KR100482842B1 - 식물병원세균에 의해 유도되는 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소 유전자와 과산화효소 유전자 및 상기 유전자를 이용한 식물방어반응 탐색 방법 - Google Patents
식물병원세균에 의해 유도되는 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소 유전자와 과산화효소 유전자 및 상기 유전자를 이용한 식물방어반응 탐색 방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 식물 병원성 세균 혹은 식물체 병저항성 유도물질에 의해 유도되는 고추 유래의 방어유전자 및 상기 유전자를 이용한 식물방어반응의 탐색방법에 관한 것으로, 본 발명은 식물 병원성 세균 혹은 식물체 병저항성 유도물질에 의해 유도되는 방어유전자인 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소 및 과산화효소를 각각 코딩하는 유전자를 제공하는 뛰어난 효과가 있다. 또한, 본 발명은 방어유전자인 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소 및 과산화효소를 각각 코딩하는 유전자를 이용하여 식물방어반응을 탐색하는 방법을 제공하는 뛰어난 효과가 있다. 따라서, 본 발명 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소 및 과산화효소를 각각 코딩하는 유전자를 이용하여 식물방어반응의 표지 및 고추분자육종을 위한 유전재료로서 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 식물 병원성 세균에 의해 유도되는 고추 유래의 방어유전자 및 상기 유전자를 이용한 식물방어반응의 탐색방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명은 식물 병원성 세균 혹은 식물체 병저항성 유도물질에 의해 유도되는 고추에서 얻은 아스코르베이트 과산화효소 및 과산화효소를 각각 코딩하는 유전자와 상기 유전자들을 이용한 식물방어반응의 탐색방법에 관한 것이다.
작물의 병해충 발생에 의한 수량 감소를 최소화시켜 생산량을 증대시키려는 노력의 일환으로 식물의 병저항성 유전자를 이용한 형질전환식물체의 개발이나 작물 분자육종에 대한 연구 및 상업화가 진행되고 있다. 고추는 우리나라 주요작물 중 하나로서, 재배중 발생하는 병으로는 역병, 탄저병, 세균성점무늬병 등이 알려져 있다. 이러한 질병을 유발하는 병원균의 침입에 대해 식물의 방어메카니즘에 대한 연구를 통해 병저항성 반응에 관련된 몇가지 효소와 유전자가 밝혀져 있다. 특히, 아스코르베이트 과산화효소(ascorbate peroxidase)는 과산화수소를 제거하는 항산화효소의 일종으로, 병원균의 공격, 상처뿐만 아니라 그밖에 환경 스트레스에 대해 반응하여 식물의 방어메카니즘에 관여하는 것으로 알려져 있다. 이러한 식물병저항성에 관련된 생화학적 메카니즘을 이해하고 이용함으로써 식물에 새로운 병저항성을 부여하거나 저항 능력을 증진시키는 형질전환식물체를 개발하거나 상업적으로 응용할 수 있으리라 사료된다.
따라서, 본 발명의 목적은 식물 병원성 세균 또는 식물체 병저항성 유도물질에 의해 고추에서 발현되는 방어유전자인 아스코르베이트 과산화효소를 코딩하는 CAPOA1 유전자와 과산화효소를 코딩하는 CAPO1 유전자를 분리하고 그것의 염기서열분석 및 발현 패턴을 조사하여 식물방어반응을 규명하고자 한다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 식물 병원성 세균 또는 식물체 병저항성 유도물질에 의해 고추에서 발현되는 상기의 방어유전자들을 이용하여 식물방어반응을 탐색하는 방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 상기 목적은 고추세균성점무늬병균에 감염된 고추에서 방어유전자를 디퍼련셜 하이브리다이제이션을 이용하여 분리하고 선별된 유전자의 염기서열을 결정한 다음 건전한 고추식물에서 상기 유전자들의 각 기관별 발현 양상을 조사하고 고추세균성점무늬병균에 감염된 고추 잎에서 총 과산화효소 활성 및 과산화수소의 함량을 조사하며 고추역병균 또는 고추열매탄저병균에 감염된 고추 잎에서 상기 방어유전자의 발현 여부를 조사하고, 식물체 병저항성 유도물질인 살리실산과 과산화수소를 처리하여 상기 방어유전자의 발현 여부를 조사함으로써 달성하였다.
이하, 발명의 구체적인 구성을 상세히 설명한다.
본 발명은 고추세균성점무늬병균에 감염된 고추에서의 방어유전자의 분리, 그것의 염기서열 결정 단계; 건전한 고추식물에서 상기 유전자들의 각 기관별 발현 양상 및 고추세균성점무늬병균에 감염된 고추 잎에서의 총 과산화효소 활성 및 과산화수소의 함량 조사단계; 고추역병균 또는 고추열매탄저병균에 감염된 고추 잎에서 상기 방어유전자의 발현 여부 조사단계; 및 식물체 병저항성 유도물질인 살리실산과 과산화수소에 의한 상기 방어유전자의 발현 여부 조사단계로 구성된다.
