HUT66424A - Surfactants of antioxidant activity - Google Patents
Surfactants of antioxidant activity Download PDFInfo
- Publication number
- HUT66424A HUT66424A HU9401293A HU9401293A HUT66424A HU T66424 A HUT66424 A HU T66424A HU 9401293 A HU9401293 A HU 9401293A HU 9401293 A HU9401293 A HU 9401293A HU T66424 A HUT66424 A HU T66424A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- leu
- amino acid
- formula
- group
- lys
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/785—Alveolar surfactant peptides; Pulmonary surfactant peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/16—Central respiratory analeptics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Anti-Oxidant Or Stabilizer Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
A találmány tárgya az (1) általános képletű vegyületek, ahol az általános képletben
X jelentése hidrogénatom, 1-5 szénatomszámú alkilcsoport, 1-10 szénatomszámú acil-csoport, valamely aminosav maradék, dipeptid-maradék vagy tripeptid-maradék;
Y és Y' mindegyikének jelentése egymástól függetlenül egy kötés, -(Ser)n- általános képletű csoport, ahol n jelentése 1-3 közötti egész szám vagy
T általános képletű csoport, ahol az általános képletben n' 1-8 közötti egész szám;
W jelentése -NHC(0)-csoport, NHCH2-csoport, -0C(0)-csoport, -C(0)O-csoport, -SC(0)-csoport vagy -SS-csoport; és
D jelentése (Da) általános képletű csoport vagy (Db) általános képletű csoport, ahol
B jelentése egy kötés, 1-16 szénatomszámú alkilén-csoport vagy 2-16 szénatomszámú alkenilén-csoport és B^ jelentése B általános képletű csoport vagy (E) általános képletű csoport, ahol az általános képletben R^, R2, R3, R4, R5, Rg és R-? mindegyikének jelentése egymástól függetlenül 1-6 szénatomszámú alkilcsoport; vagy
X és Y jelentése együttesen Da-C(O)- általános képletű csoport vagy Db-C(O)- általános képletű csoport;
Q jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport, alkil-amino-csoport, alkoxi-csoport, -O-Da általános képletű csoport vagy -O-Db általános képletű csoport;
Z jelentése 8-25 aminosav maradékból álló peptid, amely az alábbi oligomer-fragmenst tartalmazza ’Al“A2_A3A4’A5A6’A7’A8_A9’A10’All_Al'~A2'A3'A4'A5'A6' A7'-A8'-A9'-A10'- A11'- A1-A2-A3~A4’A5’A6“A7’A8’A9’ A10~A11“A1'''-a2'’’és amely bármely A4-A44 aminosav-maradékkal kezdődhet, ahol az általános képletben
A|, A^', A^, ', A4, A4', A4, Ag, Ag', Ag', és Ag jelentése egymástól függetlenül lehet valamely hidrofil aminosav-maradék, amoly -lehet——--Alá-. -Gin--—=Asn-. ~Gly-„..„
- —és—-hArg.-^— ahol az általános képletben a2' A2 ' ' A2' a2'''' A3 ' A3'· A3' A6' A6’' A6'' A7':A7'' A7A10' Α1θ' ®s Α1θ jelentése lehet lipofil aminosav-maradék, aaelye-k-lehetnek , -Nle- ·,—Met—r -Alá - τ =^lva·- , — I le- , es -Tyr- vagy T ált alános- képle tű aminos a v -maradék származék;
Αβ, Ας', Α^ , Α-q' és Α-^ jelentése egymástól függetlenül lehet bázisos aminosav-maradék, amely lehet például -Lys-, ü)rn-, -Arg-,- vagy -hArg- ;
Ag, Ag', Ag jelentése egymástól függetlenül lehet lipofil semleges vagy bázisos aminosav-maradék,
-Thr-, -Ser-, -Gin-, -Asn-, -G_ly_x-r·—eys’A -Arg-, -hArg-, -Trp-, -Orn-,^Trp(Tor) - vagy aminosav maradék, amely a T -*$3Xaiánes·-· képié tű csoport;...........
és ezek lipidekkel vagy lipid keverékkel képzett komplexei.
A találmány szerinti vegyületek tüdő felületaktív anyagként alkalmazhatók és gyógyszerészeiben a légzőrendszeri fájdalom szindróma kezelésére használhatók.
?lb.g. & k. Budapesti N<?ní»ctkí,zi
Ssafea d a 1 m iIroda H-lOöl Ludnpcst. Dalszínház «. 19. Telefon: 155-3733, Fax: 153-3664
2 9 3 j 9 4 KÖZZÉTÉTELI PÉLDÁNY
H Sito C oH
C o y K T- I /I θ
Atioxidáns tulajdonságú felületaktív anyagok \ j ' V
Merrell Dow Pharmaceuticals Inc., CINCINNATI, Ohio,
AMERIKAI EGYESÜLT ÁLLAMOK
Feltalálók: MCLEAN, Larry R., CINCINNATI, Ohio,
PAYNE(Marguerite H., MADISON, Wisconsin,
AMERIKAI EGYESÜLT ÁLLAMOK
A «ftamaatköaj bejelentés napja: 1992. 10. 13.
Elsőbbsége: 1991. 11. 04. (789,918)
AMERIKAI EGYESÜLT ÁLLAMOK
A nemzetközi bejelentés száma: PCT/US92/08728
A nemzetközi közzététel száma: WO 93/08824
A találmány tárgya eljárás polipeptid típusú anyagok előállítására, amelyek antioxidáns hatásúak és szintetikus tüdő felületaktív anyagként alkalmazhatók. A találmány tárgya továbbá eljárás a fenti polipeptidek lipidekkel történő keverékeinek
I «
előállítására, valamint eljárás gyógyszerkészítmény előállítására, amely emlősökben légzőrendszeri betegség, illetve fájdalom szindróma kezelésére alkalmas.
A tüdő igen érzékeny egyensúlyban működik toxikus oxidáns hatóanyagok és védő antioxidáns rendszer aktivitásának egyensúlyában. Amennyiben ebben a rendszerben az egyensúly megszűnik vagy ha az oxidánsok mennyisége megnövekszik, vagy az antioxidáns rendszer védőhatása nem működik, ez a tüdőben patofiziológiás következményekkel járhat, és a tüdő rendellenes működése áll be. Az egyik ilyen típusú rendellenes tüdő működés, amely az oxidánsok mennyiségének növekedéséből származik, a légzőrendszervi fájdalom szindóma (RDS).
A csecsemőkori légzőrendszervi fájdalom szindróma a 28 napos életkorig csecsemőknél az elhalálozás elsődleges oka. Ez a betegség világszerte 100 csecsemő közül körülbelül 1 csecsemőt érint és körülbelül a betegek 10%-a meghal. A szindróma ritkán fordul elő időben született csecsemőknél, általában a koraszülött, illetve az alacsony testtömeggel született gyerekeket érinti (2 kg testtömeg alattiak). A felnőttkori RDS hasonló klinikai jellemzőkkel rendelkezik és patofiziológiája is megfelel a csecsemőkori betegségnek és ezt is intenzív osztályon történő hasonló kezeléssel gyógyíthatják. A felnőttkori megbetegedés különböző kórokoki következtében jöhet létre és általában a tüdő károsodásából ered, amely lehet például diffúz fertőzés, gyomortartalom vagy emésztőrendszer tartalom tüdőbe kerülése, irritáns anyagok és toxinok belégzése és tüdőödéma, amely különféle okokból jöhet létre, mint például narkotikum túladagolás.
Az RDS betegség amiatt alakul ki, mivel a tüdő felületaktív anyaga, amely az alveoli (mirigy) tüdorészt borítja, ahol a gázcsere megtörténik, nem megfelelően működik vagy hiányzik és általában a betegség oxigén alapú szabad gyökök jelenlétével magyarázható, amelyeket összefoglalóan oxidánsoknak nevezünk. Ezek lehetnek például szuperoxid-gyökök, hidroxil-gyökök, hidrogén-peroxid, amely hidroxil-gyökök képzésére alkalmas és lipid-peroxidok, amelyek a sejtsérülés esetén alakulhatnak ki (Heffner, és munkatársai., Am. Rév. Respir, Dis. 104: 531-554, 1989); (Halliwell, FASEB J. 1: 358-364, 1987).
A találmány szerinti szintetikus tüdő felületaktív polipeptideket, ezek antioxidáns részei nélkül leírták az 1988. december 9-én benyújtott 282,795 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben és az 1988. július 1-jén benyújtott 214,228 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben, amelyeket referenciaként adunk meg. Azonban a találmány tárgya olyan hatásos szintetikus tüdőfelülataktív anyag, amely antioxidáns jellemzőket visel, azaz képes az érzékeny vegyületek oxidánsokká történő oxidációját gátolni.
Néhány szintetikus tüdőfelületaktív készítményt már adagoltak terápiás szerként, például E vitamint felületaktív készítményekhez külön komponensként (4,765,987 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés; WO 90/11768 számú PCT bejelentés; WO 90/07469 számú PCT). A találmány szerinti készítményben az antioxidánsok nem külön komponensek, hanem a polipeptidbe foglaltak. Az, hogy az antioxidánst a polipeptidbe építjük, azzal az előnnyel jár, hogy egy háromkomponensű rendszer helyett (lipid, polipeptid és antioxidáns) csak egy kétkomponensű rend4 ♦ · 4 · 4* 4
4« 4·· Μ·4
44444 » ·· szert kell alkalmaznunk. Ez jelentős előnyt jelent abban az esetV ben, amikor a piacra kerülő gyógyszerkészítmény tesztvizsgálata megtörténik, ugyanis ennek során a komponensek mindegyikére különféle dózisok és készítményformák analízisét kell elvégezni. Ezen túlmenően a kétkomponensű készítmény ipari termelés során könnyebben előállítható.
A találmány szerinti polipeptidek önmagukban alkalmazhatók lipiddel keverékben vagy lipid keverékekkel képzett elegy formában is alkalmazhatók, amely esetekben a polipeptid a felületaktív keverék kisebb részét képezi. A találmány szerinti készítményeket igen nagy tisztaságban és standard eljárással állíthatjuk elő, mivel ezek szintetikus komponensek meghatározott keverékei. Ezen túlmenően a készítmény komponensei nem állati eredetűek, amely minimálisra csökkenti a vírussal és baktériumokkal történő fer-tőzés veszélyét.
A találmány tárgya szintetikus tüdő felületaktív anyag, amely polipeptidek és lipidek elegyéből áll, ahol a polipeptid az (1) X-Y-Z-Y'-Q általános képletű vegyület vagy ennek optikailag aktív izomerjei vagy gyógyszerészetileg elfogadható sói, ahol az általános képletben
X jelentése hidrogénatom, 1-5 szénatomszámú alkilcsoport, 1-10 szénatomszámú acil-csoport, valamely aminosav maradék, dipeptid-maradék vagy ttripeptid-maradék;
Y és Y' mindegyikének jelentése egymástól függetlenül egy kötés, -(Ser)n- általános képletű csoport, ahol n jelentése 1-3 közötti egész szám vagy
T általános képletű csoport, ahol az általános képletben n' 1-8 közötti egész szám;
« · · ·« ·· ·«« *· » « »···· « » ·
W jelentése -NHC(0)-csoport, NHCH2-csoport, -0C(0)-csoport, -C(0)0-csoport, -SC(0)-csoport vagy -SS-csoport; és
D jelentése (Da) általános képletű csoport vagy (Db) általános képletű csoport, ahol
B jelentése egy kötés, 1-16 szénatomszámú alkilén-csoport vagy 2-16 szénatomszámú alkenilén-csoport és Bjelentése B általános képletű csoport vagy (E) általános képletű csoport, ahol az általános képletben R1( R2, R3, R4, R5, R5 és R7 mindegyikének jelentése egymástól függetlenül 1-6 szénatomszámú alkilcsoport; vagy
X és Y jelentése együttesen Da-C(O)- általános képletű csoport vagy Db-C(O)- általános képletű csoport;
Q jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport, alkil-amino-csoport, alkoxi-csoport, -O-Da általános képletű csoport vagy -O-Db általános képletű csoport;
Z jelentése 8-25 aminosav maradékból álló peptid, amely az alábbi oligomer-fragmenst tartalmazza -A1_A2_A3_A4-A5-A6_A7_A8_A9 A10-All_Al' A2'“A3'_A4'~A5'_A6'~ a7 ' - a8 ' - A9 ' - A10 ' _A11' A1 ' A2 ’’ A3 ’ A4 ’A5 ’’ ’A6 A7 'A8 A9 ’ A10 A11 A1 A2 és amely bármely Α^-Α·^ aminosav-maradékkal kezdődhet, ahol az általános képletben
A-p A^ ' , A| , A^ ' ' ', A4 , A4 ' , A4 , Ag , Ag ' , Ag ' , és Ag jelentése egymástól függetlenül lehet valamely hidrofil aminosav-maradék, amely lehet Glu-, Asp-, -Alá-, -Gin-, -Asn-, -Gly-, -Asn-, -Gly-, -Ser-, Thr-, -Lys-, -Arg-, -Orn-, és -hArg-;
A2 , A 2 ' r A2 , A2 ' ' ' r Αβ , Αβ 1 , Αβ , Αθ , Αθ 1 , Αθ 1 , Α·? , Αγ ' , Α·? , Α10' Α10' θε Α1θ íelentése lehet lipofil aminosav-maradék, amelyek lehetnek -Leu-, -Nle-, -Met-, -Alá-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, és -Tyr- vagy T általános képletű aminosav-maradék származékok;
A5, A5', Αβ, Αχχ, Αχχ' és Αχχ jelentése egymástól függetlenül lehet bázisos aminosav-maradék, amely lehet például -Lys-, -Orn-, -Arg-, vagy -hArg-;
Ag, Ag', Ag jelentése egymástól függetlenül lehet lipofil semleges vagy bázisos aminosav-maradék, amelyek lehetnek -Leu-,
-Nle-,
-Thr-,
-Trp-,
-Met-, -Alá-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, -Tyr-,
-Ser-, -Gin-, -Asn-, -Gly-, -Lys-, -Arg-, -hArg-,
-Orn-, -Trp(For)- vagy aminosav maradék, amely a T általános képletű csoport;
azzal a feltétellel, hogy legalább egy (T), -O-Da, -Ο-Db, -(O)C-Da vagy -(0)-C-Db általános képletű csoport található az (1) általános képletű vegyületben.
A lipid komponens egy vagy több típusú alkotóelem együttese, amelyek általában természetes tüdőfelületaktív anyagok.
A polipeptid-lipid komplexek és gyógyszerkészítmények, amelyek ezekből készültek, alkalmasak emlősökben a légzőrendszeri fájdalom szindróma kezelésére.
Az ábrák rövid leírása:
Az 1. ábrán bemutatjuk az WMAP10 anyag szerkezeteit, illetve az ezekből leszármaztatott találmány szerinti antioxidáns peptidek szerkezetét.
A 2. ábrán bemutatjuk a találmány szerinti peptidek és antioxidáns peptidek CD spektrumát trifluor-etanol oldószerben (TFE) és vízben.
A 3. ábrán bemutatjuk a peptidek és peptid antioxidánsok által kifejtett lipid peroxidálás inhibiáló hatást (·) vonallal jelöljük valamennyi ábrán a kontroll csoportot; WMAP 10 panel: (□) BHT (butil-hidroxi-toluol) (1 μg/ml) , (\7) 1,5% (1,5 rész peptid: 100 rész DPPC), (▼) 4,5%; HBB-LysMAP10 panel;
(V) 0,6%, (▼) 1,2%, (P) 2,4%, () 3,6%, (Δ) 4,8%; HBS-CysMAPlO: (V) 0,4%,
() 0,8%, (▼) 1,5%, (□) 3%.
A 4. ábrán bemutatjuk a jelzett felületaktív keverékekre a reprezentatív nyomás-térfogat görbét (). A pont nélkül jelzett görbe a teljesen megfelelő működésű tüdőnek felel meg (a lég baloldalibb görbe) és a legjobboldalibb ilyen görbe pedig megfelel a károsan működő mosott tüdőnek.
A találmány szerinti leírásban a természetesen előforduló aminosavak leírására alkalmazott szokásos rövidítéseket alkalmazzuk:
Alá | vagy | A - | alanin |
Val | vagy | V - | valin |
Leu | vagy | L - | leucin |
He | vagy | I - | izoleudin |
Phe | vagy | F - | fenil-alanin |
Trp | vagy | w - | triptofán |
Met | vagy | M - | metionin |
Ser | vagy | s - | szerin |
Tyr | vagy | Y - | tirozin |
Asp | vagy | D - | aszpargánsav |
G1U | vagy | E - | glutaminsav |
Gin | vagy | Q ~ | glutamin |
Thr | vagy | τ - | treonin |
Gly | vagy | G - | glicin |
Lys | vagy | K - | lizin |
Arg | vagy | R - | arginin |
Asn | vagy | N - | aszparagin |
Nle | - norleucin | ||
Orn | - ornitin |
hArg - homoarginin
Nna - norvalin
Trp(For) - N-fomril-Trp
A természetes aminosavak a glicin kivételével királis szénatomot tartalmaznak. Hacsak másképp nem jelöljük, az itt megadott optikailag aktív aminosavak L-konfigurációjúak. Előnyösen a polipeptidben található aminosavak közül valamennyi vagy D- vagypedig valamennyi L-konfigurációjú. Amennyiben a találmány szerinti antiooxidáns csoportot hozzákötjük a peptidhez, sztereoizomerek kelet- kezhetnek. A jelen találmány tárgykörébe beleértjük ezeket az izolált formájú sztereoizomereket, illetve ezek keverékeit is. Mint általában szokásos, a találmány szerinti leírásban a peptideket úgy ábrázoljuk, hog*y a baloldali végcsoport az amino-terminális végcsoport és a láncon a jobboldali végcsoport a karboxil csoport terminális-végcsoport.
Amennyiben két vagy több aminosavat peptid formává kapcsolunk, és a víz elemeit eltávolítjuk, az egyes aminosavakból maradt részeket aminosav maradékoknak nevezzük. Ennélfogva az « «· *·· « « ···«· V · * ··· « «4 *·« -<►· aminosav maradék elnevezés alatt olyan aminosavat értünk, amely a terminális aminocsoporton hidrogénnel kevesebb mint az eredeti aminosav és/vagy a terminális karboxilcsoporton az eredeti aminosavhoz hasonlítva egy hidroxilcsoporttal kevesebb csoport. A szokásos nevezéktannak megfelelően, amennyiben egy (-) szaggatott vonalat alkalmazunk az aminosav vagy aminosav maradék hárombetűs kódjele előtt, ezt azt jelenti, hogy az aminosavból hidrogénatom hiányzik és/vagy amennyiben a fenti kód mögött alkalmazzuk ugyanezt a jelet, ez a hidroxilcsoport hiányát jelzi.
A leírásban az alkilcsoport elnevezés alatt egyenes vagy elágazó szénláncú szénhidrogén-csoportokat értünk, amelyek lehetnek például metilcsoport, etilcsoport, propilcsoport, butil-csoport, izopropil-csoport, terc-butil-csoport, szek-butil-csoport, izopentil-csoport, 1-metil-butil-csoport és hasonló csoportok, attól függően, hogy hány szénatomot tartalmaz a megadott alkilcsoport. Az acilcsoport elnevezés alatt a leírásban szerves savból levezethető csoportokat értünk, amelyeket úgy képezünk, hogy a sav vegyületből a hidroxilcsoportot elhagyjuk; általános képlete RCO-csoport, ahol R jelentése lehet alifás-csoport, aliciklusos-csoport, aromás-szénhidrogén-csoport vagy hidrogénatom (formil-csoport). Az R csoport szubsztituált lehet. Például egy ilyen acil-csoport a szukkcinil-csoport.
A találmány szerinti»vegyületekben az X csoport jelentése lehet hidrogénatom, 1-5 szénatomszámú alkilcsoport, 1-10 szénatomszámú acil-csoport, valamely aminosav, valamely dipeptid vagy tripeptid. Bármely aminosav, dipeptid vagy tripeptid lehet az X csoport, amely nem befolyásolja az itt leírt polipeptid funkcióját. Az aminosav dipeptid vagy tripeptid az Y vagy amennyiben Y
4 4 4 4· 4 · 4 ··· 4444
4*44 4 « 44 »44 a *« *444· jelentése egy kötés, a Z csoporthoz bármely alkalmas eljárással, mint például szilárd fázisú sorrendi kapcsolási eljárással, kapcsolható amelyet a későbbiekben írunk le. Amennyiben X jelentése 1-5 szénatomszámú alkilcsoport, az alkilcsoport az Y csoporthoz vagy amennyiben Y jelentése egy kötés, a Z csoporthoz bármely alkilezési eljárással kapcsolható. Amennyiben X jelentése 1-10 szénatomszámú acil-csoport, az acil-csoport az Y csoporthoz, vagy amennyiben Y jelentése egy kötés, a Z csoporthoz bármely megfelelő acilezési eljárás segítségével kapcsolható.
