KR100424726B1

KR100424726B1 - 안정화시킨 비타민 c와 파이토스핑고신을 함유하는 피부보호화장료 조성물

Info

Publication number: KR100424726B1
Application number: KR10-1998-0058217A
Authority: KR
Inventors: 김범준; 조병기
Original assignee: 주식회사 코리아나화장품
Priority date: 1998-12-24
Filing date: 1998-12-24
Publication date: 2004-05-17
Also published as: KR20000042127A

Abstract

본 발명은 안정화시킨 비타민 C와 파이토스핑고신을 함유하는 피부보호 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 화장료 조성물은 2-히드록시프로필레이티드-β-시클로덱스트린에 L-아스코르브산 및 가자(Terminalia chebulaRetz.)추출물을 미세포집하여 안정화 시킨 복합체 및 파이토스핑고신(Phytosphingosine)을 함유할 수 있다.

Description

안정화시킨 비타민 Ｃ와 파이토스핑고신을 함유하는 피부보호 화장료 조성물

본 발명은 안정화시킨 비타민 C와 파이토스핑고신(Phytosphingosine)을 함유하는 피부보호 화장료에 관한 것이다.

피부는 그 면적이 1.8m²정도로 엄청나서 인체 중 가장 큰 기관이다. 이런 피부는 외부로부터 인체의 다른 중요한 기관을 보호하고 내부의 유용한 성분이 밖으로 빠져나가는 것을 방지하는 장벽의 기능, 온도조절기능등 다양한 역할을 감당하고 있다. 하지만 피부는 시간이 지남에 따라 점점 그 기능이 떨어지고 이로인한 다양한 변화가 오면서 노화되어가는데, 피부의 두께가 얇아지고, 피부장벽의 기능이 급격하게 저하되며 피부의 수분함량이 떨어지고 피부가 건조해질 뿐만아니라 다양한 피부 병변을 유발한다. 특별히, 자외선량의 증가와 대기오염 및 현대인의 과도한 피로와 스트레스등으로 인한 반응성이 높은 활성산소, 자유라디칼 및 과산화물을 생성은 생체성분(단백질, 핵산, 세포막지질등)을 산화시키거나 변성시켜 피부노화의 주원인으로 작용한다. 특히, 피부결합조직을 이루고 있는 콜라겐(collagen), 엘라스틴(elastin), 프로티오글리칸(proteoglycans), 글루코스아미노글리칸(glucosaminoglycan), 라미닌(laminin), 파이브로넥틴(fibronectin)등이 산화되어 그 기능을 잃어버림으로써 피부는 탄력을 잃고 피부의 주름이 과도하게 형성되면서 노인성 피부로 변화되어 간다. 주름형성에 따른 피부노화 현상을 억제하고자하는 연구는 화장료 영역에서도 피부 보호 및 미용 차원에서 중요한 과제로 많은 연구가 진행되고 있다.

피부과 영역에서 피부주름 및 기미, 색소침착 개선을 위해 널리 사용되고 있는 레티노이드류, 그중에서도 트레티노인(tretinoin)과 레티놀(retinol)에 대한 피부주름제거 임상 결과들이 다양하게 보고되어지고 있는데 레티노이드는 일광에 의해 형성된 피부주름살이나 피부처짐, 탄력감소등을 효과적으로 개선하였고, 화장료에서도 레티놀을 함유하는 화장료 조성물을 상업화하여 주름개선에 사용되고 있다.

일본 특개평5-246838호에는 콜라겐 합성에 따른 피부 주름개선 방법이 소개되어 있는데 콜라겐 합성과 분해에 있어 나이가 들면서 콜라겐을 분해하여 콜라겐 대사를 원활하게하는 콜라게나제(collagenase)의 활성이 저하되면 가교형 콜라겐의 생성이 증가되어 피부조직의 주름 형성이 증가하게된다. 미국 특허 4,603,146 및 4,877,805등에서도 콜라겐 합성과 분해억제에 효과적인 레티놀(비타민 A)을 이용한 주름개선 사례가 있다. 레티노이드를 함유하는 화장료의 제조는 기존의 처방과는 달리 불안정한 레티노이드를 안정화 시키기 위한 다양하고 새로운 기술을 도입하고 있다.

이외에도 콜라겐 합성 과정에 필수적인 L-아스코르브산(비타민 C)을 함유하는 화장료 조성물이 피부주름개선, 자외선차단, 기미/주근깨/검버섯 등의 색소침착등에 효과적이다 라는 보고가있다.(미국특허 제4,938,969호 / 미국특허 제4,772,591호 / 유럽특허 제0533667호) 뿐만 아니라 각질제거에 효과가 있는 아하(α-Hydroxy acid : AHA) 함유 화장료 조성물 역시 과각질 제거와 함께 세포의 활성을 촉진하여 피부를 개선하는데 널리 사용되어지고 있다.

본 발명자들은 열이나 빛, 산소등에 매우 불안정하여 대기중에 노출되거나 수용액중에서 쉽게 산화되어 변색, 변취가 일어나 안정성 및 안전성의 문제가 발생되고 역가가 떨어지는 문제점을 갖고 있는 L-아스코르브산(비타민 C)의 안정성 문제를 극복하고, 보다 우수한 주름개선, 탄력증진, 보습효과, 색소침착억제 및 항균효과를 갖는 피부보호화장료를 제공하기 위하여 비타민 C 및 항산화 효과가 뛰어난 가자(Terminalia chebulaRetz. Terminaliae Fructus)추출물을 2-히드록시프로필레이티드-β-시클로덱스트린(2-Hydroxypropylated-β-Cyclodextrin, HPBCD)에 미세포접시킨 복합체와 각질층의 세포간지질 구성성분으로 중요한 세라마이드 생합성의 중간체인 파이토스핑고신(Phytosphingosine)을 함유한 화장료를 제조한 결과, 기존의 L-아스코르브산(비타민 C) 및 비타민 C 유도체를 함유한 화장료보다 안정성 및 안전성이 우수하였고, 주름개선, 색소침착 억제효과가 더욱 뛰어났고, 탄력증진, 보습효과, 항균효과도 뛰어남을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 비타민 C 및 가자(Terminalia chebulaRetz., Terminaliae Fructus)추출물을 2-Hydroxypropylated-β-Cyclodextrin(HPBCD)에 미세포접시킨 복합체와 파이토스핑고신(Phytosphingosine)을 함유하는 피부보호 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기 본 발명의 화장료 조성물은 2-히드록시프로필레이티드-β-시클로덱스트린(HPBCD)에 L-아스코르브산 및 가자 추출물을 미세포집하여 안정화 시킨 복합체를 화장료 총중량에 대해 0.01중량% 내지 20.0 중량% 함유할 수 있다.

상기 본 발명의 화장료 조성물은 파이토스핑고신을 화장료 총중량에 대해 0.01중량% 내지 20.0 중량%의 양으로 함유할 수 있다.

상기 복합체는 L-아스코르브산과 가자 추출물을 복합체 중량에 대해 각각 0.1중량% 내지 80.0중량%, 0.001중량% 내지 5.0중량% 함유할 수 있다.

상기 가자 추출물은 물, 메탄올 또는 메탄올 수용액, 에탄올 또는 에탄올 수용액, 아세톤, 에틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜 또는 1,3-부틸렌 글리콜 수용액, 핵산, 디에틸에테르, n-프로판올, 이소프로판올 및 n-부탄올로 이루어진 군으로부터 선택된 추출용매로 추출하여 사용할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이크림, 영양크림, 맛사지 크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징 워터, 파우더, 팩 또는 엣센스 등의 제형을 갖는다.