이하, 본 발명의 구체적인 구성을 실시예를 통해 설명하지만, 본 발명의 권리범위가 이들 실시예에만 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1: 고추세균성점무늬병균에 감염된 고추에서 방어유전자의 분리
본 발명의 고추세균성점무늬병균에 의해 유도되는 고추 유래의 방어유전자를 분리하기 위해, 고추세균성점무늬병균에 저항성을 보이는 품종인 한별고추 품종(Capsicum annuum L.cv. Hanbyul)를 사용하였다. 이를 위해, 고추세균성점무늬병균의 비병원성균주인 크산토모나스 캠페스트리스 페소바 베지카토리아 비브이 5-4a(Xanthomonas campestris pv. vesicatoria strain BV5-4a)균을 한별고추에 접종하고 습실처리한 후 과민성반응이 나오는 시간에 식물체를 습실에서 꺼내어 잎을 수거하였다. 상기 잎에서 mRNA를 추출하여 cDNA 라이브러리를 제작하였다. cDNA 라이브러리로부터 병저항성 관련 유전자를 찾아내기 위해, 고추세균성점무늬병균의 비병원성 균주를 접종한 고추식물의 잎과 접종하지 않은 건전한 고추식물의 잎에서 얻은 총 mRNA를 디옥시제닌(digoxygenin)으로 표지하여 프로브를 만들고 디퍼런셜 하이브리다이제이션(differential hybridization)을 수행하였다. 그 결과 병저항성에 관련될 것이라고 추정되는 유전자의 클론을 수득하여 염기서열을 결정하고 블라스트 프로그램을 이용하여 GenBank에 등록된 유전자 데이터베이스와 비교하였다. 상기에서 선발된 유전자가 아스코르베이트 과산화효소를 코딩하는 유전임을 확인하고 그 유전자를 CAPOA1으로 명명하였다. 또한, 선발된 또 다른 유전자의 염기서열을 결정하여 선발된 유전자가 식물의 과산화효소를 코딩하는 유전자임을 확인하고 그 유전자를 CAPO1로 명명하였다.
도 1에 나타난 바와 같이, 고추세균성점무늬병균에 의해 유도된 고추의 CAPOA1 유전자는 다른 작물 즉, 담배, 오이, 토마토 등의 아스코르베이트 과산화효소의 아미노산 서열과 약 66 ~ 67%의 상동성을 나타내었다.
도 2의 고추세균성점무늬병균의 감염에 의해 유도된 고추의 CAPO1 유전자의 예상 아미노산 서열은 토마토의 병저항성 관련 과산화효소의 아미노산 서열과 89%의 높은 상동성을 나타냈으며, 땅콩과는 73%, 애기장대와는 49%, 알팔파와는 43% 등의 상동성을 보였다.
실시예 2: 건전한 고추식물에서
CAPOA1
유전자 및
CAPO1
유전자의 각 기관별 발현 양상
본 발명 고추세균성점무늬병균의 감염에 의해 유도된 고추 유래의 CAPOA1 유전자와 CAPO1 유전자의 건전한 고추식물에서의 각 기관별 발현 양상을 조사하였다. 이를 위해, 노던 블랏팅을 실시하였으며, 이때 사용된 프로브는 CAPOA1 유전자를 32P로 표지하여 이용하였다. 노던 블랏팅을 실시할 때, 리보솜 RNA의 양을 모니터링 함으로써 동일량의 RNA 시료가 로딩되었음을 확인하였다.
도 3에 나타난 바와 같이, 건전한 고추식물에서 CAPOA1 유전자와 CAPO1 유전자의 기관별 발현 양상을 조사한 결과, CAPOA1 유전자는 고추의 붉은열매에서 강하게 발현되었고 잎, 줄기, 뿌리, 꽃, 푸른열매에서는 발현되지 않았고, CAPO1 유전자는 잎, 줄기, 뿌리, 꽃, 푸른열매, 붉은열매 등 모든 건전 기관에서 발현되지 않았다.
실시예 3: 고추세균성점무늬병균에 감염된 고추 잎에서 총 과산화효소 활성 및 과산화수소 함량 조사
과산화효소의 활성 변화는 식물의 병저항성 반응과 관련된다고 알려져 있다. 따라서, 고추의 세균성점무늬병원균에 대한 저항성 반응과정 중 총 과산화효소의 활성을 살펴보기 위해, 고추세균성점무늬병균의 병원성 균주와 비병원성균주를 고추 잎에 처리하여 시간 경과에 따른 총 과산화효소의 활성도를 측정하였다.
우선, 고추세균성점무늬병균을 접종하기 위해 병원성균주 Ds1과 비병원성균주 Bv5-4a를 배양하여 1 X 108 cfu/mL 농도의 세균현탁액을 6엽기 고추 잎의 뒷면에 진공 인필트레이션 (vacuum-infiltration) 방법으로 접종한 후 28℃, 100% 상대습도의 조건 하에서 18시간 동안 습실처리를 하였다. 병원균을 접종한 후, 2, 6, 12, 18, 24, 30 시간째에 잎을 수득하여 총 단백질을 추출하고, 구아이아콜(guaiacol)을 이용하여 25℃에서 5분간 반응시킨 후, 470 nm 에서 흡광도를 측정하였다. 과산화효소의 활성도는 테트라구아이아콜(tetraguaiacol)의 흡광계수(extinction coefficient, (26.6 X 103/mol/cm)를 이용하여 계산하였다.
