KR100254746B1

KR100254746B1 - 미세입자,그의 제조 방법 및 진단에의 그의 이용

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Publication number: KR100254746B1
Application number: KR1019940704526A
Authority: KR
Inventors: 미카엘 슈타인; 베르너 바이트쉬스; 토마스 프리쯔쉬; 디터 헬트만; 요아힘 지게르트; 폴크마르 울렌도르프; 에스터 하마커; 프랑크 뤼더스
Original assignee: 에바-마리아 시마-메이어, 얼설라 멜져, 마거, 하르트만; 쉐링 악티엔게젤샤프트
Priority date: 1992-06-13
Filing date: 1993-06-05
Publication date: 2000-08-01
Also published as: DE4219723A1; IL105891A; KR950701823A; CN1082924A; JPH07507780A; NO307646B1; EP0644777B2; AU4323293A; WO1993025242A1; NZ253115A; DK0644777T3; HUT69380A; DK0644777T4; DE59308146D1; ATE163134T1; CN1064851C; GR3026498T3; NO944805D0; EP0644777B1; AU686103B2

Abstract

본 발명은 외피가 폴리시안아크릴레이트 또는 α-, β- 또는 γ-히드록시카르복실산의 폴리에스테르로 이루어진, 기체를 함유한 미세 입자의 초음파 진단용 조영 매체, 및 이들의 제조 방법에 관한 것이다.

Description

미세 입자, 그의 제조 방법 및 진단에의 그의 이용

본 발명은 특허 청구의 범위에 특정된 것, 즉 외피(shell)가 폴리시안아크릴레이트 또는 α-, β- 또는 γ-히드록시카르복실산의 폴리에스테르로 이루어진 기체 함유 미세 입자의 초음파 진단을 위한 특수 조영(造影) 매체, 및 그의 제조 방법에 관한 것이다.

미세 기포를 함유하는 용액을 말초 주입함으로써 심장 반향 조영을 달성할 수 있다는 것이 공지되어 있다(Roelandt J, Ultrasound Med. Biol., 8:471-492, 1982 참조). 이러한 기포는 생리 적합성인 용액에서, 예를 들면 진탕, 교반, 또는 이산화탄소를 첨가함으로써 얻어진다. 그러나, 이들은 그 수효 및 크기가 표준화되어 있지 않아서, 부적당하게만 재생될 수 있다. 또한, 이들은 일반적으로 안정하지 못하여 수명이 짧다. 이들의 평균 직경은 대부분 적혈구 크기보다 커서, 좌심, 간, 신장 또는 비장과 같은 기관을 순차적으로 조영하면서 폐동맥 모세 혈관을 통과하는 것이 불가능하다. 또한, 이들은 이들로부터 생성된 초음파 반향이 서로 분리할 수 없는 여러 과정, 예를 들면 기포 전개, 융합 및 분해 과정으로 이루어지기 때문에 정량하기에 적합하지 않다. 따라서, 예를 들면 이들 초음파 조영 매체를 사용하여 심근층에서의 조영 과정을 측정함으로써 주행 시간에 관한 정보를 얻는 것은 불가능하다. 이러한 목적을 위해서는, 산란 성분들이 적당한 안정성을 나타내는 조영 매체가 필요하다.

당에 의한 기포의 안정화가 유럽 특허 제0,131,540호에 기재되어 있다. 따라서, 조영 효과의 재현성 및 균질성은 향상되지만, 이들 기포들은 폐를 통과할 때 살아남지 못한다.

유럽 특허 제0,122,624호 및 동 제0,123,235호에는 당, 당 알콜 및 염의 기포 안정화 효과가 표면 활성제를 첨가함으로써 개선된다고 기재되어 있다. 이러한 초음파 조영 매체는 폐동맥 모세혈관 통로 및 동맥 대퇴 혈관과 간 또는 비장과 같은 다양한 기관의 가시화 가능성을 제공한다. 그러나, 이러한 경우 조영 효과는 기포가 조직 세포에 의해 흡수되지 않기 때문에 혈관의 구경에 의해 제한된다.

기재된 초음파 조영 매체 중 어느 것도 장시간 동안 신체에 변하지 않고 남아 있지 못한다. 이러한 매체를 사용하여 정맥내 투여 또는 정량 후 선택된 농도에 의해 충분한 신호 강도로 기관을 증명하는 것은 불가능하다.