본 발명을 보다 상세히 설명하면 다음과 같다.

비타민 C(L-아스코르브산)는 피부가 이용할 수 있는 생물학적인 활성을 갖고 있는 형태로 골격, 치아, 혈관이 튼튼하도록 돕고 면역기능을 돕는다. 특히, 콜라겐 합성과정에 관여하여 콜라겐 합성을 촉진하는데, 콜라겐 합성의 유전정보를 제공하는 mRNA의 합성을 촉진하고 과립형질내세망(rER)에서 콜라겐 합성에 있어 중요한 Hydroxyprolin의 Hydroxylation 과정의 중요한 Co-factor로 작용한다. Hydroxyproline은 콜라겐 Polypeptide의 10% 정도를 차지하고 있으며 동물에만 존재한다. 이 Hydroxyprolin은 Prolin과 α-Ketoglutarate가 산소(O₂)가 존재하는 조건에서 Prolyl hydroxylase에 의해 Hydroxylation에 의해 생합성 되는데 이 Hydroxylation과정에 비타민 C(L-아스코르브산)가 Co-factor로 작용해 Hydroxyproline이 생합성 된다. 즉 비타민 C(L-아스코르브산)는 Prolyl hydroxylase의 활성을 촉진하여 Hydroxyprolin 생합성을 촉진함으로서 Triple helix 구조인 콜라겐 생합성을 촉진하여 피부주름 개선효과를 주는 것이다. 이 Prolyl hydroxylase는 UVA에 의해 그 활성이 저해를 받는데 비타민 C(L-아스코르브산)에는 자외선차단 기능도 있어 UVA에 의한 Prolyl hydroxylase의 활성저해를 차단하는 효과도 갖고 있다. 비타민 C(L-아스코르브산)에 의한 자외선 차단효과는 기존의 자외선차단제와는 다른 차단작용을 하는데 이는 UVA와 UVB의 스펙트럼 선상에서의 L-아스코르브산이 흡수할 수 있는 영역이 전혀 없기 때문이다. 비타민 C는 UVB 보다는 UVA에 대한 차단기능이 강하고 UVB로 인해 발생한 홍반 및 부종을 감소시킨다. 이런 다양한 생물학적인 기능을 갖고 있는 비타민 C는 일단 피부에 들어오면 저장되는 효능이 있어서 사용을 중단해도 장시간동안 그 효능을 유지할 수 있다.

또한, 피부내에 비타민 C가 부족시 이미 형성된 콜라겐의 분해가 촉진되어 Hydroxyproline이 뇨에서 다량 검출됨을 알 수 있어 비타민 C는 콜라겐 합성 뿐만아니라 분해억제에도 효과적이다.

비타민 C(L-아스코르브산)는 피부, 혈액 및 기타 조직에서 강력한 생체 항산화제로 작용하는데, 두 개의 전자를 받아 Dehydro-L-아스코르브산 형태로 쉽게 산화되는 당유사 구조(Sugarlike structure)로 생체내에서 반응성이 높은 활성산소, 자유라디칼 및 과산화물에 의한 생체성분(단백질, 핵산, 세포막지질등)이 산화되거나 변성되는 것을 방지함으로서 피부노화의 원인을 차단하는 항산화 효과를 갖고 있다.

아울러, 비타민 C(L-아스코르브산)는 색소침착억제 효과를 갖고 있는데, 이는 색소침착과 깊은 관련이 있는 멜라닌 생성억제효과를 갖고 있다. 비타민 C는 멜라닌 형성에 중요한 티로신나제의 활성을 억제하고, 산화과정에 의해 형성된 산화형 멜라닌을 다시 환원시켜 환원형 멜라닌으로 변화시킴으로서 멜라닌에 의한 색소침착증을 개선시키는 효과를 갖고 있다.

이외에도 비타민 C(L-아스코르브산)의 생리적 활성은 다양하여, 생체내 엽산대사 및 아미노산의 대사과정에 관여하며, 면역시스템계에서도 매우 중요한 역할을 담당하여 백혈구의 세균작용을 도와주고, 감염이 전개되는 동안 백혈구의 이동을 촉진하여 감염을 억제하고 백혈구의 세포막을 프리라디칼로부터 보호함은 물론 바이러스 증식 억제물질인 인터페론의 생합성을 증가시키는 작용을 하여, 다양한 감염성 질환에 대한 생체의 저항력을 상승시켜준다. 이런 비타민 C(L-아스코르브산)는 대부분의 동물들에서는 포도당(글루코스)으로부터 비타민 C(L-아스코르브산)를 생합성하는데 사람은 포도당(글루코스)으로부터 비타민 C(L-아스코르브산)로 전환하는데 필요한 효소가 부족하여 생합성을 할 수 없으므로 외부로부터 공급받아야 한다. 뿐만아니라 열, 빛, 수분, 산소등에 매우 민감하여 불안정하고 수용성으로 지용성 비타민에 비해 체내 저장능력도 아주 낮다. 따라서 음식 및 기타 방법으로 계속 공급해 주어야하며 결핍시 임상적인 증세는 콜라겐생합성의 저하로 주름이 형성되고, 피로하며, 피부가 거칠어지며, 감염에 대한 저항력이 떨어지고, 모세관 출혈이 나타나는 등 다양한 피부보호 차원에서 기능이 저하되어 피부병변이 발생하고, 장기적인 결핍인 경우 괴혈병과 같은 심각한 질병을 유발할 수도 있다. 따라서 적정 1일 권장량을 섭취하고 피부보호를 위한 적절한 비타민 C 함유 경피 흡수제로서의 화장료와 같은 물질을 사용해야만 한다.

비타민 C(L-아스코르브산)를 수용성 상태로 피부에 도포 했을 때 비타민 C는 이온화되지 않은 조건에서 피부장벽을 쉽게 통과하여 흡수되며, 비 이온 상태를 유지하기 위한 비타민 C 용액의 조건은 산도(pH)가 반드시 4.2이하 이어야한다. 이런 조건하에서 피부에 비타민 C를 발랐을 때 약 15% 정도가 48시간 이내에 피부에 흡수될 수 있다. 일단 피부 내로 들어온 비타민 C는 안정화되어져 물이나 기타 문지름 등에 의해 제거되지 않고 피부에 축적되며, 비타민 C(L-아스코르브산)를 입을 통해 경구투여 했을 때는 혈액을 통해 피부까지 도달하는 양은 미량으로 피부 미용을 위해서는 피부에 직접 비타민 C를 바르는 것이 효과적이다. 비타민 C의 피부 축척양은 피부에 도포 했을 때가 입을 통한 경구투여보다 20에서 40배정도 높아 외용제에 의한 비타민 C(L-아스코르브산)의 연구가 활발히 진행되고 있다.

가자추출물은 사군자과(使君子科) 식물인 가자나무(訶子 ;Terminalia chebulaRetz., Terminaliae Fructus)의 성숙한 과실을 말린 것으로부터 유효성분을 추출한 것으로 가자추출물의 생리적인 효과는 항산화효과 및 프리라디칼제거효과가 우수하고 항균효과도 강력한 것으로 나타나 있다.