또한, 상기 병원균 접종 후 얻은 잎에서 총 RNA를 분리하여 노던 블럿팅을 실시하였다.
도 4(가)에 나타난 바와 같이, 비병원성 균주에 감염된 고추 잎에서(저항성반응) 과산화효소의 활성은 세균 접종 후 6시간째 관찰되었으며, 고추 잎조직에서 과민성반응이 관찰된 18시간째에 최고에 달했다가 그 이후 급격히 감소하는 경향을 나타내었다. 반면에, 병원성 균주에 감염된 고추 잎(감수성반응)에서는 세균 접종 후 18시간 경과 시점부터 30시간까지 지속적으로 증가하는 경향을 보였다.
또한, 과산화수소와 같은 산화물의 축적은 식물병 저항성 반응인 과민성반응 중 식물 조직에서 나타나는 전형적인 특성이다. 따라서, 고추의 세균병 저항성 반응과 고추에 축적되는 과산화수소 함량과의 상관관계를 살펴보기 위해, 고추세균성병원균의 비병원성 균주 또는 병원성 균주를 접종한 고추 잎조직에서 시간 경과에 따른 과산화수소의 축적량을 측정하였다.
상기 실시예 2의 방법에 따라 고추세균성점무늬병균을 고추 잎에 접종한 후 수득한 잎에 액체질소와 5 mL의 0.2 M HClO4를 첨가하여 분쇄한 다음 초원심분리하여 상등액을 얻었다. 상기 상등액을 4 M KOH를 이용하여 pH 7.5로 중화시킨 후 원심분리하여 얻은 상등액 중 200 ㎕를 취해 AG1 X 8 레진으로 채워진 음이온치환컬럼(anion-exchange column)에 800 ㎕의 살균수를 첨가하여 통과시켰다. 이로부터 얻은 1mL의 시료에 400 ㎕의 12.5 mM 3-디메틸아미노벤조산(3-dimethylaminobenzoic acid)과 80 ㎕의 1.3 mM 3-메틸-2-벤조티아졸린 하이드라존(3-methyl-2-benzothiazoline hydrazone), 20 ㎕의 과산화효소(0.25 unit)를 첨가하여 25℃의 조건에서 590 nm의 흡광도를 측정하여 과산화수소의 양을 계산하였다.
도 4(나)에 나타난 바와 같이, 병원성 균주와 비병원성 균주를 각각 접종한 후 모두에서 접종 후 2시간째에 약하게 과산화수소의 축적이 관찰되었다가 각각 6시간, 12시간 이후 서서히 감소하는 경향을 보였다. 반면에, 세균 접종 후 12시간 이후에는 불친화적반응(비병원성 균주)에서는 급격히 과산화수소가 축적되어 24시간과 30시간째 약 1200 nmol/g의 과산화수소가 축적되었으며, 친화적반응(병원성 균주)에서는, 서서히 증가하여 접종 30시간 경과 후에 약 300 nmol/g의 과산화수소가 축적되었다.
한편, 고추 잎에 고추세균성점무늬병균을 감염시키고 CAPOA1 유전자와 CAPO1 유전자의 발현을 관찰하였다.
도 4(다)에 나타난 바와 같이, 친화적반응과 불친화적반응 모두에서 세균 접종후 2시간째부터 강한 CAPOA1 유전자의 발현을 관찰하였다. 그러나, 과민성반응이 나타나는 접종 후 18시간 경과 이후에는 불친화적 반응에서는 CAPOA1 유전자가 발현되지 않았으나 친화적반응에서는 지속적으로 발현되는 경향을 보였다.
CAPO1 유전자의 경우, 친화적반응과 불친화적반응 모두에서 세균 접종후 6시간째부터 강하게 발현되었다. 그러나, 과민성반응이 나타나는 접종 후 18시간 경과 이후에는 불친화적반응에서는 CAPO1 유전자가 발현되지 않았으나 친화적 반응에서는 지속적으로 발현되는 경향을 보였다.
실시예 4: 고추 역병균에 감염된 고추 잎에서 방어유전자의 발현 조사
고추 역병균에 감염된 고추 잎에서도 상기 고추세균성점무늬병균 감염시 유도된 방어유전자가 발현되는 지를 알아보기 위해, 고추역병균의 병원성 균주 S197과 비병원성균주 CBS178.26를 28℃에서 7일간 배양한 후 유주자낭을 형성시키고 살균수를 부어 4℃에서 저온 처리한 다음 상온에서 배양하여 유주자가 유주낭으로부터 유출되도록 하였다. 1 X 105 유주자/mL 농도의 유주자 현탁액을 살균된 솜에 적셔 상처를 낸 6 엽기 고추의 줄기에 감아 고정시키는 방법으로 접종하였다. 고추 역병균을 접종한 후, 12, 24, 36, 48 시간 경과 후 접종된 고추 줄기를 채취하여 총 RNA를 추출하고 노던 블랏팅을 실시하였다.