A találmány szerinti vegyületben Y és Y' mindegyikének jelentése egymástól függetlenül lehet egy kötés, 1-3 szerin-aminosav maradék vagy származékká alakított T aminosav. Amennyiben Y vagy Y' jelentése 1-3 szerin-savmaradék, a szerin-maradékokat a Z csoporthoz bármely alkalmas eljárással kapcsolhatjuk, mint például szilárd fázisú sorrendi eljárás segítségével, amelyet a későbbiekben írunk le. T ugyancsak kapcsolható a Z polipeptidhez, (minthogy ez egy származékká alakított aminosav), bármely alkalmas eljárás segítségével, mint például szilárd fázisú sorrendi kapcsolási eljárással.
A T csoport jelentése a csatolt ábrákon (T) általános képlettel jelzett csoport, ahol az általános képletben n' jelentése 1-8 közötti egész szám, előnyösen 1-4 közötti egész szám; ♦
W jelentése -NHC(0)-csoport, -NHCH2-csoport, -OC(0)-csoport, -C(0)0-csoport, SC(0)-csoport vagy -SS-csoport, előnyösen -NHC(0)-csoport vagy -SS-csoport; és
D jelentése a (Da) általános képletü csoport vagy a (Db) általános képletü csoport, ahol az általános képletben B jelen11 • * · · »··· · « · V · · · « « · · ··· ··· « • ···· · * · · ·· · · *· « * · tése egy kötés, 1-16 szénatomszámú alkilén-csoport vagy 2-16 szénatomszámú alkenilén-csoport és B·^ jelentése (B) általános képletű csoport vagy (E) általános képletű csoport, ahol az általános képletben , R2, R3, R4, R5, Rg és R7 jelentése egymástól függetlenül 1-6 szénatomszámú alkilcsoport. Mint korábban leírtuk, az alkilcsoport egyenes vagy elágazó szénláncú alkilcsoport lehet és az R^-R-y csoportok mindegyike különféle alkilcsoport lehet, amelyek 1-6 szénatomot tartalmazhatnak. Előnyösen R^, R2, Rg és R7 jelentése egyenként terc-butil-csoport és R3, R4, valamint R5 jelentése metilcsoport. Az általános képletben azok a vegyületek előnyösebbek, amelyekben (D) jelentése (Da) általános képletű csoport és ezek előnyösebbek a hasonló vegyületekkel szemben, amelyekben ugyanez a csoport a (Db) általános képletű csoport. Ugyancsak előnyösebbek a B csoportot tartalmazó vegyületek, mint a B^ csoportot tartalmazóak. B jelentése előnyösen egy kötés.
A (D) képletű csoportot a leírásban antioxidáns-csoportnak nevezzük, mivel úgy véljük, hogy a (D) általános képletű csoport a molekula azon része, amely a polipeptidnek az antioxidáns hatást kölcsönzi. Ennélfogva a (D) általános képletű csoport valamilyen kapcsolót igényel, amely a polipeptid lánchoz kapcsolja, így amikor a polipeptidhez kapcsolt antioxidáns-csoport elnevezésről beszélünk, ebbe mindig beleértjük a megfelelő kapcsoló csoportokat, például a W, a -C(0)- vagy az -O-csoportot.
Az egyik eljárás, amelynek során a (T) általános képletű csoportot előállítjuk az, amelyben az aminosav oldalláncát módosítjuk, azon aminosavét, amely az antioxidáns-vegyület kapcsolását biztosítja. Az ilyen kapcsolásra alkalmas aminosavak • « • ···· · · · · ·♦* · ·4 *«« ♦ · jellemzően az oldalláncúkban valamely funkciós csoportot tartalmaznak. Ilyen aminosavak például az aminocsoportot tartalmazó oldalláncú aminosavak (Ne), mint például a lizin vagy az ornitin; továbbá az oldalláncon hidroxilcsoportot tartalmazó aminosavak, mint például a szerin és a treonin; az oldalláncon szulfhidril-csoportot tartalmazó aminosavak, mint például a cisztein és a homocisztein; és az oldalláncon karboxilcsoportot tartalmazó aminosavak, mint például az aszparaginsav és a glutaminsav. Ugyancsak alkalmazhatók aminosav származékok is, amelyek oldalláncon funckiós csoportot tartalmaznak, illetve ezek közül számos kereskedelemben is kapható.
A (T) általános képletű csoport kialakítására számos eljárás ismert. Például az oldalláncon található aminocsoport, az oldalláncon található alkoholcsoport vagy az oldalláncon található szulfhidril-csoport egy aminosavban vagy aminosav származékban acilezhető, megfelelő acilezőszer segítségével, amely acilezőszert antioxidáns-vegyületekből képeztünk. Az antioxidáns-vegyületet úgy alakítjuk acilező szerré, hogy például ebből szimmetrikus anhidridet vagy aktív észtert képzünk, amely lehet például N-hidroxi-benzotriazol-észter (HOBt-észter). Ezután az acilezőszert a nem védett funkciós csoporttal rendelkező célhelyen a molekulához kötjük. Ezt a kapcsolást előnyösen szilárd fázisú peptidszintézis eljárással végezzük, amelynek során az aminosav, amelyhez az antioxidáns-csoportot kívánjuk kapcsolni, a gyantához kapcsolt peptid része.
Az egyes aminosavakat ugyancsak módosíthatjuk azelőtt, mielőtt a peptidláncba kapcsoljuk, például észterezés, reduktív alkilezés, stb. segítségével. Az aminosavak és aminosav «« · · β «« ·*···«··· « « ···« · · · · ··« « ·« ««· ♦ · származékok, amelyek funkciós csoportot tartalmaznak, más módosítása a szakirodalomban ugyancsak ismert.
A aminosavakkal vagy aminosav származékokkal a találmány szerinti eljárásban reagáltatható előnyös antioxidáns vegyületek példái az alábbiak:
1) HBB
2) HBP
3) HBC
4) HBA
5) di-HBA
6) Trl
7) HBB-al
8) HBB-ol
9) HBS
3,5-di-tere-butil-4-hidroxi-benzoesav
3-(3',5'-di-terc-butil-4-hidroxi-fenil)-propionsav
3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-fahéjsav
2-(3',5'-di-terc-butil-4-hidroxi-fenil)-ecetsav
2,2-di-(3',5'-di-tere-butil-4-hidroxi-fenil)-ecetsav
6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametil-kromán-2-karbonsav, Trolox
3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-benzaldehid
3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-benzilalkohol
3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-tiofenol
Amennyiben az aminosav kapcsoló csoportja szulfhidril-csoport, előnyösen HBS, HBB, HBP, HBA, di-HBA és Trl alkalmazható. Amennyiben az aminosav funkciós csoportja alkoholcsoport vagy aminocsoport, előnyösen HBB, HBP, HBC, HBA, di-HBA és Trl kapcsoló vegyületeket alkalmazunk. A HBB-al kapcsoló komponens az aminocsoport oldalláncok reduktív alkilezésére alkalmazható és a HBB-ol reagens az oldalláncok savas csoportjaink, illetve a karboxilcsoport végcsoportoknak észterezési reakciójában alkalmazható. »
A fent leírt antioxidáns-vegyületek kereskedelemben kaphatók, vagy szintézisük szakirodalomban ismert. Például a
3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-fenilecetsav előállítási eljárását leírták Izv. Akad. Nauk SSSR, Ser. Khim., 358, 1965 közleményben és a 3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-benzaldehid előállítási eljá«<* • · · • · · · « ·« • · * ··« ··« · • ···« · · · «
- 14 - ...........
rását leírták a J. Org. Chem., 22, 1333, 1957 közleményben. A találmány szerinti eljárásban általában alkalmazható minden olyan antioxidáns-vegyület, amely (1) kapcsolható a találmány szerinti polipeptidhez, (2) a polipeptidhez kapcsolt állapotban antioxidáns hatást fejt ki és (3) lehetővé teszi, hogy a polipeptid a fent leírtak szerint működjön.
Mint korábban leírtuk, amikor az antioxidáns-vegyület és a fentiek szerint az aminosav vagy aminosav származék reakcióba lép egymással, aminosav származék keletkezik, amely aminosav származék maradékot a (T) általános képlettel jelzünk az (1) általános képletben. A (T) általános képletű és egyéb csoportok jelentése az alábbi lehet:
-[Ne-HBB-Lys]-csoport, amely a (T^) képletű csoport. Megjegyezendő, hogy az Ne- jelentése az oldallánc aminocsoportja, amelyhez a HBB molekula kapcsolódik (a kapcsolódás miatt hidroxilcsoportja nincs jelen);
-[S-HBS-Cys]- csoport, amely azt jelenti, hogy a HBS-vegyület (a szulfhidril-csoport hidrogénje nélkül) a cisztein-maradék oldalláncához kapcsolódott a kénatomon keresztül és a (T2) képletű csoport;
- [O-HBB-Ser]-csoport, amely azt jelenti, hogy a HBB-vegyület (hidroxilcsoport nélkül) a szerin-maradék oldalláncának oxigénjéhez kapcsolt; és a (T^)*képletű csoport;
HBC-Leu-csoport, amely azt jelenti, hogy a HBC-vegyület (hidroxilcsoport nélkül) kapcsolt egy leucin-maradék a-aminocsoportjához és a (T4)-csoport;
Na-Fmoc-Ne-Boc-Lys[Ne-HBB-al]-csoport, amely azt jelenti, hogy a lizin aminosav, amelyben az Na Fmoc-csoporttal védett, az Ne ·» ·-»···♦ · ·· · · t ·· • · · ·»· ♦·· · • · · ♦ · · · · · ··« « · · «·· · ·
Boc-csoporttal védett és HBB-al vegyület (az oxigénatom nélkül) kapcsolt az Ne-helyzetben és a (T5) képletű csoport;
Fmoc-GluÜbHBB-észter]-csoport, amely azt jelenti, hogy az Na helyzetben Fmoc-csoporttal védett glutaminsav és HBB-ol (a hidroxilcsoport nélkül) kötött egymáshoz a glutaminsav oldallánc karboxilcsoportján át és így észért képez, és a (Tg) képletű csoport;
Trl-Leu-csoport, amely azt jelenti, hogy a trolox (a hidroxilcsoport nélkül) kapcsolt egy leucin-maradék a-aminocsoportjához és ez a (T7) képletű csoport.
Amint ezt például a Trl-Leu esetben előfordul, az antioxidáns-egység (ebben az esetben olyan, amelyben D jelentése és B jelentése egy kötés, egy karbonil-csoporttal együtt (C(0)-) kapcsolható a Z polipeptid a-amino-terminális csoportjához, azaz X és Y együttes jelentése az általános képletben Db-C(0)-általános képletű csoport). Ezen túlmenően az antioxidáns-egység, azaz az (Da) vagy a (Db) általános képletű csoport kapcsolható a karboxilcsoport terminális csoporthoz (-COOH), és így egy -C(0)-0-Da vagy -C(O)-O-Db általános képletű terminális csoport képezhető, ahol a vegyületben Q jelentése -O-Da általános képletű csoport vagy -Ο-Db általános képletű csoport. Az antioxidáns-vegyületből acilezőszert képezhetünk, amint ezt korábban leírtuk, és ezt az acilezőszert bármely terminális csoporthoz kapcsolhatjuk.
Az antioxidáns-egység a polipeptid Z terminális csoportjai közötti oldalláncokhoz kapcsolható úgy, hogy az aminosavakat (T) általános képletű formává módosítjuk vagy legalább egy terminális csoporton a polipeptidhez kapcsolható. Amennyiben az anti-oxidáns-egységet a terminális csoportok között egy oldallánchoz « · ««*«· ·«« · f·· • · · »99 ·*♦* • ····· · *« «»« ♦ ·· «·· «« kapcsoljuk., ezt előnyösen a peptid lipofil részéhez kötjük, amely az A2, A2', A2, A2''', A3, A3', A3, Ag, Ag', A7, A7', A7, Ag, Ag' , Ag, A10, A10' vagy Alo csoport, abból a célból, hogy a peptid konformációját megőrizzük. A Z polipeptidhez egy vagy több antioxidáns-csoportot kapcsolhatunk.
A találmány szerinti polipeptideket számos szakember által ismert eljárással előállíthatjuk, mint például oldatban végzett eljárás segítségével. Az előállításra előnyösen alkalmazható eljárás a szilárd fázisú sorrendi előállítási technológia, amelyben automatikus módszert alkalmazhatunk, például ABI peptidszintetizátort használhatunk. A szilárd fázisú sorrendi eljárásban az alábbi lépéseket hajtjuk végre: (1) az első aminosavat, amely védett α-aminocsoportot tartalmaz, a gyanta hordozóhoz kapcsoljuk; (2) a második aminosav karboxilcsoportját, amely aminosav védett α-aminocsoportot tartalmaz, aktiváljuk; (3) az első aminosavról a védőcsoportot eltávolítjuk olyan reagens alkalmazásával, amely lehetővé teszi, hogy az eltávolítási reakciónak során az első aminosav a gyantához kapcsolt állapotban maradjon; és (4) az első aminosav a-aminocsöpörtja között és a második aminosav aktivált karboxilcsoportja között kapcsolási reakciót végzünk. Ezeket a reakciólépéseket mindenegyes új aminosav-maradék esetében megismételjük, és így egy peptidet állítunk elő. Timikor a peptid kívánt hobszát elérjük, a peptidet a gyantáról lehasítjuk, majd a védőcsoportokat eltávolítjuk és a peptidet az elegyből kinyerjük.
A szintézisben alkalmazott gyanta hordozó bármely szokásosan alkalmazott szilárd fázisú polipeptid előállításra alkalmas hordozó lehet, mint például polisztirol, amely 0,5 - körülbelül 3% • « ·ν« * ····· 0 * · * «0 0*0 · · divinil-benzol alkalmazásával térhálósított, amely továbbá vagy klórmetilezett vagy hidroximetilezett abból a célból, hogy az elsőként bevezetett α-aminocsoporton védett aminosawal észter kötést képezhessen. Más alkalmazható gyanta hordozóanyagok a pMHBA (Peptide International, Louisville, Ky), a RINK (Calbiochem, LaJolla, Ca) és a Sasrin (Biochem, Philadelphia, Pa). A Sasrin gyanta speciális ABI ciklust igényel ahhoz, hogy az első aminosavat kapcsohassuk és ezt az ABI peptidszintetizátor használati utasításában megadták. Az első aminosavat, amely védett α-aminocsoportot tartalmaz, a gyantához az Applied Biosystems Model 430A peptidszintetizátor használati utasításában leírt eljárásnak megfelelően kapcsoljuk, amely fenti leírást referenciaként adunk meg.
A második aminosav aktiválásában előnyösen alkalmazható módszer a szimmetrikus anhidrid képzés vagy a második a-aminocsoporton védett aminosavból képzett aktív észter kialakítása. Például egy α-aminocsoporton védett aminosavat reagáltathatunk diciklohexil-karbodiimiddel (DCC) diklórmetán jelenlétében, és így szimmetrikus anhidridet képezhetünk. Más eljárás szerint HOBt aktív észtert képezhetünk úgy, hogy a Boc-aminosavat (terc-butoxi-karbonil-aminosav) és a HOBt vegyületet DCC oldószerben oldjuk, majd hűtjük és további DCC reagenst adagolunk hozzá. Ezt követően az oldatot szobahőmérsékletre melegítjük. Ezután ezt az oldatot adagoljuk az aminosavkötő gyanta elegyéhez. Ezt az aktiválási eljárást acilező reagensek képzésére, ugyancsak alkalmazhatjuk az antioxidáns vegyületek esetében.
Amennyiben az a-aminocsöpörtokon kívül más funkciós csoportok is találhatók a molekulában, ezeket a csoportokat is védő18 • · ·< *··» · ♦ ♦ · * ί ·» » < » *99 »99· • ·4·4 4 4»4 «44 · » · ·*·· 4 csoporttal kell ellátni. Általában az α-aminocsoportot és az oldalláncon található funkciós csoportokat eltérő védőcsöpörtokkal látjuk el, abból a célból, hogy egy adott védőcsoportot később anélkül eltávolíthassunk, hogy a többi védőcsoportot eltávolítanánk.
A találmány szerinti eljárásban alkalmazható a-aminocsoport védőcsoportok lehetnek például (1) acil-típusú védőcsoportok, mint például formil-csoport, trifluor-acetil-csoport, ftalil-csoport, toluol-szulfonil-csoport (tozil-csoport), benzolszulfonil-csoport, nitro-fenil-szulfenil-csoport, tritil-szulfenil-csoport, o-nitro-fenoxi-acetil-csoport és τ-klór-butiril-csoport; (2) aromás karbamid-típusú védőcsoportok, mint például benzoiloxi-karbonil-csoport és szubsztituált-benzoiloxi-karbonil-csoport, mint például p-klór-benziloxi-karbonil-csoport, p-nitro-benziloxi-karbonil-csoport, p-bróm-benziloxi-karbonil-csoport, p-metoxi-benziloxi-karbonil-csoport, 1-(p-bifenil)-1-metil-etoxi-karbonil-csoport, a,a-difenil-3,5-dimetoxi-benziloxi-karbonil-csoport és benzhidriloxi-karbonil-csoport; (3) alifás-karbamid típusú védőcsoportok, mint például terc-butoxi-karbonil-csoport (BOC), diizopropil-metoxi-karbonil-csoport, izopropoxi-karbonil-csoport, etoxi-karbonil-csoport és alliloxi-karbonil-csoport; (4) cikloalkil-karbamid-típusú védőcsoportok, mint például ciklopentiloki-karbonil-csoport vagy 9-fluorenil-metoxi-karbonil-csoport (Fmoc); (6) alkil-tipusú védőcsoportok, mint például trifenil-metil-csoport (tritil-csoport) és benzil-csoport; (7) trialkil-szilán-csoportok, mint például trimetil-szilil-csoport.
««r ····
Az a-aminocsoport védőcsoport kiválasztása azonban függ az alkalmazott gyanta típusától, az alkalmazott kötési funkciós csoporttól, a polipeptidben jelenlevő egyéb funckiós csoportok típusaitól és attól, hogy a (T) általános képletű aminosav származék hasadás nélkül túléli-e a gyantáról történő lehasítási reakciót, amennyiben lehasitáshoz szükséges reagenseket alkalmazzuk. Például a Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-N6-HBB-Lys-Leu-Lys-NH2 (SEQ ID NO. 1:) előállítása esetében egy pMBHA gyantát alkalmazunk, amely C-terminális aminocsoportot eredményez.
Az ct-aminocsoport védocsoport Boc, a kötési helyen alkalmazott oldallánc aminocsoport (Νε) védocsoport Fmoc csoport, a nem kötési hely oldallánc Ne védocsoport 2-Clz (2-klór-benziloxi-karbonil-csoport), a nem kötési hely oldallánc karboxilcsoport védocsoport OBzl-csoport (benzilészter-csoport) és a peptidet standard terc-Boc kémia alkalmazásával állítjuk elő egy ABI430A típusú peptidszintetizátor segítségével. Az Ne-Fmoc-csoport szelektíven eltávolítható piperidin segítésével; a HBB bevezetését HBOT aktív-észter formában végezzük, és a HBB kapcsolását a lizin oldallánc cél kapcsoló helyzetéhez megvalósítsuk. A peptid gyantáról történő lehasításához, illetve ugyanebben az időben a maradó védőcsoportok eltávolításához vízmentes hidrogén-fluoridot (HF) alkalmazunk reagensként.
A megfelelő védőcsopörtok kombinációjának, illetve az egyes védőcsoportok szelektív eltávolításához szükséges reagensek kiválasztásának elvei a szakirodalomban jól ismertek, lásd például M. Bodanszky, Peptide Chemistry, A Practical Textbook, SpringerVerlag (1988); J. Stewart és munkatársai, Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed., Pierce Chemical Co. (1984) közleményét.