화장료의 다양한 생리적인 효능효과 중에 피부의 노화 억제와 관련하여 생체성분(단백질, 핵산, 세포막지질등)의 산화에 의한 생체성분의 화학적 변화는 피부노화뿐만 아니라 다양한 생체기관 및 조직의 기능 저하를 가져올 수 있다. 생체에는 글루타치온, 카탈라아제, SOD(Superoxide dismutase), 바타민 C 및 비타민 E등과 같은 다양한 항산화 성분이 존재하고 이들에 의해 생체성분의 산화 및 프리라디칼에 의한 손상으로부터 보호 받을 수 있다. 그러나 나이가 들면서 이런 생체내 항산화 성분 및 프리라디칼 소거제의 생합성 능력이 저하되고 외부환경, 특히 자외선, 대기환경의 오염, 불건전한 식생활, 스트레스, 질병등과 같은 자유라디칼(Free radical) 생성원의 증가로 인해 인체는 점점 손상을 받아 다양한 노화현상이 나타나게 된다. 따라서 나이가 들면서 현격하게 감소하는 자유라디칼을 소거 능력을 강화함으로서 피부에 대한 산화적 스트레스를 제거하여 피부의 노화를 방지 또는 지연할 수 있다. 이에 본 발명자들은 천연 식물을 대상으로 항산화 및 프리라디칼소거능이 있는 물질에 대한 연구를 진행하던 중 가자(Terminalia chebulaRetz., Terminaliae Fructus)추출물이 우수한 항산화 및 프리라디칼소거능을 갖고 있음을 발견하여 L-아스코르브산(비타민 C)의 안정화 및 생체성분의 산화적 스트레스를 제거하여 피부노화를 방지할 수 있으리라 본다.

2-Hydroxypropylated-β-Cyclodextrin(HPBCD)는 의료용품에 사용되는 안전하면서도 높은 물 용해성을 갖고 있고, 열에 매우 안정하며(23∼80℃), 다른 성분과의 상용성 및 입자크기의 조절이 용이한 장점을 갖고 있다. 따라서 물, 열, 빛등에 매우 불안정한 L-아스코르브산(비타민 C)를 효과적으로 안정화 시킬 수 있다. 아울러 피부에서 HPBCD의 경피흡수 내지는 경피침투력이 우수하여 4.9% HPBCD 수용액을 피부에 도포하였을 때 적용 후 5분 후에는 피부의 표면으로부터 200㎛, 10분 후에는 900㎛, 20∼40분 후에는 1,500㎛까지 균일하게 HPBCD가 분포함을 입증하여(U. Vollmer, Ph.D. Thesis, Kiel, 1992) L-아스코르브산(비타민 C)를 HPBCD에 포접하여 안정화했을 때 L-아스코르브산(비타민 C)가 안정하게 진피층까지 도달할 수 있음을 알 수 있고 이로인해, 진피층에 존재하는 섬유아세포(Fibroblast)에서 콜라겐을 생합성하는데 L-아스코르브산(비타민 C)가 효과적으로 작용할 수 있다. 또한 2-Hydroxypropylated-β-Cyclodextrin(HPBCD)는 피부에서 유용성분이 효과적으로 흡수될 수 있도록 도와주는 촉진제로도 이용되는데 이는 HPBCD가 친유성인 각질층의 세포간지질과 표피와 진피의 친수성 부분에서 쉽게 흡수되기 때문이다.(U. Vollmer, Ph.D. Thesis, Kiel, 1992)

파이토스핑고신(Phytosphingosine)은 세라마이드의 생합성 경로의 중간체로서 이를 피부에 적용함으로서 결핍된 세라마이드 성분을 보충해주거나 피부세포가 직접 세라마이드를 합성할 수 있도록 해준다.(USP5578641)

기능과 효과를 강조한 약용화장품(Cosmeceuticals)의 개념으로 기능성화장품은 비타민 A인 레티놀과 아하(AHA)등 몇몇 원료들이 그 효능을 과학적으로 입증하여 폭발적인 판매신장과 시장을 형성하고 있지만 대부분 안전성과 유효성 및 안정성의 문제점을 안고 있다. 이런 기능성과 안전성을 높이기 위해 생체 성분을 활용한 화장료들에 대한 연구가 진행되고 있는데 그 중 세라마이드는 그 자체가 가지고 있는 생리적 기능의 다양성과 안전성으로 인해 고기능성 화장료의 원료로 부각되고 있다.

사람의 피부는 표피, 진피, 피하지방층으로 되어 있으며 표피는 크게 4개의 층으로 구분할 수 있는데 표피층의 주세포인 각질형성세포는 기저층에서 각질층으로 올라오면서 생화학적인 변화와 형태의 변화가 일어난다. 이때 각질층의 각질세포와 각질세포 사이의 세포간지질 성분은 기저층에서는 대부분 인지질(phospholipid)의 형태로 존재하다가 유극층에서 지질대사 과정을 거쳐 각질층에서는 대부분 세라마이드 형태로 존재한다. 이 세라마이드는 피부의 표피층이 정상적인 경우에는 피부가 손상을 입었더라도 곧바로 콜레스테롤, 지방산 및 세라미이드가 피부세포 내에서 합성, 공급됨으로서 복원되며, 이 중 세라미이드 합성이 가장 늦게 시작되므로 피부보호 및 피부의 정상적인 기능유지를 위해 세라미이드의 공급이 필요하다.

이 세라마이드는 표피층 세포의 외부환경에 대한 신호전달로 콜라겐 합성에 도움을 주며 피부 면역작용을 높여 피부를 정상으로 만드는 노화억제작용과 피부 잔주름 및 주름 발생의 가장 큰 원인이 되는 자외선에 의한 세포손상과 수분증발 및 콜라겐 파괴로 인한 탄력손실 방지, 잔주름의 지연 및 완화하는 효과가 뛰어나다. 또 수분조절과 수분증발을 억제하는 보습효과, 세포와 세포사이를 단단하게 연결해 탄력을 증진시키는 리프팅 기능이 있다.

세라마이드는 화학적으로 한가지의 물질을 일컫는 것이 아니라 유사한 여러 가지의 물질을 통칭하는 것으로 사람의 피부에는 6가지의 세라마이드가 존재하는 것으로 알려져 있다. 특히 세라마이드는 일반적으로 콩에서 추출한 식물 유래의 것보다 동물 유래의 것이 사람의 세라마이드와 유사하고 최근에는 효모(yeast)로부터 사람의 피부와 동일한 세라마이드를 분리해 사용하고 있다.

각질층의 가장 풍부한 세포간지질인 세라마이드의 구성 성분의 하나로 Sphingoid bases는 파이토스핑고신, sphingosine, sphinganine이 5.6:2.4:1의 비율로 존재하며, 세라미이드는 이들 free sphingoid bases와 free fatty acid 가 ceramidase의 효소작용에 의해 형성된다. Free sphingoid base는 protein kinase C의 활성을 억제하여 세포성장에 중요한 역할을 감당하며, 세라마이드 생합성을 촉진하고, 항염효과, 항산화효과 및 피부표면의 세균, 미생물의 성장을 억제하는 항균효과등 다양한 생리활성을 갖고 있다.

파이토스핑고신은 효모(yeast)로부터 분리해 사용하고 있는데 이는 구조와 성질이 사람의 피부에 존재하는 파이토스핑고신과 같다.

파이토스핑고신은 피부에 존재하는 ceramide의 6가지 중 ceramide 1, 3, 6 생합성의 중간체로 피부에 불필요한 미생물의 성장을 억제하고, protein kinase C의 활성을 억제하여 염증 전구물질인 인터루킨 1α(IL-1α)의 분비를 억제하여 염증 및 자극을 억제하여 건강한 피부를 유지해준다.