도 5(가)에는 고추 역병균의 병원성 균주를 접종한 고추 줄기에서 나타나는 친화적반응과 비병원성균주를 접종한 후 나타나는 불친화적반응에서의 CAPOA1 유전자와 CAPO1 유전자의 발현 양상을 나타내었다. 친화적반응에서는 접종 후 12시간부터 지속적으로 CAPOA1 유전자가 발현되었고 불친화적 반응에서는 24시간과 36시간째 강하게 발현되고 이후 감소하는 경향을 나타내었다. CAPO1 유전자는 친화적반응에서는 그 발현이 관찰되지 않았으나 불친화적 반응에서는 접종 후 12시간부터 발현이 관찰되어 36시간과 48시간째에 강하게 발현되는 경향을 나타내었다.
실시예 5: 고추열매탄저병균에 감염된 고추 잎에서 방어유전자의 발현 조사
고추열매탄저병균에 감염된 고추 잎에서도 상기 고추세균성점무늬병균 감염시 유도된 방어유전자가 발현되는 지를 알아보았다.
고추열매탄저병균을 접종하기 위해 고추의 푸른열매에 탄저병을 일으키는 균주 CHC2를 28℃에서 5일 동안 배양하여, 분생포자를 수거한 후 1 X 106 분생포자/mL의 현탁액을 이용하여 40 ㎕ 씩 고추의 푸른열매와 붉은열매 위에 방울로 떨어뜨리는 방법으로 접종하였다. 28℃, 습한 조건에서 배양한 후 12, 24, 48, 72 시간 경과 후 접종된 열매부위를 채취하여 총 RNA를 추출하고 노던 블랏팅을 실시하였다.
도 5(나)에는 고추의 푸른열매에 탄저병을 일으키는 균주 CHC2를 고추의 푸른열매와 붉은열매에 접종한 후 CAPOA1 유전자와 CAPO1 유전자의 발현 양상을 나타내었다. 미성숙된 푸른열매에서는 12시간 이후에 CAPOA1 유전자의 강한 발현이 지속적으로 유도되었으나 성숙된 붉은열매에서는 건전한 열매에서 발현되는 CAPOA1 유전자의 발현이 탄저병균 접종 이후 오히려 감소하고 48시간째 강한 발현을 나타내는 경향을 보였다. CAPO1 유전자는 미성숙된 푸른열매에서는 12시간 이후에 CAPO1 유전자가 약하게 발현되어 24시간과 48시간째 강하게 발현이 유도되고 72시간째 감소하는 경향을 보였으나 성숙된 붉은열매에서는 발현되지 않았다.
실시예 6: 살리실산과 과산화수소 처리에 따른 고추의
CAPOA1
유전자와
CAPO1
유전자의 발현 조사
식물병 저항성 반응 유도에 관여한다고 알려진 살리실산과 과산화수소를 고추 잎에 처리하여 CAPOA1 유전자와 CAPO1 유전자의 발현 여부와 양상을 조사하였다. 우선, 5 mM의 살리실산을 6 엽기 고추 잎에 분무하고 1, 2, 6, 12, 18, 24 시간 후에 처리 잎을 수득하여 총 RNA를 추출하였다.
또한, 0.001, 0,01, 0.1, 1, 5, 10 mM의 과산화수소를 6 엽기 고추 잎에 진공 인필트레이션(vacuum-infiltration) 방법으로 처리하고 18시간 경과 후 처리된 잎을 수득하고, 10 mM의 과산화수소를 처리한 고추 잎은 0.25, 0.5, 1, 2, 6, 12, 18, 24 시간 경과 후 수거하여 각각의 시료에서 총 RNA를 추출하였다. 상기에서 얻은 RNA를 이용하여 노던 블랏팅을 실시하였다.
도 6에 나타난 바와 같이, 식물체 내에 고농도의 산화물 축적은 식물에 유해하므로, 식물은 자체적으로 항산화기작을 가지고 있다. CAPOA1 유전자가 코딩하는 아스코르베이트 과산화효소는 과산화수소와 같은 산화물을 제거하는데 중요한 역할을 하는 항산화효소로 알려져있다. 고추 잎에 과산화수소의 시간별 또는 농도별 처리시, CAPOA1 유전자의 발현양상을 관찰하기 위해 노던 블럿팅을 수행하였다. 그 결과, CAPOA1 유전자는 과산화수소 처리 후 1시간째 강한 발현이 관찰되었고 그 이후 24시간까지 지속적인 발현이 관찰되었다. 또한 10 M 이상의 과산화수소 처리시 강한 발현을 나타내었다. CAPO1 유전자는 과산화수소 처리 12시간 경과 후부터 지속적인 강한 발현이 관찰되었고, 10 M 이상의 과산화수소 처리시 강한 발현을 나타내었다.
도 7에 나타난 바와 같이, 살리실산을 고추 잎에 처리한 결과, 처리 6시간 경과 후부터 CAPOA1 유전자의 발현이 유도되어 18시간과 24시간에 강하게 발현되는 것을 관찰하였다. CAPO1 유전자는 처리 18시간과 24시간 경과 후에 약한 CAPO1 유전자의 발현을 관찰하였다.
