KR100250847B1 - 산화방지 특성을 지닌 합성 폐 표면활성제 - Google Patents

산화방지 특성을 지닌 합성 폐 표면활성제 Download PDF

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알. 맥린 래리
에이치. 페인 마거리트
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슈테펜 엘. 네스비트
메렐 다우 파마슈티칼스 인크.
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Abstract

α-나선형 구조를 지니는, 항산화성 잔기를 포함하는 폴리펩타이드와 천연 폐동맥 표면활성제와 결합된 상태로 존재하는 하나 이상의 지질로 이루어진 지질과의 복합물로 이루어진, 항산화성을 지니는 합성 폐동맥 표면활성제를 제조하였다. 이들 표면 활성제는 호흡기 질환의 치료시 유용하다.

Description

[발명의 명칭]
산화방지 특성을 지닌 합성 폐 표면활성제
[발명의 분야]
본 발명은 합성 폐 표면활성제(synthetic lung surfactant)로서 유용한 산화방지 특성을 지니는 일련의 폴리펩타이드, 이의 합성 방법, 이러한 폴리펩타이드와 지질의 혼합물 제제, 이러한 제제의 제조방법 및 포유동물의 호흡곤란 증후군을 치료하는데 효과적인 약제학적 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
[발명의 배경]
폐는 독성 산화제와 산화방지 방어 시스템의 보호 활성 사이의 정밀한 균형내에 존재한다. 산화제의 증가 또는 보호성 산화방지 방어 시스템의 기능장애를 통한, 시스템 내에서의 불균형은 폐동맥의 기능장애를 유발시키는 폐내의 병리생리학적 이상을 유도할 수 있다. 산화제를 증가시키는 폐동맥 기능 장애의 한 가지 유형은 호흡 곤란 증후군(RDS)이다.
신생아 호흡 곤란 증후군은 생후 28일내의 사망을 유발시킬 수 있다. 이는 세계적으로 100명의 신생아당 1명에 해당되는 것으로 약 10%의 사망률을 보이고 있다. 상기 질환은 신생아에게서 드물게 발생하는데, 일반적으로 미숙 및 출생시의 저체중(2kg 미만)과 관련이 있다. 성인의 RDS는 신생아의 질환과 유사한 임상적 특성 및 병리생리학적 특성을 나타내며, 유사한 방식으로 매우 세심하게 주의하여 취급해야 한다. 성인의 질환은 다양한 병인학적 특성을 지니며, 예를 들어 전염성 감염, 위장 내용물의 흡인, 자극물 및 독소의 흡입 및 과량의 마취제와 같은 공급원으로부터 유발되는 폐동맥 부종과 같은 폐 손상에 의해 초래된다.
RDS는 가스 교환이 이루어지는 폐의 폐포를 덮고 있는 폐 표면 활성제의 부재 또는 기능 장애와 관련이 있으며, 이는 예를 들어, 과산화물 라디칼, 하이드록실 라디칼, 하이드록실 라디칼을 생성할 수 있는 과산화수소 및 세포내 손상과 관련된 과산화지질과 같은 산화제로서 공지된 산소-중심 유리 라디칼과 연관되어 있다[참조 : Heffner, et al., Am. Rev. Respir. Dis. 104 : 531-554, 1989 : Halliwell, FASEB J. 1 : 358-364, 1987].
산화방지 잔기를 포함하지 않는, 본 발명의 합성 폐 표면활성제 폴리펩타이드에 대해서는 본원에서 참고로 인용된 미합중국 특허원 제282,795호(1988. 12. 9) 및 제214,228호(1988. 7. 1)에 기술되어 있다. 그러나, 본 발명의 목적은 산화방지 특성, 즉 민감성 화합물이 산화제로 산화되는 것을 억제하는 능력을 지니는 효과적인 합성 폐 표면활성제를 제공하는 것이다.
몇몇 합성 폐 표면활성제는 비타민 E와 같은 치료제에 별개 성분으로서의 표면활성제로 첨가되어 왔다[참조 : 미합중국 특허 제4,765,987호; PCT 공보 제WO90/11768호; PCT 공보 제WO90/07469호]. 그러나, 본 발명에 있어서, 산화방지제는 별개 성분이 아니라, 실제로 폴리펩타이드에 혼입되어 있다. 산화방지제를 폴리펩타이드내에 혼입시키는 것의 잇점은 3개 성분(지질, 폴리펩타이드 및 산화방지제)의 혼합물을 포함하는 대신에 2개 성분의 혼합물을 이용할 수 있다는 데에 있다. 이는 각종 용량 및 제형을 각각의 성분에 대해 시험해야 하는 시판용 약제에 대한 효능을 시험하는데 상당히 유리할 수 있다. 또한, 2개 성분의 제형은 제조하기도 용이하다.
본 발명의 폴리펩타이드는 폴리펩타이드가 표면활성제 혼합물의 미량 성분을 포함하는 지질의 혼합물중에서 단독으로 또는 배합된 상태로 사용할 수 있다. 본 발명의 조성물은 합성 성분들의 한정된 혼합물이기 때문에 고순도 및 표준 방식으로 제조할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 바이러스 및 세균에 의해 오염될 위험을 최소화시키는 동물원에서 기원하지는 않는다.
[발명의 요약]
본 발명은 일반식(1)의 폴리펩타이드, 이의 광학 활성 이성체 또는 약제학적으로 허용되는 염인 폴리펩타이드와 지질의 복합체로 이루어진 합성 폐 표면활성제를 포함한다.
상기식에서, X는 수소, C1-5알킬 그룹, C1-10아실 그룹, 아미노산, 디펩타이드 또는 폴리트리펩타이드이고, Y 및 Y′는 각각 독립적으로 결합, -(Ser)n-(여기서, n은 1 내지 3의 정수이다) 또는 T[여기서, T는{여기서, n′는 1 내지 8의 정수이고, W는 -NHC(O)-, -NHCH2-, -OC(O)-, -C(O)-O-, -SC(O)- 또는 -SS-이며, D는또는(여기서, B는 결합, C1-6알킬렌 또는 C2-16알케닐렌이며, B1은 B 또는이고, R1, R2, R3, R4, R5, R6및 R7은 각각 독립적으로 C1-6알킬이다)이다}이다]이거나, X와 Y가 함께는 Da-C(O)- 또는 Db-C(O)-이고, Q는 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 알콕시 그룹, -O-Da또는 -O-Db이며, Z는 A1내지 A11로 지정된 아미노산 잔기중의 어느 하나로부터 시작할 수 있는 서열
의 올리고머 단편으로 이루어진 8 내지 25개 아미노산 잔기의 펩타이드 잔기[여기서, A1, A1′, A1″, A1″′, A4, A4′, A4″, A8, A8′ 및 A8″은 각각 독립적으로 -Glu-, -Asp-, -Ala-, -Gln-, -Asn-, -Gly-, -Ser-, -Thr-, -Lys-, -Arg-, -Orn- 및 -hArg-로 이루어진 친수성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되며; A2, A2′, A2″, A2″′, A3, A3′, A3″, A6, A6′, A6″, A7, A7′, A7″, A10, A10′ 및 A10″는 각각 독립적으로 -Leu-, -Nle-, -Met-, -Ala-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile- 및 -Tyr-로 이루어진 호지성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되거나, 또는 아미노산 잔기 유도체 T이며; A5, A5′, A5″, A11, A11′ 및 A11″는 각각 독립적으로 -Lys-, -Orn-, -Arg- 및 -hArg-로 이루어진 염기성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되고, A9, A9′ 및 A9″는 각각 독립적으로 -Leu-, -Nle-, -Met-, -Ala-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, -Tyr-, -Thr-, -Ser-, -Gln-, -Asn-, -Gly-, -Lys-, -Arg-, -hArg-, -Trp-, -Orn- 및 -Trp(For)-로 이루어진 호지성, 중성 또는 염기성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되거나, 또는 아미노산 잔기 유도체 T이다)이고, 단, 일반식(1)에는 하나 이상의 T, -O-Da, O-Db, Da-C(O)- 또는 Db-C(O)-가 존재한다.
지질은 천연 폐동맥 표면활성제와 관련된 하나 이상의 유형을 포함한다.
이들 폴리펩타이드-지질 복합체 및 이들의 약제학적 조성물은 포유동물의 호흡 곤란 증후군을 치료하는데 유용하다.
[도면의 간단한 설명]
제1도는 WMAP10 및 본 발명의 유도체 산화방지 펩타이드의 구조를 도시한 것이다.
제2도는 트리플루오로에탄올(TFE) 및 물중에서 펩타이드 및 산화방지 펩타이드의 CD 스펙트럼을 도시한 것이다.
제3도는 펩타이드 및 펩타이드 산화방지제에 의한 지질 과산화의 억제를 도시한 것이다.
(·) 모든 패널에서의 대조물; WMAP 10패널 : (□) BHT(부틸하이드록시-톨루엔)(1㎍/mL), (▽) 1.5%(1.5부 펩타이드 : 100부 DPPC), (▼) 4.5%; HBB-LysMAP10패널; (▽) 0.6%, (▼) 1.2%, (□) 2.4%, (■) 3.6%, (△) 4.8%; HBB-CysMAP10 패널 : (▽) 0.4%, (■) 0.8%, (▼) 1.5%, (□) 3%.
제4도는 표시된 표면활성제 혼합물에 대한 대표적인 압력-용적 감소 곡선을 도시한 것이다(·). 포인트가 없는 곡선은 정상 폐(좌측-주요 곡선) 및 결손된 세척 폐(우측-주요 곡선)에 해당한다.
[발명의 상세한 설명]
천연 아미노산에 대해 하기와 같은 통상의 약어를 본 명세서 전반에 걸쳐 사용한다 :
Ala 또는 A-알라닌,
Val 또는 V-발린,
Leu 또는 L-루이신,
Ile 또는 I-이소루이신,
Phe 또는 F-페닐알라닌,
Trp 또는 W-트립토판,
Met 또는 M-메티오닌,
Ser 또는 S-세린,
Tyr 또는 Y-타이로신,
Asp 또는 D-아스파르트산,
Glu 또는 E-글루탐산,
Gln 또는 Q-글루타민,
Thr 또는 T-트레오닌,
Gly 또는 G-글라이신,
Lys 또는 K-라이신,
Arg 또는 R-아르기닌,
Asn 또는 N-아스파라긴,
Nle-노르루이신,
Orn-오르니틴,
hArg-호모아르기닌,
Nva-노르발린 및
Trp(For)-N-포밀-Trp.
글라이신을 제외한 천연 아미노산은 키랄 탄소 원자를 포함한다. 다른 각별한 언급이 없는 한, 본원에서 인용되는 광학 활성 아미노산은 L-배위이다. 바람직하게, 폴리펩타이드내 모든 아미노산은 모두 D 배위이거나 모두 L 배위이다. 일단, 본 발명의 산화방지 잔기를 펩타이드에 가하면, 입체 이성체가 형성될 수 있다. 본 발명은 분리된 입체이성체 뿐만 아니라 이들 입체이성체들의 혼합물을 포함한다. 통상적으로, 본원에서 사용된 펩타이드의 구조는 아미노 말단이 쇄의 좌측에 위치하고, 카복시 말단이 쇄의 우측에 위치한다.
2개 이상의 아미노산이 결합되어 펩타이드를 형성할 경우, 물의 성분들이 제거되고, 각각의 아미노산에서 남은 것을 잔기라 부른다. 따라서, “잔기”는 말단아미노 그룹의 수소 원자가 부재하고/하거나 말단 카복실 그룹의 하이드록실 그룹이 부재하는 아미노산이다. 허용되는 전문 용어를 사용하는데 있어서, 아미노산 또는 아미노산 유도체에 대한 3개의 문자 코드의 전(수소의 부재를 나타내는) 및/또는 후(하이드록실의 부재를 나타내는)에서의 (-)는 잔기를 나타낸다.
본원에서 사용된 것으로서 “알킬”은 명시된 탄소원자수에 따라 직쇄 또는 측쇄 탄화수소 라디칼(예 : 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 이소프로필, 3급 부틸, 2급 부틸, 이소펜틸, 1-메틸부틸 등)을 의미한다. 본원에서 사용된 “아실”은 하이드록실 그룹을 제거함으로써 유기산으로부터 형성된 라디칼을 의미하는데, 일반식은 RCO-[여기서, R은 지방족, 지환족, 방향족 탄화수소 또는 수소(포밀 그룹)이다]이다. R 그룹은 치환될 수 있다. 아실 그룹의 예에는 석시닐이 있다.
본 발명의 X 그룹은 수소, C1-5알킬 그룹, C1-10아실 그룹, 아미노산, 디펩타이드 또는 트리펩타이드일 수 있다. 특정 아미노산, 디펩타이드 또는 트리펩타이드는 본원에 기술된 폴리펩타이드의 작용을 방해하지 않는 X일 수 있다. 아미노산, 디펩타이드 또는 트리펩타이드는 후술되는 고체상 순차 공정과 같은 임의의 적합한 방법으로 Y에 부착시킬 수 있거나, Y가 결합인 경우에는, Z에 부착시킬 수 있다. X가 C1-5알킬 그룹인 경우, 알킬 그룹은 적당한 알킬화 방법으로 Y에 가할 수 있거나, Y가 결합인 경우에는, Z에 가할 수 있다. X가 C1-10아실 그룹인 경우, 아실 그룹은 적당한 아실화 방법으로 Y에 가할 수 있거나, Y가 결합인 경우에는, Z에 가할 수 있다.
Y 및 Y′는 각각 독립적으로 결합, 1 내지 3개의 세린 잔기 또는 유도체화된 아미노산 T이다. Y 또는 Y′가 1 내지 3개의 세린 잔기인 경우, 세린 잔기는 후술되는 고체상 순차 공정과 같은 임의의 적당한 방법으로 Z에 부착시킬 수 있다. T는 또한 고체상 순차 공정과 같은 임의의 적당한 방법으로 유도체화된 아미노산으로서 폴리펩타이드 Z에 부착시킬 수 있다.
T는 하기 일반식으로 정의된다 :
상기식에서, n′는 1 내지 8의 정수, 바람직하게는 1 내지 4의 정수이고, W는 -NHC(O)-, -NHCH2-, -OC(O)-, -C(O)-O-, -SC(O)- 또는 -SS-, 바람직하게는 -NHC(O)- 또는 -SS-이며, D는또는이고, 여기서 B는 결합, C1-16알킬렌 또는 C2-16알케닐렌이며, B1은 B 또는이고, R1, R2, R3, R4, R5, R6및 R7은 각각 독립적으로 C1-6알킬이다.
상기한 바와 같이, 알킬은 직쇄 또는 측쇄 알킬일 수 있고, 각각의 R1-7은 탄소수 1 내지 6의 상이한 알킬일 수 있다. 바람직하게는, R1, R2, R6및 R7은 각각 3급-부틸이고, 각각의 R3, R4및 R5는 메틸이다. Da가 Db보다 바람직하고, B는 B1보다 바람직하다. B는 결합인 것이 바람직하다.
D는 폴리펩타이드상에 산화방지 특성 제공하는 부위인 것으로 여겨지기 때문에, D는 본원에서 “산화방지 잔기”로서 언급된다. 그러나, “폴리펩타이드에 부착된 산화방지 잔기”를 기술할 때, 이것은 적합한 링커, 예를 들면, W, -C(O)- 또는 -O-를 포함할 수 있도록 D가 폴리펩타이드에 대한 링커를 필요로 함이 이해되어야 할 것이다.
T를 형성시키는 한 가지 방법은 산화방지 화합물의 부착에 대해 민감한 아미노산의 측쇄를 개질시키는 것이다. 상기 부착에 대해 민감한 아미노산은 통상적으로 측쇄상에 작용성 그룹을 갖는다. 이들 아미노산의 예에는 아미노 측쇄(Nε)작용성 그룹을 갖는 아미노산(예 : 라이신 및 오르니틴); 하이드록시 측쇄 작용성 그룹을 갖는 아미노산(예 : 세린 및 트레오닌); 설프하이드릴 측쇄 작용성 그룹을 갖는 아미노산(예 : 시스테인 및 호모시스테인); 및 카복실 측쇄 작용성 그룹을 갖는 아미노산(예 : 아스파르트산 및 글루탐산)이 있다. 측쇄 작용성 그룹을 갖는 아미노산 유도체를 또한 사용할 수 있고 이들의 다수는 통상적으로 구입가능한 것이다.