초음파 조영 매체로서 기체, 예를 들면 공기를 캡슐화하는 것이 유럽 특허 제0,224,934호에 기재되어 있다. 이 경우에 사용된 벽(wall) 재료는 단백질, 특히 공지된 알레르기 특성을 갖는 인간 혈청 알부민으로 이루어지며, 여기에는 변성에 의해 세포 독성 효과가 첨가될 수 있다.

생분해성 합성 물질을 기재로 하는 초음파 진단용 기체 함유 미세 입자가 유럽 특허 공고 제0,327,490호에 기재되어 있다. 이러한 매체들은 충분한 생체내 수명을 나타내고, 정맥내 투여 후 세망 내피 조직계에서, 및 따라서 간 또는 비장내에서도 세포내 농축된다. 이 특허 명세서에서는 또한 폴리시안아크릴레이트 또는 α-, β- 또는 γ-히드록시카르복실산이 청구되어 있지만, 본 발명에 따른 입자는 입자의 비중이 0.7 g/cm³미만이라는 점에서 유럽 특허 제0,327,490호에 개시된 입자들과 구별된다.

따라서, 본 발명에 따른 입자가 저밀도인 것은 같은 크기이면서도 더 많은 기체를 함유한다는 사실의 결과이다. 기포 상에서의 산란 및 반사에 의해 생성된 초음파 반향의 강도는 기체 코아 반경의 6제곱에 의존하고, 따라서 본 발명에 따른 입자는 유럽 특허 제0,327,490호에 개시된 매체 보다도 상당히 효과적인 초음파 조영 매체를 제공하게 된다.

이러한 기체 부피의 증가는 본 발명에 따라 벽 두께를 감소시킴으로써 달성된다. 놀랍게도, 본 발명에 따른 입자는 더 작은 벽 두께에도 불구하고 폐를 통과하기에 충분할 정도로 안정하다.

신규한 "얇은 벽" 입자는 본 발명에 따른 방법을 사용함으로써 제조할 수 있다.

모세혈관 통로에 비추어 요구되는 입자 크기는 10 ㎛ 미만이다. 0.2 내지 2 ㎛의 평균 직경을 갖는 입자가 바람직하다. 이러한 요구는 본 발명에 따른 방법을 사용할 때에 충족된다.

본 발명의 방법에 따라 제조된 입자의 비중은 0.05 g/cm³내지 0.7 g/cm³이고, 이로부터 입자의 평균 벽 두께는 10 내지 50 nm로 계산된다.

예로서 선택된 본 발명의 실시예 9에 따라 제조된 폴리시안아크릴레이트 입자와 유럽 특허 제0,327,490호의 실시예 2에 따라 제조된 입자를 비교하여 하기 표 1에 종합된 수치로 나타내었다.

본 발명의 실시예 9에 따라 제조한 입자의 비중 0.15 g/cm³로부터 거의 10배 정도 작은 평균 벽 두께와 대략 60 % 커진 기체 부피가 계산된다.

이러한 수치들은 주사 전자 현미경 사진의 결과와 잘 일치한다(제1도 및 제2도 참조).

놀랍게도, 본 발명에 따른 입자의 경우에 이들은 적합한 음압 및 적합한 진동수의 초음파를 조사(照射)함으로써 독립적인 신호로 여기되기 때문에, 초음파 연구에서는 산란에 의해 유발된 신호 증폭 이상의 입자에 의한 또다른 조영의 증가가 관찰된다.

이렇게 예외적으로 관찰된 현상 때문에, 본 발명에 따른 매체를 사용하는 신규 분야는 먼저 간 및 비장 영역에서의 종양 진단을 위해 출현하였다. 따라서, 건강한 조직은 본 발명에 따른 미세 입자를 말초 정맥내 투여한 후, 칼라-코드화(color-coded) 도플러 기술에 의해 착색되어 나타나지만, 종양 영역은 칼라-코드화가 보다 적거나 또는 거의 없다.

또한, 기재된 유리한 입자 특성(더 큰 기체 부피 및 독립적인 초음파 신호)때문에 상당히 적은 수의 입자로도 양호한 조영을 이미 달성할 수 있다. 이러한 증가된 효과의 결과로서, 양호한 초음파 조영을 위하여 단지 소량(㎍ 범위)의 중합체 물질만이 필요하며, 그에 따라 약리학적 안정성 한계가 증가된다.