Valamennyi védett aminosavat vagy aminosav szekvenciát a szilárd fázisú reaktorban körülbelül négyszeres feleslegben alkalmazunk és a kapcsolást kapcsoló reagens jelenlétében végezzük, közegként például dimetilformamid:diklórmetán (1:1) vagy egyedül dimetilformamid vagy egyedül diklórmetán oldószert alkalmazunk. Amennyiben nem tökéletes kapcsolást tapasztalunk, a kapcsolási eljárást, mielőtt az a-aminocsoport védőcsoportot eltávolítanánk és a következő aminosav szilárd fázisú reaktorba történő kapcsolását megkezdenénk megismételjük. A szintézis során az egyes lépésekben a kapcsolási reakció lezajlását ninhidrin-reakció segítségével ellenőrizzük, a szakirodalomban leírtak szerint E. Káiser, és munkatársai, Analyt. Biochem. 34, 595 (1970).
Miután a kívánt aminosav szekvenciát előállítottuk, a pepiidet a gyantáról bármely megfelelő reagens alkalmazásával lehasítjuk, ahol a reagenst úgy választjuk meg, hogy a polipeptid szerkezete a hasítási reakció során ne károsodjon. Például a pMBHA gyantáról történő polipeptid hasításhoz alkalmazhatunk vízmentes HF reagenst, amely 5% anizol és 5% acetonitril tartalmú; a hasítási reakcióban oldószerként 0,1%-os trifluor-ecetsavat használunk.
A találmány szerinti (1) általános képletű polipeptidek gyógyszerészetileg elfogadható sókat képeznek bármely nem toxikus szerves vagy szervetlen savval. Ilyen alkalmas só kialakítására használható szervetlen savak például a hidrogén-klorid, a hidrogén-bromid, a kénsav, a foszforsav és a savas-fémsók, mint például a nátrium-monohidrogén-ortofoszfát és a kálium-hidrogén-szulfát. A sóképzésben alkalmazható szerves savak például a
V ·· ···· · • · · ·· • « <·· ··* · ···· * · · · • ·· ··♦ 99 mono-, a di- és a tri-karbonsavak. Ilyen savak például az ecetsav, a glikolsav, a tej sav, a piruvinsav, a malonsav, a borostyánkősav, a glutársav, a fumársav, az almasav, a bórkősav, a citromsav, az aszkorbinsav, a maleinsav, a hidroxi-maleinsav, a benzoesav, a hidroxi-benzoesav, a fenil-ecetsav, a fahéj sav, a szalicilsav, a 2-fenoxi-benzoesav és a szulfonsavak, mint például a metánszulfonsav és a 2-hidroxi-etánszulfonsav. A karboxi-terminális aminosav egység segítségével képzett sók lehetnek a nem toxikus karbonsav-sók, amelyeket bármely alkalmas szervetlen vagy szerves bázissal képezhetünk. Ilyen alkalmazható sók például az alkálifém-sók, mint például a nátrium és kálium-sók, az alkáli- földfém sók, mint például a kálcium- és magnézium-sók; a könnyűfém IIIA csoporthoz tartozó-sók, mint például az alumínium-sók; és a szerves elsőrendű-, másodrendű- és tercier-aminokkal képzett sók, mint például a trialkil-aminokkal képzett sók, beleértve a trietil-amint, a prokaint, a dibenzil-amint, az 1-etán-amint, az N,N'-dibenzil-etilén-diamint, a dihidro-abietilamint, az N-kis szénatomszámú-piperidint és bármely más alkalmas amint.
A találmány szerinti protein-foszfolipid komplexekben alkalmazható foszfolipidek lehetnek bármely típusú foszfolipid vegyület és ebbe beleértjük a foszfo-glicerideket, valamint a sphingolipideket. A foszfogliceridek olyan di-zsírsav-glicerol-észterek, amelyekben a mhradó hidroxilcsoport, azaz egy terminális hidroxilcsoport a glicerol-csoportban egy foszforsavval képzett észter formában van jelen. Általában a foszfogliceridekben jelenlevő foszforsav-csoport egy második észtercsoportot is képez valamely alkohollal, amely lehet például etanol-amin, szerin, kolin vagy glicerol. Az sphingolipidek az sphingozin ·· ··*
- 22 4 V ··· ··· « ···· · · · · • · ·· ··· ·· mono-zsírsav észterei vagy a dihidro-sphingozin mono-zsírsav észterei, amelyben az 1-helyzetben található hidroxilcsoport további észtert képez egy foszforsav-kolin-észterrel. A találmány szerinti protein-foszfolipid komplexben alkalmazható előnyös lipidek a dipalmitoil-foszfatidil-kolin (DPPC), az egyéb lánchosszúságú és telítési értékű acil-láncokat tartalmazó foszfatidil-kolin molekulák (PC) , a kardiolipin (CL), a foszfatidil-glicerolok (PG), a foszfatidil-szerinek (PS) , a szírsavak (FA) és a triacil-glicerolok (TG). A tüdő felületaktív keverék fő komponense a DPPC, kisebb komponensei pedig a PC, a CL, a PG, a PS, az FA és a TG. A találmány szerinti foszfolipidekben alkalmazható zsírsavak általában hosszú szénláncü karbonsavak (általában 8 vagy több szénatomot tartalmaznak), amelyek jellemzően nem elágazó szénláncúak. A zsírsavak lehetnek telítettek vagy telítetlenek. Ilyen zsírsavak például a laurilsav, a mirisztilsav, a palmitinsav és az olaj savak.
A találmány szerinti polipeptid vagy protein-foszfolipid komplexek gyógyszerkészítményei előállíthatok száraz keverék vagy vizes szuszpenzió formában, amely néhány esetben tartalmazhat kis mennyiségű szerves oldószert, mint például etanolt vagy trifluor-etanolt, detergens hatású vegyületeket, mint például nátrium-dodecil-szulfátot vagy nátrium-deoxi-kolátot, sókat, mint például kálcium-kloridot Vagy nátriumk-kloridot, szénhidrátokat, mint például glükózt, dextrózt vagy mannitolt, és aminosavakat, mint például glicint és alanint. Amennyiben a gyógyszerkészítmény folyékony formájú, stablizálószerek, tartósítószerek, ozmózis nyomás szabályozó anyagok, pufferek és szuszpendálószerek adagolhatok a folyadékhoz. Kívánt esetben alkalmas germicidek is * · · ·
- 23 - .........
adagolhatok a készítményhez. A vizes szuszpenzió készítmény pH értéke 2 és 10 érték között változhat és a megfelelő pH értéket savakkal vagy bázisokkal biztosíthatjuk, amelyek lehetnek például sósav, nátrium-foszfát vagy nátrium-hidroxid. A száraz keverék készítményt vizes oldatban rekonstituálhatjuk, amely oldat gyógyszerészetileg elfogadható sókat, szerves oldószereket és detergenseket tartalmazhat. A vizes készítmény dializálható, szűrhető vagy kromatografálható abból a célból, hogy a szuszpendáló közeget gyógyszerészetileg elfogadható közeggel cseréljük fel. Ezt a kezelést felhasználás előtt végezzük. A találmány szerinti készítmény közvetlenül a fájdalomérzettel rendelkező beteg tüdejébe száraz por, vizes szuszpenzió vagy aerosol formában adagolható. A találmány szerinti gyógyszerkészítmény hermetikusan lezárt tartályokban, mint például ampullákban, fiolákban tárolható steril körülmények között. A készítmény tárolható ampullában vagy fiolában elkülönítettek attól az ampullától vagy fiolától, amelyben a szuszpenziós puffért tároljuk és a száraz vagy hidratált készítmény a szuszpenziós pufferrel felhasználás előtt elegyíthető.
A tüdő felülataktív készítmény 50-99,9%-a lipid lehet. Alkalmazható lipidek a DPPC, a PC, a CL, a PG, a PS, az FA és a TG. A lipid anyagok többsége a DPPC és a teljes lipidtömeg körülbelül 60-100%-kát teszi ki. A maradó lipidek a készítményben kisebb koncentrációjúak. A PC, CL, PG és PS a lipidek 30%-kát képviselheti és a FA és TG a lipidek tömegének 10%-kát jelentheti. A kisebb mennyiségű lipidkomponensek zsírsav- -láncai lehetnek telítettek vagy telítetlenek és bármely lánc-hosszú zsírsavakból származhatnak. Előnyösen a lánchossz 12-16 szénatomszám
- 24 és a láncban két telítetlen kötés van jelen. Előnyösen alkalmazható lipid készítmény a 80-100% DPPC és 0-15% PG keverék.
A szintetikus tüdő felületaktív anyag lipidkomponensei általában megtalálhatók az emlős tüdő felületaktív anyagok között és ipari előállításból nagy tisztaságban rendelkezésre állnak. A polipeptid komponenseket szilárd fázisú peptid szintézissel állítja elő, amely eljárás a szakember számára ismert. A találmány szerinti lipidek emlős tüdőből öblítés által izolált proteinekkel elegyítve alkalmazhatók az újszülött RDS betegség hatásos kezelésére. Ennek ellenére az ilyen lipidek és szintetikus fehérjék elegyeinek alkalmazását tüdő felületaktív készítményekben eddig nem írták le.
A lipideket illékony szerves oldószerrel vagy oldószerkeverékkel elegyítjük, amely keverék lehet kloroform és metanol vagy trifluor-etanol. Az oldószert nitrogén áramban, argon áramban vagy vákuumban elpárologtatjuk. A száraz lipid keverékhez vizes oldatot, amely szerves vagy szervetlen savakat, bázisokat és sókat, valamint szaccharidokat, mint például dextrózt tartalmazhat, adagolunk, és így 0,1-100 mg/ml DPPC koncentrációt állítunk elő. Általában előnyös, de nem szükséges, hogy az elegyet 35-50°C hőmérsékletre melegítsük és erősen keverjük, majd max. 2 óra időtartamon át 25-50°C hőmérsékleten inkubáljuk. Ezután a peptidet vagy a peptidek keve/ékét adagoljuk az elegyhez száraz por formában vagy vizes közegben szuszpendált formában, amelyek bizonyos esetekben tartalmazhatnak alkalmas szerves oldószert, mint például etanolt vagy trifluor-etanolt vagy denaturáló hatóanyagot, mint például guaninium-hidrokloridot vagy karbamidot, amelyek megnövelik a peptid vizes szuszpenzióban történő oldha• · · ·
- 25 tóságát. A peptid és a lipid asszociációja növelhető adott pH érték alkalmazásával, így a vizes oldat pH értéke 2-10 érték között változhat. A peptid és lipid elegyítésének előnyös eljárása során száraz peptidet adagolunk a vízben található lipidhez 45-50°C hőmérsékleten és ultrahangos keverő fürdővel elegyítjük a keveréket 30-90 percen át 45-50°C hőmérsékleten, majd az elegyet fagyasztva szárítjuk és -20°C hőmérsékleten tároljuk.
A lipideket alkalmas detergenssel, mint például oktil-glükoziddal vagy nátrium-deoxi-koláttal elegyítjük 1-20 tömegrész detergens/1 tömegrész DPPC alkalmazásával vízben vagy vizes pufferben vagy fiziológiás sóoldatban, ahol az elegyből származó DPPC koncentrációja 1-100 mg/ml érték. Ezután az elegyhez adagoljuk a peptidet száraz formában vagy vizes oldatban szuszpendált formában, amely szerves oldószert tartalmaz vagy szerves oldószer nélküli denaturáló hatóanyagot tartalmaz vagy detergenst tartalmaz. Az elegyet ezután dializáljuk, leszűrjük, centrifugáljuk vagy kromatografáljuk, hogy a detergenst eltávolítsuk.
Előnyösen a lipideket és a peptideket illékony szerves oldószerben elegyítjük kismennyiségű víz jelenlétében vagy enélkül. Az illékony oldószert nitrogén vagy argon áramban vákuum kemencében elpárologtatjuk vagy rotációs bepárolással távolítjuk el vizes oldószer adagolása után vagy ezt megelőzően.
Az előző eljárások egyikével vagy bármelyikével előállított lipid és peptid keveréket ezután 2 órán át inkubáljuk, előnyösen 35-50°C hőmérsékleten ultrahangos besugárzás mellett. Ezt követően az elegyet dializáljuk, leszűrjük vagy kromatografáljuk abból a célból, hogy a vizes közeget gyógyszerészetileg elfogadható közeggel cseréljük ki, azonban ez nem feltétlenül szükséges.
• · ·
- 26 Egyes esetekben a hatásosság megnövelhető úgy, hogy az el nem reagált lipidet vagy peptidet az asszociált lipid és peptid komplextől ultracentrifugálás, szűrés vagy kromatografálás segítségével elválasztjuk. Ezután a keveréket liofilizálhatjuk vagy aeroszol formába vihetjük.
Amennyiben a találmány szerinti polipeptid-foszfolipideket alkalmazzuk újszülött légzőrendszeri fájdalom szindróma kezelésében, amely fiziológiai állapot abból ered, hogy a koraszülött csecsemők tüdeje képtelen tüdő felületaktív anyagot termelni, a kezelés során a komplexek antioxidánsként és szintetikus tüdő felületaktív anyagként hatnak és vagy helyettesítik a természetes hiányzó felületaktív anyagot vagy csökkentik, illetve megszüntetik a természetes felületaktív anyag hiányt. A kezelést mindaddig folytatjuk, amíg az újszülött tüdeje megfelelő mennyiségű természetes tüdő felületaktív anyagot termel, ami a kezelést ezután szükségtelenné teszi.
A találmány szerinti készítmények előnyösen endotrachealis adagolásra alkalmas készítmények, azaz folyékony szuszpenzió, száraz por vagy aeroszol formájúak. Folyékony szuszpenzió készítmény esetében száraz keveréket vagy vizes szuszpenzióban képzett keveréket elegyítünk alkalmas segédanyagokkal, mint például vízzel, fiziológiás oldatokkal dextrózzal és glicerollal, és így gyógyszerészetileg elfogadható hatásos készítményt állítunk elő. Előnyös folyékony szuszpenzió 0,8-1,0 tömeg% nátrium-kloridot tartalmaz és előnyösen 1-20 mmol, kálcium-ion koncentrációjú. A készítményt ezután leszűrjük és steri-lizáljuk. Általában a készítmény 1-100 mg/ml DPPC tartalmú és ezt 0,2-5 ml/kg dózisban adagoljuk. A száraz keveréket úgy állítjuk elő, hogy a vizes szuszpenziót liofilizáljuk. Az aeroszolt úgy állítjuk elő, hogy finomra őrölt száraz port szuszpendálunk egy propellens anyagban, amely lehet például kis szénatomszámú alkán és fluorozott alkán, mint például freon. Az aeroszolt nyomás alatti tartályban tároljuk.
Például a felületaktív anyagot (a találmány szerinti polipeptid és lipid komplex) adagolhatjuk megfelelő dózisformában endotracheális cső, aeroszol adagolás vagy szuszpenzióból történő ködképzés vagy a beszívott gázba bevezetett száraz keverék formában. A felületaktív anyagot egy vagy több dózisban 10-200 mg/kg mennyiségben adagoljuk. Az adagolás előnyös formája a peptid és lipid szészpenzió, amely fiziológiás oldatban készült, adagolása 5-10 mg felületaktív anyag/ml koncentrációban endotracheális cső alkalmazásával történik, amely adagolás során 50-100 mg/kg dózist alkalmazunk.
A találmány szerinti polipeptidet a kezelés céljából a betegnek adagoljuk. A beteg elnevezés alatt emlőst értünk, amely nem limitáltan lehet például ember.
A találmány szerinti eljárást a polipeptid, a polipeptid/ lipid komplex és a kiindulási anyagok előállítására az alábbi példákon részletesen bemutatjuk. A példák nem jelentik a találmány tárgykörének korlátozását.
A példákban alkalmazott korábban nem ismertetett rövidítések az alábbiak:
Standard Boc kémia és standard Fmoc kémia: az ilyen kémiai eljárást ABI peptid szintetizátor felhasználásával végezzük Boc-ciklusokban és külön Fmoc-ciklusokban.
TBDMS | tetrabutil-dimetil-szilil |
SEt | etiltio |
SUC | sukcinil |
TFA | trifluor-ecetsav |
Bzl | benzil |
Ot-Bu | tere-butil-éter |
1. példa | |
KA) | Polipeptid előállítása: |
Suc-Leu-Leu-Glu-Lvs-Leu-Leu-Glu-N^-HBB-Lys-Leu-Lvs-NH2 (HBB-Lys-ΜΑΡΙΟ) (SEQ ID NO: 2)
Előállítjuk a Na-Boc-N6-Fmoc-Lys-Leu-Ne-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet standard t-Boc kémia alkalmazásával ABI430A peptid szintetizátor felhasználásával (Applied Biosystems Inc., Foster City, CA).
Előállítjuk a Na-Boc-Lys-Leu-Ne-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet a Na-Boc-Ne-Fmoc-Lys-Leu-Ne-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületből kiindulva úgy, hogy az Ne-Fmoc csoportot piperidin segítségével eltávolítjuk.
Előállítjuk a Na-Boc-Lys-Leu-N£-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet a Na-Boc-Ne-Fmoc-Lys-Leu-Ne-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületből kiindva úgy, hogy az Ne-Fmoc csoportot piperidin segítségével eltávolítjuk. ’
Előállítjuk a Na-Boc-Ne-HBB-LYys-Leu-N6-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet a Na-Boc-Lys-leu-Ne-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületből és 3,5-di-terc-butil-4-hidroxil-bezoesavból kiindulva, amely utóbbi N-hidroxi-benzotriazol-észter formájú (2 mmol sav, négyszeres felesleg aktív észter minden két kapcsolásra számítva).
• 4
- 29 Előállítjuk a Leu-leu-Glu(OBzl)-Ne-2C1Z-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Ne-HBB-Lys-Leu-Ne-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 3) a Na-Boc-Ne-HBB-Lys-Leu-Ne-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületből kiindulva standard t-Boc kémiát alkalmazva ABI430A peptidszintetizátor alkalmazásával.
Kapcsoljuk a Leu-Leu-Glu(OBzl)-Ne-2C1Z-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Ne-HBB-Lys-Leu-Ne-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 3) borostyánkősav-anhidriddel, és így előállítjuk a Suc-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Ne-2C1Z-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Ne-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 4).
Lehasítjuk a Suc-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Ne-2C1Z-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Ne-HBB-Lys-Leu-Ne-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 4) a gyantáról és eltávolítjuk az oldallánc védőcsoportokat vízmentes HF segítségével, amely 5% anizolt és 5% dimetil-szulfidőt tartalmaz. A reakciót 1 órán át -5°C hőmérsékleten végezzük. Ezután a gyantát 50% acetonitril tartalmú 0,1%-os trifluor-ecetsavval extraháljuk, majd az extraktumot fagyasztjuk és liofilizáljuk. A kapott anyagot reverz fázisú nagynyomású folyadékkromatográfia segítségével (HPLC) Rainin 21.4 x 250 mm C18 oszlopon tisztítjuk lineáris 39-46,5% acetonitril gradiens elució alkalmazásával 15 percen át, ahol az alapoldat 0,1%-os vizes trifluor-ecetsav (pk 2). 40 ml/perc áramlási sebességet alkalmazunk és az anyag jelzését 214 nm értéknél mért abszorpció segítségével végezzük. A tiszta frakciókat egyesítjük, megfagyasztjuk és liofilizáljuk, így a címbeli vegyületet nyerjük. FAB-Ms (M+H+) 1558.2
1(B) Az 1(A) példában leírt polipeptid DPPC komplexének előállítása
Az 1(A) peptidet fentiek szerint állítjuk elő. 25 mg DPPC ml kloroformban készült oldatát nitrogén áramban megszárítjuk, majd vákuumban szárítjuk abból a célból, hogy a szerves oldószer nyomait eltávolítsuk. Ezután a száraz lipid keverékhez 3 ml vizet adagolunk. A kapott preparárumot 1 órán át 45°C hőmérsékleten inkubáljuk. Ezután a vizes preparátumhoz 0,5 ml száraz 1(A) peptidet adagolunk. A készítményt ultrahang fürdőben 2 órán át 45°C hőmérsékleten keverjük. A kapott lipid-peptid keveréket liofilizáljuk, majd 1 hónapon át 4°C hőmérsékleten tároljuk. A tesztvizsgálat előtt az elegyhez 9 ml 0,9%-os NaCl oldatot 20 mmol HEPES puffért (pH 7.40) adagolunk. A készítményt 1 órán át 45°C hőmérsékleten időszakos keverés közben inkubáljuk.