T를 형성시키기 위한 다수의 방법이 있다. 예를 들어, 아미노산이나 아미노산 또는 아미노산 유도체의 측쇄 아미노 그룹, 측쇄 알콜 그룹 또는 측쇄 설프하이드릴 그룹은 산화방지 화합물로부터 형성된 아실화제로 아실화시킬 수 있다. 아실화제가 되기 위해서는, 항산화성 화합물은 예를 들어 대칭성 무수물 또는 활성 에스테르[예 : N-하이드록시벤조트리아졸 에스테르(HOBt) 에스테르]를 형성할 수 있다. 그다음, 아실화제를 반응이 일어나도록 하기 위한 비보호된 작용성 타겟 부위에 노출시킨다. 이는 산화방지 잔기를 제공받는 아미노산이 수지에 부착된 펩타이드의 일부인 고체상 펩타이드 합성 공정중에 수행하는 것이 바람직하다.
개별적인 아미노산은 또한 예를 들어 에스테르화, 환원적 알킬화 등에 의해 펩타이드내로 혼입시키기 전에 개질시킬 수도 있다. 작용성 그룹을 함유하는 아미노산 및 아미노산 유도체의 기타 개질 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있다.
본 발명에 따라 아미노산 또는 아미노산 유도체와 반응시키는데 있어서 유용한 것으로 밝혀진 산화방지 화합물의 바람직한 예에는 하기와 같은 화합물들이 있다 :
1) HBB : 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시벤조산,
2) HBP : 3-(3′,5′-디-3급-부틸-4-하이드록시페닐)프로피온산,
3) HBC : 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시산남산,
4) HBA : 2-(3′,5′-디-3급-부틸-4-하이드록시페닐)아세트산,
5) di-HBA : 2,2-디-(3′,5′-디-3급-부틸-4-하이드록시페닐)아세트산,
6) Trl : 6-하이드록시-2,5,7,8-테트라메틸크로만-2-카복실산(Trolox로도 공지되어 있는),
7) HBB-알 : 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시벤즈알데히드,
8) HBB-올 : 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시벤질 알콜 및
9) HBS : 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시티오페놀.
HBS, HBB, HBP, HBA, 디-HBA 및 Trl은 작용성 그룹이 설프하이드릴 그룹인 경우에 사용하는 것이 바람직하고, HBB, HBP, HBC, HBA, 디-HBA 및 Trl은 작용성 그룹이 알콜 그룹 또는 아미노 그룹인 경우에 사용하는 것이 바람직하다. HBB-알은 아민 측쇄를 환원성 알킬화시키는데 사용할 수 있고, HBB-올은 산성 측쇄 및 카복실 말단을 에스테르화시키는데 사용할 수 있다.
상기한 산화방지 화합물은 시판되고 있는 것이거나 당해 분야에서 공지된 합성 물질인데, 예를 들어 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시페닐아세트산은 문헌[참조 : IZu, Akad. Nauk SSSR, Ser. Khim. 358, 1965]에 기술되어 있고, 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시벤즈알데히드는 문헌[참조 : J. Org. Chem., 22, 1333 1957]에 기술되어 있다. 일반적으로 (1) 본 발명의 폴리펩타이드에 부착될 수 있고, (2) 폴리펩타이드에 부착되어 있으면서 산화방지 활성을 나타내며, (3) 폴리펩타이드가 본원에 기술되어 있는 바와 같이 수행되도록 하는 임의의 산화방지 화합물이 본 발명중에 사용될 수 있다.
상기한 바와 같이, 본원에 기술되어 있는 산화방지 화합물과 아미노산 또는 아미노산 유도체가 반응하는 경우, 아미노산 유도체가 형성되는데, 이의 잔기는 일반식(1)의 T로 표시된다. 본원에서 사용된 T 및 다른 그룹에 대한 약어의 예는 하기와 같다 : -[Nε-HBB-Lys]- :
여기서, Nε는 HBB(반응으로 인해 하이드록실 그룹이 제거된)가 부착된 측쇄 아미노 그룹을 의미한다.
황 라디칼에서 시스테인 잔기의 측쇄에 부착된 HBS(설프하이드릴 그룹의 수소가 제거된)를 의미하는 -[S-HBS-Cys]- :
세린 잔기의 측쇄상에서 산소에 부착된 HBB(하이드록실 그룹이 부재하는)를 의미하는 -[O-HBS-Ser]- :
루이신 잔기의 α-아미노 그룹에 부착되어 있는 HBC(하이드록실 그룹이 부재하는)를 의미하는 HBC-Leu- :
Nα가 Fmoc로 보호되어 있고, Nε이 Boc로 보호되어 있으며, HBB-알(산소 원자가 부재하는)이 Nε위치에 부착되어 있는 라이신 아미노산을 의미하는 Nα-Fmoc-Nε-Boc-Lys[Nε-HBB-알] :
Fmoc에 의해 보호된 Nα및 글루탐산의 측쇄 카복실 그룹에 부착되어 에스테르를 형성하는 HBB-올(하이드록실 그룹이 부재하는)을 갖는 글루탐산 아미노산을 의미하는 Fmoc-Glu[λ-HBB 에스테르] :
루이신 잔기의 α-아미노 그룹에 부착되어 있는 trolox(하이드록실 그룹이 부재하는)를 의미하는 Trl-Lue- :
Trl-Lue의 예를 통해 알 수 있는 바와 같이, 산화방지 잔기는, D가 Db이고 B가 결합인 경우에, 카보닐 그룹(C(O)-)과 함께 폴리펩타이드 Z의 α-아미노 말단에 부착될 수 있다. 특히, X와 Y는 함께 Db-C(O)-를 형성한다. 또한, 산화방지 잔기 Da또는 Db는 카복시 말단(-COOH)에 부착되어 말단 -C(O)-O-Da또는 -C(O)-O-Db를 형성할 수 있다. 즉 Q가 -O-Da또는 -O-Db가 된다. 산화방지 화합물은 상기한 바와 같이 아실화제를 형성할 수 있고, 각각의 말단에 커플링될 수 있다.
산화방지 잔기는 아미노산을 개질시켜 T를 형성함으로써 폴리펩타이드 Z의 말단기들 사이의 측쇄에 부착될 수 있거나 하나 이상의 말단상에 부착될 수 있다. 산화방지 잔기를 말단기들 사이의 측쇄에 부착시킨 경우, 이는 예를 들어, A2, A2′, A2″, A2″′, A3, A3′, A3″, A6, A6′, A6″,A7, A7′, A7″, A9, A9′, A9″, A10, A10′ 또는 A10″와 같은 호지성 펩타이드 부위에 부착시켜 펩타이드의 구조를 유지시키는 것이 바람직하다. 폴리펩타이드 Z에 부착된 하나 이상의 산화방지 잔기도 존재할 수 있다.
본 발명의 폴리펩타이드는 액체상 화학과 같이 당해 분야의 전문가들에게 쉽게 공지되어 있는 다양한 방법으로 제조할 수 있다. 바람직한 방법은 ABI 펩타이드 합성기와 같은 자동화된 방법을 이용할 수 있는 고체상 순차 공정이다. 고체상 순차 공정에 있어서는, (1) 보호 α-아미노 그룹을 갖는 제1아미노산을 수지 지지체에 결합시키는 단계, (2) 보호된 α-아미노 그룹을 갖는 제2아미노산의 카복실 그룹을 활성화시키는 단계, (3) 제1아미노산을 수지에 부착된 상태로 유지시키는 시약으로 제1아미노산을 탈보호시키는 단계, (4) 제1아미노산의 α-아미노 그룹과 제2아미노산의 활성화된 카복실 그룹간에 커플링 반응을 수행하는 단계를 실시한다. 상기한 단계들은 펩타이드를 형성시키는 신규한 아미노산 잔기를 사용하여 반복 수행한다. 목적하는 길이의 펩타이드가 형성되면, 이 펩타이드를 수지로부터 분리해내고, 탈보호시켜 회수한다.
사용된 수지 지지체는 클로로메틸화되거나 하이드록시 메틸화되어 처음에 도입된 α-아미노 보호된 아미노산과 함께 에스테르를 형성하는 부위를 제공하는 디비닐 벤젠 0.5 내지 약 3%와 가교-결합된 폴리스티렌과 같은 폴리펩타이드의 고체상 제조를 위해 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 임의의 적합한 수지일 수 있다. 다른 적합한 수지 지지체에는 pMHBA(Peptide International, Louisville, Ky), RINK(Calbiochem, LaJolla, Ca) 및 Sasrin(Biochem, Philadelphia, Pa)이 있다. Sasrin 수지는 ABI 펩타이드 합성기 사용자의 조작법에 기술되어 있는 제1아미노산을 적하하기 위한 특정 ABI 주기를 필요로 한다. 보호 α-아미노 그룹을 갖는 제1아미노산은 문헌[참조 : Applied Biosystems Model 430A Peptide Synthesizer User′s Manual]에 기술되어 있는 바와 같이 수지에 결합되어 있다.
제2아미노산을 활성화시키는 바람직한 방법에는 제2 α-아미노 보호 아미노산의 대칭성 무수물 또는 활성 에스테르의 형성이 포함된다. 예를 들어, α-아미노 보호된 아미노산은 디클로로메탄(DCM)의 존재하에서 디사이클로헥실카보디이미드(DCC)와 반응시켜 대칭성 무수물을 형성시킬 수 있다. 달리는, Boc-아미노산(3급-부틸옥시카보닐-아미노산) 및 HOBt를 DCC 중에 용해시키고, 급냉시키고, 추가의 DCC를 가하고, 이 용액을 실온으로 가온시킴으로써 HOBt 활성 에스테르를 형성시킬 수 있다. 그 다음, 이 용액을 아미노산 결합 수지에 가한다. 아실화제를 형성시키기 위한 이러한 활성화 방법은 또한 산화방지 화합물에 대해서도 이용할 수 있다.
α-아미노 그룹이외의 다른 작용성 그룹이 존재하는 경우, 이들 그룹들도 또한 보호되어야 할 것이다. 일반적으로, α-아미노 그룹 및 각각의 측쇄 작용성 그룹은 상이한 보호 그룹으로 보호시킴으로써, 다른 보호 그룹들을 제거하지 않으면서 하나의 보호 그룹을 제거할 수 있다.
본 발명에서 사용하기 위해 고려되는 α-아미노 보호 그룹 부류중에는 (1) 아실형 보호 그룹[예 : 포밀, 트리플루오로아세틸, 프탈릴, 톨루엔설포닐(토실), 벤젠설포닐, 니트로페닐설페닐, 트리틸설페닐, o-니트로페녹시아세틸 및 γ-클로로부티릴], (2) 방향족 우레탄형 보호 그룹[예 : 벤질옥시카보닐 및 치환된 벤질옥시카보닐(예 : p-클로벤질옥시카르보닐, p-니트로벤질옥시카보닐, p-브로모벤질옥시카보닐, p-메톡시벤질옥시카보닐, 1-(p-비페닐)-1-메틸에톡시카보닐, α,α-디메틸-3,5-디메톡시벤질옥시카보닐 및 벤즈하이드릴옥시카보닐)], (3) 지방족 우레탄 보호 그룹[예 : 3급-부틸옥시카보닐(Boc), 디이소프로필메톡시카보닐, 이소프로필옥시카보닐, 에톡시카보닐 및 알릴옥시카보닐], (4) 사이클로알킬 우레탄형 보호 그룹[예 : 사이클로펜틸옥시카보닐 또는 9-플루오레닐메톡시카보닐(Fmoc)], (6) 알킬형 보호 그룹[예 : 트리페닐메틸(트리틸) 및 벤질] 및 (7) 트리알킬실란 그룹(예 : 트리메틸실란)이 있다.
그러나, α-아미노 보호 그룹은 사용된 수지, 타겟 부위 작용성 그룹, 폴리펩타이드내에 존재하는 다른 작용성 그룹 및 아미노산 유도체 T가 분해 시약을 사용함에 의해 수지로부터 분해될 수 있는지의 여부 등에 따라 선택될 것이다. 예를 들어, Sus-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-Nε-HBB-Lys-Leu-Lys-NH2(서열동정 번호 : 1)를 제조하기 위해서는, C-말단 아미노 그룹을 제공하는 pMBHA 수지를 사용한다. α-아미노 보호 그룹은 Boc이고, 타겟 부위 측쇄 아미노(Nε)보호 그룹은 Fmoc이며, 비타겟 부위 Nε보호 그룹은 2ClZ(2-클로로벤질옥시카보닐)이고, 비타겟 부위 COOH 보호 그룹은 OBZ1(벤질 에스테르)이며, 펩타이드는 ABI430A 펩타이드 합성기상에서 표준 t-Boc 화학을 이용하여 작제한다. Nε-Fmoc는 피페리딘 및 타겟 부위 라이신 측쇄에서 HBB를 부착시키기 위해 HOBT 활성 에스테르로서 도입된 HBB를 사용하여 선택적으로 제거할 수 있다. 무수 플루오르화수소산(HF)은 수지로부터 펩타이드를 분해시키면서 동시에 나머지 보호 그룹을 제거하는데 사용할 수 있다.
보호 그룹과 보호 그룹을 선택적으로 제거하기 위한 시약의 적절한 배합의 선택은 당해 분야에 잘 공지되어 있다[참조 : M. Bodanszky, PEPTIDE CHEMISTRY, APRACTICAL TEXTBOOK, Springer-Verlag(1988); J. Stewart, et al., SOLID PHASE PEPTIDE SYNTHESIS, 2nd ed., Pierce Chemical Co. (1984)].
각각의 보호된 아미노산 또는 아미노산 서열은 고체상 반응기에 약 4배 과량으로 도입시키고, 커플링제의 존재하에서, 예를 들어 디메틸포름아미드 : 메틸렌 클로라이드(1 : 1)의 매질 중에서 또는 디메틸포름아미드 단독 또는 메틸렌 클로라이드 단독중에서 커플링을 수행한다. 커플링이 불완전하게 일어날 경우, 그 다음 아미노산을 고체상 반응기내에서 커플링시키기 앞서 α-아미노 보호 그룹을 제거하기 전에, 커플링 공정을 반복 수행한다. 각각의 합성 단계에서의 커플링 반응의 성공 여부는 하기 문헌에 기술되어 있는 닌하이드린 반응으로 모니터링한다[참조 : E. Kaiser, et al., Analyt. Biochem. 34, 595(1970)].
목적하는 아미노산 서열이 수득된 후, 폴리펩타이드에 부작용을 미치지 않는 임의의 적당한 시약을 사용하여 수지로부터 펩타이드를 분리한다. 예를 들어, 0.1% 트리플루오로 아세트산중 5% 아니솔 및 5%-아세토니트릴을 함유하는 무수 HF를 사용하여 pMBHA 수지로부터 폴리펩타이드를 분리할 수 있다.
일반식(1)의 폴리펩타이드는 임의의 비독성 유기 또는 무기산과 함께 약제학적으로 허용되는 염을 형성할 수 있다. 적합한 염을 형성하는 무기산의 예에는 염산, 브롬화수소산, 황산 및 인산과 산 금속염(예 : 일수소나트륨 오르토포스페이트 및 황산수소칼륨)이 포함된다. 적합한 염을 형성하는 유기산의 예에는 모노, 디 및 트리카복실산이 포함된다. 이러한 산에는 예를 들어 아세트산, 글리콜산, 락트산, 피루브산, 말론산, 석신산, 글루타르산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 말레산, 하이드록시말레산, 벤조산, 하이드록시벤조산, 페닐아세트산, 신남산, 살리사이클산, 2-페녹시벤조산 및 설폰산(예 : 메탄 설폰산 및 2-하이드록시에탄 설폰산)이 포함된다. 카복시 말단 아미노산 잔기의 염에는 임의의 적합한 무기 또는 유기 염기를 사용하여 형성시킨 비독성 카복실산 염이 포함된다. 예시용으로, 이러한 염들에는 알칼리 금속(예 : 나트륨 및 칼륨), 알칼리토금속(예 : 칼슘 및 마그네슘) 및 IIIA족 경금속(예 : 알루미늄)의 염 및 유기 1급, 2급 및 3급 아민[예 : 트리알킬아민(예 : 트리에틸아민), 프로카인, 디벤질아민, 1-에틸아민, N,N′-디벤질에틸렌디아민, 디하이드로아비에틸아민, N-(저급)알킬피페리딘 및 임의의 다른 적합한 아민]이 포함된다.