이상 상기 실시예를 통하여 설명한 바와 같이, 본 발명은 식물 병원성 세균 혹은 식물체 병저항성 유도물질에 의해 유도되는 방어유전자인 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소 및 과산화효소를 각각 코딩하는 유전자를 제공하는 뛰어난 효과가 있다. 또한, 본 발명은 방어유전자인 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소 및 과산화효소를 각각 코딩하는 유전자를 이용하여 식물방어반응을 탐색하는 방법을 제공하는 뛰어난 효과가 있다. 따라서, 본 발명 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소 및 과산화효소를 각각 코딩하는 유전자를 이용하여 식물방어반응의 표지 및 고추분자육종을 위한 유전재료로서 사용될 수 있어 분자육종산업상 매우 유용한 발명인 것이다.
도 1은 고추세균성점무늬병균에 감염된 한별고추(Capsicum annuum L. cv. Hanbyul) 품종에서 얻은 클론 CAPOA1 유전자의 염기서열 및 그것의 예상 아미노산 서열을 나타낸 것이다.
도 2는 고추세균성점무늬병균에 감염된 한별고추 품종에서 얻은 클론 CAPO1 유전자의 염기서열 및 그것의 예상 아미노산 서열을 나타낸 것이다.
도 3은 건전한 고추식물의 각 기관에서의 CAPOA1 유전자 및 CAPO1 유전자의 발현양상을 나타낸 것이다.
도 4는 한별고추 잎에 고추세균성점무늬병균의 병원성 균주와 비병원성 균주를 처리함에 따른 총 과산화효소의 활성, 과산화수소(H2O2)의 축적량 및 CAPOA1
유전자와 CAPO1 유전자의 mRNA 발현양상을 나타낸 것이다.
도 5는 한별고추의 줄기에 고추역병균의 병원성 균주와 비병원성 균주를, 한별고추의 열매에 고추탄저병균을 각각 처리함에 따른 CAPOA1 유전자와 CAPO1 유전자의 발현양상을 나타낸 것이다.
도 6은 한별고추의 잎에 과산화수소를 처리함에 따른 CAPOA1 유전자와 CAPO1유전자의 과산화수소 처리 농도 및 시간별 발현 양상을 나타낸 것이다.
도 7은 한별고추의 잎에 살리실산을 처리함에 따른 CAPOA1 유전자와 CAPO1 유전자의 시간별 발현 양상을 나타낸 것이다.
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<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 1138
<212> DNA
<213> Capsicum annuum
<220>
<221> CDS
<222> (24)..(884)
<400> 1
gcacgaggtc ggttctctct cca atg gcg aag cca att gtc gat act 47
Met Ala Lys Pro Ile Val Asp Thr
1 5
gaa tac atc aaa gaa att gag aaa gct cgt cgc gac ctc cgc gct ctc 95
Glu Tyr Ile Lys Glu Ile Glu Lys Ala Arg Arg Asp Leu Arg Ala Leu
10 15 20
atc tcc aac aaa aac tgt gct cct atc atg ctt cgc tta gca tgg cac 143
Ile Ser Asn Lys Asn Cys Ala Pro Ile Met Leu Arg Leu Ala Trp His
25 30 35 40
gat gca gga acg tat gat gct aag tca aag act ggt gga ccg aat ggt 191
Asp Ala Gly Thr Tyr Asp Ala Lys Ser Lys Thr Gly Gly Pro Asn Gly
45 50 55
tct atc aga aat gag gaa gaa ttc act cac ggt gct aat aat ggc ttg 239
Ser Ile Arg Asn Glu Glu Glu Phe Thr His Gly Ala Asn Asn Gly Leu
60 65 70
aaa atc gcc ctt gat ttc tgt gaa gca gtg aag tcc aaa cat cca aag 287
Lys Ile Ala Leu Asp Phe Cys Glu Ala Val Lys Ser Lys His Pro Lys
75 80 85
att aca tat gca gat ctg tac cag ctt gca cgt gtt gtt gct gtt gag 335
Ile Thr Tyr Ala Asp Leu Tyr Gln Leu Ala Arg Val Val Ala Val Glu
90 95 100
gtc act ggt ggt cct act att gat ttt gtc cct ggt agg aag gat tcc 383
Val Thr Gly Gly Pro Thr Ile Asp Phe Val Pro Gly Arg Lys Asp Ser
105 110 115 120
agt att tct cca aag gaa ggg cgg tta cca gat gct aaa caa ggt gtg 431
Ser Ile Ser Pro Lys Glu Gly Arg Leu Pro Asp Ala Lys Gln Gly Val
125 130 135
cca cat ctt aaa gat gtc ttt tat agg atg ggt ttg tct gac aaa gat 479
Pro His Leu Lys Asp Val Phe Tyr Arg Met Gly Leu Ser Asp Lys Asp
140 145 150
ata gtg gcg cta tca ggg ggt cat aca ctg gga agg gca cat cca gag 527
Ile Val Ala Leu Ser Gly Gly His Thr Leu Gly Arg Ala His Pro Glu
155 160 165
aga tca ggc ttt gat ggt cca tgg aca aag gag cct ctg aaa ttt gac 575
Arg Ser Gly Phe Asp Gly Pro Trp Thr Lys Glu Pro Leu Lys Phe Asp
170 175 180
aat tca tat ttt gtg gag ctg ctt aag ggg gaa agt gag ggc cta ctg 623
Asn Ser Tyr Phe Val Glu Leu Leu Lys Gly Glu Ser Glu Gly Leu Leu
185 190 195 200
aaa cta ccc aca gac att gct tta ttg gat gat cct gag ttc aga cac 671