본 발명의 화장료 조성물은 2-Hydroxypropylated-β-Cyclodextrin(HPBCD)에 L-아스코르브산(비타민 C) 및 가자(Terminalia chebulaRetz., Terminaliae Fructus)추출물을 미세포집(Microencapsulation)하여 안정화 시킨 복합체를 배합시켜 얻어지며, 이때 가자추출물은 항산화제로서 작용한다. 그 양은 화장료의 총 중량에 대해 L-아스코르브산(비타민 C) 및 가자(Terminalia chebulaRetz., Terminaliae Fructus)추출물을 2-Hydroxypropylated-β-Cyclodextrin(HPBCD)에 안정화 시킨 복합체를 0.01∼20.0중량%, 바람직하게는 0.1∼10.0중량% 함유하고, 이때, HPBCD에 포집하여 안정화시킨 L-아스코르브산(비타민 C)의 양은 복합체의 중량에 대해 0.1∼80.0중량%, 바람직하게는 1.0∼60.0중량%이고, 가자추출물은 0.001∼5.0중량%, 바람직하게는 0.01∼3.0중량%이다. 또 파이토스핑고신(Phytosphingosine)을 화장료 총 중량에 대하여 0.01∼20.0중량%, 바람직하게는 0.05∼5.0중량%이다.

이하, L-아스코르브산(비타민 C) 및 가자(Terminalia chebulaRetz., Terminaliae Fructus)추출물을 2-Hydroxypropylated-β-Cyclodextrin(HPBCD)에 미세포집(Microencapsulation)하여 안정화 시킨 복합체를 얻기 위한 제조방법 및 가자추출물에 대한 제조방법을 간단히 설명한 후, 실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 상세히 설명한다. 그러나 본 발명이 이들 실험예에만 한정되는 것은 아니다.

제조예 1. 가자추출물(Terminalia chebulaRetz., Terminaliae Fructus)

사군자과 식물인 가자의 과실을 말린 것을 깨끗한 물로 세척한 다음 건조하여 분말화 하고, 분말화된 가자의 건조 중량에 대하여 추출 용매로서 물, 저급 알코올(메탄올, 에탄올), 물과 저급 알코올의 혼합물, 아세톤, 에틸아세테이트, 1·3-부틸렌 글리콜, 헥산, 디에틸 에테르, 노말 프로판올, 이소-프로판올, 노말-부탄올을 1∼15배의 양으로 가해 실온에서 1∼15일간 침적시켜 유효 성분을 추출한다. 이렇게 추출한 추출용액을 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치를 이용하여 감압농축하여 목적하는 본 발명의 가자 추출물을 얻었다.

제조예 2. 비타민 C 및 가자추출물을 함유한 HPBCD 복합체

2-Hydroxypropylated-β-Cyclodextrin(HPBCD) 330.0g을 20℃, 실온에서 증류수 1ℓ에 용해하여 포화된 HPBCD 수용액을 준비하고, L-아스코르브산(비타민 C) 및 가자(Terminalia chebulaRetz., Terminaliae Fructus)추출물을 적정량 첨가한 뒤 이 혼합물을 12∼24시간 동안 교반하여 Complex(복합체)를 형성시킨다. 형성된 복합체를 교반액으로부터 분리하고 증류수로 2∼3회 세척한 뒤, 50℃, 진공상태에서 건조시킨 뒤, 분쇄하여 분말상태의 복합체를 얻는다.

또한, 본 발명의 피부보호화장료는 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 통상적인 화장료, 예를들면, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이크림,영양크림, 맛사지크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 파우더, 팩, 엣센스등의 제형을 가질 수 있다. 그리고, 각 제형의 피부보호화장료 조성물에 있어서, 상기한 L-아스코르브산(비타민 C) 및 가자(Terminalia chebulaRetz., Terminaliae Fructus)추출물을 2-Hydroxypropylated-β-Cyclodextrin(HPBCD)에 미세포집(Microencapsulation)하여 안정화 시킨 복합체 와 파이토스핑고신외에 다른 성분들을 기타 화장료의 제형 또는 사용목적 등에 따라 당업자가 어려움없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.

다음은 L-아스코르브산(비타민 C) 및 가자(Terminalia chebulaRetz., Terminaliae Fructus)추출물을 2-Hydroxypropylated-β-Cyclodextrin(HPBCD)에 미세포집(Microencapsulation)하여 안정화시킨 복합체(이하 복합체)와 파이토스핑고신을 함유한 화장료의 처방예를 들어 본 발명을 구체적으로 설명하고자 한다.

처방 예1

비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 화장료 중 유연 화장수의 처방예는 다음과 같다.

성분	중량%
복합체	2.0
파이토스핑고신	0.01
1,3- 부틸렌 글리콜	6.0
글리세린	4.0
피이지 1500	1.0
소듐히아루로네이트	1.0
폴리 소베이트 20	0.5
에탄올	8.0
방부제, 색소	적량
벤조 페논 -9	0.05
향	미량
정제수	잔량
합계	100

처방 예 2

비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 화장료 중 영양화장수 처방예는 다음과 같다.

성분	중량부
복합체	5.0
파이토스핑고신	0.1
1,3-부틸렌 글리콜	4.0
글리세린	4.0
세테아릴알콜	0.8
글리세릴스테아레이트	1.0
트리 에탄올 아민	0.13
토코페릴 아세테이트	0.3
유동 파라핀	5.0
스쿠 알란	3.0
마카다미아 너트 오일	2.0
폴리 솔베이트 60	1.5
솔비탄 세스퀴 올레이트	0.5
카르복시 비닐 폴리머	1.0
방부제, 색소	적량
향	적량
정제수	잔량
합계	100

처방 예 3

비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 화장료 중 영양 크림의 처방예는 다음과 같다.

성분	중량부
복합체	10.0
파이토스핑고신	0.5
메도우폼오일	3.0
세테아릴알콜	1.5
스테아린산	1.5
글리세릴스테아레이트	1.5
유동 파라핀	10.0
밀 납	2.0
폴리 솔베이트 60	0.6
솔비탄 세스퀴올레이트	2.5
스쿠알란	3.0
1,3-부틸렌 글리콜	3.0
글리세린	5.0
트리 에탄올 아민	0.5
토코페릴 아세테이트	0.5
방부제, 색소	적량
향	적량
정제수	잔량
합계	100

처방 예4

비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 화장료 중 맛사지 크림의 처방예는 다음과 같다.

성분	중량부
복합체	2.0
파이토스핑고신	0.05
1,3-부틸렌 글리콜	6.0
소듐 마그네슘 실리케이트	0.3
글리세린	4.0
트리 에탄올 아민	0.15
밀 납	2.0
바셀린	5.0
글리세릴 스테아레이트	1.5
토코페릴 아세테이트	0.1
폴리 솔베이트 60	2.0
솔비탄 세스퀴 올레이트	0.8
세테아릴 알코올	2.0
유동 파라핀	40.0
카르복시 비닐 폴리머	0.15
방부제	적량
향	적량
정제수	잔량
합계	100

처방 예5

비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 화장료 중 팩 처방예는 다음과 같다.

성분	중량부
복합체	2.0
파이토스핑고신	0.1
1,3-부틸렌 글리콜	1.0
글리세린	2.0
피이지 4000	1.5
폴리비닐알콜	12.5
에 탄 올	7.0
경화피마자유	0.8
셀룰로오스검	0.3
방부제, 색소	적량
향	적량
정제수	잔량
합계	100

처방 예6

비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 화장료 중 에센스 처방예는 다음과 같다.

성분	중량부
복합체	10.0
파이토스핑고신	1.0
글리세린	10.0
1,3-부틸렌글리콜	5.0
피이지 1500	2.0
알란토인	0.1
DL-판테놀	0.3
이.디.티.에이-2Na	0.02
히드록시에틸 셀룰로우스	0.1
소듐히아루로네이트	8.0
카르복시 비닐 폴리머	0.2
트리에탄올아민	0.18
옥틸도데세스-16	0.4
에탄올	6.0
향, 방부제, 색소	적량
정제수	잔량
합계	100

실험예 1

상기 비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 화장료에 대한 피부주름개선 효과를 측정 하였다.

