KR0175546B1 - 인삼 사포닌 성분을 함유하는 외상 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피부의 외상이나 창상, 궤양 등에 대해 우수한 치료 효과를 갖는 인삼 사포닌 성분을 함유하는 외상 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 인삼 사포닌 성분 중에서 진세노사이드(ginsenoside) Rb2 또는 진세노사이드 Rg1을 함유하는 외상 치료용 조성물에 관한 것이다.

Description

인삼 사포닌 성분을 함유하는 외상 치료용 조성물

본 발명은 피부의 외상이나 창상, 궤양 등에 대해 우수한 치료 효과를 갖는 인삼 사포닌 성분을 함유하는 외상 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 인삼 사포닌 성분 중에서 진세노사이드(ginsenoside) Rb2 또는 진세노사이드 Rg1을 함유하는 외상 치료용 조성물에 관한 것이다.

종래, 상처 치유제로서, 에피더말 성장인자(epidermal growth factor), 시토킨(cytokine), 인터루킨(interlukin), 트랜스포밍 성장인자-β(transforming growth factor-beta) 등과 같은 펩타이드와 마데카솔(Madecasol; 아시아티코사이드(Asiaticoside)) 등이 사용되어 오고 있으나, 펩타이드의 경우 값이 매우 비싸고, 또 불안정하여 상처 치유제로 널리 사용되지 못하고 있으며, 마데카솔의 경우 효과가 미약하고, 접촉성 피부염 같은 부작용을 유발하는 단점이 지적되어 왔다.

이에, 본 발명자들은 피부 부작용이 없고, 효과가 탁월한 상처 치유제를 개발할 목적으로 일반적으로 널리 이용되고 있는 생약을 대상으로 상처 치유 물질의 검색을 실시해 오던 중, 인삼 추출물이 피부의 상처 치유능력이 있음을 알아내었다. 본 연구자들은 더 나아가 인삼 추출물 중의 어떤 성분이 이러한 피부 상처 치유 효과를 나타내는 것인지를 알아내기 위한 각종 분리 정제법을 사용하여 피부 상처 치유에 효과가 있는 물질을 추적한 결과, 인삼속에 함유된 사포닌 성분인 진세노사이드 Rb2와 진세노사이드 Rg1이 피부상처 치유효과가 가장 우수함을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

인삼(Panax ginseng C.A meyer)은 한국, 중국, 일본 등지에서 2,000여년 전부터 사용되어 온 생약으로, 인삼의 성분에 대한 연구는 1854년 Garrigae의 인삼에서 추출한 사포닌(파나퀼론이라 명명하였음)에 대한 연구 이래 동서양의 수많은 학자들에 의해 활발히 수행되고 있다. 이러한 연구에 의해 인삼의 유효성분의 대부분이 다마란계 트리터페노이드 화합물, 즉 인삼 사포닌임이 밝혀졌고, 각각의 진세노사이드의 분리방법, 구조 등의 화학적 성질이 규명되었다. 또한, 정제된 각각의 진세노사이드는 서로 다른 약리적 효과를 나타내는 것으로 보고되고 있다.

인삼 사포닌 성분의 상처 치유과 관련된 연구는 극히 미약한데, 이로 인해 아직까지 상처 치유 효과를 갖는 구체적인 유효성분을 밝혀내지 못하고 있다. 일본특허 공개 62-39759호에서는, 인삼의 사포닌 성분 중의 진세노사이드 Rb2 분획물이 세포중식 촉진작용과 각막 창상 부위의 개선 치료 효과를 갖는 것으로 보고하고 있으나, 피부에서의 상처치료와는 그 기작을 달리하는 부분이다. 이 특허에서는 세포증식 촉진작용을 나타내는 유효성분으로 인삼의 진세노사이드 Rb2 분획물을 밝히고 있으나, 정작 정제된 진세노사이드 Rb2 자체는 세포증식 촉진작용과 각막 창상부위의 개선 치료 효과가 없는 것으로 밝히고 있다. 이는 세포증식 촉진작용을 나타내는 유효성분은 진세노사이드 Rb2 분획물 중의 미지의 어떤 다른 성분임을 의미한다. 실제, 이 특허에서의 진세노사이드 Rb2 분획물이란, 인삼의 뿌리를 물 또는 알콜로 추출한 후 C-18컬럼에 넣고 32%의 아세토니트릴을 용리액으로 하여 진세노사이드 Rb2의 머무름 시간의 앞 뒤 5%의 머무름 시간을 갖고 용출되는 분획을 모은 것으로, 이러한 분획물은 세포증식 촉진작용을 나타내나, 순수 진세노사이드 Rb2는 세포증식 촉진작용을 나타내지 않는다는 것은, 세포증식 촉진작용과 피부상처 치료작용은 서로 다른 기작을 가짐을 알 수 있다.