2. példa
2(A) Polipeptid előállítása: Suc-Leu-Leu-Glu-Lvs-Leu-Leu-Glu-S-HBS-Cvs-Leu-Lvs-NHo (HBS-Cys-ΜΑΡΙΟ) (SEQ ID NO: 5)
Előállítjuk a Leu-Leu-Glu(OBzl)-Ne-2C1Z-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Cys(SEt)-Leu-Ne-2C1Z-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 6) standard t-Boc kémia és ABI430A peptid szintetizátor alkalmazásával.
Kapcsoljuk a Leu-Leu-Glu(OBzl)-Ne-2C1Z-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Cys(SEt)-Leu-Ne-2ClZ-Lys~pMBHA-gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 6) borostyánkősav-anhidriddel és előállítjuk a Suc-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Ne-2C1Z-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Cys(SEt)-Leu~Ne-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 7).
Elegyítjük a Suc-Leu-Leu-Glu(0Bzl)-Ne-2ClZ-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Cys(SEt)-Leu-Ne-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 7) (0,263 g) 5 ml vízmentes dimetilformamiddal és 450 μΐ metiltio-glikoláttal. Az elegyet éjszakán át argon atmoszférában keverjük, és így előállítjuk a Suc-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Ne-2C1Z-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Cys-Leu-Ne-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 8) .
A Suc-Leu-LeuGlu(OBzl)-Ne-2C1Z-Lys-Ieu-Leu-Glu(OBzl)-Cys-Leu-Ne-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 8) a gyantáról lehasítjuk és az oldallánc védőcsoportokat eltávolítjuk. A reakciót vízmbentes HF segítségével végezzük, amely 5% anizol és 5% dimetil-szulfid tartalmú. A reakciót -5°C hőmérsékleten 1 órán át hajtjuk végre. Ezt követően a gyantát 50% acetonitril tartalmú 0,1%-os trifluor-ecetsawal extraháljuk, majd az extraktumot fagyasztjuk és liofilizáljuk. A kapott anyagot reverz fázisú nyagynyomású folyadékkromatográfia (PHLC) segítségével Rainin 21.4 x 250 mm C18 oszlopon tisztítjuk. Lineáris 34-44% acetonitril tartalmú gradiens elúciót alkalmazunk, ahol az alapoldat 0,1%-os vizes trifluor-ecetsav (pH 2). Az elúciót 15 percen át végezzük 40 ml/perc áramlási sebességgel és 214 nm értéknél abszorpció méréssel követjük. A tiszta frakciókat egyesítjük, fagyasztjuk, majd liofilizáljuk, és így Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-Cys~Leu-Lys-NH2 (SEQ ID NO: 9) anyagot nyerünk.
751 mg 3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-tiofenolt, 496 μΐ (3,15 mmol) dietil-azo-dikarboxilátot és 5 ml p-dioxánt elegyítünk. Az elegyet argon atmoszférába helyezzük, majd 2 órán át keverjük, így 3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-tiofenol és dietil-azo-dikarboxilát komplex vegyületet nyerünk.
· ···«
- 32 32 mg Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-Cys-Leu-Lys-NH2 (SEQ ID NO: 9) vegyületet reagáltatunk 1,1 ekvivalens előre előállított 3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-tiofenol és dietil-azo-dikarboxilát komplexszel 80 μΐ p-dioxán és 40 μΐ dimetilformamid elegyében. Az elegyet argon atmoszférában éjszakán át keverjük. Ezután az elegyet 25% acetonitril tartalmú 0,1%-os trifluor-ecetsavba öntjük, majd fagyasztjuk és liofilizáljuk. A kapott anyagot reverz fázisú nagynyomású folyadékkromatográfia (HPLC) segítségével Rainin 21,4 x 250 mm C18 oszlop alkalmazásával tisztítjuk. Lineáris 44,5-52% acetonitril gradiens elúciót alkalmazunk 0,1%-os vizes trifluor-ecetsav alapoldat használatával (pH 2). Az elúciót 15 percen át végezzük 41 ml/perc áramlási sebességet alkalmazunk és az elúciót 214 nm értéknél mért abszorpcióval követjük. A tiszta frakciókat egyesítjük, fagyasztjuk, majd liofilizáljuk, és így a címbeli vegyületet nyerjük. FA-BMS (M+H+) 1536.5
2(B) A 2(A) példában leírt polipeptid DPPC komplexének előállítása
A 2(A) peptidet DPPC anyaggal keverjük az 1. példában leírt eljárásnak megfelelően, azzal az eltéréssel, hogy a végső szuszpendáló puffer 5 mmol CaCl2 tartalmú a 0,9% NaCl, 20 mmol HEPES puffer (pH 7.40) tartalom mellet.
t
3. példa
3(A) Polipeptid előállítása: HBC-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-Lvs-Leu-Lys-NHo (SEQ ID NO: 10)
Előállítjuk a Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-
··» ♦ ··
- 33 -Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Ne-boc-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 11) egy ABI430A peptid szintetizátor alkalmazásával standard Na-Fmoc védőcsoport és HOBT aktív észter alkalmazásával.
Előállítjuk a HBC-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-leu-Ne-Boc-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 11) a Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu~Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Ne-Boc-Lys-pMBHA-gyanta vegyületből kiindulva (SEQ ID NO: 11), továbbá 3,5-di-terc-butil-4-hidroxi- fahéj sav N-hidroxi-benzotriazol aktív észter alkalmazásával (2 mmol sav, négyszeres felesleg aktív észter minden két kapcsolásra számítva.
Lehasítjuk a HBC-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-N£-Boc-Lys-Leu-LeuGlu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-leu-N6-Boc-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 12) a gyantáról és eltávolítjuk az oldallánc védőcsoportokat. A hasításra 50%-os diklórmetános trifluor-ecetsav oldatot alkalmazunk. A reakcióelegyet 1 órán át argon atmoszférában keverjük. Ezután az oldószert vákuumban elpárologatatjuk és a maradékot reverz fázisú nagynyomású folyadékkromatográfia (HPLC) segítségével tisztítjuk. A címbeli vegyületet nyerjük. 4
4. példa
4(A) Polipeptid előállítása:
t
Suc-Leu-leu-Glu-Lvs-Leu-Leu-Glu-Lvs-Leu-Lys-(3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-benzilészter) (SEQ ID NO: 13)
Élőálltjuk a Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne~Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(OtBu) -Ne-Boc-Lys-Leu-Ne-Boc-Lys-Sasrin-gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 14) ABI430A peptidszintetizátor alkalmazásával standard Na-Fmoc védőcsoport és HOBT aktív észter alkalmazásával.
A Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Ne-Boc-Lys-Sasrin-gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 14) kapcsoljuk borostyánkősav-anhidriddel, és így Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Ne-Boc-Lys-Sasrin-gyanta vegyületet állítunk elő (SEQ ID NO: 15).
A Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Leu~Glu(Ot-Bu) -Ne-Boc-Lys-Leu-Ne-Boc-Lys-Sasrin-gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 15) a gyantáról lehasítjuk 1%-os trifluorecetsav diklórmetánban készült oldatával, és így a Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Ne-Boxíc-Lys vegyületet állítjuk elő(SEQ ID NO: 15).
A Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Ne-Boc-Lys vegyületet (SEQ ID NO: 15) oldjuk dimetil formami dban, majd 1 ekvivalens mennyiségű diciklohexil-karbodiimiddel és 2 ekvivalens mennyiségű 3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-benzilalkohollal reagáltatjuk. A reakcióelegyet argon atmoszférában éjszakán át keverjük. Ezt követően az elegyet etilacetáttal hígítjuk, majd hideg In sósav oldattal mossuk. Ezután a terméket nagynyomású folyadékkromatográfia segítségével tisztítjuk. így Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Ne-boc-Lys-3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-benzilésztert nyerünk (SEQ ID NO: 16).
A Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Ne-boc-Lys-3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-benzilészter vegyületet (SEQ ID NO: 16) 50%-os diklórmetános trifluor-ecetsav oldattal reagáltatjuk. A reakcióelegyet 1 órán át argon atmoszférában keverjük. Ezután az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, majd a terméket nagynyomású folyadékkromatográfia segít··· t · ·<
·♦ · · • ♦ · ««1 • ···· · *·* · ·<
- 35 ségével tisztítjuk. így a címbeli vegyületet nyerjük.
4(B) A 4(A) polipeptid DPPC komplexének előállítása
A 4(A) peptid DPPC komplexének előállítását úgy végezzük, hogy a peptidet DPPC vegyülettel keverjük az 1(B) példa szerinti eljárásnak megfelelően.
5. példa
5(A) Polipeptid előállítása:
Trl-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Lvs-NHg (SEQ ID NO: 17)
Leu-Léu-Glu(OBzl)-Ne-2ClZ-Lys-Leu-Leu~Glu(OBzl)-Ne-2C1Z-Lys-Leu-Ne-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet állítunk elő (SEQ ID NO: 18) standard terc-Boc kémia alkalmazásával ABI430A peptidszintetizátor segítségével.
mg 6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametil-kromán-2-karbonsavat, μΐ dimetilformamidot és 250 μΐ diklórmetánt elegyítünk. Ezután az elegyhez 200 μΐ 0,5m diklórmetános oldat diciklohexil-karbodiimid vegyületet adagolunk, majd a reakcióelegyet 5 percen át keverjük. így 6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametil-kromán-2-karbonsav (Trolox) szimmetrikus anhidridet nyerünk.
A Trl-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Ne-2C1Z-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Ne-2ClZ-Lys-Leu-N£-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet állítjuk elő t
(SEQ ID NO: 19) a Leu-Leu-Glu(OBzl)-Ne-2C1Z-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Ne-2ClZ-Lys-Leu-Ne-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületből (SEQ ID NO: 18) és 6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametil-kromán-2-karbonsav (Trolox)-szimmetrikus anhidridből kiindulva (2 mmol sav, tízszeres felesleg szimmetrikus anhidrid mindenegyes kétszetes kapcsolásra számítva).
«·ν«
- 36 A Trl-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Ne-2C1Z-Lys-Leu-Leu-Glu(OBzl)-Ne-2ClZ-Lys-Leu-Ne-2ClZ-Lys-pMBHA-gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 19) a gyantáról lehasítjuk, majd az oldallánc védőcsoportokat eltávolítjuk. A hasítás és védőcsoport eltávolítás céljára a vegyületet vízmentes HF reagenssel, amely 5% anizol és 5% dimetil-szulfid tartalmú, -5°C hőmérsékleten 1 óra időtartamon át reagáltatjuk. A gyantát ezt követően 50% acetonitril tartalmú 0,1%-os trifluor-ecetsavval extraháljuk, majd az extraktumot fagyasztjuk és liofilizáljuk. A terméket reverz fázisú nagynyomású folyadékkromatográfia segítségével tisztijük, és így a címbeli vegyületet nyerjük.
5(B) Az 5(A) polipeptid DPPC komplexének elállítása
Az 5(A) polipeptidet DPPC vegyülettel elegyítjük az 1(B) példa szerinti eljárásnak megfelelően.
6. példa
6(A) Polipeptid előállítása:
Suc-Leu-Leu-Glu-Lvs-Leu-Leu-Glu-Q-HBB-Ser-Leu-Lvs-NHo (SEQ ID NO: 20)
Előállítjuk a Na-Fmoc-0-TBDMS-Ser-Leu-Ne-Boc-Lys-átköto gyantát (TBDMS kötött a szerint-maradék oldallánc oxigénatomját hoz) ABI430A peptidszintetitázor segítségével standard Na-Fmoc védőcsoport és HOBT aktív-észter eljárás alkalmazásával.
A Na-Fmoc-0-TBDMS-Ser-Leu-Ne-Boc-Lys-átviteli gyanta vegyületet ecetsavval tetrahidrofurán/víz elegyben reagáltatjuk, és így Na-Fmoc-Ser-Leu-Ne-Boc-Lys-átviteli gyantát állítunk elő.
.1 ! ♦* ·*·· · ♦♦ · · · tt
4 · * 4 « *44* * · · · · 4 · ·· *·♦ · · · 44 44 ·
Előállítjuk a Na-Fmoc-0-HBB-Ser-Leu-Ne-Boc-Lys-átviteii gyantát standard Fmoc kémia alkalmazásával ABI430A peptidszintetizátor segítségével. A kiindulási anyag Na-Fmoc-Ser-Leu-N£-Boc-Lys-átviteli gyanta és 3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-benzoesav N-hidroxi-benzotriazol-aktív észtere (2 mmol sav, négyszeres felesleg aktív észter minden két kapcsolásra számítva).
Előállítjuk a Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-0-HBB-Ser-Leu-N£-Boc-Lys-átviteli gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 21) a Na-Fmoc-0-HBB-Ser-Leu-Ne-boc-Lys-átviteli gyantából kiindulva ABI430A peptidszintetizátor segítségével standard Na-Fmoc védőcsoport eljárást és HOBT-aktív észtereket alkalmazva.
A Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-O-HBB-Ser-Leu-Ne-Boc-Lys-átviteli gyantát (SEQ ID NO: 21) reagáltatjuk és kapcsoljuk borostyánkősav-anhididdel, és így a Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)~Ne-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-O-HBB-Ser-Leu-Ne-Boc-Lys-átviteli gyanta vegyületet állítjuk elő (SEQ ID NO: 22).
Lehasítjuk a Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-0-HBB-Ser-Leu-Ne-Boc-Lys-átviteli gyanta (SEQ ID NO: 22) vegyületet a gyantáról és eltávolítjuk az oldallánc védőcsoportokat. Erre a célra trifluorecetsav, fenol, dimetil-szulfid és víz elegyét alkalmazzuk. Az elegyet 1 órán át argon atmoszférában keverjük. Ezután az oldószert vákuumban, elpárologtatjuk, majd a maradékot nagynyomású folyadékkromatográfiás ananízis segítségével tisztítjuk. A címbeli vegyületet nyerjük.
6(B) A 6 (A) példa szerinti polipeptid DPPC komplexének előállítása
A 6(A) szerinti polipeptidet DPPC vegyülettel elegyítjük az 1(A) példa szerinti eljárásnak megfelelően.
>4 · * • 4 * * ·· •*· ·«· « • · « » •· ·♦· ·*
7. példa (A) Polipeptid előállítása:
Suc-Leu-Leu-qlu-Lvs-Leu-Leu-Glu-S-HBB-Cvs-Leu-Lvs-NHo (SEQ ID NO: 23)
Előállítjuk a Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Cys(Set)-Leu-Ne-Boc-Lys-átviteli gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 24). Az előállítást ABI430A peptidszintetizátor segítségével végezzük standard Na-Fmoc védőcsoport eljárás és HOBT aktív-észterek alkalmazásával.
A Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Cys(Set)-Leu-Ne-Boc-Lys-átviteli gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 24) kapcsoljuk borostyánkősav-anhididdel, és így Suc-Leu-Leu-Glu-(Ot-Bu)-Cys(SEt)-Leu-Ne-Boc-Lys-átviteli gyanta vegyületet állítunk elő (SEQ ID NO: 25).
A Suc-Leu-Leu-Glu-(Ot-Bu)-Cys(SEt)-Leu-Ne-Boc-Lys-átviteli gyanta (SEQ ID NO: 25) (0,263 g) vegyületet 5 ml vízmentes dimetilformamiddal és 450 μΐ metiltio-glikoláttal elegyítjük. A reakcióelegyet éjszakán át argon atmoszférában keverjük, és így a Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-N£-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Cys-Leu-N£-Boc-Lys-átviteli gyanta (SEQ ID NO: 26) vegyületet nyerjük.
Előállítjuk a Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-BocLys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-S-HBB-Cys-Leu-Ne-Boc-Lys-átviteli gyanta vegyületet »
(SEQ ID NO: 27), az előállítást standard Fmoc kémia alkalmazásával ABI430A peptidszintetizátor segítségével végezzük; kiindulási anyagként Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-Boc-Lys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Cys-Leu-Ne-Boc-Lys-átviteli gyantát (SEQ ID NO: 26) és 3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-benzoesav-N-hidroxi-benzotriazol-észtert alkalmazunk (2 mmol sav, négyszeres felesleg aktív **♦·
- 39 észter mindenegyes két kapcsolásra).
Lehasitjuk a Suc-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-Ne-BocLys-Leu-Leu-Glu(Ot-Bu)-S-HBB-Cys-Leu-Ne-Boc-Lys-átviteli gyanta vegyületet (SEQ ID NO: 27) a gyantáról, majd a oldallánc védőcsoportokat eltávolítjuk. A hasítást és a védőcsoportok eltávolítását trifluor-ecetsav, fenol és dimetil-szulfid, valamint víz segítségével végezzük. A reakcióelegyet argon atmoszférában 1 órát át keverjük. Ezután az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, majd a terméket nagynyomású folyadékkromatográfia segítségével tiszítjuk (HPLC), így a címbeli vegyületet nyerjük.
7(B) A 7(A) példa szerinti polipeptid DPPC komplexének előállítása
A 7(A) peptidet DPPC reagenssel keverjük az 1(B) példa szerinti eljárásnak megfelelően.
8. példa
8(A) Polipeptid előállítása:
Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Gln-N£-Trl-Lys-Leu-Lvs-NH2 (Trl-Lys-MAP10) (SEQ ID NO: 28)
A címbeli vegyületet az 1. példa szerinti eljárásnak megfelelően állítjuk elő, azzal az eltéréssel, hogy a cél lizin-maradékot 9-fluorino-metoxi-karbonil védőcsoporttal látjuk el t
(Fmoc). A következő savmaradék bevezetése előtt az Ne-Fmoc csoportot eltávolítjuk, piperidin és dimetilformamid alkalmazásával és a trl-csoportot az előre elkészített lizin e-aminocsoportjával képzett HOBT-észter segítségével kapcsoljuk. A szintézist ezután a szokásos Boc-kémia alkalmazásával folytatjuk és a peptidet a gyantáról az 1. példa szerinti eljárásnak meg40 felelően hasítjuk le, továbbá a védőcsoportok eltávolítását is aszerint végezzük.
A 8(A) polipeptid DPPC komplexének előállítása:
A 8(A) peptidet DPPC vegyülettel elegyítjük az 1(B) példa szerinti eljárásnak megfelelően.
9. példa
Antioxidáns hatású aminosav származék előállítása
Fmoc-Glu[-HBB-ol észter]
2,0 g (13,6 mmol) finoman őrölt L-glutaminsavat és 2,0 g vízmentes nátrium-szulfátot, valamint 14 mmol 3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-benzilalkoholt (HBB-ol) elegyítünk 75 ml tetrahidrofuránban. Az elegyhez 3,7 ml 54%-os (27,2 mmol) tetrafluor-bórsav-éterátot adagolunk, majd a reakcióelegyet 15 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az elegyet leszűrjük és a szűrlethez 4,1 ml (29,6 mmol) trietilamint adagolunk. Az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, majd a terméket kromatográfia segítségével tisztítjuk. így Glu[-HBB-ol-észtert] nyerünk.
mmol Glu[ -HBB-ol-észtert] oldunk 100 ml 10%-os nátrium-karbonát oldatban. Az oldatot jeges fürdő alkalmazásával 0°C hőmérsékletre hűtjük, majd 50 ml dioxánt adagolunk hozzá. Ezt követően az elegyhez keverés közben lassú ütemben hozzáadagoljuk t
g (50,2 mmol) 9-fluorenil-metil-klór-formiát 75 ml dioxánban készült oldatát. Az elegyet 1 órán át 0°C hőmérsékleten majd 5-18 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet ezután 1,5 liter jeges vízbe önjük. A keveréket kétszer 400 ml éterrel extraháljuk, és így a nem reagált klór-formiátot eltávolítjuk. Ezután a vizes fázist jéggel lehűtjük, majd tömény sósav segít41
ségével pH 2 értékre savanyítjuk. A savas oldatot etilacetáttal extraháljuk, a szerves oldatot 0,lm sósavval és vízzel mossuk. A szerves oldatot magnézium-szulfáton megszárít-juk, majd az oldószert vákuumban elpárologtatjuk. így Na-Fmoc- Glu[HBB-ol-észter] terméket kapunk.
A kapott vegyületet a polipeptidbe ABI430A peptidszintetizátor segítségével vezetjük be standard Na-Fmoc védőcsoportot és HOBT-aktív észtereket alkalmazva.