1) 실험방법

30세 이상의 여성 15명을 대상으로 비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 크림(본 발명품 A)과 비타민 C를 안정화시킨 복합체만을 함유한 크림(비교군 B) 및 복합체 대신에 비타민 C 유도체인 Magnesium ascorbyl phosphate 만을 함유한 크림(비교군 C), Magnesium ascorbyl phosphate와 파이토스핑고신을 함유한 크림(비교군 D)을 하기 표 1에 따라 제형하여 팔의 상박에 2X2㎠의 면적에(2회/일, 0.2g/회) 도포하여 피부 주름을 투명한 실리콘 재질의 용액을 이용하여 레플리카(Replica)를 떠서 피부주름측정기(SKIN VISIOMETER SV400, C+K Electronics GmbH. Germany)로 피부주름변화를 측정하였다. 레플리카를 CCD 카메라로 그 상을 3차원적으로 분석하며 피부주름의 분석은 각각의 주름의 거칠기(R_m: m은 1이상의 정수)의 합을 주름의 개수로 나눈 값인 하기 수학식 1의 평균주름거칠기(R_z)로 주름개선 효과를 분석하였다.

R₁+R₂+R₃+ … +R_m-2+R_m-1+R_m

R_z= -------------------------

주름의 개수(m)

제형 예

	중량부
	본 발명품(A)	비교군(B)	비교군(C)	비교군(D)
복합체	10.0	10.0	-	-
파이토스핑고신	0.5	-	-	1.0
마그네슘 아스코르빌포스페이트	-	-	10.0	10.0
메도우폼오일	3.0	3.0	3.0	3.0
세테아릴알콜	1.5	1.5	1.5	1.5
스테아린산	1.5	1.5	1.5	1.5
글리세릴스테아레이트	1.5	1.5	1.5	1.5
유동 파라핀	10.0	10.0	10.0	10.0
밀 납	2.0	2.0	2.0	2.0
폴리 솔베이트 60	0.6	0.6	0.6	0.6
솔비탄 세스퀴올레이트	2.5	2.5	2.5	2.5
스쿠알란	3.0	3.0	3.0	3.0
1,3-부틸렌 글리콜	3.0	3.0	3.0	3.0
글리세린	5.0	5.0	5.0	5.0
트리 에탄올 아민	0.5	0.5	0.5	0.5
토코페릴 아세테이트	0.5	0.5	0.5	0.5
방부제, 색소	적량	적량	적량	적량
향	적량	적량	적량	적량
정제수	T0 100	To 100	To 100	To 100

2) 실험결과

피부주름개선효과

	△R_z=사용전 R_z-6주후 R_z
	본 발명품(A)	비교군(B)	비교군(C)	비교군(D)
피검자 1	0.127	0.100	0.030	0.068
피검자 2	0.136	0.098	0.045	0.065
피검자 3	0.132	0.111	0.048	0.071
피검자 4	0.123	0.096	0.057	0.064
피검자 5	0.141	0.112	0.033	0.066
피검자 6	0.128	0.091	0.039	0.056
피검자 7	0.118	0.102	0.021	0.068
피검자 8	0.122	0.099	0.075	0.084
피검자 9	0.113	0.092	0.042	0.062
피검자 10	0.149	0.105	0.050	0.060
피검자 11	0.121	0.088	0.015	0.049
피검자 12	0.133	0.101	0.048	0.075
피검자 13	0.141	0.113	0.048	0.059
피검자 14	0.135	0.101	0.018	0.058
피검자 15	0.131	0.107	0.037	0.066

실험결과 L-아스코르브산(비타민 C) 및 가자(Terminalia chebulaRetz., Terminaliae Fructus)추출물을 2-Hydroxypropylated-β-Cyclodextrin(HPBCD)에 미세포집(Microencapsulation)하여 안정화 시킨 복합체를 함유한 크림(A,B)이 비타민 C 유도체인 Magnesium ascorbyl phosphate를 함유한 크림(C,D) 보다 주름개선효과가 우수하였고, 파이토스핑고신을 함유한 본 발명품(A)인 경우 6주간 사용 후 피부 주름의 높이가 0.113∼0.149mm(평균값: 0.130mm) 정도 낮아져 주름이 통계학적으로 유의한 범위 내에서 확실히 개선되었음을 알 수 있고(p<0.01), 파이토스핑고신을 함유하지 않고 비타민 C를 안정화시킨 복합체만을 함유한 비교군(B)은 6주간 사용 후 피부 주름의 높이가 0.088∼0.113mm(평균값: 0.101mm)정도 낮아져 주름이 통계학적으로 유의한 범위 내에서 개선(p<0.01) 되었지만 파이토스핑고신을 함유한 본 발명품(A)의 주름개선 효과가 훨씬 우수함을 알 수 있다. 반면, 파이토스핑고신을 함유하지 않고 비타민C 유도체인 Magnesium ascorbyl phosphate 만을 함유한 비교군(C)은 6주간 사용 후 피부 주름의 높이가 0.015∼0.075mm(평균값: 0.040mm) 정도 낮아져 주름이 약간은 개선 되었으나 그 정도가 통계학적으로 유의하지는 않고(p>0.05), 파이토스핑고신과 Magnesium ascorbyl phosphate를 함유한 비교군(D)은 6주간 사용 후 피부 주름의 높이가 0.049∼0.084mm(평균값: 0.065mm) 정도 낮아져 주름이 통계학적으로는 유의한 주름개선효과(p<0.05)를 갖지만 본 발명품에 비하면 주름개선효과가 상당히 떨어진다. 이 실험결과 비타민 C를 안정화시킨 복합체 뿐만아니라 파이토스핑고신이 주름개선에 상당히 효과적임을 알 수 있다.

실험예 2

상기 비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 화장료에 대한 피부탄력개선 효과를 측정 하였다.

1) 실험방법

온도 24-26℃, 습도 75% 조건에서 건강한 여성 40명을 대상으로하여 A, B, C, D 4그룹으로 나누어 A그룹에는 비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 크림(본 발명품 A)을 B그룹에는 비타민 C를 안정화시킨 복합체만을 함유한 크림(비교군 B)을 C그룹에는 복합체 대신에 비타민 C 유도체인 Magnesium ascorbyl phosphate 만을 함유한 크림(비교군 C), D그룹에는 Magnesium ascorbyl phosphate와 파이토스핑고신을 함유한 크림(비교군 D)을 상기 표 1에 따라 제형하여 피검자의 왼쪽와 오른쪽의 얼굴에 나누어 발라 6주 사용 후 피부탄력측정기(Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 측정하였다. 실험결과는 하기 표 3에 Cutometer SEM 575의 △R8 값으로 기재하였는데, R8 값은 피부는 점탄성(viscoelasticity)의 성질 나타낸다.

2) 실험결과

피부탄력

실험제품	피부탄력효과(△R8)
본발명품 A	0.19
비교군 B	0.13
비교군 C	0.05
비교군 D	0.09

표 3 서 알수 있듯이 본 발명품(A)은 비타민 C(L-아스코르브산)가 콜라겐 생합성 과정에 관여하여 콜라겐 생합성을 촉진시며 비타민 C를 안정화 시키기 위해 사용한 HPBCD가 피부 깊숙히 피부침투를 촉진하여 피부를 촉촉하고 탄력있게 해줄 뿐만아니라 파이토스핑고신이 콜라겐 합성에 도움을 주며 피부 면역작용을 높여 피부를 정상으로 만드는 노화억제작용과 피부 잔주름 및 주름 발생의 가장 큰 원인이 되는 자외선에 의한 세포손상과 수분증발 및 콜라겐 파괴로 인한 탄력손실 방지로 세포와 세포사이를 단단하게 연결해 탄력을 증진시키는 리프팅 기능이 있어 비타민 C를 안정화시킨 복합체만을 함유한 크림(비교군: B)보다 효과가 더욱 크다는 것을 알 수 있다.