본 발명의 단백질-인지질 복합체의 인지질은 어떠한 인지질도 가능하고, 본원에서 사용된 이러한 용어에는 포스포글리세라이드 및 스핀고리피드가 포함된다. 포스포글리세라이드는 글리세롤 잔기의 나머지 하이드록시 그룹, 즉 말단 하이드록시 그룹이 인산과 함께 에스테르를 형성하는 글리세롤의 디-지방산 에스테르이다. 통상적으로, 포스포글리세라이드의 인산 잔기는 알콜(예 : 에탄올아민, 세린, 콜린 또는 글리세롤)과 함께 제2에스테르를 형성한다. 스핀고리피드는 1-위치에서의 하이드록시 그룹이 인산의 콜린 에스테르와 에스테르를 형성하는 스핀고신 또는 디하이드로스핀고신의 모노-지방산 에스테르이다. 본 발명의 단백질-인지질 복합체의 바람직한 지질은 디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC), 다른 길이 및 포화도의 아실쇄를 함유하는 포스파티딜콜린 분자(PC), 카디오리핀(CL), 포스파티딜글리세롤(PG), 포스파티딜세린(PS), 지방산(FA) 및 트리아실글리세롤(TG)을 포함한다. DPPC는 폐 표면활성 혼합물의 주성분을 포함하며, PC, CL, PG, PS, FA 및 TG는 미량 성분을 포함한다. 본 발명의 인지질중에 사용하기 위한 적당한 지방산에는 통상적으로 비측쇄된 장쇄 카복실산(일반적으로, 탄소수 8 이상의)이 있다. 지방산은 포화되거나 불포화될 수 있다. 지방산의 예에는 라우르산, 미리스트산, 팔미트산 및 올레산이 있다.
본 발명의 폴리펩타이드 또는 단백질-인지질 복합체의 약제학적 제제는 무수 혼합물로서 제조하거나, 몇몇 경우에는 소량의 유기 용매(예 : 에탄올 또는 트리플루오로에탄올), 세제(예 : 나트륨 도데실 설페이트 또는 나트륨 데옥시콜레이트), 염(예 : 염화칼슘 또는 염화나트륨), 탄수화물(예 : 글루코즈, 덱스트로즈 또는 만니톨) 및 아미노산(예 : 글리신 및 알라닌)을 함유하는 수성 현탁액으로 제조할 수 있다. 약제학적 조성물을 액체형으로 제조할 경우, 안정화제, 방부제, 삼투압 조절제, 완충제 및 액상 현탁제를 가할 수 있다. 경우에 따라, 적합한 살균제를 또한 가할 수도 있다. 수성 현탁액의 pH는 2 내지 10으로 가변적일 수 있고, 이는 산 및 염기(예 : 염산, 인산나트륨 또는 수산화나트륨)를 사용하여 조절할 수 있다. 무수 혼합물은 약제학적으로 허용되는 염, 유기 용매 및 세제를 함유하는 수용액중에서 재구성할 수 있다. 수성 제제는 사용 직전에 현탁 매질을 약제학적으로 허용되는 매질로 교환하기 위해 투석하거나, 여과하거나 크로마토그래피할 수 있다. 제제는 무수 분말, 수성 현탁제 또는 에어로졸제로서 호흡 곤란 대상의 폐내로 직접 투여할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물은 바이알 및 앰플과 같은 살균성 밀봉 용기 내에 충전시킬 수 있고 멸균-보존할 수 있다. 조성물은 현탁 완충액을 함유하는 바이알 또는 앰플로부터 개별적으로 바이알 또는 앰플내에 저장하고 이러한 무수 또는 수화 조성물은 사용 직전에 현탁 완충액과 혼합시킬 수 있다.
지질은 폐 표면활성제의 50 내지 99.9%를 구성하고 있다. 적합한 지질은 DPPC, PC, CL, PG, PS, FA 및 TG를 포함한다. DPPC는 주요 지질종을 포함하고 지질 총중량의 60 내지 100중량% 농도로 존재한다. 나머지 지질은 저농도로 존재한다. PC, CL, PG 및 PS는 지질 30% 이하를 포함할 수 있고, FA 및 TG는 지질을 10중량% 이하로 포함할 수 있다. 미량의 지질 성분의 지방 아실쇄는 포화되거나 불포화될 수 있으며 쇄 길이도 다양하다. 탄소수 12 내지 16의 쇄길이가 바람직하고 2개 이하의 불포화 결합이 존재하는 것이 바람직하다. 바람직한 지질 조성물은 85 내지 100%의 DPPC와 0 내지 15%의 PG의 혼합물이다.
합성 폐 표면활성제의 지질 성분은 통상적으로 포유동물의 폐 표면활성제내에서 발견되며 고순도의 통상의 산업원으로부터 구입할 수 있다. 폴리펩타이드 성분은 당해 분야의 전문가들에게 친숙한 방법에 의해 고체상 펩타이드 합성법으로 제조한다. 본 발명의 지질과 포유동물의 폐 세척시 분리된 단백질의 혼합물은 신생아의 RDS를 치료하는데 효과적인 것으로 밝혀졌다. 그러나, 폐 표면활성제의 합성 펩타이드와 지질과의 혼합물은 보고된 바 없다.
지질은 휘발성 유기 용매 또는 클로로포름과 메탄올 또는 트리플루오로에탄올의 혼합물과 같은 용매들의 혼합물 중에서 혼합시킨다. 유기 용매는 질소, 아르곤 또는 진공하에 증발시킴으로써 제거한다. 유기 및 무기산, 염기 및 염과 사카라이드(예 : 덱스트로즈)를 함유할 수 있는 수용액을 무수 지질 혼합물에 가하여 DPPC의 최종 농도를 0.1 내지 100mg/ml로 만든다. 일반적으로, 혼합물을 35 내지 50℃로 가온시키고, 격렬하게 교반시키고, 25 내지 50℃에서 2시간 이하 동안 항온처리하는 것이 필수적이지는 않으나 바람직하다. 그 다음, 펩타이드 또는 펩타이드들의 혼합물을 무수 분말로서 가하거나, 적합한 유기 용매(예 : 에탄올 또는 트리플루오로에탄올) 또는 수성 현탁액중에서 펩타이드의 가용성을 증진시키는 변성제(예 : 구아니디늄 하이드로클로라이드 또는 우레아)를 함유하는 몇몇 경우에 수용액중에서 현탁시킨다. 펩타이드 및 지질의 연합은 특정 pH에서 촉진될 수 있으며, 따라서 수용액의 pH는 2 내지 10으로 가변적일 수 있다. 펩타이드와 지질을 혼합시키는 바람직한 방법은 무수 펩타이드를 45 내지 50℃에서 수중의 지질에 가하고, 45 내지 50℃에서 욕내 초음파 처리에 의해 30 내지 90분 동안 혼합시킨 다음 동결건조시키고 -20℃에서 저장하는 방법이다.
지질은 적합한 세제(예 : 옥틸글루코사이드 또는 나트륨 데옥시콜레이트)와 함께 물, 수성 완충액 또는 염수 용액 중의 DPPC 부당 세제 1 내지 20부의 중량비에서 1 내지 100mg DPPC/ml의 농도로 혼합시킨다. 그다음, 펩타이드를 무수 분말로서 가하거나 유기 용매, 변성제 또는 세제의 존재 또는 부재하에 수용액중에서 현탁시킨다. 그 다음, 혼합물을 투석하고, 여과하고, 원심분리시키거나 크로마토그래피하여 세제를 제거한다.
바람직하게, 지질과 펩타이드는 소량의 물의 존재 또는 부재하에 휘발성 유기 용매중에서 혼합시킨다. 휘발성 용매는 질소 또는 아르곤 스트림하에서 증발시키거나, 진공 오븐내에서 증발시키거나, 수성 용매를 가하기 전 또는 후에 회전 증발시킨다.
상기한 방법중의 하나에 의해 제조된 지질과 펩타이드의 혼합물을 바람직하게는 35 내지 50℃에서 초음파 조사하면서 2시간 이하 동안 항온처리한다. 그 다음, 혼합물을 투석하거나, 여과하거나, 크로마토그래피하여, 필수적이지는 않으나, 수성 매질을 약제학적으로 허용되는 매질로 대체한다. 몇몇 경우, 연합된 지질 및 펩타이드로부터 반응하지 않은 지질 또는 펩타이드를 한외원심분리, 여과 또는 크로마토그래피에 의해 분리함으로써 효능을 증가시킨다. 그 다음, 혼합물을 동결건조시키거나 에어로졸화할 수 있다.
본 발명의 펩타이드-인지질 복합체는 신생아 호흡 곤란 증후군, 폐동맥 표면 활성제를 생성하는 미숙아 폐의 불능으로 인한 생리학적 질환 상태를 치료하는데 사용되며, 이러한 복합체는 산화방지제 및 합성 폐동맥 표면활성제로서 작용하며, 천연의 부재된 표면활성제를 대체하거나 또는 충분한 천연 표면활성제의 결손을 증진시킨다. 신생아의 폐가 충분량의 천연 폐동맥 표면활성제를 생성함으로써 추가의 치료가 불필요해질 때까지 계속해서 처리한다.
제제는 기관내 투여용으로 적합한 형태, 즉 액상 현탁제, 무수 산제 또는 에어로졸제로서 투여하는 것이 바람직하다. 액상 현탁제에 있어서, 무수 혼합물 또는 수성 현탁액 중에서의 혼합물은 적합한 제제(예 : 물, 염수 용액, 덱스트로즈 및 글리세롤)와 혼합하여 약제학적으로 효과적인 조성물을 수득한다. 바람직한 액상 현탁제는 염화나트륨 0.8 내지 1.0중량%를 함유할 것이고, 바람직하게는 칼슘 이온에 대해 1 내지 20mM이 될 것이다. 그 다음, 상기 제제를 여과기 멸균시킨다. 일반적으로, 제제는 ml당 DPPC 1 내지 100mg을 포함하고, 0.2 내지 5ml/kg의 용량으로 투여된다. 무수 혼합물을 제조하기 위해서는, 수성 현탁액을 동결건조시킨다. 에어로졸제는 추진제[예 : 저급 알칸 및 플루오르화된 알칸(예 : 프레온)]중에 현탁시킨 미분된 무수 분말로부터 제조한다. 에어로졸제는 가압 용기내에 보관한다.
예를 들어, 표면활성제(본 발명의 폴리펩타이드와 지질 복합체)를 기관내 튜브에 의해, 에어로졸 투여에 의해, 또는 현탁액 또는 무수 혼합물을 흡입 가스내로 분무시킴에 의해 적당한 투여 형태로 투여한다. 표면활성제는 10 내지 200mg/kg의 용량을 1회 또는 수회에 걸쳐 투여한다. 바람직한 투여 방법은 기관내 튜브를 통해 표면활성제 5 내지 10mg/ml의 농도로 생리학적 염수 용액중 펩타이드 및 지질의 현탁액을 50 내지 100mg/kg의 용량으로 달성되도록 투여하는 것이다.
본 발명의 폴리펩타이드는 대상체를 치료하기 위해 투여된다. “대상체”는 포유동물, 예를 들면, 이로써 제한되지는 않으나 사람을 의미한다.
하기 실시예는 폴리펩타이드, 폴리펩타이드/지질 복합체 및 본 발명의 출발물질을 제조하는 몇가지 방법을 제시할 것이다. 그러나, 본 발명이 하기 실시예 또는 이들 제조방법으로 제한되지는 않는다.
상기에서 정의되지는 않았으나 본 실시예에서 사용될 약어는 하기와 같은 의미를 지닌다 :
표준 Boc 화학기술 및 표준 Fmoc화학 기술 : Boc주기 및 Fmoc주기에 대해 각각 ABI 펩타이드 합성기를 이용하여 사용된 화학기술.
TBDMS : 테트라부틸디메틸실릴,
SEt : 에틸티오,
Suc : 석시닐,
TFA : 트리플루오로아세트산
Bzl : 벤질 및
Ot-Bu : 3급-부틸 에테르.
[실시예 1]
1(A). 폴리펩타이드 : Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-Nε-HBB-Lys-Leu-Lys-NH2(HBB-Lys-MAP10)(서열동정번호 : 2)의 제조방법
ABI430A 펩타이드 합성기(Applied Biosystems Inc., Foster City, CA)상에서 표준 t-Boc 화학기술을 사용하여 Nα-Boc-Nε-Fmoc-Lys-Leu-Nε-2ClZ-Lys-pMBHA 수지를 제조한다.
Nα-Boc-Nε-Fmoc-Lys-Leu-Nε-2ClZ-Lys-pMBHA 수지로부터 Nε-Fmoc를 피페리딘으로 제거하여 Nα-Boc-Lys-Leu-Nε-2ClZ-Lys-pMBHA 수지를 제조한다.
Nα-Boc-Nε-Fmoc-Lys-Leu-Nε-2ClZ-Lys-pMBHA 수지로부터 Nε-Fmoc를 피페리딘으로 제거하여 Nα-Boc-Lys-Leu-Nε-2ClZ-Lys-pMBHA 수지를 제조한다.
Nα-Boc-Lys-Leu-Nε-2ClZ-Lys-pMBHA 수지 및 N-하이드록시벤조트리아졸 활성 에스테르(2mmol 산, 2개의 커플링 각각에 대해 4배 과량의 활성 에스테르)로서의 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시벤조산으로부터 Nα-Boc-Nε-HBB-Lys-Leu-Nε-2ClZ-Lys-pMBHA 수지를 제조한다.
ABI430A 펩타이드 합성기상에서 표준 t-Boc 화학기술을 이용하여 Nα-Boc-Nε-HBB-Lys-Leu-Nε-2ClZ-Lys-pMBHA 수지로부터 Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-2ClZ-Lys-Leu-Glu(OBzl)-Nε-HBB-Lys-Leu-Nε-2Clz-Lys-pMBHA 수지(서열동정번호 : 3)를 제조한다.
Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-2ClZ-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-HBB-Lys-Leu-Nε-2Clz-Lys-pMBHA 수지(서열동정번호 : 3)를 석신산 무수물과 커플링시켜 Suc-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-2ClZ-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-HBB-Lys-Leu-Nε-2Clz-Lys-pMBHA 수지(서열동정번호 : 4)를 수득한다.
수지로부터 Suc-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-2ClZ-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-HBB-Lys-Leu-Nε-2Clz-Lys-pMBHA 수지(서열동정번호 : 4)를 분해시키고 5% 아니솔 및 5% 디메틸설파이드를 함유하는 무수 HF 중의 측쇄 보호 그룹을 -5℃에서 1시간 동안 제거한다. 0.1% 트리플루오로아세트산중의 50% 아세토니트릴로 수지를 추출하고, 동결 및 동결건조시킨다. 선형 39 내지 46.5% 아세토니트릴 구배를 이용하여 Rainin 21.4×250mm C18 컬럼상에서 0.1% 수성 트리플루오로아세트산(pH 2)중 214nm에서의 흡광도에 의해 모니터링되는 40mL/분 유속하에 역상 HPLC로 15분에 걸쳐 정제한다. 순수한 분획을 합하고 동결 및 동결건조시켜 표제 화합물을 수득한다 : FAB-MS(M+H+) 1558.2
1(B). 실시예 1(A)에에 기술되어 있는 폴리펩타이드와 DPPC의 복합체의 제조방법
펩타이드 1(A)를 상기한 바와 같이 제조한다. 클로로포름 1ml 중의 DPPC(25mg)를 질소 스트림하에 건조시키고 진공하에 건조시켜 미량의 유기 용매를 제거한다. 무수 지질 혼합물에 물 3ml를 가한다. 제제를 45℃에서 1시간 동안 항온처리한다. 그 다음, 무수 펩타이드 1(A) 0.5mg을 수성 제제에 가한다. 제제를 45℃에서 2시간 동안 육내 초음파기중에서 초음파처리한다. 생성된 지질-펩타이드 혼합물을 동결건조시키고 4℃에서 한달 이하 동안 저장한다. 시험하기 전에, 0.9% NaCl 9ml, 20mM HEPES 완충액(pH 7.0)을 가한다. 제제를 45℃에서 1시간 동안 주기적으로 혼합하면서 항온처리한다.
[실시예 2]
2(A). 폴리펩타이드 : Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-S-HBS-Cys-Leu-Lys-NH2(HBS-Cys-MAP10)(서열동정번호 : 5)의 제조방법
ABI430A 펩타이드 합성기상에서 표준 t-Boc 화학기술을 사용하여 Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-2ClZ-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Cus(SEt)-Leu-Nε-2Clz-Lys-pMBHA(서열동정번호 : 6) 수지를 제조한다.
Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-2ClZ-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Cys(SEt)-Leu-Nε-2Clz-Lys-pMBHA 수지(서열동정번호 : 6)를 석신산 무수물과 커플링시켜 Suc-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-2ClZ-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Cys(SEt)-Leu-Nε-2Clz-Lys-pMBHA 수지(서열동정번호 : 7)를 수득한다.
Suc-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-2ClZ-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Cys(SEt)-Leu-Nε-2Clz-Lys-pMBHA 수지(서열동정번호 : 7)(0.263g), 무수 디메틸포름아미드(5mL) 및 메틸 티오글리콜레이드(450μL)를 혼합한다. 아르곤 대기하에서 일야 교반시켜 Suc-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-2ClZ-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Cys-Leu-Nε-2Clz-Lys-pMBHA 수지(서열동정번호 : 8)를 수득한다.
수지로부터 Suc-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-2ClZ-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Cys-Leu-Nε-2Clz-Lys-pMBHA 수지(서열동정번호 : 8)를 분해시키고, 5% 아니솔 및 5% 디메틸설파이드를 함유하는 무수 HF 중에서 측쇄 보호 그룹을 -5℃에서 1시간 동안 제거한다. 0.1% 트리플루오아세트산 중의 50% 아세토니트릴을 사용하여 수지를 추출하고 동결 및 동결건조시킨다. 선형 34 내지 44% 아세토니트릴 구배를 이용하여 Rainin 21.4×250mm C18 컬럼상에서 0.1% 수성 트리플루오로아세트산(pH 8)중 214nm에서의 흡광도로 모니터링되는 40mL/분의 유속하에 역상 HPLC로 15분에 걸쳐 정제한다. 순수한 분획을 합하고, 동결 및 동결건조시켜, Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-Cys-Leu-Lys-NH2(서열동정번호 : 9)를 수득한다.
3,5-디-3급-부틸-4하이드록시티오페놀(751mg), 디에틸아조디카복실레이트(496μL, 3.15mmol) 및 p-디옥산(5mL)을 혼합한다. 아르곤 대기하에 놓고 2시간 동안 교반시켜, 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시티오페놀과 디에틸 아조디카복실레이트의 복합체를 수득한다.
Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-Cys-Leu-Lys-NH2(서열동정번호 : 9)(32mg)를 p-디옥산(80μL) 및 디메틸포름아미드(40μL)중에서 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시티오페놀과 디에틸아조디카복실레이트(1.1당량)의 예비형성 복합체 1.1당량으로 처리한다. 아르곤 대기하에 넣고 일야 교반시킨다. 0.1% 트리플루오로아세트산중의 25% 아세토니트릴에 붓고, 동결 및 동결건조시킨다. 선형 44.5 내지 52% 아세토니트릴 구배를 이용하여 Rainin 21.4×250mm C18 컬럼상에서 0.1% 수성 트리플루오로아세트산(pH 2) 중 214nm에서의 흡광도로 모니터링되는 41mL/분의 유속하에 역상 HPLC로 15분에 걸쳐 정제한다. 순수한 분획을 합하고, 동결 및 동결건조시켜 표제 화합물을 수득한다 : FAB-MS(M+H+) 1536.5
2(B). 실시예 2(A)에 기술되어 있는 폴리펩타이드의 DPPC 복합체의 제조방법
최종 현탁 완충액이 0.9% NaCl, 20mM HEPES 완충액(pH 7.40)뿐만 아니라 5mM CaCl2를 함유하는 것을 제외하고는, 펩타이드 2(a)를 실시예 1에 기술되어 있는 DPPC와 혼합시킨다.
[실시예 3]
3(A). 폴리펩타이드 : HBC-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Lys-NH2(서열동정번호 : 10)의 제조방법
ABI430A 펩타이드 합성기상에서 표준 Nα-Fmoc 보호 및 HOBt 활성 에스테르를 사용하여 Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Nε-Boc-Lys-pMBHA 수지(서열동정번호 : 11)를 제조한다.
Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Nε-Boc-Lys-pMBHA 수지(서열동정번호 : 11) 및 N-하이드록시벤조트리아졸 활성 에스테르(2mmol 산, 2개의 커플링 각각에 대해 4배 과량의 활성 에스테르)로서의 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시신남산으로부터 HBC-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Nε-Boc-Lys-pMBHA 수지(서열동정번호 : 12)를 제조한다.
수지로부터 HBC-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Nε-Boc-Lys-pMBHA 수지(서열동정번호 : 12)를 분리해내고 메틸렌 클로라이드중의 50% 트리플루오로아세트산을 사용하여 측쇄 보호 그룹을 제거한다. 아르곤 대기하에 넣고 1시간 동안 교반시킨다. 용매를 진공하에서 증발시키고 역상 HPLC로 정제하여 표제 화합물을 수득한다.
[실시예 4]
4(A). 폴리펩타이드 : Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Lys, 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시벤질 에스테르(서열동정번호 : 13)의 제조방법
ABI430A 펩타이드 합성기상에서 표준 Nα-Fmoc 및 HOBT 활성 에스테르를 사용하여 Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Nε-Boc-Lys-Sasrin 수지(서열동정번호 : 14)를 제조한다.
Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Nε-Boc-Lys-Sasrin 수지(서열동정번호 : 14)를 석신산 무수물과 함께 커플링시켜 Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Nε-Boc-Lys-Sasrin 수지(서열동정번호 : 15)를 제조한다.
Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Nε-Boc-Lys-Sasrin 수지(서열동정번호 : 15)를 메틸렌 클로라이드중의 1% 트리플루오로아세트산으로 분해시켜, Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Nε-Boc-Lys(서열동정번호 : 15)를 수득한다.
Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Nε-Boc-Lys(서열동정번호 : 15)를 디메틸포름아미드중에 용해시키고, 디사이클로헥실카보디이미드(1당량) 및 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시벤질 알콜(2당량)로 처리한다. 아르곤 대기하에 넣고 일야 교반시킨다. 에틸 아세테이트로 희석시키고, 냉 1N 염산으로 세척하고, HPLC로 정제하여, Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Nε-Boc-Lys, 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시벤질에스테르(서열동정번호 : 16)를 수득한다.
Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Nε-Boc-Lys, 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시벤질에스테르(서열동정번호 : 16)를 메틸렌클로라이드중의 50% 트리플루오로아세트산으로 처리한다. 아르곤 대기하에 넣고 1시간 동안 교반시킨다. 용매를 진공하에서 증발시키고 HPLC로 정제하여 표제 화합물을 수득한다.
4(B). 4(A)에 기술되어 있는 폴리펩타이드의 DPP 복합체의 제조방법
실시예 1(B)에 기술되어 있는 바와 같이 DPPC와 혼합시킴으로써 펩타이드 4(A)의 DPPC 복합체를 제조한다.
[실시예 5]
5(A). 펩타이드 : Trl-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Lys-NH2(서열동정번호 : 17)의 제조방법
ABI430A 폴리펩타이드 합성기상에서 표준 t-Boc 화학기술을 이용하여 Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-2ClZ-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-2ClZ-Lys-Leu-Nε-2ClZ-Lys-pMBHA 수지(서열동정번호 : 18)를 제조한다.
6-하이드록시-2,5,7,8-테트라메틸크로만-2-카복실산(Trolox)(27mg), 디메틸포름아미드(30μL) 및 메틸렌 클로라이드(250μL)를 합한다. 디사이클로헥실카보디이미드(메틸렌 클로라이드중의 0.5M 용액 200μL)를 가하고 5분동안 교반시켜, 6-하이드록시-2,5,7,8-테트라메틸크로만-2-카복실산(Trolox) 대칭성 무수물을 수득한다.
Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-2ClZ-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-2ClZ-Lys-Leu-Nε-2ClZ-Lys-pMBHA 수지(서열동정번호 : 18) 및 6-하이드록시-2,5,7,8-테트라메틸크로만-2-카복실산(Trolox) 대칭성 무수물(2mmol 산, 2개의 커플링 각각에 대해 10배 과량의 대칭성 무수물)로부터 Trl-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-2ClZ-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-2ClZ-Lys-Leu-Nε-2ClZ-Lys-pMBHA 수지(서열동정번호 : 19)를 제조한다.
수지로부터 Trl-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-2ClZ-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Nε-2ClZ-Lys-Leu-Nε-2ClZ-Lys-pMBHA 수지(서열동정번호 : 19)를 분해시키고, 5% 아니솔 및 5% 디메틸설파이드를 함유하는 무수 HF중의 측쇄 보호 그룹을 -5℃에서 1시간 동안 제거한다. 수지를 0.1% 트리플루오로아세트산중의 50% 아세토니트릴로 추출하고, 동결 및 동결건조시킨다. 역상 HPLC로 정제하여 표제화합물을 수득한다.
5(B). 5(A)에 기술되어 있는 폴리펩타이드의 DPPC 복합체의 제조방법
펩타이드 5(A)를 실시예 1(B)에 기술되어 있는 바와 같이 DPPC와 혼합시킨다.
[실시예 6]
6(A). 폴리펩타이드 : Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-0-HBB-Ser-Leu-Lys-NH2(서열동정번호 : 20)의 제조방법
ABI430A 펩타이드 합성기상에서 표준 Nα-Fmoc 보호 및 HOBT 활성 에스테르를 사용하여 Nα-Fmoc-O-TBDMS-Ser-Leu-Nε-Boc-Lys-Rink 수지(세린 잔기의 측쇄 산소상에 부착된 측쇄 TBDMS)를 제조한다.
Nα-Fmoc-O-TBMDS-Ser-Leu-Nε-Boc-Lys-Rink 수지를 테트라하이드로푸란/물중의 아세트산으로 처리하여 Nα-Fmoc-Ser-Leu-Nε-Boc-Lys-Rink 수지를 수득한다.
ABI430A 펩타이드 합성기상에서 표준 Fmoc 화학기술을 이용하여 Nα-Fmoc-Ser-Leu-Nε-Boc-Lys-Rink 수지 및 n-하이드록시벤조트리아졸 활성 에스테르(2mmol 산, 2개의 커플링 각각에 대해 4배 과량의 활성 에스테르)로서의 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시벤조산으로부터 Nα-Fmoc-O-HBB-Ser-Leu-Nε-Boc-Lys-Rink 수지를 제조한다.
ABI430A 펩타이드 합성기상에서 표준 Nα-Fmoc 보호 및 HOBT 활성 에스테르를 사용하여 Nα-Fmoc-O-HBB-Ser-Leu-Nε-Boc-Lys-Rink 수지로부터 Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-O-HBB-Ser-Leu-Nε-Boc-Lys-Rink 수지(서열동정번호 : 21)를 제조한다.
Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-O-HBB-Ser-Leu-Nε-Boc-Lys-Rink 수지(서열동정번호 : 21)를 석신산 무수물과 커플링시켜 Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-O-HBB-Ser-Leu-Nε-Boc-Lys-Rink 수지(서열동정번호 : 22)를 수득한다.
수지로부터 Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-O-HBB-Ser-Leu-Nε-Boc-Lys-Rink 수지(서열동정번호 : 22)를 분해시키고, 트리플루오로아세트산, 페놀, 디메틸설파이드 및 물을 사용하여 측쇄 보호 그룹을 제거한다. 아르곤 대기하에 넣고 1시간 동안 교반시킨다. 용매를 진공하에서 증발시키고, HPLC로 정제하여 표제 화합물을 수득한다.
6(B). 실시예 6(A)에 기술되어 있는 폴리펩타이드의 DPPC 복합체의 제조방법
펩타이드 6(A)를 실시예 1(A)에 기술되어 있는 바와 같이 DPPC와 혼합시킨다.
[실시예 7]
7(A). 폴리펩타이드 : Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-S-HBB-Cys-Leu-Lys-NH2(서열동정번호 : 23)의 제조방법
ABI430A 펩타이드 합성기상에서 표준 Nα-Fmoc 보호 및 HOBT 활성 에스테르를 사용하여 Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Cys(SEt)-Leu-Nε-Boc-Lys-Rink 수지(서열동정번호 : 24)를 제조한다.
Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Cys(SEt)-Leu-Nε-Boc-Lys-Rink 수지(서열동정번호 : 24)를 석신산 무수물과 커플링시켜 Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Cys(SEt)-Leu-Nε-Boc-Lys-Rink 수지(서열동정번호 : 25)를 수득한다.
Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Cys(SEt)-Leu-Nε-Boc-Lys-Rink 수지(서열동정번호 : 25)(0.263g), 무수 디메틸포름아미드(5mL) 및 메틸티오글리콜레이트(450μL)를 혼합시킨다. 아르곤 대기하에서 일야 교반시켜, Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Cys-Leu-Nε-Boc-Lys-Rink 수지(서열동정번호 : 26)를 수득한다.
Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Cys-Leu-Nε-Boc-Lys-Rink 수지(서열동정번호 : 26) 및 N-하이드록시벤조트리아졸 활성 에스테르(2mmol 산, 2개의 커플링 각각에 대해 4배 과량의 활성 에스테르)로서의 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시벤조산으로부터 ABI430A 펩타이드 합성기상에서 표준 Fmoc 화학기술을 이용하여 Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-S-HBB-Cys-Leu-Nε-Boc-Lys-Rink 수지(서열동정번호 : 27)를 제조한다.
수지로부터 Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Nε-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-S-HBB-Cys-Leu-Nε-Boc-Lys-Rink 수지(서열동정번호 : 27)를 분해시키고, 트리플루오로아세트산, 페놀, 디메틸설파이드 및 물을 사용하여 측쇄 보호 그룹을 제거한다. 아르곤 대기하에 넣고 1시간 동안 교반시킨다. 용매를 진공하에서 증발시키고 HPLC로 정제하여 표제화합물을 수득한다.
7(B). 7(A)에 기술되어 있는 폴리펩타이드의 DPPC 복합체의 제조방법
펩타이드 7(A)를 실시예 1(B)에 기술되어 있는 바와 같이 DPPC와 혼합시킨다.
[실시예 8]
8(A) 폴리펩타이드 : Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Gln-Nε-Trl-Lys-Leu-Lys-NH2(Trl-Lys-MAP10)(서열동정번호 : 28)의 제조방법
표적 리신 잔기를 9-플루오로리노메틸옥시카보닐(Fmoc)로 보호하는 것을 제외하고는 실시예 1에 기술되어 있는 방법에 따라 표제 화합물을 제조한다. 그 다음 잔기를 가하기 전에, Nε-Fmoc를 디메틸포름아미드(DMF)중의 피페리딘 및 예비 형성된 HOBT 에스테르를 통해 리신의 ε-아미노 그룹에 커플링된 Trl로 제거한다. 합성 공정을 표준 Boc 화학기술을 이용하여 계속해서 수행하고, 실시예 1에 기술되어 있는 바와 같이 펩타이드를 분해하고 탈보호시키고 정제한다.
[실시예(A)의 폴리펩타이드의 DPPC 복합체의 제조방법]
펩타이드 8(A)를 실시예 1(B)에 기술되어 있는 바와 같이 DPPC와 혼합시킨다.
[실시예 9]
[산화방지 아미노산 유도체 : Fmoc-Glu[λ-HBB-올-에스테르]의 제조방법]
미분된 L-글루탐산(2.0g, 13.6mmol) 및 무수 황산나트륨(2.0g) 및 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시벤질 알콜(HBB-올)(14μL) 및 테트라하이드로푸란(75mL)을 혼합시킨다. 테트라플루오로붕산 에테레이트(54%, 3.7mL, 27.2mmol)를 가하고, 실온에서 15시간 동안 교반시킨다. 여과하고, 여과물을 트리에틸아민(4.1mL, 29.6mmol)으로 처리하고 용매를 진공하에서 증발시킨다. 크래마토그래피로 정제하여 Glu[λ-HBB-올 에스테르)를 수득한다.
Glu[λ-HBB-올 에스테르](50mmol)를 10% 탄산나트륨 용액(100mL)에 용해시킨다. 빙욕중에서 0℃로 냉각시키고 디옥산(50mL)을 가한 다음, 교반시키면서, 디옥산(75mL)중의 9-플루오레닐메틸 클로로포르메이트(13g, 50.2mmol) 용액을 서서히 가한다. 0℃에서 1시간 동안 교반시키고, 실온에서 5 내지 18시간 동안 교반시킨다. 반응 혼합물을 1.5L 빙수에 붓는다. 에테르(2×400mL)로 추출하여 비반응 클로로포르메이트를 제거한다. 수성 상을 빙-냉각시키고, 농축 염산을 사용하여 pH 2로 산성화시킨다. 에틸 아세테이트로 추출하고, 0.1M 염산 및 물로 세척한다. 건조시키고(MgSO4), 진공하에서 용매를 증발시켜, Nα-Fmoc-Glu[HBB-올 에스테르]를 수득한다.