10. példa
Antioxidáns hatású aminosav-származék előállítása: Na-Fmoc-N£-boc-Lvs[N£-HBB-CH21
7,2 mmol Na-Fmoc~Lys vegyületet és 7,2 mmol 3,5-di-terc-butil-4-hidroxi-benzaldehidet (HBB-al) elegyűtünk 30 ml acetonitrilben. Az elegyhez 1,37 g (23,2 mmol) nátrium-ciano-bórhidridet adagolunk. Ezután a keverékhez annyi ecetsavat adunk, hogy kissé savas pH értékű maradjon. Az elegyet több órán át keverjük, majd 100 ml etiléterrel hígítjuk és In nátrium-hidroxid oldattal mossuk. A szerves fázist elválasztjuk, majd magnézium-szulfáton megszárítjuk és az oldószert vákuumban elpárologtatjuk. Na-Fmoc-Lys[Ne-HBB-CH2] vegyületet nyerünk.
mmol Na-Fmoc-Lys[N£-HBB-CH2] vegyületet oldunk 50/50 t arányú dioxán/víz (25 ml) elegyben, majd In nátrium-hidroxid oldat segítségével pH értékét 10 értékre állítjuk be. A lúgos oldathoz 10°C hőmérsékleten 1,58 g (11 mmol) terc-butil-azido-formiát éteres oldatát csepegtetjük 10°C hőmérsékleten. Az elegyet hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni, majd időnként bázist adagolunk hozzá, hogy pH értékét 10 értéken tartsuk. Ezt követően az elegyet nátrium-citrát/citromsav pufferrel pH 5 értékre megsavanyítjuk. A savas oldatot háromszor éterrel extraháljuk, majd a szerves oldatot magnézium-szulfáton megszárítjuk és nitrogén árammal átöblítjük, így a címbeli vegyületet nyerjük.
A vegyületet polipeptidbe ABI430A peptidszintetizátor segítségével standard Na-Fmoc védőcsoportot, HOBT-aktív észtert és áthidaló-gyantát alkalmazva építjük be.
Az alábbi antioxidáns kiindulási anyagokat ugyanolyan módon alkalmazhatjuk, mint ahogy az előző példákban leírtakat.
11. példa
Antioxidáns veqyület kiindulási anyagának előállítása:
3-tere-butil-5-metil-4-hidroxi-benzoesav
A reakcióedénybe 4,74 g (0,198 mól) nátrium-hidrid 150 ml vízmentes etilén-glikol-dimetil-éterben képzett szuszpenzióját mérjük. Ezután a szuszpenzióhoz 0,1 mól 2-terc-butil-6-metil-fenol 150 ml etilén-glikol-dimetil-éterben készült oldatát csepegtetjük. A reakcióelegyet 1,5 órán át 50-60°C hőmérsékletre melegítjük, majd gázbevezető csövön keresztül a reakcióelegy felszíne alá 20 órán át szén-dioxidot buborékoltatunk. Ezt követően az elegyet 5°C hőmérsékletre hűtjük, majd a felesleg nátrium-hidridet metilalkohol segítségével óvatosan elbontjuk t
(30 ml). Miután a hidrogénfejlődés megszűnik, a reakcióelegy pH értékét In sósav segítségével 2 értékre állítjuk be. Ezután az elegyet vízzel (1,6 liter) hígítjuk és a csapadék formájú, címbeli vegyületet leszűrjük.
12. példa
Antioxidáns hatású kiindulási anyag előállítása: (6-hidroxi-7-terc-butil-5-izopropll-8-propil-kromán-2-il)-ecetsav mg (1,85 mmol) magnézium forgácsot és 74,6 mg (0,7 mmol) l-klór-2,2-dimetil-propánt elegyítünk 9 ml vízmentes éterben. Az elegyet melegítjük és erősen keverjük, majd hozzácsepegtetjük 156 mg (0,839 mmol) 1,2-dibróm-etán 1,5 ml vízmentes éterben készült oldatát. A reakcióelegyet 12 órán át visszafolyatás mellet forraljuk, majd argon atmoszférába helyezzük és 0-5°C hőmérsékletre hűtjük. Ezután az elegyhez 0,533 mmol izobutiril-klorid 1,5 ml száraz dietiléterben készült oldatát csepegtetjük. A reakcióelegyet 1,5 órán át 0-5°C hőmérsékleten keverjük, majd jég és 0,15 ml tömény sósav elegyébe öntjük. A szerves fázist elválasztjuk, a vizes fázist etilacetáttal mossuk, majd a szerves oldatot 5%-os vizes nátrium-karbonát oldattal és telített sóoldattal mossuk. A szerves oldatot magnézium-szulfáton megszárítjuk és az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, így 2,2,6-trimetil-4-heptanont nyerünk.
0,7 mmol vinil-magnézium-kloridot oldunk 1 ml vízmentes dietiléterben, majd az oldatot argon atmoszférába helyezzük és 1-5°C hőmérsékletre hűtjük. Ezután az oldathoz 0,533 mmol t
butiril-klorid 1,5 ml vízmentes dietiléterben készült oldatát csepegtetjük. A reakcióelegyet 1,5 órán át 0-5°C hőmérsékleten keverjük, majd jég és tömény sósav (0,15 ml) elegyébe öntjük. A szerves fázist elválasztjuk. A szerves oldatot vízzel, 5%-os vizes nátrium-karbonát oldattal, majd telített sóoldattal mossuk. Ezután a szerves oldatot magnézium-szulfáton megszárítjuk és az oldatot vákuumban elpárologtatjuk. Propil-vinil-keton terméket nyerünk.
0,4 mól 2,2,6-trimetil-4-heptanont oldunk 10 ml metanolban, majd az oldathoz 12 g (0,1 mól) kálium-tere-butoxidot adagolunk. A reakcióelegyhez 0,2 mól propil-vinil-keton 10 ml metanolban készült oldatát csepegtetjük, majd az elegyet 10 percen át keverjük. Ezután a keveréket etiléter és telített sóoldat között megosztjuk. A szerves fázist elválasztjuk és telített sóoldattal mossuk mindaddig, amíg pH értéke semleges értékűvé nem válik. Ezután a szerves oldatot nátrium-szulfáton megszárítjuk és az oldószert vákuumban elpárologtatjuk. 2-propil-3-terc-butil-5-izopropil-benzokinont nyerünk.
mmol 2-propil-3-terc-butil-5-izopropil-benzokinont 1,79 ml (10 mmol) 1,1,3,3-tetrametil-disziloxánt és 0,05 g jódot 30 ml diklórmetánban oldunk. A reakcióelegyet 30 percen át keverés közben visszafolyatás mellett forraljuk, majd ezt követően 30 ml In nátrium-hidroxid oldattal extraháljuk. A vizes fázist ezt követően tömény sósavval megsavanyítjuk, majd négyszer 10 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves oldatot nátrium-szulfáton megszárítjuk és az oldószert vákuumban elpárologtatjuk. 2-propil- 3 -tere-butil-4-hidroxi- 5 -izopropil- fenolt nyerünk.
2,0 mól 2-propil-3-terc-butil-4-hidroxi-5-izopropil-fenolt, » valamint 0,3 liter trimetil-ortoformiátot 1,2 liter metanolban oldunk, majd gázmentesítjük. Ezután az oldatot nitrogén atmoszférába helyezzük és 3°C hőmérsékletre hűtjük. Az elegyhez 5 ml tömény kénsavat adagolunk. Ezután a keverékhez 340 ml (4,0 mól) metil-vinil-keton oldatot csepegtetünk. Az elegyet hűtés nélkül 44 órán át keverjük, majd vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldatba
Λ ·»·» ··· ·· :**· ··· ·· :
·· öntjük. Az oldatot etiléterrel extraháljuk. A szerves oldatot magnézium-szulfáton megszárítjuk, majd az oldószert vákuumban elpárologtatjuk. 2-metoxi-2-metil-7-terc-butil-5-izopropil-8-propil-kromán-6-ol vegyületet nyerünk.
mól 2-metoxi-metil-7-terc-butil-5-izopropil-8-propil-kromán-6-ol vegyületet 600 ml piridinben oldunk, majd az oldathoz 900 ml ecetsav-anhidridet adagolunk. Az elegyet gázmentesítjük, majd nitrogén atmoszférában 18 órán át keverjük. Ezután a reakcióelegyet jég és víz elegyébe öntjük és 3 órán át keverjük. A keveréket etiléterrel extraháljuk, majd a szerves oldatot magnézium-szulfáton megszárítjuk és az oldószert vákuumban elpárologtatjuk. A maradékot kromatográfia segítségével tisztítjuk, és így 2-metoxi-2-metil-7-terc-butil-5-izopropil-8-propil-kromán-6-il-acetátot nyerünk.
mól 2-metoxi-2-metil-7-terc-butil-5-izopropil-8-propil-kromán-6-il-acetátot oldunk 2,5 liter acetonban, majd az oldathoz 2 liter vizet és ezt követően 16,6 ml tömény sósavat adunk. A kevert elegyből az oldószert elpárologtatjuk olyan mértékben, hogy a fejhőmérséklet 90°C értéket érjen el. A kapott szuszpenziót lehűtjük, majd etiléterrel hígítjuk és vizes nátrium-hidrogén-karbonát oldattal mossuk. A szerves oldatot magnézium-szulfáton megszárítjuk és az oldószert vákuumban »
elpárologtatjuk. A terméket kromatográfia segítségével tisztítjuk, és így 2-hidroxi-2-metil-7-terc-butil-5-izopropil-8-propil-kromán-6-il-acetátot nyerünk.
47,2 g (56%-os olajos szuszpenzió, 1,10 mól) nátrium-hidridet 1 liter vízmentes tetrahidrofuránban szuszpendálunk. A szuszpenziót nitrogén atmoszférába helyezzük, majd 209,4 g
- 46 (1,15 mól) trimetil-foszfono-acetátot csepegtetünk hozzá. A reakcióelegyet 25 percen át keverjük, majd 0,5 mól 2-hidroxi-2-metil-7-terc-butil-5-izopropil-8-propil-kromán-6-il-acetát liter tetrahidrofuránban készült oldatát csepegtetjük hozzá.
Az elegyet 18 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd 4 órán át visszafolyatás mellett forraljuk. Ezután a keveréket lehűtjük, az oldószert vákuumban elpárologtatjuk és a maradékot kromatográfia segítségével tisztítjuk. A címbeli vegyületet nyerjük.
Biológiai vizsgálatok
A szintetikus felületaktív készítmények hatásosságának tesztvizsgálata a szakirodalomban jól ismert. Például a találmány szerinti szintetikus felületaktív készítmények megfelelő módon vizsgálhatók felnőtt patkány tüdő modell alkalmazásával [Ikegami és munkatársai (1979) Pediatr. Rés. 13, 777-780].
A felületaktív anyag hiányos patkány tüdő nyomás-térfogat jellemzői hasonlóak, mint az újszülöttek tüdő tünetei, akik üvegszerű membrán betegségben szenvednek. A nyomás-térfogat viszony normál tüdő értékre történő visszaállítását a becsepegtetett felületaktív anyag mennyiségének függvényében dózisfüggő módon valósíthatjuk meg. [Bermel, M.S. és munkatársai, Felületaktív anyaghiány modellként alkalmazott öblített kimetszett t
patkánytüdők, Lung 162: 99-113 (1984)].
13. példa
Izolált öblített patkánytüdő modell
Az állat preparálásának és a nyomás-térfogat görbe mérésének továbbá a tüdő öblítésnek eljárását a· szakirodalomban leírtak
- 47 szerint végezzük [Ikegami és munkatársai, Pediatr. Rés. 11: 178182 (1977) és Pediatr. Rés. 13: 777-780 (1979) és Bermel és munkatársai, Lung 162: 99-113 (1984)]. 200-250 g tömegű hím Sprague Dawley patkányokat érzéstelenítünk nátrium-pentobarbitál segítségével, majd kivéreztetjük. A légcsőt kanüllel látjuk el, a mellkasi szerveket egyben eltávolítjuk. Miután a járulékos szöveteket eltávolítjuk, a légcsövet és a tüdőket (kb. 2 g) 0,9%-os izotóniás sóoldatban szuszpendáljuk, majd vákuumkamrába helyezzük. A tüdőt és légcsövet Stengel és munkatársai eljárásával gázmentesítjük. A gázmentesített tüdőket 37°C hőmérsékleten fiziológiás sóoldatban szuszpendáljuk egy köpennyel ellátott tartályban, majd a légcsövi kanült hozzákötjük a víz manométerhez és T-cső segítségével egy üveg injekcióstűhöz segítségével. Az üveg injekcióstűt infúzió/szívó szivattyúra kötjük. A tüdőket gyorsan elárasztjuk levegővel 30 víz cm nyomás értékig, a levegő bevezetés sebessége 10 ml/perc abból a célból, hogy levegőcsapda ne keletkezzen. A tüdőket 10 percen át ezen a nyomáson tartjuk úgy, hogy időszakosan újabb levegőt vezetünk be a tüdőkbe. A bevezetett levegő teljes mennyiségét mérjük; ez a tüdő teljes kapacitása. Általában a teljes kapacitás 14-15 ml. Ezt követően a tüdőket 2,5 ml/perc ürítési sebességgel, amíg 0 nyomásig kiürítjük. Az ürítés során a nyomást a víz manométeren mérjük, 1 cm szakaszonként leolvassuk és feljegyezzük. Ezeket az adatokat alkalmazzuk a nyomás-térfogat (P-V) vagy a kvázi-statikus teljesítés görbe képzéséhez, miután a P-V berendezés görbe-korrekciót elvégezzük. A gáztalanítás és egyensúlyba hozás után a tüdőket felületaktív anyag hiányossá alakítjuk úgy, hogy ismételten 5 ml/g öblítő pufferrel mossuk (0,9% NaCl, 10 mmol HEPES, pH 7,4).
• ·
- 48 A gázmenetesités, egyensúlyba hozás és öblítés folya-matot addig ismételjük (15-20 alkalommal), amíg a nyomás-térfogat görbe egyértelműen S-alakúvá válik és az 5 cm víznyomás mellett a tüdőkben maradó levegő térfogata 3 ml vagy ennél kevesebb. Ekkor a tüdőket felületaktív anyag hiányosnak tekintjük. A tesztvizsgálat céljából 2 ml 0,9% NaCl, 10 mmol HEPES puffer, pH 7,4 elegyet adagolunk a száraz tüdő felületaktív anyagokhoz (25 ml foszfolipid; 100-125 mg/kg), majd ezt az elegyet örvény- keveréssel keverjük, nitrogénnel átöblítjük és 1 órán át 45°C hőmérsékleten inkubáljuk. Ezt követően az elegyet ismét örvénykeveréssel keverjük, amennyiben habos gázmentesítjük, majd 2 ml tesztvizsgálati elegyet vezetünk be, illetve szívunk ki a tüdőkből 4 alkalommal injekcióstű alkalmazásával. Amikor a tesztvizsgálati keveréket ötödik alkalommal ismét bevezetjük a tüdőkbe, hagyjuk, hogy a tüdőben maradjon. Ezt a bevezetési eljárást abból a célból alkalmazzuk, hogy az anyag egyenletes eloszlását biztosítsuk a tüdő teljes területén. Ezt követően a tüdőket gázmentesítjük, majd 3 percen át 37°C hőmérsékleten hagyjuk, hogy egyensúlyba kerüljenek és ezt követően a P-V mérést végezzük el.
A tüdőket 37°C hőmérsékleten fiziológiás sóoldatban vizsgáljuk és nem szobahőmérsékleten végezzük a mérést, mivel a feületaktív anyagok fizikai jellemzői hőmérséklettől függőek lehetnek. Canin »
tüdő felületaktív anyagot ugyanilyen módon alkalmazunk, azzal az eltéréssel, hogy a felületaktív anyagot csak 5 percen át melegítjük. Az adatokat %-os teljes tüdőkapacitás (TLC) értékben adjuk meg. A hiány szakaszokat a felnőtt patkánytüdők nyomás-térfogat (P-V) görbéin úgy analizáljuk, hogy kiszámítjuk a teljes tüdőkapacitásokat (% TLC) 5 és 10 víz cm nyomás értékeknél (PC5 és
4
- 49 PC^q) . Az összehasonlítást a tüdő működésének új rabeállitás %ában adjuk meg = (PC5 (elegendő) ” pc5 (tesztvizsgálati) x 7 (pc5(elegendő) ’ PC5(hiányos)· Egyirányú variancia analízist végzünk általános lineáris modell eljárást alkalmazva a specifikus kontraszt átlagértékekkel (SAS Institute Inc., Cary, NC). A <0,05 valószínűség értéket tekintettük a statisztikai jelentőségű eltérés jelének. Az öblítés és a tesztvizsgálati eleggyel történő kezelés az abszolút TLC értékben nem okozott 6%-nál nagyobb változást.
Antioxidáns aktivitás
Peptideket oldunk trifluor-etanolban (TFE) és szója foszfatidil-kolinnos oldatával elegyítjük. Az elegyet nitrogénáramban megszárítjuk, majd újra szuszpendáljuk etanolban és pufferbe injektáljuk (50 mmol NaCl, 50 mmol Tris-HCl, ph 7,0). A végső oldatba 0,5 mmol foszfolipid koncentrációt alakítunk ki. Peroxidálást iniciálunk 50 Mmol Fe2+ és 50 μπιοί Fe3+, valamint 250 Mmol hisztidin elegyével. 15 perc időtartamokon belül 37°C hőmérsékleten tartva az elegyet 1 ml térfogatú mintát veszünk. A mintákban meghatározzuk a TBARs tartalmat (tiobarbitursav reaktív anyagok). 2 ml elegyhez 2 rész 0,67%-os tiobarbitursavat/0,05n NaOH elegyet és 1 rész 10% triklór-ecetsav és 0,05 ml 2%-os butilezett hidroxi-toluol elegyet adunk. A reakciót 30 percenát 100°C hőmérsékleten végezzük. Ezután a mintacsöveket lehűtjük, 15 percen át 3000 ford/perc alkalmazásával centrifugáljuk, majd akril-küvettákba töltjük. Az 532 nm és 700 nm értéknél mért abszorpció különbséget (a fényszóródás korrekciója érdekében) mérjük és a TBAR anyagok mennyiségét malon-dialdehid ekvivalens
- 50 egységekben adjuk meg. A moláris extinkciós koeffi-ciens: 1.56 x 105 m1 cm·1·.
CD spektrum mm köralakú küvettákban a minták cirkuláris dikroizmus (CD) spektrumát mérjük szobahőmérsékleten Jasco J-500A spektropolariméter alkalmazásával, amely 2 nm hasítási szélességű. A puffer CD spektrumát kivonjuk a minta CD spektrumából mindenegyes szkennelés után. A szkennelési sebesség 2 nm/perc, az időállandó 8 másodperc. Az adatokat 0,04 nm intervallumokban mérjük és 0,2 nm intervallumra átlagoljuk.
Felületi feszültség mérés
37°C hőmérsékleten a minták oszcilláló buborékénak minimális és maximális felületi feszültségét mérjük 20/perc ciklus sebességgel pulzáló buborék felületi feszültségmérőben (PBS, Electronetics Corp.), a mérést az Enhorning, J. Appl. Physiol 43: 198203 (1977) eljárásának megfelelően végezzük. A műanyag kamrát felhasználás előtt edénymosogatószer híg oldatával átbölítjük, majd vízzel alaposan kiöblítjük és nitrogénáramban szárítjuk.
Eredmények
A teszvizsgálatnak alávetett peptidek szerkezetét az 1. ábrán mutatjuk be. A WMAP10 hatásos amphipatikus a-helikális peptid, amelyet DPPC-ban szintetikus tüdő felületaktív anyagként vetünk alá tesztvizsgálatnak. A HBB-Lys-MAP10, a HBS-Cys-MAPIO és Trl-Lys-MAPIO peptid-analógok hidrofób antioxidáns részt tartalmaznak. A Trolox Lys-L kapcsolt Trl-Lys-MAPIO vegyületben, és így • · · · · • t · · · * · · · ····· · · · két izomert képzett, amelyek a Trolos(I)-ΜΑΡΙΟ és Trolos(II)-ΜΑΡΙΟ és amely izomereket elválasztottuk, azonban sztereokémiájukat nem azonosítottuk. A peptidek szerkezetét vízben és trifluor-etanolban, amely elősegíti a hidrogén-kötések kialakulását és az a-helikális szerkezet képződését, összehasonlítottuk CD spektroszkópia mérés segítségével. A CD spektrumokat a 2. ábrán mutatjuk be. A számított másodlagos szerkezeteket az I. táblázatban írjuk le. Valamennyi peptid nagymértékben a-helikális szerkezetű TFE oldószerben és kevésbbé α-helikális szerkezetű vízben. A TFE oldószerben igen kis α-helikális szerkezet tartalom különbség mutatkozik a peptidekben, ami az I. táblázat adataiból kitűnik. Ugyanebben jelentős különbségek mutatkoznak víz oldószerben.