실험예 3

상기 비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 화장료에 대한 피부보습 효과를 측정 하였다.

1) 실험방법

25℃, 상대습도는 45%, 공기의 흐름이 없는 실내에서 건강한 여성 40명을 대상으로하여 A, B, C, D 4그룹으로 나누어 A그룹에는 비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 크림(본 발명품 A)을 B그룹에는 비타민 C를 안정화시킨 복합체만을 함유한 크림(비교군 B)을 C그룹에는 복합체 대신에 비타민 C 유도체인 Magnesium ascorbyl phosphate 만을 함유한 크림(비교군 C), D그룹에는 Magnesium ascorbyl phosphate와 파이토스핑고신을 함유한 크림(비교군 D)을 상기 표 1에 따라 제형하여 팔의 상박에 하루에 3회 6주간 도포하여 TEWAMETER TM210(C+K electronic GmbH. Germany)를 이용한 경피수분손실량-TEWL(Transepidermal Water Loss)-값을 시간 변화에 따른 TEWL 값 변화량을 △TEWL로 측정하고, CORNEOMETER CM 820 PC(C+K electronic GmbH. Germany)를 이용하여 표피 수분량의 변화에 대한 전기전도도의 변화를 수치한 값으로 0에서 150까지 피부의 수분량을 수치화하여 보습효과를 측정하였다. 실험결과는 하기 표4에 나타내었다.

2) 실험결과

피부보습효과

실험제품	△TEWL	Corneometer Value
본발명품 A	3.2	110
비교군 B	1.5	95
비교군 C	1.2	80
비교군 D	2.5	100

TEWAMETER TM210의 TEWL 값은 비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 크림(본 발명품 A)의 △TEWL 값은 3.2g/hm²로 경피수분손실량이 6주 후 급격하게 개선되었음을 알 수 있다.

이는 파이토스핑고신이 피부장벽 기능을 강화하여 수분손실량이 저하됨으로서 피부에 보습효과를 부여하고 있고, 피부의 수분량을 측정한 Corneometer value도 다른 비교군에 비해 본 발명품이 크게 증가되었음을 알 수 있다. 또한 파이토스핑고신을 사용한 제형이 사용하지 않은 제형보다 높아 phytosphingo-

sine이 피부보습에 크게 기여함을 알 수 있다.

실험예 4

상기 비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 화장료에 대한 미백효과 시험을 실시하였다.

실험예 4-1티로시나제 활성 억제능

1) 실험방법

먼저 기질인 티로신을 0.05M 인산나트륨 완충용액(pH 6.8)에 녹여 0.1㎎/㎖의 용액(기질액)을 준비하고, 본 발명에 사용된 안정화시킨 비타민 C(A), 파이토스핑고신 (B), Magnesium ascorbyl phosphate(C), 코직산(D)을 여러 농도로 희석하여 시료액으로 준비하였다. 기질액 0.5㎖를 시험관에 넣은 다음, 시료액 0.5㎖를 가하고 37℃ 항온조에서 10분간 반응시킨 후, 버섯류(Mushroom)로부터 추출한 200U/㎖ 티로시나아제 용액(SIGMA사 제품) 0.5㎖씩을 가하여 교반한 다음, 다시 37℃ 항온조에서 10분간 반응시켰다. 이 반응액이 든 시험관을 얼음 위에 놓아 급냉시켜 반응을 중지시키고 분광광도계(spectrophotometer)로 475nm에서 흡광도를 측정하여 하기 수학식 1에 따라 티로시나제 활성 저해율을 계산한 후, 그 결과를 표 4에 나타내었다. 이때 시료액 대신에 완충용액 0.5㎖를 사용한 것을 대조군으로 하여 동일한 방법에 의해 흡광도를 측정하여 이를 이용하여 티로시나제 활성 억제능을 계산하였다.

시료의 흡광도

티로시나제 활성 억제능(%) = 100 - ──────── X 100

대조군 흡광도

2) 실험결과

티로시나제 활성 억제능

실험농도(㎍/㎖)	티로시나제 활성 저해율(%)
실험농도(㎍/㎖)	A	B	C	E
1	17.5	12.5	2.9	28.9
5	24.6	16.5	8.5	42.5
25	33.2	28.4	19.7	87.3
50	59.1	44.1	31.2	92.4
75	79.3	57.3	45.4	94.7
100	92.5	69.9	54.6	95.3

상기 표 5에서 알 수 있는 바와 같이, 티로시나제 활성을 50% 저해하는 농도(IC₅₀)는 본 발명에 사용된 안정화시킨 비타민 C(L-아스코르브산)가 약 43.7㎍/㎖이고 파이토스핑고신은 62.7㎍/㎖, Magnesium ascorbyl phosphate는 90.7㎍/㎖ , 코직산은 5.8㎍/㎖로 본 발명에 사용된 안정화시킨 비타민 C(L-아스코르브산)는 코직산 보다는 떨어지지만 비타민 C유도체인 Magnesium ascorbyl phosphate보다는 훨씬 우수하다. 또한 본 발명에 사용된 파이토스핑고신도 꽤 우수한 티로신네이즈 활성억제 효과를 보였다. 반면 하기의 피부자극에서 논하겠지만 본 발명에 사용된 안정화시킨 비타민 C(L-아스코르브산) 및 파이토스핑고신은 코직산보다 피부 안전성이 아주 우수하여 피부에 자극이 없으면서 미백효과가 우수하다고 불 수 있다.

실험예 4-2멜라닌 생성 억제능시험

1) 시험방법

25㎠ T-플라스크에 DMEM 배지(포도당 4.5g/ℓ 89%, 혈청 10%, 항생제 1%) 5∼6㎖를 넣은 후, 동결보관중인 마우스 유래 B-16 멜라노마(ATCC CRL 6323) 세포주를 접종하여 37℃ 온도, 5% CO2 조건하에서 24시간동안 배양한 다음, 0.02% EDTA가 함유된 0.05% 트립신을 처리하여 세포를 분리한 후, 25㎠ T-플라스크에 접종하여 48시간동안 배양하였다. 그 결과, 얻어진 세포수는 플라스크 당 5.76×106cells이었다. 여기에 본 발명에 사용된 안정화시킨 비타민 C(A), 파이토스핑고신 (B), Magnesium ascorbyl phosphate(C), 코직산(D)을 시험농도로 희석시켜 배양된 멜라노마 세포에 처리하여 37℃에서 5일간 배양하였다. 배양 후 배지를 모두 제거하고, 0.02% EDTA와 0.05% 트립신을 함유한 살린-포스페이트 완충용액(PBS) 1㎖를 처리하여 세포를 분리시킨 후 5분간 원심분리하여 세포만을 수집하였다. 수집된 세포에 5% 트리클로로아세테이트(TCA)를 처리하여 교반하고, 원심분리하여 침전된 멜라닌을 살린-포스페이트 완충용액으로 세척하였다. 이어서, 침전된 멜라닌에 1N NaOH를 처리하여 용해시킨 후 475nm에서 흡광도를 측정하고, 합성 멜라닌(시그마사)의 표준농도 곡선으로부터 멜라닌의 농도를 결정한 후, 멜라닌 생성 억제율을 하기 표 6에 나타내었다.

