜서, 0.5 내지 8.0% w/v 콜라겐을 함유하는 수성 겔을 생성시키는 단계를 포함하여, 환자의 신생물 병변을 치료하기 위한 시스플라틴 겔 제형을 제조하는 방법.
제 9항에 있어서, 비이온성 계면활성제가 폴리소르베이트임을 특징으로 하는 방법.
제 10항에 있어서, 폴리소르베이트가 폴리소르베이트 80임을 특징으로 하는 방법.
제 9항에 있어서, 현탁 단계 전에, 0.02 내지 0.2mg/㎖의 에피네프린을 수성 희석제에 첨가하는 단계를 추가로 포함함을 특징으로 하는 방법.
시스플라틴 분말,

0.05 내지 0.75%의 폴리소르베이트 80 및 0.02 내지 0.2mg/㎖의 에피네프린을 포함하는 시스플라틴을 현탁시키기 위한 수성 희석제, 및

추가로 콜라겐 겔을 포함하는, 치료용 시스플라틴 현탁액을 제조하기 위한 킷.
제 13항에 있어서, 킷의 콜라겐 겔의 농도가 6.5% w/v임을 특징으로 하는 킷.
제 13항 또는 제 14항에 있어서, 시스플라틴 분말이 동결건조된 시스플라틴임을 특징으로 하는 킷.
제 1항, 제 2항, 제 7항 및 제 8항 중 어느 한 항에 있어서, 시스플라틴 분말이 동결건조된 시스플라틴임을 특징으로 하는 제형.
제 9항, 제 10항, 제 11항 및 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, 시스플라틴 분말이 동결건조된 시스플라틴임을 특징으로 하는 방법.
제 3항에 있어서, 비이온성 계면활성제가 폴리소르베이트임을 특징으로 하는 제형.
제 18항에 있어서, 폴리소르베이트가 폴리소르베이트 80임을 특징으로 하는 제형.
제 3항에 있어서, 0.02 내지 0.2mg/㎖의 에피네프린을 추가로 포함함을 특징으로 하는 제형.