Lys Leu Pro Thr Asp Ile Ala Leu Leu Asp Asp Pro Glu Phe Arg His
205 210 215
tat gtc gag ctg tat gct aag gat gaa gat gcc ttc ttt agg gat tac 719
Tyr Val Glu Leu Tyr Ala Lys Asp Glu Asp Ala Phe Phe Arg Asp Tyr
220 225 230
gcc ata tca cac aag aaa ctg tct gag cta ggg ttt acc cca agt tct 767
Ala Ile Ser His Lys Lys Leu Ser Glu Leu Gly Phe Thr Pro Ser Ser
235 240 245
ggt tcc aag gcc aca gtg agg gat ggt act att tta gca caa agt gct 815
Gly Ser Lys Ala Thr Val Arg Asp Gly Thr Ile Leu Ala Gln Ser Ala
250 255 260
gta gga gtt gta gtg gct gct gca gtt gtg gca ctg agt tac tgg tat 863
Val Gly Val Val Val Ala Ala Ala Val Val Ala Leu Ser Tyr Trp Tyr
265 270 275 280
gaa gtc cgg aaa aag atg aag taaatc gtacgaccac attcttatct 910
Glu Val Arg Lys Lys Met Lys
285
ccatatttac tactacgtac tcttcaatga taaaagagga ccttattttt atggttataa 970
cacactttcc tcaaataata gcacgtagtg tcgactaaat ggaattagta caaaaatata 1030
gtaagaaact ggttgtaccc ttggaatata tgtttatgtt tgatacccat actttggagg 1090
gtttcttaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaa 1138
<210> 2
<211> 287
<212> PRT
<213> Capsicum annuum
<400> 2
Met Ala Lys Pro Ile Val Asp Thr Glu Tyr Ile Lys Glu Ile Glu Lys
1 5 10 15
Ala Arg Arg Asp Leu Arg Ala Leu Ile Ser Asn Lys Asn Cys Ala Pro
20 25 30
Ile Met Leu Arg Leu Ala Trp His Asp Ala Gly Thr Tyr Asp Ala Lys
35 40 45
Ser Lys Thr Gly Gly Pro Asn Gly Ser Ile Arg Asn Glu Glu Glu Phe
50 55 60
Thr His Gly Ala Asn Asn Gly Leu Lys Ile Ala Leu Asp Phe Cys Glu
65 70 75 80
Ala Val Lys Ser Lys His Pro Lys Ile Thr Tyr Ala Asp Leu Tyr Gln
85 90 95
Leu Ala Arg Val Val Ala Val Glu Val Thr Gly Gly Pro Thr Ile Asp
100 105 110
Phe Val Pro Gly Arg Lys Asp Ser Ser Ile Ser Pro Lys Glu Gly Arg
115 120 125
Leu Pro Asp Ala Lys Gln Gly Val Pro His Leu Lys Asp Val Phe Tyr
130 135 140
Arg Met Gly Leu Ser Asp Lys Asp Ile Val Ala Leu Ser Gly Gly His
145 150 155 160
Thr Leu Gly Arg Ala His Pro Glu Arg Ser Gly Phe Asp Gly Pro Trp
165 170 175
Thr Lys Glu Pro Leu Lys Phe Asp Asn Ser Tyr Phe Val Glu Leu Leu
180 185 190
Lys Gly Glu Ser Glu Gly Leu Leu Lys Leu Pro Thr Asp Ile Ala Leu
195 200 205
Leu Asp Asp Pro Glu Phe Arg His Tyr Val Glu Leu Tyr Ala Lys Asp
210 215 220
Glu Asp Ala Phe Phe Arg Asp Tyr Ala Ile Ser His Lys Lys Leu Ser
225 230 235 240
Glu Leu Gly Phe Thr Pro Ser Ser Gly Ser Lys Ala Thr Val Arg Asp
245 250 255
Gly Thr Ile Leu Ala Gln Ser Ala Val Gly Val Val Val Ala Ala Ala
260 265 270
Val Val Ala Leu Ser Tyr Trp Tyr Glu Val Arg Lys Lys Met Lys
275 280 285
<210> 3
<211> 1222
<212> DNA
<213> Capsicum annuum
<220>
<221> CDS
<222> (62)..(1057)
<400> 3
gcacgaggaa agagtataga attgtattat cataaatagt agcagtacat aatcaccatt 60
t atg gag tac tac tat aat tac aat tca att aac aaa atg gtt 103
Met Glu Tyr Tyr Tyr Asn Tyr Asn Ser Ile Asn Lys Met Val
1 5 10
tcg att att ttt att ctc gtg cta gca att gat ttg act atg gta tta 151
Ser Ile Ile Phe Ile Leu Val Leu Ala Ile Asp Leu Thr Met Val Leu
15 20 25 30
ggc caa ggg act cgt gtt gga ttt tat tcc agt acg tgc cca aga gct 199
Gly Gln Gly Thr Arg Val Gly Phe Tyr Ser Ser Thr Cys Pro Arg Ala
35 40 45
gaa tcc att gtt caa tca acg gtg agg tct cat ttt cag tct gat cca 247
Glu Ser Ile Val Gln Ser Thr Val Arg Ser His Phe Gln Ser Asp Pro