2) 실험결과

세포배양에 의한 미백효과

실험농도(㎍/㎖)	멜라닌 함량(ρg/cell)	멜라닌 생성억제율(%)
구분	A	B	C	D	A	B	C	D
무처리군	4.05	4.05	4.05	4.05	-	-	-	-
5	2.25	3.01	3.15	2.23	44.4	25.7	22.2	44.9
25	1.02	2.27	2.74	2.10	74.8	44.0	32.3	48.2
50	0.83	1.18	2.35	2.20	79.5	70.9	42.0	45.7
75	0.53	1.01	2.09	2.21	86.9	75.1	48.4	45.4
100	0.33	0.72	1.58	2.24	91.9	82.2	61.0	44.7

상기 표 6에서 알 수 있는 바와 같이, 멜라닌을 생성하는 세포인 멜라노

사이트의 세포배양에서 본 발명에 사용된 안정화시킨 비타민 C(L-아스코르브산)는 비타민 C 유도체인 Magnesium ascorbyl phosphate나 코직산의 멜라닌 생성 억제능에 비해 우수한 멜라닌 생성 억제능을 보였다.

또한 본 발명에 사용된 파이토스핑고신의 멜라닌 생성 억제능도 Magnesium ascorbyl phosphate 보다 우수하였다.

이상의 시험예 4-1 및 4-2를 통하여 볼 때, 본 발명에 사용된 안정화시

킨 비타민C(L-아스코르브산) 및 파이토스핑고신은 피부 흑화의 반응 기작 중 티로시나제의 활성을 저해하는데 관여하여, 멜라닌 생성과정중의 일부 반응을 저해함으로써 멜라닌 생성을 감소시키는 역할을 함을 알 수 있다.

실험예 4-3임상실험에 의한 미백효능

1) 실험방법

시험본 발명의 화장료의 임상 미백효능을 시험하기 위하여, 기미, 주근깨 및 색소침착증을 갖고 있는 건강한 성인 남녀 40명을 무작위로 10명씩 4개 그룹(A, B, C, D)으로 나눈 후, A그룹에는 비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 크림(본 발명품 A)을 B그룹에는 비타민 C를 안정화시킨 복합체만을 함유한 크림(비교군 B)을 C그룹에는 복합체 대신에 비타민 C 유도체인 Magnesium ascorbyl phosphate 만을 함유한 크림(비교군 C), D그룹에는 Magnesium ascorbyl phosphate와 파이토스핑고신을 함유한 크림(비교군 D)을 상기 표 1에 따라 제형하여 각각 1일 2회씩 12주간 도포한 후 피부색의 변화를 크로마메타(Minolta CR300)를 이용하여 색의 밝기변화(ΔL)를 측정하고, 복수의 숙련자에 의한 객관적 육안 관찰과 피검자에 의한 주관적 육안관찰을 실시하여 하기 등급 분류에 따라 효과를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다. 이때 미백효능 정도를 다음의 7등급으로 분류하여 평가하였다.

·미백효능 평가 기준 :

-3: 매우 악화-2: 악화 -1: 약간 악화 0: 변화 없음

1: 약간 개선 2: 개선 3: 매우 개선

2)실험결과

미백효과에 대한 임상결과

피검자	피부색의밝기 변화(ΔL)	숙련자의객관적 평가	피검자의주관적 평가
피검자	A	B	C	D	A	B	C	D	A	B	C	D
1	6.6	5.6	2.3	3.8	3	2	1	1	3	3	2	1
2	7.7	5.9	1.9	3.6	3	3	1	2	3	3	2	2
3	6.9	4.8	2.5	4.3	3	1	0	1	3	2	1	2
4	5.5	4.9	2.1	4.3	2	1	0	0	2	0	0	1
5	7.3	5.4	2.0	4.6	3	2	1	0	2	1	0	1
6	7.0	5.2	2.8	4.4	3	2	1	2	2	2	0	2
7	6.4	4.1	1.5	3.6	2	2	0	1	2	3	0	2
8	5.6	4.8	1.3	3.3	2	3	2	3	3	3	1	2
9	6.4	5.1	1.8	4.0	3	2	2	1	2	1	2	2
10	6.8	4.9	2.6	3.5	2	1	0	1	3	2	1	2
평균값	6.62	5.07	2.08	3.94	2.6	1.9	0.8	1.2	2.5	2.0	0.9	1.7

상기 표 7에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 상기 표 1에 따라 제형하여 도포한 A그룹의 평균 ΔL값은 6.62(P＜0.01)이며, 비타민 C를 안정화시킨 복합체만을 함유한 크림을 도포한 B그룹의 평균 ΔL값은 5.07(P＜0.01)로 두 그룹 모두 유의한 범위 내에서 확실한 미백 임상효과를 보이고 있다. 그 중 파이토스핑고신을 함유한 본 발명품의 A그룹이 더욱 효과적인 미백효과를 보임으로서 비타민 C와 파이토스핑고신을 함께 사용했을 때 미백효과에 상당한 상승효과를 가져옴을 알 수 있다. 비타민 C 유도체인 Magnesium ascorbyl phosphate 만을 함유한 크림을 도포한 C그룹에는 평균 ΔL값이 2.08(P<0.05)로 미약하지만 미백효과가 있었고, Magnesium ascorbyl phosphate와 파이토스핑고신을 함유한 크림을 도포한 D그룹에서의 평균 ΔL값은 3.94(P<0.02)로 crmrnq에서 보다 훨씬 좋은 미백효과를 보여 파이토스핑고신의 미백 임상효과를 또 한번 입증하였다.

숙련자에 의한 미백평가에서는 A그룹은 2.6(P＜0.01), B그룹은 1.9(P<0.01), C그룹은 0.8(P<0.05), D그룹은 1.2(P<0.05)이었고, 피검자에 의한 미백 평가에서는 A그룹은 2.5(P＜0.01), B그룹은 2.0(P<0.01), C그룹은 0.9(P<0.05), D그룹은 1.7(P<0.01)로 나타나, 이상의 결과를 종합하여 볼 때 A그룹과 B그룹의 임상 미백효과는 확실한 반면 C그룹은 미약하지만 어느 정도 미백 임상효과를 보였고, D그룹은 C그룹에 비해 상당히 효과가 증가됨을 알 수 있다. 결론적으로 비타민 C 와 파이토스핑고신을 함께 사용했을 때 미백효과에 상당한 상승효과를 가져옴을 알 수 있다.

실험예 5.파이토스핑고신에 대한 항균시험을 실시하였다.

1) 실험방법

본 발명의 파이토스핑고신의 항균효과를 시험하기 위하여 미생물 성장억제 시험을 실시하였다. 미생물 배양은 멸균한 0.85% NaCl용액에 미리 배양해둔 균체들을 혼합하여 적당한 콜로니(colony)가 생기는 균체농도가 되도록 희석한 용액 9ml에 파이토스핑고신의 농도가 적용농도(working concentration)의 10배 농도가 되도록 다양하게 희석하여 1ml을 첨가한 뒤 vortex를 이용하여 충분히 섞어준다. 대조군은 항균제로서 Erythromycin을 적정농도로 희석하여 1ml씩 첨가하였다. 이것을 37℃에서 30분간 진탕배양한 뒤 100㎕씩을 취해 미리 준비한 평판배지 위에 도말하고 37℃에서 약 5일간 배양한다. 배양이 끝난 후 콜로니(colony)수를 측정하여 효과를 측정한다. 파이토스핑고신 0.1% 함유하고 방부제가 첨가되지 않은 크림(본 발명품)에 대한 항균효과를 보기위해 동일한 방법으로 시험을 실시하였고, 그 결과를 하기 표8에 나타내었다.