I. táblázat
Peptidek konformációja CD spektrum alapján
Peptid | Víz | TFE | ||
a | β | a | a | |
WMAP10 | 64 | 0 | 73 | 0 |
HBB-LysMAP10 | 59 | 4 | 78 | 0 |
HBS-CysMAP10 | 55 t | 21 | 89 | 0 |
Trolos(I)-ΜΑΡΙΟ | 26 | 39 | 78 | 0 |
Trolox(II)-ΜΑΡΙΟ 33 | 33 | 20 | 89 | 0 |
* Az adatok megfelelnek a korábban mért standard spektrumoknak [Greenfield & Fasman, Biochemistry 8: 4108-4116 (1986)]. Az illeszkedés minden esetben ±3% (SEM illeszkedés).
A tüdő felületaktív anyag keverékek fizikai jellemzőit differenciális szkennelő kalorimetria (DSC) mérés és pulzáló buborék felületi feszültség mérs segítségével határozzuk meg. A DPPC fázis átalakulásának entalpiája jelenőtsen csökken az olyan tüdő felületaktív keverékekben, amelyek a lipiddel erős kölcsönhatásba lépő peptideket tartalmaznak [McLean, L.R. és munkatársai, Biochemistry 30: 31-37 (1991)] és amelyek hatásosak a patkány átöblített tüdő modell vizsgálatban. Az entalpiákat és a fázisátmenet hőmérsékleteit a II. táblázatban adjuk meg. Ezek túlmenően jelentős minimális felületi feszültség csökkenés tapasztalható a pulzáló buborék mérésben valamennyi szintetikus tüdő felületaktív anyag keverék esetében. A Probucol enyhén növelt^pj^H értékű (II. táblázat).
II. táblázat
Tüdő felületaktív keverékek fizikai jellemzői
Keverék min (mn/m)
DPPC* +WMAP10 <2 +WMAP10 + probucol 12 4-HBB-LysMAPlO <2 +HBS-CysMAPlO 2 -t-Trolox (I)-ΜΑΡΙΟ 10 +Trolox(II)-ΜΑΡΙΟ 2 * A DPPC értékeket nem ultrahanggal kezelt liposzómákon mértük.
^min értékek mérése 10 perc pulzálás után történt.
A peptidek antioxidáns hatásosságát összehasonlítjuk azzal az esettel, amikor a WMAP10 keverékekhez a szója PC keverékben probucolt adagolunk. Kontrollként BHT anyagot vizsgáltunk. A WMAP10 szója PC-ben nem mutat antioxidáns aktivitást a vizsgált koncentrációkba (3. ábra). Ugyancsak nem mutatott ilyen hatást az az analóg, amely a TRP maradék helyett Lys maradékot tartalmaz (az adatok nem mutatottak). A probucol legalább 8 percen át 0,6% koncentrációban alkalmazva teljesen inhibiálja az oxidálást (tömeg%) (adatok nem mutatottak). A HBB-Lys és a HBS-Cys származékok hatásos antioxidánsok olyan koncentrációban, amelyben a szintetikus felületaktív anyagokban ezeket alkalmazzuk. A Trolox származékok ugyancsak hatásos antioxidánsok hasonló keverékekben (adat nem mutatott).
A patkányoknak adagolt készítmények áttetsző megjelenésinek. A hiánygörbe részt a felnőtt patkányok tüdejének nyomás-térfogat (P-V) görbéjében úgy analizáljuk, hogy kiszámítjuk a teljes tüdő kapacitás (TLC) %-át 5 víz cm nyomáson (PC5) és a TLC értéket 10 víz cm nyomáson (PC10). A PC5 értékekben történő visszaállítási mértéket alkalmazzuk a tesztvizsgálati keverékek összehasonlításának céljára. A DPPC önmagában nem fejt ki jelentős hatást az öblített tüdő nyomás-térfogat (P-V) görbékre. A szintetikus felületaktív anyagok esetében 2 vagy 4 tömeg% peptidkoncentrációt t alkalmazunk, amely százalékok a WMAP10 és DPPC keverékek optimális koncentrációjára vonatkoznak (ΜΑΡΙΟ). Az eredményeket a (III) táblázatban adjuk meg. A WMAP10 szekvencia igen hatásos az öblített felnőtt patkánytüdő P-V görbéjének újra beállításában, amely újrabeállítás csaknem az eredeti egészséges állapotot állítja vissza, amennyiben ez a szekvencia DPPC anyaggal kevert.
Probucol adagolása vagy a peptidek helyettesítése, amelyek HBB-t tartalmaznak vagy Trolox funkciós csoportot tartalmaznak, nem csökkenti a peptid-DPPC elegyek aktivitását.
III. táblázat
Felnőtt patkány öblített tüdő modellben a szintetikus felület-
aktív | anyagok | hatásossága | |||
Keverék | Dózis | PC5 | PC10 hatásosság | ||
(mg) | n | (%TLC) | (%TLC) | (%) | |
elegendő | 50 | 68±1 | 87±1 | 100 | |
hiány | 50 | 17±1 | 45±1 | 0 | |
DPPC | 4 | 13±1 | 31±2 | 11±8 | |
+2%WMAP10 | 10 | 3 | 54±4 | 79±3 | 75±8 |
+2%WAMP10 + probucol | 10 | 3 | 62±7 | 82±5 | 87±11 |
+2%WMAP10 | 25 | 3 | 63±3 | 84±2 | 92±3 |
+4%WMAP10 | 10 | 3 | 63±5 | 84±4 | 95±11 |
+4%HBB-LysMAP10 | 25 | 3 | 68±2 | 83±1 | 94±3 |
+2%HBS-CysMAP10 | 25 | 2 | 62±3 | 84±2 | 104±4 |
+2%Trolox(I)-ΜΑΡΙΟ | 25 | 3 | 61±4 | 84±1 | 103±7 |
+2%Trolox(II)-ΜΑΡΙΟ | 25 | 3 | 63±3 | 85±1 | 100±5 |
* Az újrabeállítás PC5 értékre vonatkozik és megfelelő, valamint hiányos mérések összehasonlításából származik ugyanazon tüdőket alkalmazva, amelyeket a tesztvizsgálati anyagra is alkalmazunk.
Az értékek átlag ± SEM értékek. A probucol koncentráció 2 tömeg% érték volt.
Claims (2)
1. Az (1) általános képletű polipeptid
X-Y-Z-Y’-Q (1) gyógyszerészetileg elfogadható sója vagy optikailag aktív izomerje, ahol az általános képletben
X jelentése hidrogénatom, 1-5 szénatomszámú alkilcsoport, 1-10 szénatomszámú acil-csoport, valamely aminosav maradék, dipeptid-maradék vagy tripeptid-maradék;
Y és Y' mindegyikének jelentése egymástól függetlenül egy kötés, -(Ser)n- általános képletű csoport, ahol n jelentése 1-3 közötti egész szám vagy
T általános képletű csoport, ahol az általános képletben n' jelentése 1-8 közötti egész szám;
W jelentése -NHC(0)-csoport, NHCH2-csoport, -0C(0)-csoport, -C(0)O-csoport, -SC(0)-csoport vagy -SS-csoport; és
D jelentése (Da) általános képletű csoport vagy (Db) általános képletű csoport, ahol
B jelentése egy kötés, 1-16 szénatomszámú alkilén-csoport vagy 2-16 szénatomszámú alkenilén-csoport és Bejelentése B általános képletű csoport vagy (E) áltat lános képletű csoport, ahol az általános képletben R^, R2, R3, R4, R5, Rg és R7 mindegyikének jelentése egymástól függetlenül 1-6 szénatomszámú alkilcsoport; vagy
X és Y jelentése együttesen Da-C(0)- általános képletű csoport vagy Db-C(O)- általános képletű csoport;
Q jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport, alkil-amino-csoport, alkoxi-csoport, -O-Da általános képletű csoport vagy -O-Db általános képletű csoport;
Z jelentése 8-25 aminosav maradékból álló peptid, amely az alábbi oligomer-fragmenst tartalmazza ~Al’A2~A3_A4~A5_A6’A7_A8~A9_A10“All_Al'_A2'A3'_A4'_A5' A6 ' a7'A8’-A9’~A10’-A11’-A1-a2”-a3A4A5~A6A7A8’A9’
10 Α11 Α1 Α2 és amely bármely Α^-Λ·^ aminosav-maradékkal kezdődhet, ahol az általános képletben
A2, A^ ' , A]_, A^ ' ' ' , A^, A^ ' , A^ , Αθ, Ag 1 , Ag ' , és Ag j elentése egymástól függetlenül lehet valamely hidrofil aminosav-maradék, amely lehet Glu-, Asp-, -Alá-, -Gin-, -Asn-, -Gly-, -Ser-, Thr-, -Lys-, -Arg-, -Orn-, és -hArg-;
ahol az általános képletben a2' A2 ' ' A2' A2'''' A3 ’ A3'· A3' A6' A6'' A6'' A7' A7’' A7' A10< Αιο' Α1θ jeientése lehet lipofil aminosav-maradék, amelyek lehetnek -Leu-, -Nle-, -Met-, -Alá-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, és -Tyr- vagy T általános képletű aminosav-maradék származék;
A5, A5' , A5 , A11( A]_]_' és A1;l jelentése egymástól függetlenül lehet bázisos aminosav-maradék, amely lehet például -Lys-, »
-Orn-, -Arg-, vagy -hArg-;
Ag, Ag', Ag jelentése egymástól függetlenül lehet lipofil semleges vagy bázisos aminosav-maradék, amelyek lehetnek -Leu-,
-Nle-,
-Thr-,
-Met-, -Alá-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, -Tyr-,
-Ser-, -Gin-, -Asn-, -Gly-, -Lys-, -Arg-, -hArg-,
-Trp-, -Orn-, -Trp(For)- vagy aminosav maradék, amely a T általános képletű csoport;
azzal a feltétellel, hogy legalább egy (T), -O-Da, -Ο-Db, -(O)C-Da vagy -(0)-C-Db általános képletű csoport található az (1) általános képletű vegyületben.
2. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, azzal jellemezve, hogy az általános képletben A2, A2', A2 vagy A2''' legalább egyikének jelentése Leu.
. igénypont szerinti legalább egyikének hogy az általános képletben A2, A2' vagy A2 elentése Leu.
igénypont szerinti polipeptid, azzal jellemezve, hogy az általános képletben A4, A4' vagy A4 legalább egyikének j elentése azzal jellemezve, igénypont szerinti polipeptid, egyikének
Lys.
hogy igénypont szerinti polipeptid, azzal jellemezve, hogy az általános képletben Ag, Ag' vagy Ag legalább egyikének jelentése Leu.
azzal jellemezve, igénypont szerinti polipeptid, egyikének
Leu.
azzal jellemezve, hogy igénypont szerinti polipeptid, egyikének jelentése Glu.
. igénypont szerinti legalább egyikének hogy az általános képletben Ag, Ag1 vagy Ag jelentése (T) általános képletű csoport.
·· ··»♦
10. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, azzal jellemezve, hogy az általános képletben A10, A10' vagy A10 legalább egyikének jelentése Leu.
11. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, azzal jellemezve, hogy az általános képletben Allf A-^' vagy A1;L legalább egyikének jelentése Lys.
12. Az 1-12. igénypontok bármelyike szerinti polipeptid, azzal jellemezve, hogy az általános képletben Q jelentése aminocsoport .
13. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, azzal jellemezve, hogy az általános képletben D jelentése Da általános képletű csoport.
14. A 13. igénypont szerinti polipeptid, azzal jellemezve, hogy az általános képletben R-j_ és R2 mindegyikének jelentése tere-butil-csoport.
15. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, azzal jellemezve, hogy ez a Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-[Ne-HBB-Lys]-Leu-Lys-NH2 (SEQ ID NO: 29) vegyület.
16. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, azzal jellemezve, hogy ez a Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-[S-HBS-Cys]-Leu-Lys-NH2 (SEQ ID NO: 30) vegyület.
17. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, azzal jellemezve, t
hogy ez a Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-[Ne-Trl-Lys]-Leu-Lys-NH2 (SEQ ID NO: 31) vegyület.
18. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, azzal jellemezve, hogy az (1) általános képletben legalább egy (T) általános képletű csoport található, ahol az általános képletben n' jelentése 4, W jelentése -HNC(0)-csoport, D jelentése Da általános képletű «*4 *· ··*· · • 4·· • 44 4 ··* • 4 4·
4 · «444 4
- 59 csoport, Bj_ jelentése egy kötés, R·^ jelentése terc-butil-csoport és R2 jelentése terc-butil-csoport.
19. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, azzal jellemezve, hogy az (1) általános képletben legalább egy (T) általános képletű csoport található, ahol az általános képletben n' jelentése 1, W jelentése -SS-csoport, D jelentése Da általános képletű csoport, B]_ jelentése egy kötés, R^ jelentése terc-butil-csoport és R2 jelentése terc-butil-csoport.
20. Az 1. igénypont szerinti polipeptid, azzal jellemezve, hogy a benne található aminosavak D-izomer konfigurációjúak.
21. Az (1) általános képletű polipeptid X-Y-Z-Y'-Q (1) gyógyszerészetileg elfogadható sójának vagy optikailag aktív izomerje ahol az általános képletben
X jelentése hidrogénatom, 1-5 szénatomszámú alkilcsoport, 1-10 szénatomszámú acil-csoport, valamely aminosav maradék, dipeptid-maradék vagy tripeptid-maradék;
Y és Y' mindegyikének jelentése egymástól függetlenül egy kötés, -(Ser)n- általános képletű csoport, ahol n jelentése 1-3 közötti egész szám vagy
T általános képletű csoport, ahol az általános képletben n' 1-8 közötti egész szám;
W jelentése -NHC(0)-csoport, NHCH2-csoport, -OC(0)-csoport, -C(O)O-csoport, -SC(0)-csoport vagy -SS-csoport; és
D jelentése (Da) általános képletű csoport vagy (Db) általános képletű csoport, ahol
B jelentése egy kötés, 1-16 szénatomszámú alkilén-csoport vagy 2-16 szénatomszámú alkenilén-csoport és B^ jelentése B általános képletű csoport vagy (E) álta60 • · · ··· ···V • ·<«· ♦ 9 ·« ♦ *· · 4« ·«·«* lános képletű csoport, ahol az általános képletben Rp R2, R3, R4, R5, Rg és R-? mindegyikének jelentése egymástól függetlenül 1-6 szénatomszámú alkilcsoport; vagy
X és Y jelentése együttesen Da-C(O)- általános képletű csoport vagy Db-C(O)- általános képletű csoport;
Q jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport, alkil-amino-csoport, alkoxi-csoport, -O-Da általános képletű csoport vagy -O-Db általános képletű csoport;
Z jelentése 8-25 aminosav maradékból álló peptid, amely az alábbi oligomer-fragmenst tartalmazza AlA2A3A4A5A6A7“A8“A9“A10~AllAl'_A2'_A3'_A4'_A5'A6' A7 ' - A8 ' -A9 ' -A10 ' -A11' -A1 ' a2 -A3 ’ A4 A5 'A6 'A7 A8 ’ A9 “
A ”_A — A »»'_A I I I _ A10 A11 A1 A2 és amely bármely Α^-Α-^ aminosav-maradékkal kezdődhet, ahol az általános képletben
Alz A]/, A^, Aj_' ' ' , A4, A4' , A4, Αθ, Αθ' , Ag' , és Ag jelentése egymástól függetlenül lehet valamely hidrofil aminosav-maradék, amely lehet Glu-, Asp-, -Alá-, -Gin-, -Asn-, -Gly-, -Ser-, Thr-, -Lys-, -Arg-, -Orn-, és -hArg-;
ahol az általános képletben a2-» a2 ' ' a2 ’ A2 ' ' ' ' a3 ' a3 ' ' a3 · A6 ' A6 ' ' A6 ' ' A7 ' A7 ' ' A7 ' t
A10' Α1θ' θΞ Α1θ jelentése lehet lipofil aminosav-maradék, amelyek lehetnek -Leu-, -Nle-, -Met-, -Alá-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, és -Tyr- vagy T általános képletű aminosav-maradék származék;
Ag , Ag ’ , Ag, Allr A^jl’ és A^j-” jelentése egymástól függetlenül lehet bázisos aminosav-maradék, amely lehet például -Lys-, ·· IkV· ·· · · ··· • · · ·«»·«« · • «*·* «4 ·· ·«· · ·« «·· *·
-Orn-, -Arg-, vagy -hArg-;
Ag, Ag', Ag jelentése egymástól függetlenül lehet lipofil semleges vagy bázisos aminosav-maradék, amelyek lehetnek -Leu-,
-Nle-,
-Met-,
-Alá-, -Val·-, -Phe-, -Nva-, -He-,
-Tyr-,
-Thr-,
-Ser-,
-Gin-, -Asn-, -Gly-, -Lys-, -Arg-,
-hArg-,
-Trp(Fór) t
aminosav amely
-Trp-,
-Orn-, azzal a feltétellel, hogy legalább egy (T), -O-Da, -Ο-Db, -(O)C-Da vagy -(O)-C-Db általános képletű csoport található az (1) lános képletű vegyületben;
és egy lipid vagy lipid keverék komplex keveréke, ahol a általipid lehet DPPC, PC, CL, PG,
PS, FA és
TG.
22. A 21. igénypont szerinti komplex keverék, azzal jellemezve, hogy a lipid fő komponense
DPPC.
23. A 21. igénypont szerinti komplex keverék, azzal jellemezve, hogy a lipid DPPC és PG elegye.
24. A 21. igénypont szerinti komplex keverék, azzal jellemezve, hogy a lipid körülbelül 85-100% DPPC és körübelül tartalmú.
25. A 21. igénypont szerinti komplex keverék, azzal
0-15% PG jellemezve, hogy a polipeptid a Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-[Ne
-HBB-Lys]-Leu-Lys-NH2 (SEQ ID NO: 32) vegyület.
26. A 21. igénypont szerinti komplex keverék, azzal jelle- mezve, hogy a polipeptid a Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-[S
-HBS-Cys]-Leu-Lys-NH2 (SEQ ID NO: 33) vegyület.
27. A 21. igénypont szerinti komplex keverék, azzal jellemezve, hogy a polipeptid a Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-[Ne-Trl-Lys]-Leu-Lys-NH2 (SEQ ID NO: 34) vegyület.
28. A 21. igénypont szerinti komplex keverék, azzal jellemezve, hogy a polipeptidben az aminosavak D-izomer konfigurációjúak.