따라서, 비글 개에 대한 전형적인 동물 실험에서, 체중 킬로그램(KGW) 당 입자 25 ㎍으로 심장의 좌공동을 이미 최적으로 균일하게 조영한다(제3도 우측 참조). 유럽 특허 제0,327,490호의 입자는 2 mg/kg(체중)의 투여량을 사용하고나서야 비교할만한 조영을 달성할 수 있었다(제3도 좌측 참조).

본 발명에 개시된 입자(실시예 9) 및 유럽 특허 제0,327,490호에 기재된 입자(실시예 2)를 방광에 점적 주입한 후의 조영 효과가 제4도 및 제5도에 도시되어 있다. 유럽 특허 제0,327,490호의 입자는 약 3mg/ml의 투여량을 첨가하였고, 본 발명에 따른 입자는 0.04 mg/ml를 첨가하였다. 본 발명에 따른 입자는 명백히 소량의 농도에도 불구하고 상당히 더 양호한 조영 효과를 달성한다는 것을 알 수 있다.

본 발명의 또다른 면은 본 발명에 따른 미세 입자의 제조 방법에 관한 것이다.

폴리시안아크릴레이트 기재의 미세 입자의 제조는 회전-고정자 (rotor-stator) 혼합기를 사용하여, 기체로 포화되고 임의의 1종 이상의 표면 활성제를 함유하는 산성 수용액 중에 단량체 시안아크릴레이트를 분산시키고, 분산 5분 내지 3시간 후 얻어진 입자를 분리하고, 임의로 물로 세척한 후, 제약학상 허용되는 현탁 매질에 흡수시켜 동결 건조시키고, 유리하게는 현탁액을 동결시키는 동안 격렬하게 교반시키는 방법으로 수행한다. 바람직하게는, 시안아크릴레이트로서 부틸 에스테르가 사용되고, 기체로서는 공기, 질소, 산소, 희유 기체 또는 이산화탄소가 사용된다. 또한, 회전-고정자 혼합기 대신에 혼합물의 격렬한 분산이 가능한 비교할만한 장치(예, 용해-교반기)를 사용할 수도 있다. 표면 활성제로서, 폴리소르베이트, 옥틸 또는 노닐 페놀, 마크로골-글리세롤 에스테르 또는 세토마크로골의 군 또는 폴록사머^(R)로부터 선택된 물질 또는 이들의 혼합물이 사용된다. 기체-포화 수용액의 pH는 1.8 내지 4.5인 것이 바람직하고, pH 조정을 위해서는 특히 염산 및 인산이 적합하다. 입자의 분리는 원심 분리법 또는 부유법으로 수행한다. 현탁 매질로서는 주입을 목적으로 하는 경우 임의로 식염 및(또는) 글루코스 및(또는) 만니톨 및(또는) 락토스가 첨가되고, 또한 임의로 표면 활성제, 예를 들면 폴리소르베이트, 옥틸 또는 노닐 페놀, 마크로골-글리세롤 에스테르 또는 세토마크로골의 군으로부터 선택된 물질 또는 폴록사머의 군으로부터 선택된 물질 또는 이들의 혼합물 및(또는) 다가 알콜을 함유하는 물이 적합하다.

폴리에스테르 기재의 미세 입자의 제조는 α-, β- 또는 γ-히드록시카르복실산의 폴리에스테르를 임의로 수분산성 유화제와 함께 건강에 무해한 용매에 용해시키고, 이 용액을 용해-교반기 또는 음파 봉(sound rod)으로 분산시키면서 수분산성 유화제를 함유하는 기상 액체에 첨가하고(이 때, 유화제는 아직 폴리에스테르와 함께 첨가되지 않은 상태임), 분산 30분 내지 2시간 후 얻어진 입자를 분리하고, 임의로 물로 세척한 후, 제약학상 허용되는 현탁 매질에 용해시키고, 동결-건조시키는 방법으로 수행한다.

본 발명에 따르면, 락트산 또는 글리콜산의 중합체 뿐만 아니라 이들의 공중합체도 바람직하다. 무해한 용매로서는 가열된 에틸 알콜을 사용하는 것이 바람직하다. 기상 액체로서는 물 또는 87 % 글리세롤을 사용하는 것이 바람직하고, 바람직한 기체는 공기, 질소, 산소, 희유 기체 또는 이산화탄소이다. 수분산성 유화제로서는 포스파티딜콜린 또는 수크로스-팔미데이트-스테아레이트 15 뿐만 아니라 이들의 혼합물을 언급할 수 있다. 제약학상 허용되는 현탁 매질로서는 폴리시안아크릴레이트 기재의 입자의 경우에서와 동일한 매질이 적합하다.