ABI430A 펩타이드 합성기상에서 표준 Nα-Fmoc 보호 및 HOBT 활성 에스테르를 이용하여 폴리펩타이드내로 혼입시킨다.
[실시예 10]
[산화방지 아미노산 유도체 : Nα-Fmoc-Nε-Boc-Lys[Nε-HBB-CH2]의 제조방법
Nα-Fmoc-Lys(7.2mmol)과 3,5-디-3급-부틸-4-하이드록시벤즈알데히드(HBB-알)(7.2mmol)을 아세토니트릴(30mL)중에서 혼합시킨다. 나트륨 시아노보로하이드라이드(1.37g, 23.2mmol)를 가한다. 아세트산을 필요한 만큼 가하여 매질을 약산성으로 유지시킨다. 수시간 동안 교반시키고, 에틸 에테르(100mL)로 희석시키고, 1N 수산화나트륨으로 세척한다. 유기상을 분리하고, 건조시키고(MgSO4), 진공하에서 용매를 증발시켜, Nα-Fmoc-Lys[Nε-HBB-CH2]를 수득한다.
Nα-Fmoc-Lys[Nε-HBB-CH2](10mmol)를 50/50 디옥산/물(25mL)에 용해시키고, 1N 수산화나트륨을 사용하여 pH 10으로 완충 상태를 만든다. 3급-부틸 아지도포르메이트(1.58g, 11mmol)의 에테르 용액을 10℃에서 적가한다. 실온으로 가온시키고, 경우에 따라 pH 10의 완충 상태를 유지시킨다. 시트르산나트륨/시트르산 완충액을 사용하여 pH 5로 산성화시키고, 에테르로 3회 추출하고, 건조시키고(MgSO4), 잔기에 질소, 스트림을 취입시켜 표제 화합물을 수득한다.
ABI430A 펩타이드 합성기상에서 표준 Nα-Fmoc 보호, HOBT 활성 에스테르 및 Rink 수지를 사용하여 폴리펩타이드내에 혼입시킨다.
하기 산화방지 출발물질을 상기 실시예에 기술되어 있는 바와 같이 사용할 수 있다.
[실시예 11]
[출발물질로서의 산화방지 화합물 : 3-3급-부틸-5-메틸-4-하이드록시벤조산의 제조방법]
반응 용기를 무수 에틸렌 글리콜 디메틸 에테르(150mL)중의 수소화나트륨(4.74g, 0.198mol) 현탁액으로 충전시킨다. 에틸렌 글리콜 디메틸 에테르(150mL)중의 2-3급-부틸-6-메틸페놀(0.1mol) 용액을 적가한다. 50 내지 60℃로 1.5시간 동안 가온시킨 다음, 기체 방출 튜브를 통해 이산화탄소를 반응 혼합물의 표면 아래에 20시간 동안 도입시킨다. 5℃로 냉각시키고, 과량의 수소화나트륨을 메틸 알콜(30mL)로 조심스럽게 분해시킨다. 수소 방출이 중단된 후, 1N 염산을 사용하여 반응 혼합물을 pH를 2로 조절한다. 물(1.6L)로 희석시키고, 여과에 의해 표제 화합물을 수집한다.
[실시예 12]
[출발물질로서의 산화방지 화합물 : (6-하이드록시-7-3급-부틸-5-이소프로필-8-프로필크로만-2-일)아세트산의 제조방법]
마그네슘 조각(45mg, 1.85mmol) 및 1-클로로-2,2-디메틸프로판(74.6mg, 0.7mmol)을 무수 에테르(9mL) 중에서 혼합시킨다. 가열하고 격렬히 교반시킨 다음, 무수 에테르(1.5mL) 중의 1,2-디브로모에탄(156mg, 0.893mmol)을 적가한다. 12시간 동안 환류시키고, 아르곤 대기하에 넣고, 0 내지 5℃로 냉각시킨다. 무수 디에틸 에테르(1.5mL)중의 이소부티릴 클로라이드(0.533mmol) 용액을 적가한다. 0 내지 5℃에서 1.5시간 동안 교반시키고, 얼음과 진한 염산(0.15mL)의 혼합물에 붓고, 유기상을 분리한다. 에틸 아세테이트, 5% 수성 탄산나트륨 및 염수로 세척한다. 건조시키고(MgSO4), 진공하에서 용매를 증발시켜, 2,2,6-트리메틸-4-헵탄온을 수득한다.
비닐마그네슘 클로라이드(0.7mmol)를 무수 디에틸 에테르(1mL)에 용해시키고, 아르곤 대기하에 넣고 1 내지 5℃로 냉각시킨다. 무수 디에틸 에테르(1.5mL)중의 부티릴 클로라이드(0.533mmol) 용액을 적가한다. 0 내지 5℃에서 1.5시간 동안 교반시키고, 얼음과 진한 염산(0.15mL)의 혼합물에 붓고, 유기상을 분리한다. 물, 5% 수성 탄산나트륨 및 염수로 세척한다. 건조시키고(MgSO4), 진공하에서 용매를 증발시켜, 프로필 비닐 케톤을 수득한다.
2,2,6-트리메틸-4-헵탄온(0.4mol)을 메탄올(10mL)에 용해시키고, 칼륨 3급-부톡사이드(12g, 0.1mol)를 가한다. 메탄올(10mL)중의 프로필 비닐 케톤(0.2mol) 용액을 적가한다. 10분 동안 교반시키고, 에틸 에테르와 염수 사이에 분배한다. 유기상을 분리하고 중성이 될 때까지 염수로 세척한다. 건조시키고(MgSO4), 진공하에서 용매를 증발시켜, 2-프로필-3-3급-부틸-5-이소프로필벤조퀴논을 수득한다.
2-프로필-3-3급-부틸-5-이소프로필벤조퀴논(10mmol), 1,1,3,3-테트라메틸디실옥산(1.79mL, 10mmol) 및 요오드(0.05g)를 메틸렌 클로라이드(30mL)에 용해시킨다. 30분 동안 환류 교반시키고 1N 수산화나트륨(30mL)으로 추출한다. 수성상을 진한 염산으로 산성화시키고, 에틸 아세테이트(4×10mL)로 추출하고, 건조시키고(MgSO4), 진공하에서 용매를 증발시켜, 2-프로필-3-3급-부틸-4-하이드록시-5-이소프로필페놀을 수득한다.
2-프로필-3-3급-부틸-4-하이드록시-5-이소프로필페놀(2.0mol) 및 트리메틸오르토포르메이트(0.3L)를 메탄올(1.2L)에 용해시키고 탈기시킨다. 질소 대기하에 넣고 3℃로 냉각시키고 진한 황산(5mL)을 가한다. 메틸 비닐 케톤(340mL, 4.0mol)을 적가하고, 냉각시키지 않으면서 44시간 동안 교반시킨다. 수성 탄산수소나트륨에 붓고, 에틸 에테르로 추출한다. 건조시키고(MgSO4), 진공하에서 용매를 증발시켜, 2-메톡시-2-메틸-7-3급-부틸-5-이소프로필-8-프로필-크로만-6-온을 수득한다.
2-메톡시-2-메틸-7-3급-부틸-5-이소프로필-8-프로필-크로만-6-올(2mol)을 피리딘(600mL)에 용해시키고 아세트산 무수물(900ml)을 가한다. 탈기시키고 질소 대기하에 18시간 동안 교반시킨다. 얼음/물에 붓고, 3시간 동안 교반시킨다. 에틸 아세트로 추출하고, 건조시키고(MgSO4), 진공하에서 용매를 증발시키고, 크로마토그래피로 정제하여, 2-메톡시-2-메틸-7-3급-부틸-5-이소프로필-8-프로필-크로만-6-일-아세테이트를 수득한다.
2-메톡시-2-메틸-7-3급-부틸-5-이소프로필-8-프로필-크로만-6-일 아세테이트(2mol)를 아세톤(2.5L)에 용해시키고, 물(2L) 및 진한 염산(16.6mL)을 차례로 가한다. 헤드 온도가 90℃에 도달될 때까지 교반 혼합물로부터 용매를 증류시킨다. 현탁액을 냉각시키고, 에틸 에테르로 희석시키고, 수성 탄산수소나트륨으로 세척한다. 건조시키고(MgSO4), 진공하에서 용매를 증발시키고, 크로마토그래피에 의해 정제하여, 2-하이드록시-2-메틸-7-3급-부틸-5-이소프로필-8-프로필-크로만-6-일-아세테이트를 수득한다.
수소화나트륨(광유중 56%, 47.2g, 1.10mol)을 수성 테트라하이드로푸란(1L)중에서 현탁시킨다. 질소 대기하에 놓고, 트리메틸 포스포노아세테이트(209.4g, 1.15mol)를 적가한다. 25분 동안 교반시키고, 테트라하이드로푸란(1L)중의 2-하이드록시-2-메틸-7-3급-부틸-5-이소프로필-8-프로필-크로만-6-일-아세테이트(0.5mol) 용액을 가한다. 실온에서 18시간 동안 교반시킨 다음 4시간 동안 가열환류시킨다. 냉각시키고, 진공하에서 용매를 증발시키고, 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 수득한다.
[생물학적 약제]
합성 표면 활성제의 효능을 시험하는 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 예를 들어, 본 발명의 합성 표면 활성제는 예를 들어 성장이 끝난 래트 폐 모델에서와 같이 임의의 적당한 방법으로 시험할 수 있다[참조 : Ikegami, et al., (1979) Pediatr. Res. 13, 777-780].
표면 활성제-고갈된 래트 폐의 압력-용적 특성은 초자질 막 질환을 앓고 있는 신생아의 폐의 압력-용적 특성과 유사하고, 폐의 압력-용적 관계가 정상으로 회복되는 것은 용량 의존 방법으로 주입된 표면 활성제의 양과 관련이 있다[참조 : Bermel, M.S., et al., Lavaged excised rat lungs as a model of surfactant deficiency, Lung 162 : 99-113(1984)].
[실시예 13]
[분리된 래트 세정 폐 모델]
동물 제제, 압력-용적 곡선 기재 및 폐 세정의 실험 방법은 하기 문헌에 기술되어 있는 바를 적용시킨다[참조 : Ikegami et al., Pediatr. Res. 11 : 178-182(1977) and Pediatr. Res. 13 : 777-780(1979, and Bermel et al, Lung 162 : 99-113(1984)]. 숫컷 스프라그 다울리 래트(Sprague Dawley rat)(체중 : 200 내지 250g)를 나트륨 펜토바르비탈로 마취시키고 사혈시킨다. 기관을 삽입시키고, 흉부를 분리해낸다. 혈관외막 조직을 분리해낸 후, 흉부 및 폐(약 2g)를 염수(0.9%)중에서 현탁시키고, 진공 챔버에 넣은 후, Stengel 등의 방법에 따라 탈기시킨다. 탈기된 폐를 37℃하에 염수중에 현탁시키고, 저장기내에 저장하고, 흉부 캐뉼라(cannula)를 T-튜브로 압력계 및 유리 주사기에 연결시킨다. 유리 주사기를 주입/배출 펌프내에 위치시킨다. 폐를 공기를 사용하여 10ml/분의 속도에서 30cm H2O 압력으로 팽창시켜, 공기 트래핑(air trapping)을 최소화시키고, 공기를 폐에 간헐적으로 가함으로써 상기 압력에서 10분 동안 유지시킨다. 주입된 공기의 총 용적을 일반적으로 14 내지 15ml인 총 폐용량(TLC)으로서 기록한다. 그 다음 압력이 0에 도달될 때까지 폐를 2.5ml/분의 속도로 탈기시킨다. 탈기시키는 동안, 압력계로부터 1cm 간격으로 압력을 판독하고 기록한다. 이러한 데이타를 사용하여 장치의 P-V 곡선을 보정한 후 압력-용적(P-V) 또는 준-정적 컴플라이언스(quasi-static compliance)를 제작한다. 탈기 및 평형화시킨 후, 폐를 5ml/g의 세정 완충액(0.9% NaCl, 10mM HEPES, pH 7.4)을 사용하여 반복 세정함으로써 표면활성제가 결핍된 상태로 만든다. 압력-용적 곡선의 형태가 완전한 S자형을 이루고 5cm H2O 압력하에서 폐내에 잔류하는 공기 용적이 3ml 이하가 될 때까지 탈기, 평형화 및 세정 공정을 반복한다(15 내지 20회). 이 싯점에서, 폐는 표면 활성제가 결핍되는 상태로 되는 것으로 생각되어진다. 시험을 위해, 0.9% NaCl 2ml, 10mM HEPES 완충액(pH 7.4)을 건조된 폐 표면 활성제(인지질 25mg; 100 내지 125mg/kg)에 가하고, 혼합물을 교반시키고, 질소로 플러슁하고, 45℃에서 1시간 동안 항온처리한다. 그 다음, 혼합물을 재 볼텍싱(vortexing)시키고, 거품이 형성되면 탈기시키고, 시험 혼합물 2ml를 주사기를 사용하여 폐에 4회 주입 및 배출시킨다. 시험 화합물을 5회째에 재주입시켜, 폐내에 잔류시킨다. 이 방법은 폐를 통해 물질을 균일하게 분포시키는데 적용한다. 폐를 탈기시키고, 37℃에서 5분에 걸쳐 평형화시키고, P-V를 측정한다. 표면 활성제의 물리적 특성이 온도에 의존적일 수 있기 때문에, 상온에 대해 반대되는 온도로서 37℃에서 염수중에 지지된 상태로 폐를 연구한다. 개의 폐 표면 활성제는, 표면 활성제를 5분 동안만 가열시키는 것을 제외하고는, 상기와 유사한 방법으로 투여한다. 데이타를 %TLC로 나타낸다. 성장이 끝난 래트 폐의 압력-용적(P-V) 곡선의 탈기 림(limb)에 대해서는 5 및 10cm H2O 압력(PC5및 PC10)에서 총 폐용량(%TLC)을 계산함으로써 분석한다. 대조는 계산식, 회복율(%)=(PC5(충분)-PC5(시험)×100/(CP5(충분)-PC5(결핍))을 기초로 하고, 평균의 특정 컨트라스트를 갖는 일반 선형 모델 방법(SAS Institute Inc., Cary, NC)을 이용하여 변형의 1-방식 분석으로 수행한다. 0.05 미만의 확률값은 통계학적 확실성을 나타내는 것으로 간주한다. 세정 및 시험 화합물을 사용한 처리는 6% 보다 큰 절대 TLC의 변화를 제공하지 않는다.
[산화방지 활성]
펩타이드를 트리플루오로에탄올(TFE)에 용해시키고, 클로로포름 중의 대두 포스파티딜콜린(PC)과 혼합시킨다. N2스트림하에서 건조시킨 후, 혼합물을 에탄올중에서 재현탁시키고, 완충액(50mM NaCl, 50mM 트리스-HCl, pH 7.0)에 주입하여, 0.5mM 인지질의 최종 농도를 수득한다. 50μM Fe3+와 250μM 히스티딘의 혼합물과 50μM Fe2+를 사용하여 과산화를 개시한다. 37℃에서 15분에 걸친 간격을 두고, 반응 혼합물 1mL 샘플을 TBAR(티오바르비투르산 반응 물질)을 측정하는데 사용한다. 0.67% 티오바르비투르산/0.05M NaOH 2부와 10% 트리클로로아세트산 1부의 혼합물 2mL 및 2% 부틸화 하이드록시톨루엔 0.05mL를 가한다. 반응을 100℃에서 30분 동안 수행한다. 그 다음, 튜브를 냉각시키고, 3.000rpm에서 15분 동안 원심분리시키고, 아크릴성 큐벳(cuvette)으로 이동시킨다. 532nm 및 700nm에서의 흡수능의 차이(광산란도를 교정하기 위한)를 측정하고, 1.56×105M-1cm-1의 몰 흡광계수를 사용하여 말론디알데히드 당량 단위로 TBAR을 계산한다.