29. Eljárás ilyen kezelést igénylő betegben légzőszervi fájdalom szindróma kezelésére, azzal jellemezve, hogy a kezelést igénylő betegnek az (1) általános képletű polipeptid X-Y-Z-Y'-Q (1) optikailag aktív izomerje vagy gyógyszerészetileg elfogadható sója, ahol az általános képletben
X jelentése hidrogénatom, 1-5 szénatomszámú alkilcsoport, 1-10 szénatomszámú acil-csoport, valamely aminosav maradék, dipeptid-maradék vagy tripeptid-maradék;
Y és Y' mindegyikének jelentése egymástól függetlenül egy kötés,
-(Ser)n- általános képletű csoport, ahol n jelentése 1-3 közötti egész szám vagy
T általános képletű csoport, ahol az általános képletben n' 1-8 közötti egész szám;
W jelentése -NHC(0)-csoport, NHCH2-csoport, -0C(0)-csoport, -C(O)O-csoport, -SC(0)-csoport vagy -SS-csoport; és
D jelentése (Da) általános képletű csoport vagy (Db) általános képletű csoport, ahol
B jelentése egy kötés, 1-16 szénatomszámú alkilén-csoport vagy 2-16 szénatomszámú alkenilén-csoport és Βχ t jelentése B általános képletű csoport vagy (E) általános képletű csoport, ahol az általános képletben R1( R2, R3, R4, R5, Rg és R7 mindegyikének jelentése egymástól függetlenül 1-6 szénatomszámú alkilcsoport; vagy
X és Y jelentése együttesen Da-C(O)- általános képletű csoport vagy Db-C(O)- általános képletű csoport;
Q jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport, alkil-amino-csoport, alkoxi-csoport, -O-Da általános képletű csoport vagy -O-Db általános képletű csoport;
Z jelentése 8-25 aminosav maradékból álló peptid, amely az alábbi oligomer-fragmenst tartalmazza Al_A2A3_A4_A5“A6“A7_A8A9~A10All_Al'_A2'_A3'_A4'_A5'_A6' a7’-a8'-A9'-A10'-A11'A1-A2-A3’A4 ’ A5 ’A6 A7’A8 A9 ’ A10 A11 A1 A2 és amely bármely A4-A44 aminosav-maradékkal kezdődhet, ahol az általános képletben
A]_, A^' , A^, A1''', A^, A4' , A4, Ag, Ag' , Ag' , és Ag jelentése egymástól függetlenül lehet valamely hidrofil aminosav-maradék, amely lehet Glu-, Asp-, -Alá-, -Gin-, -Asn-, -Gly-, -Ser-, Thr-, -Lys-, -Arg-, -Orn-, és -hArg-;
ahol az általános képletben a2' A2 ' ' a2' A2 ' *' A3' a3’' a3· A6' A6'' A6'' A7' A7’' a7' a1q, A]_q ' és A10 jelentése lehet lipofil aminosav-maradék, amelyek lehetnek -Leu-, -Nle-, -Met-, -Alá-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, és -Tyr- vagy T általános képletű aminosav-maradék származék;
A5, Ag' , Ag, Allr A-lí' és Α^ jelentése egymástól függetlenül lehet bázisos aminosav-maradék, amely lehet például -Lys-, -Orn-, -Arg-, vagy -hArg-;
Ag, Ag', Ag jelentése egymástól függetlenül lehet lipofil semleges vagy bázisos aminosav-maradék, amelyek lehetnek -Leu-, -Nle-, -Met-, -Alá-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, -Tyr-,
-Thr-, -Ser-, -Gin-, -Asn-, -Gly-, -Lys-, -Arg-, -hArg-, -Trp-, -Orn-, -Trp(For)- vagy aminosav maradék, amely a T általános képletű csoport;
azzal a feltétellel, hogy legalább egy (T), -O-Da, -Ο-Db, -(O)C-Da vagy -(0)-C-Db általános képletű csoport található az (1) általános képletű vegyületben; és egy lipid vagy lipid keverék komplex elegyének megfelelő mennyiségét adagoljuk, ahol a lipid lehet DPPC, PC, CL, PG, PS, FA és TG.
30. A 29. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a lipid fő komponenseként DPPC vegyületet alkalmazunk.
31. A 29. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy lipidként DPPC és PG elegyet alkalmazunk.
32. A 29. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan lipidet alkalmazunk, amely körülbelül 85-100% DPPC és körülbelül 0-15% PG tartalmú.
33. A 29. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy polipeptidként a Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-[Ne-HBB-Lys]-Leu-Lys-NH2 (SEQ ID NO: 32) vegyületet alkalmazzuk.
34. A 29. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy polipeptidként a Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-[S-HBS-Cys]-Leu-Lys-NH2 (SEQ ID NO: 33) vegyületet alkalmazzuk.
t
35. A 29. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy polipeptidként a Suc-Leu-Leu-Glu-Lys-Leu-Leu-Glu-[Ne-Trl-Lys]-Leu-Lys-NH2 (SEQ ID NO: 37) vegyületet alkalmazzuk.
36. A 29. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan polipeptidet alkalmazunk, amelyben a benne található aminosavak D-izomer konfigurációjúak.
37. Eljárás az (1) általános képletü polipeptid X-Y-Z-Y'-Q (1) gyógyszerészetileg elfogadható sója vagy optikailag elfogadható izomerje előállítására, ahol az általános képletben
X jelentése hidrogénatom, 1-5 szénatomszámú alkilcsoport, 1-10 szénatomszámú acil-csoport, valamely aminosav maradék, dipeptid-maradék vagy tripeptid-maradék;
Y és Y' mindegyikének jelentése egymástól függetlenül egy kötés, -(Ser)n- általános képletü csoport, ahol n jelentése 1-3 közötti egész szám vagy
T általános képletü csoport, ahol az általános képletben n' 1-8 közötti egész szám;
W jelentése -NHC(0)-csoport, NHCH2-csoport, -OC(0)-csoport,
-C(0)O-csoport, -SC(0)-csoport vagy -SS-csoport; és
D jelentése (Da) általános képletü csoport vagy (Db) általános képletü csoport, ahol
B jelentése egy kötés, 1-16 szénatomszámú alkilén-csoport vagy 2-16 szénatomszámú alkenilén-csoport és B^ jelentése B általános képletü csoport vagy (E) általános képletü csoport, ahol az általános képletben R1( R2, R2, R4, R5, Rg és R7 mindegyikének jelentése egymástól függetlenül 1-6 szénatomszámú alkilcsoport; vagy
X és Y jelentése együttesen Da-C(0)- általános képletü csoport vagy Db-C(O)- általános képletü csoport;
Q jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport, alkil-amino-csoport, alkoxi-csoport, -O-Da általános képletü csoport vagy -O-Db általános képletü csoport;
Z jelentése 8-25 aminosav maradékból álló peptid, amely az alábbi oligomer-fragmenst tartalmazza -Al_A2’’A3-A4_A5”A6-A7_A8_A9-A10-All-Al' _A2 'a3'“A4'_A5'_A6' _ a7 ' - A8 ' -a9 ' -A10 ' -A11' - A1 ’ A2 -a3 ’ A4 ’A5 A6 ’A7 ’’ ’ A8 ” ’A9 ’ A10-A11~A1''’A2'''és amely bármely Ai-Aii aminosav-maradékkal kezdődhet, ahol az általános képletben
A-]_, A]_ ’ , A-j_, ' ' ' , A4 , A4 ' , A4, Aq, Ag ' , Ag ' , és Ag jelentése egymástól függetlenül lehet valamely hidrofil aminosav-maradék, amely lehet Glu-, Asp-, -Alá-, -Gin-, -Asn-, -Gly-, -Ser-, Thr-, -Lys-, -Arg-, -Orn-, és -hArg-;
ahol az általános képletben A2’ A2' ' A2’ A2' ' ' ' a3' a3' ’ a3· A6' A6' ' A6' ' A7' A7' ' A7 ' a1q, A1q' és A10 jelentése lehet lipofil aminosav-maradék, amelyek lehetnek -Leu-, -Nle-, -Met-, -Alá-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, és -Tyr- vagy T általános képletű aminosav-maradék származék;
Ag, Ag1, Ag jelentése egymástól függetlenül lehet lipofil semleges vagy bázisos aminosav-maradék, amelyek lehetnek -Leu-,
általános képletű csoport;
azzal a feltétellel, hogy legalább egy (T), -O-Da, -Ο-Db, -(O)C-Da vagy -(0)-C-Db általános képletű csoport található az (1) álta67 lános képletű vegyületben, azzal jellemezve, hogy az alábbi reakciólépéseket hajtjuk végre:
a) egy alkalmasan C-terminálisan védett aminosavhoz kötött gyantát alkalmazunk, amely aminosav a Z-Y'-Q általános képletű csoportból származik, ahol a gyanta az aminosavhoz a Q, Y' fragmensen keresztül kötött és Q jelentése a korábban leírt, továbbá Z jelentése Z csoport azon része, amely a (Τ') általános képletű aminosav vegyületet tartalmazza, ahol az általános képletben n' jelentése a korábban megadott és W' jelentése a W védett formája, amely lehetővé teszi az antioxidáns kapcsolását;
b) a W' általános képletű csoportból a fenti védőcsoportot eltávolítjuk;
c) a megfelelő (Da) vagy (Db) általános képletű antioxidáns egységet a gyantához kapcsoljuk, ahol az általános képletben R^, R2, R3, R4 és R5 jelentése a fent megadott és B', valamint ' jelentése a B és módosításai, amelyek amikor a B' csoporttal kapcsoljuk őket, a Z'-Y'-Q védett aminosav szekvenciát alkotják, ahol Y' és Q jelentése a korábban megadott és Z' jelenetése a Z azon része, amely a (T) általános képletű aminosavat tartalmazza, ahol az általános képletben n' és D jelentése a korábban megadott és W jelentése -NHC(0)-csoport, -NHCH2 _csoport, -0C(O)-csoport, -C(0)0-csoport és -SC(0)-csoport vagy -SS-csoport;
d) sorrendben az egyéb ot-aminocsoporton védett A^-A·^ aminosavakat kapcsoljuk a gyantához, és így egy védett, az igénypontban leírt aminosavszekvenciát állítunk elő; és
e) a védőcsoportokat eltávolítjuk és a kívánt peptidet tisztítjuk.
• «
38. Eljárás az (1) általános képletű polipeptid X-Y-Z-Y'-Q (1) gyógyszerészetileg elfogadható sója vagy optikailag aktív izomerje előállítására, ahol az általános képletben
X jelentése hidrogénatom, 1-5 szénatomszámú alkilcsoport, 1-10 szénatomszámú acil-csoport, valamely aminosav maradék, dipeptid-maradék vagy tripeptid-maradék;
Y és Y' mindegyikének jelentése egymástól függetlenül egy kötés, -(Ser)n- általános képletű csoport, ahol n jelentése 1-3 közötti egész szám vagy
T általános képletű csoport, ahol az általános képletben n' 1-8 közötti egész szám;
W jelentése -NHC(0)-csoport, NHC^-csoport, -0C(0)-csoport,
-C(0)O-csoport, -SC(0)-csoport vagy -SS-csoport; és
D jelentése (Da) általános képletű csoport vagy (Db) általános képletű csoport, ahol
B jelentése egy kötés, 1-16 szénatomszámú alkilén-csoport vagy 2-16 szénatomszámú alkenilén-csoport és B^ jelentése B általános képletű csoport vagy (E) általános képletű csoport, ahol az általános képletben R^, R2, R3, R4, R5, Rg és R7 mindegyikének jelentése egymástól függetlenül 1-6 szénatomszámú alkilcsoport; vagy t
X és Y jelentése együttesen Da-C(O)- általános képletű csoport vagy Db-C(0)- általános képletű csoport;
Q jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport, alkil-amino-csoport, alkoxi-csoport, -O-Da általános képletű csoport vagy -O-Db általános képletű csoport;
Z jelentése 8-25 aminosav maradékból álló peptid, amely az alábbi oligomer-fragmenst tartalmazza ’Al_A2’A3’A4_A5_A6A7~A8_A9_A10“AllAl'_A2'~A3'_A4'_A5’-A6'-
A7'-Ag'-Ag1 -Αχ 01 -AX1'-AX,A2-Ag-A4-Ag-Ag- A?-Ag-AgA10 -A11-A1'''-A2' ' '~ és amely bármely Αχ-Αχχ aminosav-maradékkal kezdődhet, ahol az általános képletben
Αχ, Αχ', Αχ, Αχ''', A4, A4', A4, Ag, Ag', Ag', és Ag jelentése egymástól függetlenül lehet valamely hidrofil aminosav-maradék, amely lehet Glu-, Asp-, -Alá-, -Gin-, -Asn-, -Gly-, -Ser-, Thr-, -Lys-, -Arg-, -Orn-, és -hArg-;
ahol az általános képletben A2 * A2' ' A2' A2' ' ' ' a3' a3' ' a3' A6' A6' ' A6'’ A7' A7' ' A7' A10< AXq' és Alo jelentése lehet lipofil aminosav-maradék, amelyek lehetnek -Leu-, -Nle-, -Met-, -Alá-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, és -Tyr- vagy T általános képletű aminosav-maradék származék;
Ag, Ag', Ag, Αχχ, Αχχ' és Αχχ jelentése egymástól függetlenül lehet bázisos aminosav-maradék, amely lehet például -Lys-, -Orn-, -Arg-, vagy -hArg-;
Ag, Ag', Ag jelentése egymástól függetlenül lehet lipofil semleges vagy bázisos aminosav-maradék, amelyek lehetnek -Leu-,
-Nle-, -Met-, -Alá-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, -Tyr-,
-Gin-, -Asn-, -Gly-, -Lys-, -Arg-, -hArg-,
-Trp(For)- vagy aminosav maradék, amely a T általános képletű csoport;
azzal a feltétellel, hogy legalább egy (T), -O-Da, -Ο-Db, -(O)C-Da vagy -(0)-C-Db általános képletű csoport található az (1) áltaΊΟ lános képletű vegyületben;
azzal jellemezve, hogy
a) egy alkalmasan C-terminális helyzetben védett kötött aminosavat tartalmazó gyantát használva, amely aminosav a Z-Y'-Q általános képletű csoportból származik, ahol a gyanta az aminosav fragmenshez a Q és Y' csoporton keresztül kötött és Q jelentése az előzetesen megadott, továbbá Z jelentése Z csoport azon részlete, amely a (Τ') általános képletű aminosavat képezi, ahol az általános képletben n' jelentése a korábban megadott és W' jelentése a W csoport módosítása, amely lehetővé teszi az antioxidáns kapcsolását;
b) sorrendben az egyéb Α-^-Α-^ α-aminocsoporton védett aminosavakat kapcsoljuk, és így egy X-Y-Z'-Y'-Q védett aminosav szekvenciát állítunk elő, ahol X, Y, Y' és Q jelentése a korábban megadott és Z' jelentése olyan csoport, amely tartalmazza a (Τ') általános képletű aminosav vegyületet, ahol az általános képletben n' jelentése korábban megadott és W' jelentése védett W általános képletű csoport, amely lehetővé teszi az antioxidáns kapcsolását;
c) a W' csoportból a fenti védőcsöpörtót eltávolítjuk;
d) a megfelelő (Da) vagy (Db) általános képletű antioxidáns csoportot kapcsoljuk, ahol az általános képletben R^, R2> R3, R4 t
és R5 jelentése a fent megadott és B', továbbá B^' jelentése a B és Bj módosított változata, amelyek amennyiben W' csoporthoz kapcsoltak, az X-Y-Z-Y'-Q általános képletű aminosav szekvenciát alkotják, ahol az általános képletben X, Y, Z, Y' és Q jelentése a korábban megadott; és
e) A fenti védőcsoportokat eltávolítjuk és a kívánt peptidet tisztítjuk.
39. Eljárás az (1) általános képletű polipeptid X-Y-Z-Y'-Q (1) gyógyszerészetileg elfogadható sója vagy optikailag aktit izomerje előállítására, ahol az általános képletben
X jelentése hidrogénatom, 1-5 szénatomszámú alkilcsoport, 1-10 szénatomszámú acil-csoport, valamely aminosav maradék, dipeptid-maradék vagy tripeptid-maradék;
Y és Y' mindegyikének jelentése egymástól függetlenül egy kötés, -(Ser)n- általános képletű csoport, ahol n jelentése 1-3 közötti egész szám vagy
T általános képletű csoport, ahol az általános képletben n' 1-8 közötti egész szám;
W jelentése -NHC(0)-csoport, NHCl^-csoport, -0C(0)-csoport,
-C(0)0-csoport, -SC(0)-csoport vagy -SS-csoport; és
D jelentése (Da) általános képletű csoport vagy (Db) általános képletű csoport, ahol
B jelentése egy kötés, 1-16 szénatomszámú alkilén-csoport vagy 2-16 szénatomszámú alkenilén-csoport és B^ jelentése B általános képletű csoport vagy (E) általános képletű csoport, ahol az általános képletben R^, R2, R3, R4, R5, Rg és R7 mindegyikének jelentése egymástól függetlenül 1-6 szénatomszámú alkilcsoport; vagy
X és Y jelentése együttesen Da-C(0)- általános képletű csoport vagy Db-C(O)- általános képletű csoport;
Q jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport, alkil-amino-csoport, alkoxi-csoport, -O-Da általános képletű csoport vagy -O-Db általános képletű csoport;
aminosav peptid, amely oligomer-fragmenst amely bármely ahol az általános képletben
A 4, A]_' , A4, A4' ' ' , A4, A4' , A4, Ag, Ag', Ag' , és Ag jelentése egymástól függetlenül lehet valamely hidrofil aminosav-maradék, amely lehet Glu-, Asp-, -Alá-, -Gin-, -Asn-, -Gly-, -Ser-, Thr-, -Lys-, -Arg-, -Orn-, és -hArg-;
ahol az általános képletben
A2, A2' , A2, A2' ' ' , Ag, Ag' , Ag, Ag, Ag' , Ag' , Αγ, Αγ' , Αη , Α10' Α10' Α1θ jelentése lehet lipofil aminosav-maradék, amelyek lehetnek -Leu-, -Nle-, -Met-, -Alá-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -He-, és -Tyr- vagy T általános képletű aminosav-maradék származék;
A5, Ag', Ag, A41, A14' és A41 jelentése egymástól függetlenül lehet bázisos aminosav-maradék, amely lehet például -Lys-, -Orn-, -Arg-, vagy -hArg-;
Ag, Ag', Ag jelentése egymástól függetlenül lehet lipofil sem» leges vagy bázisos aminosav-maradék, amelyek lehetnek -Leu-,
-Nle-,
-Met-, -Alá-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, -Tyr-,
-Gin-, -Asn-, -Gly-, -Lys-, -Arg-, -hArg-,
-Trp-,
-Orn-,
-Trp(Fór)- vagy aminosav maradék, amely a T általános képletű csoport;
azzal a feltétellel, hogy legalább egy (T) , -O-Da, -Ο-Db, -(O)C-Da vagy -(0)-C-Db általános képletű csoport található az (1) általános képletű vegyületben, azzal jellemezve, hogy
a) a megfelelően C-terminálisán védett és kötött aminosavat tartalmazó gyantát alkalmazva, amely aminosav a Z-Y'-Q általános képletű csoportból származik, ahol a gyanta az aminosav fragmenshez a Q, Y' csoporton keresztül kötött és ahol Q jelentése a korábban megadott és Z jelentése a Z általános képletű csoport bármely alkalmas aminosav része;
b) sorrendben kapcsoljuk az általános képletű a-ami- nocsoporton védett aminosavakat, és így egy Y-Z'-Y-Q általános képletű védett aminosav szekvenciát állítunk elő, ahol Y, Y' és Q jelentése az általános képletben megadott és Z' jelentése egy N-terminálisán védett peptid-maradék, amely a kívánt számú A^-A·^ aminosav maradékot tartalmazza;
c) a Z' csoportból a védőcsoportot eltávolítjuk;
d) a megfelelő (Da) vagy (Db) általános képletű antioxidáns egységet kapcsoljuk, ahol az általános képletben R1( R2, R3, R4 és R5 jelentése a korábban megadott és Β', valamint B^' jelentése a B és B^ általános képletű csoportok módosított változata, amely
I amennyiben a W' csoporttal kapcsolt, egy X-Y-Z-Y'-Q általános képletű védett aminosav szekvenciát szolgáltat, ahol az általános képletben X, Y, Z, Y' és Q jelentése a korábban megadott; és
e) A fenti védőcsoportokat eltávolítjuk és a kívánt peptidet tisztítjuk.