본 발명에 따른 미세 입자의 동결 건조는 유리하게는 동결 건조되는 동안 입자가 파괴 및(또는) 응집되는 것으로부터 보호하는 물질(소위 동결 방지제)를 첨가하여 수행한다. 동결 방지제로서는 생중합체(예, 알부민, 압열 멸균 젤라틴, 옥시폴리젤라틴, 젤라틴-폴리숙시네이트, 가교 폴리펩티드), 합성 거대분자 물질(예, 포비돈, 폴리비닐 알콜), 당(예, 사카로스, 락토스, 트레할로스, 라피노스), 당 알콜(예, 만니톨, 소르비톨) 또는 이들 제약 보조제의 혼합물을 현탁액에 1 내지 15 %의 농도로 첨가하는 것이 유리할 수 있다. 본 발명에 따른 동결 방지제의 첨가는 매질 제조시 미세 입자를 동결 방지제 용액에 부유시켜 분리한 후에 흡수시키거나, 또는 동결 건조 직전에 현탁액에 직접 첨가하여 수행한다.

놀랍게도, 본 발명자들은 동결 방지제 이외에 동결 건조를 최적화하는 물질, 예를 들면 폴리올계 물질(예, 글리세롤, 프로필렌 글리콜) 또는 DMSO를 0.1 내지 3 %의 농도로 첨가하는 것이 유리할 수 있다는 것을 발견하였다.

동결시키는 동안 본 발명에 따른 미세 입자가 부유되지 않도록 동결 건조시키는 것이 바람직하다. 이 목적을 위하여, 본 발명에 따른 미세 입자의 현탁액을 미리 냉각시키고, 동결 속도 2 캘빈/분 이상으로 동결시켜 동결 건조시키는 것이 유리하다.

유럽 특허 제0,327,490호에 개시된 방법에 비해 본 발명에 따른 제조 방법의 또다른 중요한 잇점은 기체로 충전된 입자를 건강상 및 환경학상 유해한 유기 용매 또는 보조제의 사용없이 단일 공정 단계로 제조할 수 있다는 것이다.

본 발명에 따른 입자의 즉시 사용가능한 주사제의 제조는 임의로 표면 활성제(예, 폴리소르베이트, 옥틸 또는 노닐 페놀, 마크로골-글리세롤 에스테르 또는 세토마크로골의 군으로부터 선택된 물질 또는 폴록사머의 군으로부터 선택된 물질 또는 이들의 혼합물) 및(또는) 생리 적합성인 다가 알콜(예, 글리세롤)을 또한 함유하는 제약학상 허용되는 현탁 매질, 예를 들면 물, 1종 이상의 무기염의 수용액,예를 들면 생리학적 전해질 용액 및 완충 용액, 예를 들면 단당류 또는 이당류(예, 글루코스 또는 락토스)의 타이로드(Tyrode) 수용액, 당 알콜(예, 만니톨)중에 동결 건조물을 재현탁시켜서 수행하지만, 바람직하게는 주입 목적상 물이 바람직하다. 임의로 용해시킨 물질의 총농도는 0 내지 15 중량%이다.

즉시 사용가능한 주사제의 제조를 위한 별법은 미세 입자를 제조하기 위한 본 발명에 따른 방법에서 최종 동결 건조를 생략하는 것으로 이루어진다. 투여의 안정성을 증가시키기 위하여, 주입 직전에 현탁액의 여과를 수행할 수 있다. 이것은 취급 실수로 발생할 수 있는 응집체는 남겨두되 응집되지 않은 입자는 통과가 가능하도록 하기 위하여 주사기와 캐뉼라 사이에 부착된 필터에 의해 유리하게 수행된다. 필터 재료로서는 기본적으로 시판되는 막 필터가 적합하다. 그러나, 놀랍게도 필터의 선택에 있어, 폴리프로필렌 미세사(microthread)의 특수 다층막으로 가장 좋은 결과를 달성할 수 있다는 것이 밝혀졌다. 절대 체류 속도가 10 내지 20 ㎛인 필터가 특히 유리하였다. 또한, 이러한 필터는 보다 작지만 정맥내 용도로는 바람직하지 못한 입자 응집체, 예를 들면 5 내지 10 ㎛의 것은 보유할 수 있다.