[CD 스펙트럼]
1mm 순환 큐벳내의 샘플의 순환 이색성(CD) 스펙트럼을 실온하에 Jasco J-500a Spectropolarimeter 상에서 2nm 슬릿폭으로 기록한다. 각각을 주사(scan)한 후 샘플의 CD 스펙트럼으로부터 완충액의 CD 스펙트럼을 감한다. 주사 속도는 2nm/분이고, 시간 상수는 8초이다. 0.04nm 간격으로 데이타를 수집하고 0.2nm 간격으로 평균화시킨다.
[표면 장력 측정]
오실레이팅 버블(oscillating bubble)의 최소 및 최대 표면 장력을 필수적으로 문헌[참조 : Enhorning, J. Appl. Physiol 43 : 198-203(1977)]에 기술되어 있는 바와 같이 맥동 버블 표면 장력계(pulsating bubble surfactometer; PBS, Electronetics Corp.)에서 분당 20주기의 속도로 37℃하에 샘플에 대해 측정한다. 플라스틱 캠플(cample) 챔버를 식기 세척용 세제의 희석액으로 헹구고, 물로 완전히 헹군 다음, N2스트림하에서 건조시켜 사용한다.
[결과]
시험 펩타이드의 구조를 제1도에 나타내었다. WMAP 10은 합성 폐 표면 활성제로서의 DPPC 중에서 시험된 효과적인 친양쪽성 α-나선형 펩타이드이다. 펩타이드 동족체, HBB-Lys-MAP 10, HBS-Cys-MAP 10 및 Trl-Lys-MAP 10에 소수성 산화방지제를 주입시킨다. Trolox를 Trl-LysMAP10내의 Lys와 커플링시켜 분리되기는 하나 입체화학적으로는 확인되지 않는 2개의 이성체, Trolox(I)-MAP 10 및 Trolox(II)-MAP 10을 형성시킨다. 펩타이드의 구조를 수소-결합 및 α-나선형 구조의 형성을 촉진시키는 트리플루오로에탄올 및 물중에서의 CD 분광기에 의해 비교한다. CD 스펙트럼을 제2도에 도시하였다. 계산된 제2구조를 표 I에 나타내었다. 모든 펩타이드는 TFE 중에서 고 α-나선형을 나타내는 반면, 수중에서는 α-나선형이 보다 적은 편이다. TFE 내에서 펩타이드의 α-나선형 함량의 소폭의 차이는 표 I의 데이타로부터 명백히 알 수 있다. 그러나, 실제적인 차이는 수중에서 관찰할 수 있다.
[표 I]
폐 표면 활성제 혼합물의 물리적 특성은 시차주사열량계(DSC) 및 맥관 버블 표면 장력계로 측정한다. DPPC의 상 전이 엔탈피는 지질과 강력하게 상호작용하는 펩타이드를 함유하는 폐 표면 활성제 혼합물중에서 크게 감소되고[참조 : McLean, L.R. et al., Biochemistry 30 : 31-37(1991)], 래트 세정 폐 모델내에서 효과적이다. 엔탈피 및 상 전이 온도를 표 II에 나타내었다. 또한, 맥관 버블내에서의 최소 표면 장력(γmin)의 상당한 감소는 모든 합성 폐 표면 활성제 혼합물에 대해 관찰되는 바이다. 프로부콜은 γmin을 상당히 증가시킨다(표 II).
[표 II]
산화방지제로서의 펩타이드의 효능을 대두 PC 혼합물내에서의 WMAP10의 혼합물에 가한 프로부콜의 효능과 비교한다. BHT를 대조용으로서 시험한다. 대두 PC 내에서의 WMAP10은 시험된 범위내에서 산화방지 활성을 나타내지 않는다(제3도). Trp 잔기 대신 Lys를 함유하는 동족체도 역시 마찬가지이다(데이타 부재). 프로부콜은 총체적으로 0.6(중량)%의 농도에서 8분 이상 동안 산화를 억제한다(데이타 부재). HBB-Lys 및 HBS-Cys 유도체 모두는 합성 표면 활성제의 제조시 사용된 농도와 유사한 농도에서 효과적인 산화방지제이다. Trolox 유도체도 또한 유사한 혼합물중에서 효과적인 산화방지제이다(데이타 부재).
래트에 투여된 제제는 반투명성 외양을 갖는다. 5cm H2O 압력(PC5)에서의 총 폐용량(TLC) 및 10cm H2O(PC10)에서의 TLC의 백분율을 계산함으로써 성장이 끝난 래트 폐내의 압력-용적(P-V) 곡선의 탈기 림을 분석한다. PC5값을 기준으로 하는 회복을 시험 혼합물의 비교에 사용한다. 단독의 DPPC는 세정된 폐의 압력-용적(P-V) 곡선상에 상당한 효과를 나타내지 않는다. 합성 표면 활성제에 있어서, 2 또는 4중량%의 펩타이드 농도는 DPPC(MAP10)와의 WMAP10 혼합물에 대한 최적 농도를 근거로 하여 선택한다. 그 결과를 표 III에 요약해 놓았다. WMAP10 서열은 DPPC와 혼합할 경우 거의 충분해지도록 세정된 성장이 끝난 래트 폐의 P-V 곡선을 회복하는데 매우 효과적이다. HBB 또는 Trolox 작용성 그룹을 함유하는 펩타이드의 치환 또는 프로부콜의 첨가는 펩타이드-DPPC 혼합물의 활성을 감소시키지 않는다.
[표 III]
[서열목록]
(1) 일반 정보 :
(i) 출원인 : 래리 알. 맥린
마거리트 에이치. 페인
(ii) 발명의 명칭 : 산화방지 특성을 지닌 합성 폐 표면 활성제
(iii) 서열수 : 37
(iv) 상당하는 주소
(A) 수신인 : 마리온 메렐 다우 인코포레이티드
(B) 거리 : 이스트 갈브레이쓰 로오드 2110
(C) 시 : 신시내티 피. 오. 박스 156300
(D) 주 : 오하이오
(E) 국가 : 미합중국
(F) 우편번호 : 45215-6300
(v) 컴퓨터 판독 형태 :
(A) 매체 형태 : 플라피 디스크
(B) 컴퓨터 : IBM PC 호환성
(C) 운용 시스템 : PC-DOS/MS-DOS
(D) 소프트웨어 : Patent In Release #1.0, Version #1.25
(vi) 통상의 특허출원 데이타 :
(A) 출원국 : US
(B) 출원일 :
(C) 분류
(viii) 위임인/대리인 정보 :
(A) 성함 : 캐롤라인 디 문
(B) 등록번호 : 33,022
(C) 참고/인용 번호 : MO1613
(ix) 통신정보 :
(A) 전화번호 : (513) 948-7785
(B) 팩스번호 : (513) 948-7961
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(i) 서열 특성 :
(A) 길이 : 10개 아미노산
(B) 타입 : 아미노산
(D) 형태 : 선형
(ii) 분자 타입 : 펩타이드
(xi) 서열식 : 서열동정번호 26 :
(2) 서열동정번호 : 27에 대한 정보 :
(i) 서열 특성 :
(A) 길이 : 10개 아미노산
(B) 타입 : 아미노산
(D) 형태 : 선형
(ii) 분자 타입 : 펩타이드
(xi) 서열식 : 서열동정번호 27 :
(2) 서열동정번호 : 28에 대한 정보 :
(i) 서열 특성 :
(A) 길이 : 10개 아미노산
(B) 타입 : 아미노산
(D) 형태 : 선형
(ii) 분자 타입 : 펩타이드
(xi) 서열식 : 서열동정번호 28 :
(2) 서열동정번호 : 29에 대한 정보 :
(i) 서열 특성 :
(A) 길이 : 10개 아미노산
(B) 타입 : 아미노산
(D) 형태 : 선형
(ii) 분자 타입 : 펩타이드
(xi) 서열식 : 서열동정번호 29 :
(2) 서열동정번호 : 30에 대한 정보 :
(i) 서열 특성 :
(A) 길이 : 10개 아미노산
(B) 타입 : 아미노산
(D) 형태 : 선형
(ii) 분자 타입 : 펩타이드
(xi) 서열식 : 서열동정번호 30 :
(2) 서열동정번호 : 31에 대한 정보 :
(i) 서열 특성 :
(A) 길이 : 10개 아미노산
(B) 타입 : 아미노산
(D) 형태 : 선형
(ii) 분자 타입 : 펩타이드
(xi) 서열식 : 서열동정번호 31 :
(2) 서열동정번호 : 32에 대한 정보 :
(i) 서열 특성 :
(A) 길이 : 10개 아미노산
(B) 타입 : 아미노산
(D) 형태 : 선형
(ii) 분자 타입 : 펩타이드
(xi) 서열식 : 서열동정번호 32 :
(2) 서열동정번호 : 33에 대한 정보 :
(i) 서열 특성 :
(A) 길이 : 10개 아미노산
(B) 타입 : 아미노산
(D) 형태 : 선형
(ii) 분자 타입 : 펩타이드
(xi) 서열식 : 서열동정번호 33 :
(2) 서열동정번호 : 34에 대한 정보 :
(i) 서열 특성 :
(A) 길이 : 10개 아미노산
(B) 타입 : 아미노산
(D) 형태 : 선형
(ii) 분자 타입 : 펩타이드
(xi) 서열식 : 서열동정번호 34 :
(2) 서열동정번호 : 35에 대한 정보 :
(i) 서열 특성 :
(A) 길이 : 10개 아미노산
(B) 타입 : 아미노산
(D) 형태 : 선형
(ii) 분자 타입 : 펩타이드
(xi) 서열식 : 서열동정번호 35 :
(2) 서열동정번호 : 36에 대한 정보 :
(i) 서열 특성 :
(A) 길이 : 10개 아미노산
(B) 타입 : 아미노산
(D) 형태 : 선형
(ii) 분자 타입 : 펩타이드
(xi) 서열식 : 서열동정번호 36 :
(2) 서열동정번호 : 37에 대한 정보 :
(i) 서열 특성 :
(A) 길이 : 10개 아미노산
(B) 타입 : 아미노산
(D) 형태 : 선형
(ii) 분자 타입 : 펩타이드
(xi) 서열식 : 서열동정번호 37 :

Claims (41)

  1. 일반식(1)의 폴리펩타이드, 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 광학 활성 이성체.
    상기식에서, X는 수소, C1-5알킬 그룹, C1-10아실 그룹, 아미노산, 디펩타이드 또는 폴리트리펩타이드이고, Y 및 Y′는 각각 독립적으로 결합, -(Ser)n-(여기서, n은 1 내지 3의 정수이다) 또는 T[여기서, T는{여기서, n′는 1 내지 8의 정수이고, W는 -NHC(O)-, -NHCH2-, -C(O)-O-, -OC(O)-, -SC(O)- 또는 -SS-이며, D는또는(여기서, B는 결합, C1-16알킬렌 또는 C2-16알케닐렌이며, B1은 B 또는이고, R1, R2, R3, R4, R5, R6및 R7은 각각 독립적으로 C1-6알킬이다)이다}이다]이거나, X 및 Y가 함께는 Da-C(O)- 또는 Db-C(O)-이고, Q는 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 알콕시 그룹, -O-Da또는 -O-Db이며, Z는 A1내지 A11로 표시되는 아미노산 잔기중의 어느 하나로부터 시작할 수 있는 서열
    의 올리고머 단편으로 이루어진 8 내지 25개 아미노산 잔기의 펩타이드 잔기[여기서, A1, A1′, A1″, A1″′, A4, A4′, A4″, A8, A8′ 및 A8″은 각각 독립적으로 -Glu-, -Asp-, -Ala-, -Gln-, -Asn-, -Gly-, -Ser-, -Thr-, -Lys-, -Arg-, -Orn- 및 -hArg-로 이루어진 친수성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되며; A2, A2′, A2″, A2″′, A3, A3′, A3″, A6, A6′, A6″, A7, A7′, A7″, A10, A10′ 및 A10″는 각각 독립적으로 -Leu-, -Nle-, -Met-, -Ala-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile- 및 -Tyr-로 이루어진 호지성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되거나, 또는 아미노산 잔기 유도체 T이며; A5, A5′, A5″, A11, A11′ 및 A11″는 각각 독립적으로 -Lys-, -Orn-, -Arg- 및 -hArg-로 이루어진 염기성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되고, A9, A9′ 및 A9″는 각각 독립적으로 -Leu-, -Nle-, -Met-, -Ala-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, -Tyr-, -Thr-, -Ser-, -Gln-, -Asn-, -Gly-, -Lys-, -Arg-, -hArg-, -Trp-, -Orn- 및 -Trp(For)-로 이루어진 호지성, 중성 또는 염기성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되거나, 또는 아미노산 잔기 유도체 T이다)이고, 단, 일반식(1)에는 하나 이상의 T, -O-Da, O-Db, Da-C(O)- 또는 Db-C(O)-가 존재한다.
  2. 제1항에 있어서, 하나 이상의 A2, A2′, A2″ 또는 A2″′가 Leu인 폴리펩타이드.
  3. 제1항에 있어서, 하나 이상의 A3, A3′ 또는 A3″가 Leu인 폴리펩타이드.
  4. 제1항에 있어서, 하나 이상의 A4, A4′ 또는 A4″가 Glu인 폴리펩타이드.
  5. 제1항에 있어서, 하나 이상의 A5, A5′ 또는 A5″가 Lys인 폴리펩타이드.
  6. 제1항에 있어서, 하나 이상의 A6, A6′ 또는 A3″′가 Leu인 폴리펩타이드.
  7. 제1항에 있어서, 하나 이상의 A7, A7′ 또는 A7″가 Leu인 폴리펩타이드.
  8. 제1항에 있어서, 하나 이상의 A8, A8′ 또는 A8″가 Glu인 폴리펩타이드.
  9. 제1항에 있어서, 하나 이상의 A9, A9′ 또는 A9″가 T인 폴리펩타이드.
  10. 제1항에 있어서, 하나 이상의 A10, A10′ 또는 A10″가 Leu인 폴리펩타이드.
  11. 제1항에 있어서, 하나 이상의 A11, A11′ 또는 A11″가 Lys인 폴리펩타이드.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, Q가 아미노인 폴리펩타이드.
  13. 제1항에 있어서, D가 Da인 폴리펩타이드.
  14. 제13항에 있어서, R1및 R2가 각각 3급-부틸인 폴리펩타이드.
  15. 제1항에 있어서, Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-[Nε-HBB-Lys]-Leu-Lys-NH2(서열동정 번호 : 29)인 폴리펩타이드.
  16. 제1항에 있어서, Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu[S-HBS-Lys]-Leu-Lys-NH2(서열동정 번호 : 30)인 폴리펩타이드.
  17. 제1항에 있어서, Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-(Nε-Trl-Lys)-Leu-Lys-NH2(서열동정 번호 : 31)인 폴리펩타이드.
  18. 제1항에 있어서, n′가 4이고 W가 -HNC(O)-이며 D가 Da이고 B1이 결합이며 R1이 3급-부틸이고 R2가 3급-부틸인 일반식(1)중에 하나 이상의 T가 존재하는 폴리펩타이드.
  19. 제1항에 있어서, n′가 1이고 W가 -SS-이며 D가 Da이고 B1이 결합이며 R1이 3급-부틸이고 R2가 3급-부틸인 일반식(1)중에 하나 이상의 T가 존재하는 폴리펩타이드.
  20. 제1항에 있어서, 아미노산이 D 이성체 형태로 존재하는 폴리펩타이드.
  21. 일반식(1)의 폴리펩타이드, 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 광학 활성 이성체와 DPPC, PC, CL, PG, PS, FA 및 TG로 이루어진 그룹으로부터 선택된 지질 또는 지질들의 혼합물의 복합체.