50 55 60
acg gtg gcg cca gga ttg ctg aca atg cac ttc cat gat tgt ttc gta 295
Thr Val Ala Pro Gly Leu Leu Thr Met His Phe His Asp Cys Phe Val
65 70 75
caa ggt tgt gat gct tcc atc ctc att tct ggt tct ggc act gag aga 343
Gln Gly Cys Asp Ala Ser Ile Leu Ile Ser Gly Ser Gly Thr Glu Arg
80 85 90
aca gct ccc cca aat tca ttg ttg aga gga tac gag gtt atc gat gat 391
Thr Ala Pro Pro Asn Ser Leu Leu Arg Gly Tyr Glu Val Ile Asp Asp
95 100 105 110
gct aag cag caa att gaa gct att tgt cca gga gtt gtc tcc tgt gct 439
Ala Lys Gln Gln Ile Glu Ala Ile Cys Pro Gly Val Val Ser Cys Ala
115 120 125
gac att ctt gct ctt gct gcc cgt gat tcc gtt ctt gtg act aaa gga 487
Asp Ile Leu Ala Leu Ala Ala Arg Asp Ser Val Leu Val Thr Lys Gly
130 135 140
ttg acc tgg tct gtg ccc acg ggg cgc agg gat gga cta gtt tca aga 535
Leu Thr Trp Ser Val Pro Thr Gly Arg Arg Asp Gly Leu Val Ser Arg
145 150 155
gca tca gac acg tct gat ttg cca ggc ttt act gag tct gtt gat tct 583
Ala Ser Asp Thr Ser Asp Leu Pro Gly Phe Thr Glu Ser Val Asp Ser
160 165 170
caa aag caa aag ttt tct gca aag ggt ctc aac act caa gat ctc gtc 631
Gln Lys Gln Lys Phe Ser Ala Lys Gly Leu Asn Thr Gln Asp Leu Val
175 180 185 190
acc ctt gtt ggt ggg cac aca att ggg acc tca gca tgc caa ttc ttc 679
Thr Leu Val Gly Gly His Thr Ile Gly Thr Ser Ala Cys Gln Phe Phe
195 200 205
agc tac agg cta tac aat ttc aac tcc act ggt ggc cct gac cct tca 727
Ser Tyr Arg Leu Tyr Asn Phe Asn Ser Thr Gly Gly Pro Asp Pro Ser
210 215 220
atc gac gca tcc ttt ctt cct acg ctt cga gga tta tgt cca caa aac 775
Ile Asp Ala Ser Phe Leu Pro Thr Leu Arg Gly Leu Cys Pro Gln Asn
225 230 235
gga gat ggc tca aag cgt gtg gca ctg gac act gga agc gtg aac aat 823
Gly Asp Gly Ser Lys Arg Val Ala Leu Asp Thr Gly Ser Val Asn Asn
240 245 250
ttt gac acc tcg tac ttc tct aac ttg agg aat ggt cgc gga att ctg 871
Phe Asp Thr Ser Tyr Phe Ser Asn Leu Arg Asn Gly Arg Gly Ile Leu
255 260 265 270
gaa tca gac cag aaa ttg tgg act gat gat tcc acc aag gtg ttt atc 919
Glu Ser Asp Gln Lys Leu Trp Thr Asp Asp Ser Thr Lys Val Phe Ile
275 280 285
caa agg tat tta ggg ctc agg gga ttt ctt gga ttg aga ttt ggt gtc 967
Gln Arg Tyr Leu Gly Leu Arg Gly Phe Leu Gly Leu Arg Phe Gly Val
290 295 300
gaa ttt gga agg tcg atg gtt aaa atg agc aat att gaa gtt aag act 1015
Glu Phe Gly Arg Ser Met Val Lys Met Ser Asn Ile Glu Val Lys Thr
305 310 315
ggg act aat ggt gaa att cgt aaa gtt tgc tca gca atc aac tga 1060
Gly Thr Asn Gly Glu Ile Arg Lys Val Cys Ser Ala Ile Asn
320 325 330
ttcataatat catcctctta tttatgtact taattacact ctttttacat aggttcgttc 1120
atgttagcgc aagctgcaaa gtcgaattgt tatagtggta tccaataata tcaataaata 1180
aaagcattta ccgagtgaac ttgcaaaaaa aaaaaaaaaa aa 1222
<210> 4
<211> 332
<212> PRT
<213> Capsicum annuum
<400> 4
Met Glu Tyr Tyr Tyr Asn Tyr Asn Ser Ile Asn Lys Met Val Ser Ile
1 5 10 15
Ile Phe Ile Leu Val Leu Ala Ile Asp Leu Thr Met Val Leu Gly Gln
20 25 30
Gly Thr Arg Val Gly Phe Tyr Ser Ser Thr Cys Pro Arg Ala Glu Ser
35 40 45
Ile Val Gln Ser Thr Val Arg Ser His Phe Gln Ser Asp Pro Thr Val
50 55 60
Ala Pro Gly Leu Leu Thr Met His Phe His Asp Cys Phe Val Gln Gly
65 70 75 80
Cys Asp Ala Ser Ile Leu Ile Ser Gly Ser Gly Thr Glu Arg Thr Ala