즉시 사용가능한 조영 매체의 농도는 현탁 매질 1 ml 당 입자 0.1 내지 20 mg, 바람직하게는 2 내지 6 mg의 범위로 조정할 수 있다. 주입량은 목적하는 용도에 따라 달라지며, 예컨대 혈관을 조사하는 경우 칼라 도플러 소노그래피로 1 내지 500 ㎍(입자)/kg(체중), 바람직하게는 10 내지 100 ㎍(입자)/kg(체중)이고, 간 및 비장을 조사하는 경우 50 내지 1000 ㎍/kg(체중), 바람직하게는 200 내지 600 ㎍/kg(체중)이다.

이하, 본 발명을 실시예로 설명한다.

[실시예 1]

시안아크릴산 부틸 에스테르 0.4 ml를 1 % 폴록사머 407을 함유하는 pH 2.0의 HCl 60 ml에서 회전-고정자 혼합기를 사용하여 5분 동안 분산시켰다. 평균 크기 2 ㎛의 미세 입자를 원심 분리하여, 1 % 폴록사머 및 5 % 글루코스의 수용액 300 ml에 용해시켰다. 밀도를 측정한 결과 비중은 0.2 g/cm³이었다.

[실시예 2]

실시예 1과 동일하게 수행하되, 염산은 pH 2.5이었고, 폴록사머 407은 옥톡시놀 9로 대체하였다. 미세 입자는 약 0.9 ㎛의 평균 크기 및 0.2 g/cm³의 비중을 가졌다. 이들을 0.1 % 폴리소르베이트 20을 함유하는 5 % 만니톨 용액 300 ml에 용해시켰다.

[실시예 3]

실시예 1과 동일하게 수행하되, 염산은 pH 3.0이었고, 폴록사머 407은 세토마크로골 1200으로 대체하였다. 미세 입자의 평균 크기는 1.5 ㎛이었고, 이들의 비중은 0.3 g/cm³이었다. 이들을 0.1 % 세토마크로골 1200 및 5 % 포비돈을 함유하는 5 % 만니톨 용액 300 ml에 용해시켰다.

[실시예 4]

실시예 1과 동일하게 수행하되, 폴록사머 407은 5 % 폴리소르베이트 40으로 대체하였다. 미세 입자의 평균 크기는 1.0 ㎛이었고, 이들의 비중은 0.4 g/cm³이었다. 이들을 1 % 마크로골글리세롤 히드록시스테아레이트를 함유하는 5 % 만니톨 용액 300 ml에 용해시켰다.

[실시예 5]

실시예 1과 동일하게 수행하되, 폴록사머 407은 5 % 마크로골글리세롤 히드록시스테아레이트로 대체하였다. 입자의 평균 크기는 0.9 ㎛이었고, 이들은 0.3 g/cm³의 비중을 가졌다. 이들을 1 % 마크로골글리세롤 히드록시스테아레이트 및 10 % 프로필렌 글리콜을 함유하는 5 % 만니톨 용액 300 ml에 용해시켰다.

[실시예 6]

실시예 1과 동일하게 수행하되, 시안아크릴산 부틸 에스테르는 시안아크릴산 에틸 에스테르로 대체하였다. 미세 입자는 1.5 ㎛의 평균 크기 및 0.2 g/cm³의 비중을 가졌다. 이들을 1 % 폴록사머 407 및 5 % 글루코스의 수용액 300 ml에 용해시켰다.

[실시예 7]

실시예 1과 동일하게 수행하되, 시안아크릴산 부틸 에스테르는 시안아크릴산 이소프로필 에스테르로 대체하였다. 미세 입자는 1.3 ㎛의 평균 크기 및 0.2 g/cm³의 비중을 가졌다. 이들을 1 % 폴록사머 407 및 5 % 만니톨 및 10 % 프로필렌 글리콜의 수용액 300 ml에 용해시켰다.

[실시예 8]

시안아크릴산 부틸 에스테르 3 ml를 1 % 폴록사머 407을 함유하는 pH 2.0의 HCl 300 ml에서 용해-혼합기를 사용하여 120분 동안 분산시켰다. 평균 크기 2 ㎛ 및 비중 0.1 g/cm³의 미세 입자를 부유시켜 분리하고, 1 % 폴록사머 407 및 10 % 프로필렌 글리콜을 함유하는 5 % 만니톨 용액 5 ℓ에 용해시켰다.