    상기식에서, X는 수소, C1-5알킬 그룹, C1-10아실 그룹, 아미노산, 디펩타이드 또는 트리펩타이드이고, Y 및 Y′는 각각 독립적으로 결합, -(Ser)n-(여기서, n은 1 내지 3의 정수이다) 또는 T[여기서, T는{여기서, n′는 1 내지 8의 정수이고, W는 -NHC(O)-, -NHCH2-, -C(O)-O-, -OC(O)-, -SC(O)- 또는 -SS-이며, D는또는(여기서, B는 결합, C1-6알킬렌 또는 C2-16알케닐렌이며, B1은 B 또는이고, R1, R2, R3, R4, R5, R6및 R7은 각각 독립적으로 C1-6알킬이다)이다}이다]이거나, X 및 Y가 함께는 Da-C(O)- 또는 Db-C(O)-를 형성하고, Q는 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 알콕시 그룹, -O-Da또는 -O-Db이며, Z는 A1내지 A11로 표시되는 아미노산 잔기중의 어느 하나로부터 시작할 수 있는 서열
    의 올리고머 단편으로 이루어진 8 내지 25개 아미노산 잔기의 펩타이드 잔기[여기서, A1, A1′, A1″, A1″′, A4, A4′, A4″, A8, A8′ 및 A8″은 각각 독립적으로 -Glu-, -Asp-, -Ala-, -Gln-, -Asn-, -Gly-, -Ser-, -Thr-, -Lys-, -Arg-, -Orn- 및 -hArg-로 이루어진 친수성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되고, A2, A2′, A2″, A2″′, A3, A3′, A3″, A6, A6′, A6″, A7, A7′, A7″, A10, A10′ 및 A10″는 각각 독립적으로 -Leu-, -Nle-, -Met-, -Ala-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile- 및 -Tyr-로 이루어진 호지성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되거나, 또는 아미노산 잔기 유도체 T이며; A5, A5′, A5″, A11, A11′ 및 A11″는 각각 독립적으로 -Lys-, -Orn-, -Arg- 및 -hArg-로 이루어진 염기성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되고, A9, A9′ 및 A9″는 각각 독립적으로 -Leu-, -Nle-, -Met-, -Ala-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, -Tyr-, -Thr-, -Ser-, -Gln-, -Asn-, -Gly-, -Lys-, -Arg-, -hArg-, -Trp-, -Orn- 및 -Trp(For)-로 이루어진 호지성, 중성 또는 염기성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되거나, 또는 아미노산 잔기 유도체 T이다]이고, 단, 일반식(1)에는 하나 이상의 T, -O-Da, O-Db, Da-C(O)- 또는 Db-C(O)-가 존재한다.
  22. 제21항에 있어서, DPPC가 지질의 주요 성분을 구성하는 복합체.
  23. 제21항에 있어서, 지질이 DPPC와 PG의 혼합물인 복합체.
  24. 제21항에 있어서, 지질이 약 85 내지 100%의 DPPC와 약 0 내지 15%의 PG로 이루어진 복합체.
  25. 제21항에 있어서, 폴리펩타이드가 Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-[Nε-HBB-Lys]-Leu-Lys-NH2(서열동정 번호 : 32)인 복합체.
  26. 제21항에 있어서, 폴리펩타이드가 Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-[S-HBB-Cys]-Leu-Lys-NH2(서열동정 번호 : 33)인 복합체.
  27. 제21항에 있어서, 폴리펩타이드가 Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-[Nε-Trl-Lys]-Leu-Lys-NH2(서열동정 번호 : 34)인 복합체.
  28. 제21항에 있어서, 폴리펩타이드의 아미노산이 D 이성체 형태를 갖는 복합체.
  29. a) 그룹 Z″-Y′-Q[여기서, Y′ 및 Q는 이하에서 정의하는 바와 같고, Z″는 일반식의 아미노산 화합물(여기서, n′는 이하에서 정의하는 바와 같고, W′는 산화방지제를 부착시킬 수 있는 W의 보호된 개질체이다)이다]로부터 적절히 결합되어 있는 C-말단 보호된 아미노산과 함께 Q를 통해 아미노산 단편에 결합되어 있는 수지를 사용하는 단계; b) W′로부터 보호 그룹을 제거하는 단계; c) 일반식또는의 적절한 산화방지 잔기[여기서, R1, R2, R3, R4및 R5는 이하에서 정의하는 바와 같고; B′ 및 B1′는 W′와 커플링되는 경우, Z′-Y′-Q의 보호된 아미노산 서열{여기서, Y′ 및 Q는 이하에서 정의하는 바와 같고, Z′는 일반식의 아미노산 화합물을 함유하는 Z의 부위(여기서, n′ 및 D는 이하에서 정의하는 바와 같고, W는 -NHC(O)-, -NHCH2-, -OC(O)-, -C(O)O- 및 -SC(O)- 또는 -SS-이다)이다}을 제공하는 B 및 B1의 개질체이다]를 커플링시키는 단계; d) 다른 α-아미노 보호된 아미노산인, A1-A11을 계속해서 커플링시켜, 보호된 아미노산 서열을 수득하는 단계 및 e) 보호 그룹을 제거하고 목적하는 펩타이드를 정제하는 단계를 포함하는, 일반식(1)의 폴리펩타이드, 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 광학 활성 이성체의 제조방법.
    상기식에서, X는 수소, C1-5알킬 그룹, C1-10아실 그룹, 아미노산, 디펩타이드 또는 트리펩타이드이고, Y 및 Y′는 각각 독립적으로 결합, -(Ser)n-(여기서, n은 1 내지 3의 정수이다) 또는 T[여기서, T는{여기서, n′는 1 내지 8의 정수이고, W는 -NHC(O)-, -NHCH2-, -C(O)-O-, -OC(O)-, -SC(O)- 또는 -SS-이며, D는또는(여기서, B는 결합, C1-16알킬렌 또는 C2-16알케닐렌이며, B1은 B 또는이고, R1, R2, R3, R4, R5, R6및 R7은 각각 독립적으로 C1-6알킬이다)이다}이다]이거나, X 및 Y가 함께는 Da-C(O)- 또는 Db-C(O)-이고, Q는 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 알콕시 그룹, -O-Da또는 -O-Db이며, Z는 A1내지 A11로 표시되는 아미노산 잔기중의 어느 하나로부터 시작할 수 있는 서열
    의 올리고머 단편으로 이루어진 8 내지 25개 아미노산 잔기의 펩타이드 잔기[여기서, A1, A1′, A1″, A1″′, A4, A4′, A4″, A8, A8′ 및 A8″은 각각 독립적으로 -Glu-, -Asp-, -Ala-, -Gln-, -Asn-, -Gly-, -Ser-, -Thr-, -Lys-, -Arg-, -Orn- 및 -hArg-로 이루어진 친수성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되며; A2, A2′, A2″, A2″′, A3, A3′, A3″, A6, A6′, A6″, A7, A7′, A7″, A10, A10′ 및 A10″는 각각 독립적으로 -Leu-, -Nle-, -Met-, -Ala-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile- 및 -Tyr-로 이루어진 호지성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되거나, 또는 아미노산 잔기 유도체 T이며; A5, A5′, A5″, A11, A11′ 및 A11″는 각각 독립적으로 -Lys-, -Orn-, -Arg- 및 -hArg-로 이루어진 염기성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되고, A9, A9′ 및 A9″는 각각 독립적으로 -Leu-, -Nle-, -Met-, -Ala-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, -Tyr-, -Thr-, -Ser-, -Gln-, -Asn-, -Gly-, -Lys-, -Arg-, -hArg-, -Trp-, -Orn- 및 -Trp(For)-로 이루어진 호지성, 중성 또는 염기성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되거나, 또는 아미노산 잔기 유도체 T이다]이고, 단, 일반식(1)에는 하나 이상의 T, -O-Da, O-Db, Da-C(O)- 또는 Db-C(O)-가 존재한다.
  30. a) 그룹 Z″-Y′-Q[여기서, Y′ 및 Q는 이하에서 정의하는 바와 같고, Z″는 일반식의 아미노산 화합물(여기서, n′는 이하에서 정의하는 바와 같고, W′는 산화방지제를 부착시킬 수 있는 W의 보호된 개질체이다)이다]로부터 적절히 결합되어 있는 C-말단 보호된 아미노산과 함께 Q를 통해 아미노산 단편에 결합되어 있는 수지를 사용하는 단계; b) 다른 α-아미노 보호된 아미노산 A1-A11을 계속해서 커플링시켜, 보호된 아미노산 서열 X-Y-Z′-Y′-Q(여기서, X, Y, Y′ 및 Q는 이하에서 정의하는 바와 같고, Z′는 일반식의 아미노산 화합물(여기서, n′는 이하에서 정의하는 바와 같고, W′는 산화방지제를 부착시킬 수 있는 W의 보호된 개질체이다)을 함유한다]을 수득하는 단계; c) W′로부터 보호 그룹을 제거하는 단계; d) 일반식또는의 적절한 산화방지 잔기[여기서, R1, R2, R3, R4및 R5는 이하에서 정의하는 바와 같고; B′ 및 B1′는 W′와 커플링되는 경우, Z′-Y′-Q의 보호된 아미노산 서열(여기서, X, Y, Z, Y′ 및 Q는 이하에서 정의하는 바와 같다)을 제공하는 B 및 B1의 개질체이다]를 커플링시키는 단계 및 e) 보호 그룹을 제거하고 목적하는 펩타이드를 정제하는 단계를 포함하는, 일반식(1)의 폴리펩타이드, 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 광학 활성 이성체의 제조방법.
    상기식에서, X는 수소, C1-5알킬 그룹, C1-10아실 그룹, 아미노산, 디펩타이드 또는 트리펩타이드이고, Y 및 Y′는 각각 독립적으로 결합, -(Ser)n-(여기서, n은 1 내지 3의 정수이다) 또는 T[여기서, T는{여기서, n′는 1 내지 8의 정수이고, W는 -NHC(O)-, -NHCH2-, -C(O)-O-, -OC(O)-, -SC(O)- 또는 -SS-이며, D는또는(여기서, B는 결합, C1-16알킬렌 또는 C2-16알케닐렌이며, B1은 B 또는이고, R1, R2, R3, R4, R5, R6및 R7은 각각 독립적으로 C1-6알킬이다)이다}이다]이거나, X 및 Y가 함께는 Da-C(O)- 또는 Db-C(O)-이고, Q는 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 알콕시 그룹, -O-Da또는 -O-Db이며, Z는 A1내지 A11로 표시되는 아미노산 잔기중의 어느 하나로부터 시작할 수 있는 서열
    의 올리고머 단편으로 이루어진 8 내지 25개 아미노산 잔기의 펩타이드 잔기[여기서, A1, A1′, A1″, A1″′, A4, A4′, A4″, A8, A8′ 및 A8″은 각각 독립적으로 -Glu-, -Asp-, -Ala-, -Gln-, -Asn-, -Gly-, -Ser-, -Thr-, -Lys-, -Arg-, -Orn- 및 -hArg-로 이루어진 친수성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되며; A2, A2′, A2″, A2″′, A3, A3′, A3″, A6, A6′, A6″, A7, A7′, A7″, A10, A10′ 및 A10″는 각각 독립적으로 -Leu-, -Nle-, -Met-, -Ala-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile- 및 -Tyr-로 이루어진 호지성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되거나, 또는 아미노산 잔기 유도체 T이며; A5, A5′, A5″, A11, A11′ 및 A11″는 각각 독립적으로 -Lys-, -Orn-, -Arg- 및 -hArg-로 이루어진 염기성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되고, A9, A9′ 및 A9″는 각각 독립적으로 -Leu-, -Nle-, -Met-, -Ala-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, -Tyr-, -Thr-, -Ser-, -Gln-, -Asn-, -Gly-, -Lys-, -Arg-, -hArg-, -Trp-, -Orn- 및 -Trp(For)-로 이루어진 호지성, 중성 또는 염기성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되거나, 또는 아미노산 잔기 유도체 T이다]이고, 단, 일반식(1)에는 하나 이상의 T, -O-Da, O-Db, Da-C(O)- 또는 Db-C(O)-가 존재한다.
  31. a) 그룹 Z″-Y′-Q[여기서, Y′ 및 Q는 이하에서 정의하는 바와 같고, Z″는 Z의 적합한 아미노산 부위이다]로부터 적절히 결합되어 있는 C-말단 보호된 아미노산과 함께 Q를 통해 아미노산 단편에 결합되어 있는 수지를 사용하는 단계; b) 다른 α-아미노 보호된 아미노산 A1-A11을 계속해서 커플링시켜 보호된 아미노산 서열 Y-Z′-Y′-Q(여기서, Y, Y′ 및 Q는 이하에서 정의하는 바와 같고, Z′는 목적하는 수의 아미노산 잔기 A1-A11을 함유하는 N-말단 보호된 펩타이드 잔기이다)를 수득하는 단계; c) Z′로부터 보호 그룹을 제거하는 단계; d) 일반식또는의 적절한 산화방지 잔기[여기서, R1, R2, R3, R4및 R5는 이하에서 정의하는 바와 같고; B′ 및 B1′는 W′와 커플링되는 경우, X-Y-Z-Y′-Q의 보호된 아미노산 서열(여기서, X, Y, Z, Y′ 및 Q는 이하에서 정의하는 바와 같다)을 제공하는 B 및 B1의 개질체이다]를 커플링시키는 단계 및 e) 보호 그룹을 제거하고 목적하는 펩타이드를 정제하는 단계를 포함하는 일반식(1)의 폴리펩타이드, 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 광학 활성 이성체의 제조방법.
    상기식에서, X는 수소, C1-5알킬 그룹, C1-10아실 그룹, 아미노산, 디펩타이드 또는 트리펩타이드이고, Y 및 Y′는 각각 독립적으로 결합, -(Ser)n-(여기서, n은 1 내지 3의 정수이다) 또는 T[여기서, T는{여기서, n′는 1 내지 8의 정수이고, W는 -NHC(O)-, -NHCH2-, -C(O)-O-, -OC(O)-, -SC(O)- 또는 -SS-이며, D는또는(여기서, B는 결합, C1-16알킬렌 또는 C2-16알케닐렌이며, B1은 B 또는이고, R1, R2, R3, R4, R5, R6및 R7은 각각 독립적으로 C1-6알킬이다)이다}이다]이거나, X 및 Y가 함께는 Da-C(O)- 또는 Db-C(O)-를 형성하고, Q는 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 알콕시 그룹, -O-Da또는 -O-Db이며, Z는 A1내지 A11로 표시되는 아미노산 잔기중의 어느 하나로부터 시작할 수 있는 서열
    의 올리고머 단편으로 이루어진 8 내지 25개 아미노산 잔기의 펩타이드 잔기[여기서, A1, A1′, A1″, A1″′, A4, A4′, A4″, A8, A8′ 및 A8″은 각각 독립적으로 -Glu-, -Asp-, -Ala-, -Gln-, -Asn-, -Gly-, -Ser-, -Thr-, -Lys-, -Arg-, -Orn- 및 -hArg-로 이루어진 친수성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되며; A2, A2′, A2″, A2″′, A3, A3′, A3″, A6, A6′, A6″, A7, A7′, A7″, A10, A10′ 및 A10″는 각각 독립적으로 -Leu-, -Nle-, -Met-, -Ala-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile- 및 -Tyr-로 이루어진 호지성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되거나, 또는 아미노산 잔기 유도체 T이며; A5, A5′, A5″, A11, A11′ 및 A11″는 각각 독립적으로 -Lys-, -Orn-, -Arg- 및 -hArg-로 이루어진 염기성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되고, A9, A9′ 및 A9″는 각각 독립적으로 -Leu-, -Nle-, -Met-, -Ala-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, -Tyr-, -Thr-, -Ser-, -Gln-, -Asn-, -Gly-, -Lys-, -Arg-, -hArg-, -Trp-, -Orn- 및 -Trp(For)-로 이루어진 호지성, 중성 또는 염기성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되거나, 또는 아미노산 잔기 유도체 T이다]이고, 단, 일반식(1)에는 하나 이상의 T, -O-Da, O-Db, Da-C(O)- 또는 Db-C(O)-가 존재한다.
  32. a) 그룹 Z″-Y′-Q(여기서, Y′ 및 Q는 이하에서 정의하는 바와 같고, Z″는 Z의 적합한 아미노산 부위이다)로부터 적절히 결합되어 있는 C-말단 보호된 아미노산과 함께 Q를 통해 아미노산 단편에 결합되어 있는 수지를 사용하는 단계; b) 다른 α-아미노 보호된 아미노산 A1-A11을 계속해서 커플링시켜 보호된 아미노산 서열 X-Y-Z′-Y′-Q(여기서, X, Y, Y′ 및 Q는 이하에서 정의하는 바와 같고, Z′는 목적하는 수의 아미노산 잔기 A1-A11을 함유하는 N-말단 보호된 펩타이드 잔기이다)를 수득하는 단계; c) 수지로부터 X-Y-Z-Y-Q′를 분리하는 단계; d) 일반식또는의 적절한 산화방지 잔기[여기서, R1, R2, R3, R4및 R5는 이하에서 정의하는 바와 같고; B′ 및 B1′는 Q′와 커플링되는 경우, X-Y-Z-Y′-Q의 보호된 아미노산 서열[여기서, X, Y, Z, Y′는 이하에서 정의하는 바와 같고, Q는 -O-Da- 또는 -O-Db-이다)을 제공한다]를 커플링시키는 단계 및 e) 보호 그룹을 제거하고 목적하는 펩타이드를 정제하는 단계를 포함하는, 일반식(1)의 폴리펩타이드, 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 광학 활성 이성체의 제조방법.