• · · · ·
40. Eljárás az (1) általános képletű polipeptid X-Y-Z-Y'-Q (1) gyógyszerészetileg elfogadható sója vagy optikailag aktív izomere előállítására, ahol az általános képletben
X jelentése hidrogénatom, 1-5 szénatomszámú alkilcsoport, 1-10 szénatomszámú acil-csoport, valamely aminosav maradék, dipeptid-maradék vagy tripeptid-maradék;
Y és Y' mindegyikének jelentése egymástól függetlenül egy kötés, -(Ser)n~ általános képletű csoport, ahol n jelentése 1-3 közötti egész szám vagy
T általános képletű csoport, ahol az általános képletben n' 1-8 közötti egész szám;
W jelentése -NHC(0)-csoport, NHCH2-csoport, -0C(0)-csoport, -C(0)0-csoport, -SC(0)-csoport vagy -SS-csoport; és
D jelentése (Da) általános képletű csoport vagy (Db) általános képletű csoport, ahol
B jelentése egy kötés, 1-16 szénatomszámú alkilén-csoport vagy 2-16 szénatomszámú alkenilén-csoport és Bjelentése B általános képletű csoport vagy (E) általános képletű csoport, ahol az általános képletben , R2, R3, R4, R5, Rg és R7 mindegyikének jelentése egymástól függetlenül 1-6 szénatomszámú alkilcsoport; vagy
X és Y jelentése együttesen Da-C(O)- általános képletű csoport vagy Db-C(O)- általános képletű csoport;
Q jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport, alkil-amino-csoport, alkoxi-csoport, -O-Da általános képletű csoport vagy -O-Db általános képletű csoport;
* * <· ·*«· · • ♦ · · V9 · « * ♦ ·«·««« « • ···»♦ · « * • · · 4 · w v···«
75 Z jelentése 8-25 aminosav maradékból álló peptid, amely az alábbi oligomer-fragmenst tartalmazza A1A2A3~A4A5_A6_A7_A8_A9 A10~AllAl'“A2'_A3' A4' A5'“A6'
A7 ' -A8 ' -Ag ' -A10 ’ -A-l χ ' -Αχ , A2 -A3 -A4 -A5 -Ag -A? -Ag -Ag A10-A11~A1 '-A2 '” és amely bármely Α^-Λ·^ aminosav-maradékkal kezdődhet, ahol az általános képletben
Alr A]/ , A-jJ', A-l ' ' ' , A4, A4' , A4, Αθ, Ag' , Ag' , és Ag jelentése egymástól függetlenül lehet valamely hidrofil aminosav-maradék, amely lehet Glu-, Asp-, -Alá-, -Gin-, -Asn-, -Gly-, -Ser-, Thr-, -Lys-, -Arg-, -Orn-, és -hArg-;
ahol az általános képletben
A2, A2', A2, A2' ' 1 , Ag, Ag', Ag, Ag, Ag1, Ag', A7, A71, A7, A10> Αιο' θΞ Α1θ jelentése lehet lipofil aminosav-maradék, amelyek lehetnek -Leu-, -Nle-, -Met-, -Alá-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, és -Tyr- vagy T általános képletű aminosav-maradék származék;
Ag, Ag ' , Ag, Allr A1X' és A44 jelentése egymástól függetlenül lehet bázisos aminosav-maradék, amely lehet például -Lys-, -Orn-, -Arg-, vagy -hArg-;
Ag, Ag', Ag jelentése egymástól függetlenül lehet lipofil semleges vagy bázisos aminosav-maradék, amelyek lehetnek -Leu-,
-Nle-,
-Met-, -Alá-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, -Tyr-,
-Thr-,
-Ser-,
-Gin-, -Asn-, -Gly-, -Lys-, -Arg-, -hArg-,
-Trp(Fór) vagy aminosav maradék, amely a T általános képletű csoport; azzal a feltétellel, hogy legalább egy (T), -O-Da, -Ο-Db, -(O)C-Da vagy -(O)-C-Db általános képletű csoport található az (1) általános képletű vegyületben, azzal jellemezve, hogy
a) megfelelően C-terminálisan védett aminosawal kötött gyantát alkalmazunk, ahol az aminosav a Z-Y'-Q általános képletű csoportból származik, ahol a gyanta az aminosav fragmenshez Q-Y csoporton keresztül kötött és ahol Q jelentése a korábban megadott, továbbá Z jelentése a Z általános képletű csoport bármely alkalmas aminosav része;
b) sorrendben kapcsoljuk a további A^-A-q a-aminocsoporton védett aminosavakat, és így egy X-Y-Z'-Y'-Q általános képletű védett aminosav szekvenciát nyerünk, ahol az általános képletben X, Y, Y' és Q jelentése a korábban megadott, továbbá Z' jelentése egy N-terminálisán védett peptidmaradék, amely az A^-A^ aminosav maradékok kívánt számát tartalmazza;
c) a fenti gyantáról az X-Y-Z-Y-Q' általános képletű csoportot lehasítjuk;
d) a megfelelő (Da) vagy (Db) általános képletű antioxidáns egységet a vegyülethez kapcsoljuk, ahol az általános képletben R^, R2, R3, R4 és R5 jelentése a korábban megadott és B', valamint B^' jelentése a B és Bj általános képletű csoportok módo- t
sításai, amelyek amikor a Q' csoporttal kapcsoltak, az X-Y-Z-Y'-Q általános képletű védett aminosav szekvenciát szolgáltatják, ahol az általános képletben X, Y, Z, Y' jelentése a korábban megadott és Q jelentése -O-Da-csoport vagy O-Db-csoport; és
e) a fenti védőcsoportokat eltávolítjuk és a kívánt peptidet tisztítjuk.
··»· *·· * • « ·<· «·
41. Eljárás az (1) általános képletű polipeptid X-Y-Z-Y'-Q (1) gyógyszerészetileg elfogadható vagy optikailag aktív izomerje, komplex keverékének előállítására, ahol az általános képletben X jelentése hidrogénatom, 1-5 szénatomszámú alkilcsoport, 1-10 szénatomszámú acil-csoport, valamely aminosav maradék, dipeptid-maradék vagy tripeptid-maradék;
Y és Y' mindegyikének jelentése egymástól függetlenül egy kötés, -(Ser)n~ általános képletű csoport, ahol n jelentése 1-3 közötti egész szám vagy
T általános képletű csoport, ahol az általános képletben n* 1-8 közötti egész szám;.
W jelentése -NHC(0)-csoport, NHCH2-csoport, -0C(0)-csoport, -C(0)0-csoport, -SC(0)-csoport vagy -SS-csoport; és
D jelentése (Da) általános képletű csoport vagy (Db) általános képletű csoport, ahol
B jelentése egy kötés, 1-16 szénatomszámú alkilén-csoport vagy 2-16 szénatomszámú alkenilén-csoport és B^ jelentése B általános képletű csoport vagy (E) általános képletű csoport, ahol az általános képletben Rlr R2, R3, R4, R5, Rg és R7 mindegyikének jelentése egymástól függetlenül 1-6 szénatomszámú alkilcsoport; vagy r
X és Y jelentése együttesen Da-C(O)- általános képletű csoport vagy Db-C(O)- általános képletű csoport;
Q jelentése hidroxilcsoport, aminocsoport, alkil-amino-csoport, alkoxi-csoport, -0-Da általános képletű csoport vagy -O-Db általános képletű csoport;
.·· ··* ··· * · · ·· ··· • · ·· · • · 9 • ···« ··· ·
Z jelentése 8-25 aminosav maradékból álló peptid, amely az alábbi oligomer-fragmenst tartalmazza ~Al_A2'A3~A4-A5_A6~A7_A8A9~A10All_Al' _A2 ' ~A3 ' _A4 ' A5 ' A6 '
A7 ’ -Ag ' -Ag' -Αχ 0'-Αχ χ'-Αχ, A2 -A3 -A4 -A5 -Αθ - A? -Ag11 -Ag 10 A11 A1 A2 és amely bármely Aj-An aminosav-maradékkal kezdődhet, ahol az általános képletben
Αχ, Αχ’, Αχ, Αχ’’’, Α4, Α4', Α4, Αθ, Αθ', Αθ' , és Αθ jelentése egymástól függetlenül lehet valamely hidrofil aminosav-maradék, amely lehet Glu-, Asp-, -Alá-, -Gin-, -Asn-, -Gly-, -Ser-, Thr-, -Lys-, -Arg-, -Orn-, és -hArg-;
ahol az általános képletben A2' A2' ' A2' a2' ' ' ’ a3· a3' ' a3' A6' A6' ' A6 ' ' A7 ' A7 ' ' A7 ' aXq, A10' és A10 jelentése lehet lipofil aminosav-maradék, amelyek lehetnek -Leu-, -Nle-, -Met-, -Alá-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, és -Tyr- vagy T általános képletű aminosav-maradék származék;
Αθ, Αθ', Αβ, Αχ^, Αχ/ és Αβχ jelentése egymástól függetlenül lehet bázisos aminosav-maradék, amely lehet például -Lys-,
-Orn-, -Arg-, vagy -hArg-;
Ag, Ag', Ag jelentése egymástól függetlenül lehet lipofil semleges vagy bázisos aminosav-maradék, amelyek lehetnek -Leu-,
-Nle-,
-Met-, -Alá-, -Val-, -Phe-, -Nva-, -Ile-, -Tyr-,
-Thr-,
-Ser-,
-Gin-, -Asn-, -Gly-, -Lys-, -Arg-, -hArg-,
-Trp-,
-Orn-,
-Trp(For)- vagy aminosav maradék, amely a T általános képletű csoport;
·· ··« : j...
:··. ···.
• ·· ··« ·· ··
Λ λ, * azzal a feltétellel, hogy legalább egy (T), -O-Da, -Ο-Db, -(O)C-Da vagy -(0)-C-Db általános képletü csoport található az (1) általános képletü vegyületben, azzal jellemezve, hogy az (1) általános képletü polipeptidet lipiddel vagy lipidek keverékével elegyítjük, ahol a lipidek lehetnek DDPC, PC, CL, PG, PS, FA és TG.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US07/789,918 US5272252A (en) | 1991-11-04 | 1991-11-04 | Synthetic lung surfactant having antioxidant properties |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HU9401293D0 HU9401293D0 (en) | 1994-08-29 |
HUT66424A true HUT66424A (en) | 1994-11-28 |
Family
ID=25149105
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU9401293A HUT66424A (en) | 1991-11-04 | 1992-10-13 | Surfactants of antioxidant activity |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US5272252A (hu) |
EP (1) | EP0666754B1 (hu) |
JP (1) | JPH07502500A (hu) |
KR (1) | KR100250847B1 (hu) |
AT (1) | ATE175116T1 (hu) |
AU (1) | AU667200B2 (hu) |
CA (1) | CA2121147C (hu) |
DE (1) | DE69228077T2 (hu) |
DK (1) | DK0666754T3 (hu) |
ES (1) | ES2127764T3 (hu) |
FI (1) | FI942032A (hu) |
GR (1) | GR3029279T3 (hu) |
HU (1) | HUT66424A (hu) |
NO (1) | NO941616D0 (hu) |
WO (1) | WO1993008824A1 (hu) |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5653685A (en) * | 1990-10-10 | 1997-08-05 | Lrt, Inc. | Method of providing circulation via lung expansion and deflation |
USRE36460E (en) * | 1990-10-10 | 1999-12-21 | Life Science Holdings, Inc. | Method of providing circulation via lung expansion and deflation |
US5272252A (en) * | 1991-11-04 | 1993-12-21 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Synthetic lung surfactant having antioxidant properties |
NZ254496A (en) * | 1992-07-31 | 1996-08-27 | Merrell Dow Pharma | Polypeptides (3-4 amino acids) with antioxidant moieties covalently attached and their use as pulmonary surfactants |
EP0886652B1 (en) * | 1995-11-20 | 2002-04-17 | Ortho-McNeil Pharmaceutical, Inc. | Pulmonary surfactant peptide solubilization process |
CA2247876A1 (en) * | 1996-03-08 | 1997-09-12 | Ronald M. Klatz | Liquid ventilation method and apparatus |
AU2001278864A1 (en) * | 2000-06-30 | 2002-01-30 | University Of Cincinnati | Peptides with antioxidant and antimicrobial properties |
GB2368339B (en) * | 2000-10-26 | 2002-09-18 | Yissum Res Dev Co | Complex incorporating a plurality of antioxidants |
AU2002357168A1 (en) * | 2001-12-12 | 2003-07-09 | Penn State Research Foundation | Surfactant prevention of lung complications from cancer chemotherapy |
MXPA04010560A (es) * | 2002-04-25 | 2005-08-15 | Scripps Research Inst | Tratamiento y prevencion de condiciones pulmonares. |
US7290197B2 (en) * | 2003-06-03 | 2007-10-30 | Quantum Corporation | Correcting data using redundancy blocks |
EP1809272A4 (en) * | 2004-10-18 | 2008-01-02 | Maroon Biotech Corp | METHOD AND COMPOSITIONS FOR TREATING DAMAGES THROUGH FREE RADICALS |
US7582312B2 (en) | 2004-11-15 | 2009-09-01 | Discovery Laboratories, Inc. | Methods to produce lung surfactant formulations via lyophilization and formulations and uses thereof |
US7464012B2 (en) * | 2004-12-10 | 2008-12-09 | L'air Liquide, Societe Anonyme A Directoire Et Conseil De Surveillance Pour L'etude Et L'exploitation Des Procedes Georges Claude | Simplified process simulator |
SI1841458T1 (sl) | 2005-01-06 | 2012-04-30 | Discovery Lab Inc | Zdravljenje s predpisanim odmerjanjem surfaktanta za zdravljenje ali preprečevanje bronhopulmonalne displazije |
WO2007001094A1 (ja) * | 2005-06-29 | 2007-01-04 | Sannamu Lee | 人工肺サーファクタント組成物 |
KR20090060348A (ko) * | 2006-09-19 | 2009-06-11 | 디스커버리 래보래토리스, 인크. | 폐 계면활성제 제제 및 점액 클리어런스 촉진 방법 |
WO2013188016A2 (en) | 2012-05-04 | 2013-12-19 | Discovery Laboratories, Inc. | Surfactant therapy for exposure to ionizing radiation |
CN111568853B (zh) * | 2020-04-30 | 2023-07-28 | 杭州濡湜生物科技有限公司 | 一种新型肺部智能释药系统 |
Family Cites Families (25)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4643988A (en) * | 1984-05-15 | 1987-02-17 | Research Corporation | Amphipathic peptides |
US4912038A (en) * | 1984-12-11 | 1990-03-27 | California Biotechnology Inc. | Recombinant DNA sequence encoding alveolar surfactant protein |
US4933280A (en) * | 1984-12-11 | 1990-06-12 | California Biotechnology Inc. | Recombinant DNA sequence encoding Alveolar Surfactant Protein |
US4659805A (en) * | 1984-12-11 | 1987-04-21 | California Biotechnology, Inc. | Recombinant alveolar surfactant protein |
US5104853A (en) * | 1984-12-11 | 1992-04-14 | California Biotechnology Inc. | Alveolar surfactant proteins having cys to ser mutations |
US4705684A (en) * | 1985-05-31 | 1987-11-10 | The University Of Tennessee Research Corporation | Synthetic M proteins - streptococci type 6 |
FR2586587B1 (fr) * | 1985-08-30 | 1987-10-23 | Adir | Nouveaux surfactants artificiels, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent. |
US5055553A (en) * | 1985-09-26 | 1991-10-08 | Genetics Institute Inc. | Low molecular weight pulmonary surfactant proteins |
US4882422A (en) * | 1985-10-24 | 1989-11-21 | Genetics Institute, Inc. | Pulmonary surfactant proteins |
US4918161A (en) * | 1985-09-26 | 1990-04-17 | Genetics Institute, Inc. | Low molecular weight pulmonary surfactant proteins |
EP0273916A4 (en) * | 1986-05-06 | 1989-11-30 | Childrens Hosp Medical Center | LUNG HYDROPHOBES, PROTEIN ASSOCIATED TO A SURFACE ACTIVE MEDIUM OF 6000 DALTON MOLECULAR WEIGHT AND MULTIMEREOUS ITEMS. |
WO1988003170A1 (en) * | 1986-10-24 | 1988-05-05 | Whitsett Jeffrey A | Pulmonary hydrophobic surfactant-associated proteins |
JPH01501282A (ja) * | 1986-12-08 | 1989-05-11 | ホイツトセツト,ジエフリー エイ. | 肺胞疎水性界面活性物質関連タンパク質 |
WO1989000167A1 (en) * | 1987-07-01 | 1989-01-12 | Kabigen Ab | Proteins and protein compositions and their use |
JP2602968B2 (ja) * | 1987-11-04 | 1997-04-23 | カリフォルニア バイオテクノロジー インコーポレイテッド | 肺胞の界面活性タンパク類 |
US5164369A (en) * | 1988-01-06 | 1992-11-17 | The Scripps Research Institute | Pulmonary surfactant protein and related polypeptide |
US4861756A (en) * | 1988-03-08 | 1989-08-29 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Synthetic pulmonary surfactant |
US5114921A (en) * | 1988-05-27 | 1992-05-19 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Amphiphilic peptides and use thereof |
NZ229737A (en) * | 1988-07-01 | 1991-05-28 | Merrell Dow Pharma | Polypeptides and derivatives of them with lung surfactant properties and their preparation |
SE8803713D0 (sv) * | 1988-10-18 | 1988-10-18 | Kabigen Ab | Biologically active lipoprotein and its use |
US5006343A (en) * | 1988-12-29 | 1991-04-09 | Benson Bradley J | Pulmonary administration of pharmaceutically active substances |
US5134129A (en) * | 1989-03-15 | 1992-07-28 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods employing unique mixtures of polar and neutral lipids for surfactant replacement therapy |
CA2049301A1 (en) * | 1989-03-31 | 1990-10-01 | Steven Shak | Method for treating respiratory distress syndrome |
EP0458167B1 (en) * | 1990-05-21 | 1997-04-23 | Abbott Laboratories | Fatty acid-pulmonary surfactant conjugates |
US5272252A (en) * | 1991-11-04 | 1993-12-21 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Synthetic lung surfactant having antioxidant properties |
-
1991
- 1991-11-04 US US07/789,918 patent/US5272252A/en not_active Expired - Fee Related
-
1992
- 1992-10-13 KR KR1019940701486A patent/KR100250847B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-10-13 ES ES92921892T patent/ES2127764T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-13 DE DE69228077T patent/DE69228077T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-10-13 DK DK92921892T patent/DK0666754T3/da active
- 1992-10-13 HU HU9401293A patent/HUT66424A/hu unknown
- 1992-10-13 EP EP92921892A patent/EP0666754B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-13 WO PCT/US1992/008728 patent/WO1993008824A1/en active IP Right Grant
- 1992-10-13 AT AT92921892T patent/ATE175116T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-10-13 AU AU27783/92A patent/AU667200B2/en not_active Ceased
- 1992-10-13 CA CA002121147A patent/CA2121147C/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-10-13 JP JP5508432A patent/JPH07502500A/ja not_active Ceased
-
1994
- 1994-05-03 FI FI942032A patent/FI942032A/fi unknown
- 1994-05-03 NO NO941616A patent/NO941616D0/no not_active Application Discontinuation
-
1995
- 1995-05-25 US US08/450,427 patent/US5683982A/en not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-02-03 GR GR990400359T patent/GR3029279T3/el unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE69228077D1 (de) | 1999-02-11 |
EP0666754B1 (en) | 1998-12-30 |
DE69228077T2 (de) | 1999-07-08 |
GR3029279T3 (en) | 1999-05-28 |
ES2127764T3 (es) | 1999-05-01 |
CA2121147A1 (en) | 1993-05-13 |
US5272252A (en) | 1993-12-21 |
ATE175116T1 (de) | 1999-01-15 |
KR100250847B1 (ko) | 2000-09-01 |
JPH07502500A (ja) | 1995-03-16 |
WO1993008824A1 (en) | 1993-05-13 |
AU2778392A (en) | 1993-06-07 |
EP0666754A4 (en) | 1996-06-26 |
FI942032A0 (fi) | 1994-05-03 |
HU9401293D0 (en) | 1994-08-29 |
CA2121147C (en) | 2002-12-10 |
AU667200B2 (en) | 1996-03-14 |
US5683982A (en) | 1997-11-04 |
NO941616L (hu) | 1994-06-24 |
NO941616D0 (no) | 1994-05-03 |
FI942032A (fi) | 1994-05-03 |
DK0666754T3 (da) | 1999-08-30 |
EP0666754A1 (en) | 1995-08-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
HUT66424A (en) | Surfactants of antioxidant activity | |
EP1005485B1 (en) | Therapeutic pulmonary lavage with diluted surfactants | |
CA2022443A1 (en) | Pulmonary surfactant protein fragments | |
US5700777A (en) | Fatty acid - pulmonary surfactant conjugates | |
US5827825A (en) | Synthetic peptide, lung surfactant containing the same and remedy for respiratory distress syndrome | |
AU664112B2 (en) | Synthetic peptide lung surfactants having covalently bonded antioxidants | |
US6613734B2 (en) | Peptides-containing liposomal surfactants | |
AU617827B2 (en) | Synthetic lung surfactant preparation comprising lipids and polypeptides | |
KR100279540B1 (ko) | 펩티드 폐 계면활성제 및 치료용 혼합물 | |
CA2137349C (en) | Peptide lung surfactants and therapeutic combinations | |
RU2144925C1 (ru) | Новые синтетические пептиды, легочная поверхностно-активная композиция, лекарственный препарат для лечения респираторного дистресс-синдрома |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
DFC4 | Cancellation of temporary protection due to refusal |