[실시예 9]

실시예 8과 동일하게 수행하되, 폴록사머 407은 옥톡시놀-9로 대체하였고, pH는 2.5로 조정하였다. 미세 입자의 평균 크기는 0.8 ㎛이었고, 이들의 비중은 0.15 g/cm³이었다. 이들을 0.1 % 세토마크로골 1200을 함유하는 0.9 % 식염 용액 5 ℓ에 용해시켰다.

[실시예 10]

실시예 8과 동일하게 수행하되, 폴록사머 407은 세토마크로골 1200으로 대체하였다. 미세 입자의 평균 크기는 1.8 ㎛이었고, 이들의 비중은 0.4 g/cm³이었다. 이들을 0.2 % 세토마크로골 1200을 함유하는 5 % 글루코스 용액 5 ℓ에 용해시켰다.

[실시예 11]

실시예 8과 동일하게 수행하되, 폴록사머 407은 5%폴리소르베이트 60으로 대체하였다. 미세 입자의 평균 크기는 1.0 ㎛이었고, 이들의 비중은 0.4 g/cm³이었다. 이들을 1 % 폴록사머 407 및 10 % 프로필렌 글리콜을 함유하는 5 % 만니톨 용액 5 ℓ에 용해시켰다.

[실시예 12]

실시예 8, 9, 10 또는 11에서 제조한 입자를 각각 지정된 용액 대신에 0.1 % 세토마크로골 1200 및 5 % 포비돈을 함유하는 5 % 만니톨 용액 5 ℓ에 각각 용해시키고, 격렬하게 교반시키면서 15 ml씩 동결시키고, 동결 건조시켰다. 사용하기 전에, 동결 건조물을 주사제용 물로 재현탁시키고, 임의로 여과시켰다.

[실시예 12a]

실시예 8, 9, 10 또는 11에서 제조한 입자를 각각 지정된 용액 대신에 0.1 % 세토마크로골 1200을 함유하는 10 % 락토스 용액 5 ℓ에 용해시키고, 격렬하게 교반시키면서 15 ml씩 동결시키고, 동결 건조시켰다. 사용하기 전에, 동결 건조물을 주사제용 물로 재현탁시키고, 임의로 여과시켰다.

[실시예 13]

수소 첨가 대두 레시틴 1.0 g을 용해-혼합기를 사용하여 글리세롤 200 ml에 분산시켰다. 60분 후, 비등 에탄올 10 ml에 용해시킨 폴리-L-락티드(평균 분자량 1100) 2.0 g을 분산액에 적가하였다. 60분 이상 동안 더 분산시켰다. 생성된 미세 입자를 1000 rpm으로 원심 분리하고, 상징액을 물 50 ml에 용해시켜 다시 원심 분리(1000 rpm)하고, 상징액을 5 % 만니톨 용액에 용해시켰다. 이 현탁액을 10 ml씩 나누어 동결 건조시켰다. 사용하기 전에, 동결 건조물을 주사제용 물로 재현탁시켰다.

[실시예 14]

수크로스-팔미테이트-스테아레이트(HLB 15) 1.0 g을 용해-혼합기를 사용하여 글리세롤 200 ml에 분산시켰다. 30분 후, 비등 에탄올 10 ml에 용해시킨 폴리-L-락티드(평균 분자량 1100) 1.0 g을 분산액에 적가하였다. 60분 이상 동안 더 분산시켰다. 생성된 미세 입자의 평균 크기는 2 ㎛이었다. 이들을 1000 rpm으로 30분 동안 원심 분리하고, 상징액을 물 50 ml에 용해시켜 다시 원심 분리(1000 rpm)하고, 상징액을 5 % 만니톨 용액 50 ml에 용해시켰다. 이 현탁액을 10 ml씩 나누어 동결 건조시켰다. 사용하기 전에, 동결 건조물을 주사제용 물로 재현탁시켰다.

[실시예 15]

실시예 8에 따라 제조된 미세 입자(250 ㎍/ml)를 25 ㎍/kg(체중)의 투여량으로 개(12.5 kg, 흡입 마취)에게 2 ml/분의 속도로 정맥에 주사하였다. 초음파 연구 결과, 심장의 좌측 절반에서 β-화상의 격렬하고 연장된 신호 증폭이 명백하게 관찰되었다.

[실시예 16]

실시예 1 내지 7 또는 9 내지 14에서 제조한 입자를 사용하여 실시예 15를 반복하였다. 이 경우에도 또한 격렬하고 연장된 신호 증폭이 심장의 좌측 절반에서 나타났다.