    상기식에서, X는 수소, C1-5알킬 그룹, C1-10아실 그룹, 아미노산, 디펩타이드 또는 트리펩타이드이고, Y 및 Y′는 각각 독립적으로 결합, -(Ser)n-(여기서, n은 1 내지 3의 정수이다) 또는 T[여기서, T는{여기서, n′는 1 내지 8의 정수이고, W는 -NHC(O)-, -NHCH2-, -C(O)-O-, -OC(O)-, -SC(O)- 또는 -SS-이며, D는또는(여기서, B는 결합, C1-6알킬렌 또는 C2-16알케닐렌이며, B1은 B 또는이고, R1, R2, R3, R4, R5, R6및 R7은 각각 독립적으로 C1-6알킬이다)이다}이다]이거나, X 및 Y가 함께는 Da-C(O)- 또는 Db-C(O)-를 형성하고, Q는 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 알콕시 그룹, -O-Da또는 -O-Db이며, Z는 A1내지 A11로 표시되는 아미노산 잔기중의 어느 하나로부터 시작할 수 있는 서열
    의 올리고머 단편으로 이루어진 8 내지 25개 아미노산 잔기의 펩타이드 잔기[여기서, A1, A1′, A1″, A1″′, A4, A4′, A4″, A8, A8′ 및 A8″은 각각 독립적으로 -Glu-, -Asp-, -Ala-, -Gln-, -Asn-, -Gly-, -Ser-, -Thr-, -Lys-, -Arg-, -Orn- 및 -hArg-로 이루어진 친수성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되고, A2, A2′, A2″, A2″′, A3, A3′, A3″, A6, A6′, A6″, A7, A7′, A7″, A10, A10′ 및 A10″는 각각 독립적으로 -Leu-, -Nle-, -Met-, -Ala-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile- 및 -Tyr-로 이루어진 호지성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되거나, 또는 아미노산 잔기 유도체 T이며, A5, A5′, A5″, A11, A11′ 및 A11″는 각각 독립적으로 -Lys-, -Orn-, -Arg- 및 -hArg-로 이루어진 염기성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되고, A9, A9′ 및 A9″는 각각 독립적으로 -Leu-, -Nle-, -Met-, -Ala-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, -Tyr-, -Thr-, -Ser-, -Gln-, -Asn-, -Gly-, -Lys-, -Arg-, -hArg-, -Trp-, -Orn- 및 -Trp(For)-로 이루어진 호지성, 중성 또는 염기성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되거나, 또는 아미노산 잔기 유도체 T이다]이고, 단, 일반식(1)에는 하나 이상의 T, -O-Da, O-Db, Da-C(O)- 또는 Db-C(O)-가 존재한다.
  33. 일반식(1)의 폴리펩타이드를 DPPC, PC, CL, PG, PS, FA 및 TG로 이루어진 그룹으로부터 선택된 지질 또는 지질들의 혼합물과 혼합시킴을 포함하여, 일반식(1)의 폴리펩타이드, 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 광학 활성 이성체의 복합체를 제조하는 방법.
    상기식에서, X는 수소, C1-5알킬 그룹, C1-10아실 그룹, 아미노산, 디펩타이드 또는 트리펩타이드이고, Y 및 Y′는 각각 독립적으로 결합, -(Ser)n-(여기서, n은 1 내지 3의 정수이다) 또는 T[여기서, T는{여기서, n′는 1 내지 8의 정수이고, W는 -NHC(O)-, -NHCH2-, -C(O)-O-, -OC(O)-, -SC(O)-, 또는 -SS-이며, D는또는(여기서, B는 결합, C1-16알킬렌 또는 C2-16알케닐렌이며, B1은 B 또는이고, R1, R2, R3, R4, R5, R6및 R7은 각각 독립적으로 C1-6알킬이다)이다}이다]이거나, X 및 Y가 함께는 Da-C(O)- 또는 Db-C(O)-를 형성하고, Q는 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 알콕시 그룹, -O-Da또는 -O-Db이며, Z는 A1내지 A11로 표시되는 아미노산 잔기중의 어느 하나로부터 시작할 수 있는 서열
    의 올리고머 단편으로 이루어진 8 내지 25개 아미노산 잔기의 펩타이드 잔기[여기서, A1, A1′, A1″, A1″′, A4, A4′, A4″, A8, A8′ 및 A8″은 각각 독립적으로 -Glu-, -Asp-, -Ala-, -Gln-, -Asn-, -Gly-, -Ser-, -Thr-, -Lys-, -Arg-, -Orn- 및 -hArg-로 이루어진 친수성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되고, A2, A2′, A2″, A2″′, A3, A3′, A3″, A6, A6′, A6″, A7, A7′, A7″, A10, A10′ 및 A10″는 각각 독립적으로 -Leu-, -Nle-, -Met-, -Ala-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile- 및 -Tyr-로 이루어진 호지성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되거나, 또는 아미노산 잔기 유도체 T이며; A5, A5′, A5″, A11, A11′ 및 A11″는 각각 독립적으로 -Lys-, -Orn-, -Arg- 및 -hArg-로 이루어진 염기성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되고, A9, A9′ 및 A9″는 각각 독립적으로 -Leu-, -Nle-, -Met-, -Ala-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, -Tyr-, -Thr-, -Ser-, -Gln-, -Asn-, -Gly-, -Lys-, -Arg-, -hArg-, -Trp-, -Orn- 및 -Trp(For)-로 이루어진 호지성, 중성 또는 염기성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되거나, 또는 아미노산 잔기 유도체 T이다]이고, 단, 일반식(1)에는 하나 이상의 T, -O-Da, O-Db, Da-C(O)- 또는 Db-C(O)-가 존재한다.
  34. 일반식(1)의 폴리펩타이드, 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 광학 활성 이성체와 DPPC, PC, CL, PG, PS, FA 및 TG로 이루어진 그룹으로부터 선택된 지질 또는 지질들의 혼합물과의 복합체 유효량을 포함하는, 호흡 곤란 증후군 치료용 약제학적 조성물.
    상기식에서, X는 수소, C1-5알킬 그룹, C1-10아실 그룹, 아미노산, 디펩타이드 또는 트리펩타이드이고, Y 및 Y′는 각각 독립적으로 결합, -(Ser)n-(여기서, n은 1 내지 3의 정수이다) 또는 T[여기서, T는{여기서, n′는 1 내지 8의 정수이고, W는 -NHC(O)-, -NHCH2-, -C(O)-O-, -OC(O)-, -SC(O)- 또는 -SS-이며, D는또는(여기서, B는 결합, C1-16알킬렌 또는 C2-16알케닐렌이며, B1은 B 또는이고, R1, R2, R3, R4, R5, R6및 R7은 각각 독립적으로 C1-6알킬이다)이다}이다]이거나, X 및 Y가 함께는 Da-C(O)- 또는 Db-C(O)-이고, Q는 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 알콕시 그룹, -O-Da또는 -O-Db이며, Z는 A1내지 A11로 표시되는 아미노산 잔기중의 어느 하나로부터 시작할 수 있는 서열
    의 올리고머 단편으로 이루어진 8 내지 25개 아미노산 잔기의 펩타이드 잔기[여기서, A1, A1′, A1″, A1″′, A4, A4′, A4″, A8, A8′ 및 A8″은 각각 독립적으로 -Glu-, -Asp-, -Ala-, -Gln-, -Asn-, -Gly-, -Ser-, -Thr-, -Lys-, -Arg-, -Orn- 및 -hArg-로 이루어진 친수성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되며; A2, A2′, A2″, A2″′, A3, A3′, A3″, A6, A6′, A6″, A7, A7′, A7″, A10, A10′ 및 A10″는 각각 독립적으로 -Leu-, -Nle-, -Met-, -Ala-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile- 및 -Tyr-로 이루어진 호지성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되거나; 또는 아미노산 잔기 유도체 T이며; A5, A5′, A5″, A11, A11′ 및 A11″는 각각 독립적으로 -Lys-, -Orn-, -Arg- 및 -hArg-로 이루어진 염기성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되고, A9, A9′ 및 A9″는 각각 독립적으로 -Leu-, -Nle-, -Met-, -Ala-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, -Tyr-, -Thr-, -Ser-, -Gln-, -Asn-, -Gly-, -Lys-, -Arg-, -hArg-, -Trp-, -Orn- 및 -Trp(For)-로 이루어진 호지성, 중성 또는 염기성 아미노산 잔기의 그룹으로부터 선택되거나, 또는 아미노산 잔기 유도체 T이다]이고, 단, 일반식(1)에는 하나 이상의 T, -O-Da, O-Db, Da-C(O)- 또는 Db-C(O)-가 존재한다.
  35. 제34항에 있어서, DPPC가 지질의 주요 성분을 구성하는 약제학적 조성물.
  36. 제34항에 있어서, 지질이 DPPC와 PG의 혼합물인 약제학적 조성물.
  37. 제34항에 있어서, 지질이 약 85 내지 100%의 DPPC와 약 0 내지 15%의 PG로 이루어진 약제학적 조성물.
  38. 제34항에 있어서, 폴리펩타이드가 Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-[Nε-HBB-Lys]-Leu-Lys-NH2(서열동정 번호 : 32)인 약제학적 조성물.
  39. 제34항에 있어서, 폴리펩타이드가 Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-[S-HBS-Cys]-Leu-Lys-NH2(서열동정 번호 : 33)인 약제학적 조성물.
  40. 제34항에 있어서, 폴리펩타이드가 Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-[Nε-Trl-Lys]-Leu-Lys-NH2(서열동정 번호 : 37)인 약제학적 조성물.
  41. 제34항에 있어서, 폴리펩타이드의 아미노산이 D 이성체 형태인 약제학적 조성물.
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Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5653685A (en) * 1990-10-10 1997-08-05 Lrt, Inc. Method of providing circulation via lung expansion and deflation
USRE36460E (en) * 1990-10-10 1999-12-21 Life Science Holdings, Inc. Method of providing circulation via lung expansion and deflation
US5272252A (en) * 1991-11-04 1993-12-21 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Synthetic lung surfactant having antioxidant properties
NZ254496A (en) * 1992-07-31 1996-08-27 Merrell Dow Pharma Polypeptides (3-4 amino acids) with antioxidant moieties covalently attached and their use as pulmonary surfactants
EP0886652B1 (en) * 1995-11-20 2002-04-17 Ortho-McNeil Pharmaceutical, Inc. Pulmonary surfactant peptide solubilization process
CA2247876A1 (en) * 1996-03-08 1997-09-12 Ronald M. Klatz Liquid ventilation method and apparatus
AU2001278864A1 (en) * 2000-06-30 2002-01-30 University Of Cincinnati Peptides with antioxidant and antimicrobial properties
GB2368339B (en) * 2000-10-26 2002-09-18 Yissum Res Dev Co Complex incorporating a plurality of antioxidants
AU2002357168A1 (en) * 2001-12-12 2003-07-09 Penn State Research Foundation Surfactant prevention of lung complications from cancer chemotherapy
MXPA04010560A (es) * 2002-04-25 2005-08-15 Scripps Research Inst Tratamiento y prevencion de condiciones pulmonares.
US7290197B2 (en) * 2003-06-03 2007-10-30 Quantum Corporation Correcting data using redundancy blocks
EP1809272A4 (en) * 2004-10-18 2008-01-02 Maroon Biotech Corp METHOD AND COMPOSITIONS FOR TREATING DAMAGES THROUGH FREE RADICALS
US7582312B2 (en) 2004-11-15 2009-09-01 Discovery Laboratories, Inc. Methods to produce lung surfactant formulations via lyophilization and formulations and uses thereof
US7464012B2 (en) * 2004-12-10 2008-12-09 L'air Liquide, Societe Anonyme A Directoire Et Conseil De Surveillance Pour L'etude Et L'exploitation Des Procedes Georges Claude Simplified process simulator
SI1841458T1 (sl) 2005-01-06 2012-04-30 Discovery Lab Inc Zdravljenje s predpisanim odmerjanjem surfaktanta za zdravljenje ali preprečevanje bronhopulmonalne displazije
WO2007001094A1 (ja) * 2005-06-29 2007-01-04 Sannamu Lee 人工肺サーファクタント組成物
KR20090060348A (ko) * 2006-09-19 2009-06-11 디스커버리 래보래토리스, 인크. 폐 계면활성제 제제 및 점액 클리어런스 촉진 방법
WO2013188016A2 (en) 2012-05-04 2013-12-19 Discovery Laboratories, Inc. Surfactant therapy for exposure to ionizing radiation
CN111568853B (zh) * 2020-04-30 2023-07-28 杭州濡湜生物科技有限公司 一种新型肺部智能释药系统

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4643988A (en) * 1984-05-15 1987-02-17 Research Corporation Amphipathic peptides
US4912038A (en) * 1984-12-11 1990-03-27 California Biotechnology Inc. Recombinant DNA sequence encoding alveolar surfactant protein
US4933280A (en) * 1984-12-11 1990-06-12 California Biotechnology Inc. Recombinant DNA sequence encoding Alveolar Surfactant Protein
US4659805A (en) * 1984-12-11 1987-04-21 California Biotechnology, Inc. Recombinant alveolar surfactant protein
US5104853A (en) * 1984-12-11 1992-04-14 California Biotechnology Inc. Alveolar surfactant proteins having cys to ser mutations
US4705684A (en) * 1985-05-31 1987-11-10 The University Of Tennessee Research Corporation Synthetic M proteins - streptococci type 6
FR2586587B1 (fr) * 1985-08-30 1987-10-23 Adir Nouveaux surfactants artificiels, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
US5055553A (en) * 1985-09-26 1991-10-08 Genetics Institute Inc. Low molecular weight pulmonary surfactant proteins
US4882422A (en) * 1985-10-24 1989-11-21 Genetics Institute, Inc. Pulmonary surfactant proteins
US4918161A (en) * 1985-09-26 1990-04-17 Genetics Institute, Inc. Low molecular weight pulmonary surfactant proteins
EP0273916A4 (en) * 1986-05-06 1989-11-30 Childrens Hosp Medical Center LUNG HYDROPHOBES, PROTEIN ASSOCIATED TO A SURFACE ACTIVE MEDIUM OF 6000 DALTON MOLECULAR WEIGHT AND MULTIMEREOUS ITEMS.
WO1988003170A1 (en) * 1986-10-24 1988-05-05 Whitsett Jeffrey A Pulmonary hydrophobic surfactant-associated proteins
JPH01501282A (ja) * 1986-12-08 1989-05-11 ホイツトセツト，ジエフリー　エイ． 肺胞疎水性界面活性物質関連タンパク質
WO1989000167A1 (en) * 1987-07-01 1989-01-12 Kabigen Ab Proteins and protein compositions and their use
JP2602968B2 (ja) * 1987-11-04 1997-04-23 カリフォルニア バイオテクノロジー インコーポレイテッド 肺胞の界面活性タンパク類
US5164369A (en) * 1988-01-06 1992-11-17 The Scripps Research Institute Pulmonary surfactant protein and related polypeptide
US4861756A (en) * 1988-03-08 1989-08-29 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Synthetic pulmonary surfactant
US5114921A (en) * 1988-05-27 1992-05-19 The Children's Hospital Of Philadelphia Amphiphilic peptides and use thereof
NZ229737A (en) * 1988-07-01 1991-05-28 Merrell Dow Pharma Polypeptides and derivatives of them with lung surfactant properties and their preparation
SE8803713D0 (sv) * 1988-10-18 1988-10-18 Kabigen Ab Biologically active lipoprotein and its use
US5006343A (en) * 1988-12-29 1991-04-09 Benson Bradley J Pulmonary administration of pharmaceutically active substances
US5134129A (en) * 1989-03-15 1992-07-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods employing unique mixtures of polar and neutral lipids for surfactant replacement therapy
CA2049301A1 (en) * 1989-03-31 1990-10-01 Steven Shak Method for treating respiratory distress syndrome
EP0458167B1 (en) * 1990-05-21 1997-04-23 Abbott Laboratories Fatty acid-pulmonary surfactant conjugates
US5272252A (en) * 1991-11-04 1993-12-21 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Synthetic lung surfactant having antioxidant properties

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