2) 실험결과

항균효과

미생물(Microorganism)	파이토스핑고신(w/w%)^*	Erythromycin(w/w%)^*	본 발명품(w/v%)^*
Staphylococcus aureusCorynebacterium xerosisMicrococcus luteusPropionibacterium acnesEscherichia coliPseudomonas aerigunosaCandida albicansMicrosporum canis	0.0200.0160.0200.0200.0400.0100.00120.006	0.0250.0180.0250.0300.0450.0160.0020.010	22.520.018.520.025.08.51.05.0

* : 미생물의 성장을 완전히 억제하는데 필요한 양

실험결과 파이토스핑고신은 피부에 존재하는 다양한 미생물 군에 대하여 erythromycin보다도 우수한 항균효과를 갖고 있다. 아울러 파이토스핑고신이 0.1% 함유된 본 발명품에서도 좋은 항균효과를 보여 피부보호 및 피부의 정상적인 기능유지에 효과적임을 알 수 있다.

실험예 6.안정성 시험

1) 실험방법

본 발명의 화장료 제형의 안정성을 시험하기 위하여, 상기 표 1에서 제형한 비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 크림(본 발명품 A)과 비타민 C를 안정화시킨 복합체만을 함유한 크림(비교군 B) 및 복합체 대신에 비타민 C 유도체인 Magnesium ascorbyl phosphate 만을 함유한 크림(비교군 C), Magnesium ascorbyl phosphate와 파이토스핑고신을 함유한 크림(비교군 D)을 45℃로 일정하게 유지되는 항온조에서 불투명 초자 용기에 담아 2주동안 보관하고, 또한 4℃로 일정하게 유지되는 완전히 차광된 냉장고내에서 불투명 초자 용기에 담아 2주 동안 보관한 후 변색 정도를 비교측정하였다. 그 결과를 하기 표 9에 나타내었다. 이때 제품 변색 정도는 다음의 6등급으로 분류하여 평가하였다.

·제품 변색 평가 기준 :

0: 변화 없음 1: 극히 조금 변함 2: 조금 변함

3: 조금 심하게 변함 4: 심하게 변함 5: 극히 심하게 변함

2) 실험결과

안정성시험

온도	실험물질 변색 정도
온도	본 발명품(A)	비교군(B)	비교군(C)	비교군(D)
45℃	0	0.5	4.0	4.0
4℃	0	0	2.5	1.5

상기 표 9에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 크림(본 발명품 A)은 변색이 전혀 없어 안정함을 알 수 있고, 비타민 C를 안정화시킨 복합체만을 함유한 크림(비교군 B) 도 변색이 거의 없어 비타민 C(L-아스코르브산)가 가자추출물 및 2-Hydroxypropylated-β-Cyclodextrin(HPBCD)에 안정화되어 안정성이 큼을 알 수 있다. 반면 복합체 대신에 비타민 C 유도체인 Magnesium ascorbyl phosphate 만을 함유한 크림(비교군 C)에서는 변색이 심하게 일어나 극히 불안정함을 알 수 있고, Magnesium ascorbyl phosphate와 파이토스핑고신을 함유한 크림(비교군 D)은 비교군 C보다는 덜 하지만 유사한 변색을 보여 극히 불안정함을 알 수 있다.

실험예 7.피부 자극시험

1)실험방법

본 발명의 피부자극 정도를 시험하기 위하여, 상기 표 1에서 제형한 비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 크림(본 발명품 A)과 비타민 C를 안정화시킨 복합체만을 함유한 크림(비교군 B) 및 복합체 대신에 비타민 C 유도체인 Magnesium ascorbyl phosphate 만을 함유한 크림(비교군 C), Magnesium ascorbyl phosphate와 파이토스핑고신을 함유한 크림(비교군 D)을 을 피검자 40명(평균연령 24세 , 연령분포 18세-32세)을 대상으로 Haye's Test Chamber를 이용하여 상박에 피부 첩포시험(Patch Test)을 실시하였다. 단 건선(Psoriasis), 습진(Eczema), 기타 피부병변 보유자나 임신, 수유부 또는 피임제, 항히스타민제 등을 복용하고 있는 사람은 본 실험에서 제외 하였다. 시험부위를 70% 에탄올로 닦아낸 뒤 건조시킨 다음 준비된 시험물질을 15㎍ 또는 15㎕ 를 Chamber에 적하 시킨 후 시험 부위인 상박 부위에 얹어 고정시킨다. 첩포는 24시간 동안 도포하여 첩포를 제거한 후에는 Marking Pen으로 시험부위를 표시하여 각각 30분, 24시간, 48시간 후에 시험부위를 관찰한다.

판정은 첩포 제거 30분, 24시간, 48시간 후에 행하며 피부반응은 하기 표10의 국제접촉피부염연구회(International Contact Dermatitis Research Group:ICDRG)의 규정에 따라 판정하여 시험결과를 하기 표 11에 나타내었다.

표 10

국제접촉피부염연구회(International Contact Dermatitis Research

Group : ICDRG)의 판정 기준

기호	판 정 기 준	평 가	Mean Score
±++++++-	Doubtful or slight reaction and erythemaErythema + IndurationErythema + Induration + VesicleErythema + Induration + BullaeNegative	미소자극경자극중자극강자극무자극	0∼0.91.0∼2.93.0∼4.95.0이상0

2) 시험결과

피부자극시험

시간	실험물질의 피부자극 정도
시간	본 발명품(A)	비교군(B)	비교군(C)	비교군(D)
30분	0	0.5	2.5	1.0
24시간	0	0	1.5	0
48시간	0	0	0.5	0

상기 결과에서 알 수 있듯이 비타민 C를 안정화시킨 복합체와 파이토스핑고신을 함유한 크림(본 발명품 A)은 평균자극정도가 0으로 피검자 전원에서 자극을 보이지 않아 피부에 매우 안전한 기제임을 알 수 있다.

복합체 대신에 비타민 C 유도체인 Magnesium ascorbyl phosphate 만을 함유한 크림(비교군 C)은 첩포 제거 30분과 24시간 후에 상당히 자극이 있었다. 반면, 파이토스핑고신이 첨가된 본발명품과 비교군 D는 파이토스핑고신이 함유되지 않은 비교군 B나 C에 비해 상대적으로 자극히 상당히 완화되어 있다. 이로부터 파이토스핑고신이 피부자극 완화제로서 유용함을 알 수 있다.

Claims

2-히드록시프로필레이티드-β-시클로덱스트린에 L-아스코르브산 및 가자(Terminalia chebulaRetz.)추출물을 미세포집하여 안정화 시킨 복합체 및 파이토스핑고신(Phytosphingosine)을 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 2-히드록시프로필레이티드-β-시클로덱스트린(HPBCD)에 L-아스코르브산 및 가자 추출물을 미세포집하여 안정화 시킨 복합체가 화장료 총중량에 대해 0.01중량% 내지 20.0 중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 파이토스핑고신을 화장료 총중량에 대해 0.01중량% 내지 20.0 중량%의 양으로 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, L-아스코르브산과 가자 추출물이 복합체 중량에 대해 각각0.1중량% 내지 80.0중량%, 0.001중량% 내지 5.0중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 가자 추출물이 물, 메탄올 또는 메탄올 수용액, 에탄올 또는 에탄올 수용액, 아세톤, 에틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜 또는 1,3-부틸렌 글리콜 수용액, 핵산, 디에틸에테르, n-프로판올, 이소프로판올 및 n-부탄올로 이루어진 군으로부터 선택된 추출용매로 추출된 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이크림, 영양크림, 맛사지 크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징 워터, 파우더, 팩 또는 엣센스인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.