[실시예 17]

실시예 8에 따라 제조한 미세 입자(250 ㎍/ml)를 300 ㎍/kg(체중)의 투여량으로 개(11 kg, 흡입 마취)에게 0.1 ml/분의 속도로 정맥에 주사하였다. 10분 후, 칼라 도플러 시험의 결과, 간은 시험하는 동안 충분한 긴 기간 동안 균일한 칼라 코드를 나타내었다.

[실시예 18]

실시예 1 내지 7 또는 9 내지 14에서 제조한 입자를 사용하여 실시예 17을 반복하였다. 또한, 이 경우에도 간은 균일한 칼라 코드를 나타내었다.

[실시예 19]

실시예 8에서 제조한 미세 입자를 개의 혈청과 1 대 1로 혼합하고, 37 ℃에서 배양하였다. 4시간 후, 앞서 흐린 현탁액이 완전히 맑아지며, GC에 의해 이론상 기대되는 부탄올 양이 거의 100 % 확인되었다.

[실시예 20]

시안아크릴산 부틸 에스테르 3 ml를 1 % 노녹시놀을 함유하는 pH 2.5의 HCl 300 ml에 용해-혼합기를 사용하여 90분 동안 분산시켰다. 1.4 ㎛의 평균 크기를 갖는 미세 입자를 부유시켜 분리하고, 물 100 ml에 용해한 후, 5 % 알부민과 혼합하였다. 이어서, 약하게 교반하면서 5 ml씩 동결시켜서 동결 건조시켰다.

[실시예 21]

시안아크릴산 부틸 에스테르 3 ml를 1 % 옥톡시놀을 함유하는 pH 2.5의 HCl 300 ml에 용해-혼합기를 사용하여 90분 동안 분산시켰다. 1.4 ㎛의 평균 크기를 갖는 미세 입자를 부유시켜 분리하고, HCl/NaOH를 사용하여 pH 5.0으로 조정한 5 % 압열 멸균 젤라틴 용액 100 ml에 용해시키고, 약하게 교반하면서 5 ml씩 동결시켜서 동결 건조시켰다.

[실시예 22]

시안아크릴산 부틸 에스테르 3 ml를 1 % 옥톡시놀 및 5 % 포비돈을 함유하는 pH 2.5의 HCl 300 ml에 용해-혼합기를 사용하여 90분 동안 분산시켰다. 1.4 ㎛의 평균 크기를 갖는 미세 입자를 부유시켜 분리하고, 5 % 포비돈에 용해시키고, 5 ml씩 병에 넣었다. 이어서, 병에 든 현탁액을 0 ℃로 1시간 동안 온도를 유지시키고, 동결시켜서 동결 건조시켰다.

[실시예 23]

시안아크릴산 부틸 에스테르 3 ml를 1 % 옥톡시놀을 함유하는 pH 2.5의 HCl 300 ml에 용해-혼합기를 사용하여 90분 동안 분산시켰다. 1.4 ㎛의 평균 크기를 갖는 미세 입자를 부유시켜 분리하고, 물 300 ml에 용해시키고, 0.1 % 글리세롤 및 10 % 락토스와 혼합한 후, 동결시켜서 동결 건조시켰다.