85 90 95
Pro Pro Asn Ser Leu Leu Arg Gly Tyr Glu Val Ile Asp Asp Ala Lys
100 105 110
Gln Gln Ile Glu Ala Ile Cys Pro Gly Val Val Ser Cys Ala Asp Ile
115 120 125
Leu Ala Leu Ala Ala Arg Asp Ser Val Leu Val Thr Lys Gly Leu Thr
130 135 140
Trp Ser Val Pro Thr Gly Arg Arg Asp Gly Leu Val Ser Arg Ala Ser
145 150 155 160
Asp Thr Ser Asp Leu Pro Gly Phe Thr Glu Ser Val Asp Ser Gln Lys
165 170 175
Gln Lys Phe Ser Ala Lys Gly Leu Asn Thr Gln Asp Leu Val Thr Leu
180 185 190
Val Gly Gly His Thr Ile Gly Thr Ser Ala Cys Gln Phe Phe Ser Tyr
195 200 205
Arg Leu Tyr Asn Phe Asn Ser Thr Gly Gly Pro Asp Pro Ser Ile Asp
210 215 220
Ala Ser Phe Leu Pro Thr Leu Arg Gly Leu Cys Pro Gln Asn Gly Asp
225 230 235 240
Gly Ser Lys Arg Val Ala Leu Asp Thr Gly Ser Val Asn Asn Phe Asp
245 250 255
Thr Ser Tyr Phe Ser Asn Leu Arg Asn Gly Arg Gly Ile Leu Glu Ser
260 265 270
Asp Gln Lys Leu Trp Thr Asp Asp Ser Thr Lys Val Phe Ile Gln Arg
275 280 285
Tyr Leu Gly Leu Arg Gly Phe Leu Gly Leu Arg Phe Gly Val Glu Phe
290 295 300
Gly Arg Ser Met Val Lys Met Ser Asn Ile Glu Val Lys Thr Gly Thr
305 310 315 320
Asn Gly Glu Ile Arg Lys Val Cys Ser Ala Ile Asn
325 330
Claims (7)
- 서열목록의 서열 1에 기재된 염기서열로 표시되며, 식물 병원성 세균 혹은 식물체 병저항성 유도물질에 의해 발현 유도됨을 특징으로 하는 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소를 코딩하는 유전자.
- 제 1항에 있어서, 상기 식물 병원성 세균은 고추세균성점무늬병균, 고추역병균 혹은 고추탄저병균 중 어느 하나임을 특징으로 하는 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소를 코딩하는 유전자.
- 제 1항에 있어서, 상기 식물체 병저항성 유도물질은 살리실산 혹은 과산화수소 중 어느 하나임을 특징으로 하는 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소를 코딩하는 유전자.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 고추세균성점무늬병균을 식물 품종에 감염시켜 서열목록 서열번호 1에 기재된 아스코르베이트 과산화효소 혹은 서열목록 서열번호 3에 기재된 과산화효소를 코딩하는 유전자의 발현 여부를 탐지하고, 총 과산화효소의 활성도와 과산화수소의 축적량을 확인하여 식물의 저항성 반응을 탐색함을 특징으로 하는 식물방어반응 탐색방법.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR10-2003-0003099A KR100482842B1 (ko) | 2003-01-16 | 2003-01-16 | 식물병원세균에 의해 유도되는 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소 유전자와 과산화효소 유전자 및 상기 유전자를 이용한 식물방어반응 탐색 방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR10-2003-0003099A KR100482842B1 (ko) | 2003-01-16 | 2003-01-16 | 식물병원세균에 의해 유도되는 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소 유전자와 과산화효소 유전자 및 상기 유전자를 이용한 식물방어반응 탐색 방법 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR10-2005-0017907A Division KR100489010B1 (ko) | 2005-03-03 | 2005-03-03 | 식물병원세균에 의해 유도되는 고추 유래의 아스코르베이트과산화효소 유전자와 과산화효소 유전자 및 상기 유전자를 이용한 식물방어반응 탐색 방법 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20040065899A KR20040065899A (ko) | 2004-07-23 |
| KR100482842B1 true KR100482842B1 (ko) | 2005-04-14 |
Family
ID=37355970
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR10-2003-0003099A KR100482842B1 (ko) | 2003-01-16 | 2003-01-16 | 식물병원세균에 의해 유도되는 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소 유전자와 과산화효소 유전자 및 상기 유전자를 이용한 식물방어반응 탐색 방법 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR100482842B1 (ko) |
-
2003
- 2003-01-16 KR KR10-2003-0003099A patent/KR100482842B1/ko not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20040065899A (ko) | 2004-07-23 |
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