Claims

외피가 폴리알킬 시안아크릴레이트 또는 α-, β- 또는 γ-히드록시카르복실산의 폴리에스테르로 이루어지고, 입자 직경이 10 ㎛ 미만이며, 비중이 0.7 g/cm³미만인 기체 함유 미세 입자를 함유하는 것을 특징으로 하는 초음파 조영 매체.
제1항에 있어서, 평균 입자 직경이 0.1 ㎛ 내지 5 ㎛인 것인 초음파 조영 매체.
제1항에 있어서, 입자의 비중이 0.05 g/cm³내지 0.7 g/cm³인 것인 초음파 조영 매체.
단량체 시안아크릴레이트를 임의로 1종 이상의 표면 활성제를 함유하는 기체로 포화된 산 수용액에 분산시키고, 분산 5분 내지 3시간 후 얻어진 입자를 분리하고, 임의로 물로 세척한 후, 제약학상 허용되는 현탁 매질에 용해시키고, 동결 건조시키는 것을 특징으로 하는 미세 입자의 제조 방법.
α-, β- 또는 γ-히드록시카르복실산의 폴리에스테르를 임의로 수분산성 유화제와 함께 건강에 무해한 용매에 용해시키고, 이 용액을 분산시키면서 유화제가 상기 폴리에스테르와 함께 첨가되지 않은 경우에 수분산성 유화제를 함유하는 기상 액체에 가하고, 분산 30분 내지 2시간 후 얻어진 입자를 분리하고, 임의로 물로 세척한 후, 제약학상 허용되는 현탁 매질에 용해시키고, 동결 건조시키는 것을 특징으로 하는 미세 입자의 제조 방법.
제4항 기재의 방법으로 얻을 수 있는 미세 입자.
제5항 기재의 방법으로 얻을 수 있는 미세 입자.
제1항에 있어서, 폴리알킬 시안아크릴레이트로서 폴리부틸, 폴리이소프로필 또는 폴리에틸 시안아크릴레이트가 사용되는 것인 초음파 조영 매체.
제1항에 있어서, 히드록시카르복실산의 폴리에스테르로서 폴리-L-락티드가 사용되는 것인 초음파 조영 매체.
제1항에 있어서, 기체로서 공기, 질소, 산소, 희유 기체, 이산화탄소 또는 이들의 혼합물이 사용되는 것인 초음파 조영 매체.
제4항에 있어서, 수용액의 pH가 1.8 내지 4.5인 것인 미세 입자의 제조 방법.
제11항에 있어서, pH를 조정하기 위하여 염산 또는 인산이 사용되는 것인 미세 입자의 제조 방법.
제4항에 있어서, 표면 활성제로서 폴리소르베이트, 옥틸 또는 노닐 페놀, 마크로골-글리세롤 에스테르 또는 세토마크로골 또는 폴록사머^(R)의 군으로부터 선택된 물질 또는 이들의 혼합물이 사용되는 것인 미세 입자의 제조 방법.
제5항에 있어서, 수분산성 유화제로서 포스파티딜콜린 또는 수크로스-팔미테이트-스테아레이트 15 또는 이들의 혼합물이 사용되는 것인 미세 입자의 제조 방법.
제5항에 있어서, 인체에 무해한 폴리에스테르 용매로서 저급 알콜이 사용되는 것인 미세 입자의 제조 방법.
제5항에 있어서, 기상 액체로서 물 또는 87 % 글리세롤이 사용되는 것인 미세 입자의 제조 방법.
제4항에 있어서, 현탁 매질로서 임의로 식염 및(또는) 글루코스 및(또는) 만니톨 및(또는) 락토스가 첨가되고, 또한 임의로 제13항 기재의 표면 활성제 및(또는) 다가 알콜을 함유하는 주사제용 물이 사용되는 것인 미세 입자의 제조 방법.
제6항 기재의 미세 입자를 제약학상 허용되는 현탁 매질에 재현탁시킨 초음파 조영 매체.
제18항에 있어서, 제약학상 허용되는 현탁 매질로서 임의로 식염, 글루코스, 만니톨 및(또는) 락토스가 첨가되고, 또한 임의로 제13항 기재의 표면 활성제 및(또는) 다가 알콜을 함유하는 주사제용 물이 사용되는 것인 초음파 조영 매체.
최종 동결 건조를 생략하고, 제4항 기재의 방법으로 제조가능한 초음파 조영 매체.
제1항에 있어서, 초음파 조영 매체가 초음파 조사에 의해 독립적인 신호로 여기되는 것인 초음파 조영 매체.
제21항에 있어서, 독립적인 음파 신호가 칼라 도플러(Doppler) 방법으로 평가되는 것인 초음파 조영 매체.
제5항에 있어서, 현탁 매질로서 임의로 식염 및(또는) 글루코스 및(또는) 만니톨 및(또는) 락토스가 첨가되고, 또한 임의로 제13항 기재의 표면 활성제 및(또는) 다가 알콜을 함유하는 주사제용 물이 사용되는 것인 미세 입자의 제조 방법.
제7항 기재의 미세 입자를 제약학상 허용되는 현탁 매질에 재현탁시킨 초음파 조영 매체.
제24항에 있어서, 제약학상 허용되는 현탁 매질로서 임의로 식염, 글루코스, 만니톨 및(또는) 락토스가 첨가되고, 또한 임의로 제13항 기재의 표면 활성제 및(또는) 다가 알콜을 함유하는 주사제용 물이 사용되는 것인 초음파 조영 매체.
최종 동결 건조를 생략하고, 제5항 기재의 방법으로 제조가능한 초음파 조영 매체.