아직까지 정확하게 규명되지는 않았지만, 우리 몸에 상처가 나면 다음과 같은 일련의 과정을 통하여 그 상처가 치유되는 것으로 알려져 있다. 상처치유의 첫 단계는 상처 부위에서의 혈소판의 응집, 피브린, 피브리노겐, 피브리넥틴, 프로테오글리칸 등의 출현이며, 이들은 상처부위에서의 출혈방지, 세포의 이동 등에 관여한다. 두 번째 단계는 상처부위로 백혈구(leucocyte), 대식세포(macrophage)등이 이동하여 박테리아나 손상된 세포를 제거하는 면역반응이다. 이들은 또 상처치유에 필요한 각종 단백질 인자들을 생산한다. 그 다음에는 섬유아세포가 상처부위에 부착하여 증식하면서 콜라겐을 합성하는 단계이다. 마지막으로 상피세포가 상처부위로 이동하여 분화를 하면서 케라틴을 합성하고, 궁극적으로 피부의 구조를 재건축하여 상처의 치유를 완성하게 된다.

즉, 피부상처 치유는 세포증식 촉진작용에만 일어나는 것이 아니고 매우 복잡한 피부상처 치유 메카니즘을 통하여 일어남을 알 수 있다. 따라서, 본 발명자들은 특정의 진세노사이드 성분에 대해 상처 치유효과를 측정하고, 그 결과를 토대로 하여 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 인삼의 진세노사이드 Rb2 또는 진세노사이드 Rg1을 함유하는, 피부 부작용이 없고, 피부상처 치유 효과가 탁월한 외상 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명에 따른 진세노사이드 성분들은 통상의 정제방법에 따라 얻을 수 있으며, 예를 들면, 인삼을 70%의 에탄올 수용액으로 추출한 후, 이를 부탄올로 용매분획을 실시하여 실리카겔 칼럼크로마토그래피법(용리액 : 클로로포름/메탄올/물 = 65/30/4) 또는 C-18 칼럼크로마토그래피법(용리액 : 25%의 메탄올)을 이용하여 각종 단일 성분으로 분리한 다음, 알코올 용매중에서 재결정함으로써 순수 진세노사이드 성분을 얻을 수 있다. 추출, 정제된 성분에 대한 확인은 HPLC 등의 각종 기기 분석 데이터를 한국인삼연초 연구소에서 제공받은 각 표준품의 진세노사이드의 기기 분석 데이터와 비교함으로써 확인할 수 있다.

후술하는 시험예를 통해, 인삼의 사포닌 성분 중에서 진세노사이드 Rb2와 진세노사이드 Rg1이 가장 높은 피부상처 치유활성을 나타내는 것으로 확인되었으며, 임상실험에서도 시판되고 있는 상처 치유제에 비해 우수한 피부상처 치유효과를 나타내었다.

본 발명에 따른 외상 치료용 조성물은, 가장 높은 피부상처 치유활성을 갖는 진세노사이드 Rb2 또는 Rg1을 조성물 총 중량에 대해 0.01-3중량% 범위내로 함유함을 특징으로 한다.

본 발명의 피부상처 치유 물질은 그대로 또는 이를 함유하는 조성물로서 연고나 크림 등의 제형을 가질 수 있으며, 화장품, 의약품 등으로 이용될 수 있고, 열과 유기 용매에 비교적 안정하고, 물에 잘 녹고 분자량이 작기 때문에 그 응용 범위가 매우 넓다.

이하, 실시예 및 실험예를 들어 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 본 발명이 이들 실시예에 특별히 한정되는 것은 아니다.

[참고예 1]

진세노사이드 Rb2

인삼을 70%의 에탄올 수용액으로 추출한 후, 이를 부탄올로 용매 분획하고, 클로로포름/메탄올/물 = 65/30/4를 용리액으로 하여 실리카겔 칼럼크로마토그래피를 실시하여 진세노사이드 Rb2 분획을 얻고, 이를 다시 수포화 부탄올을 용리액으로 하여 실리카겔 칼럼크로마토그래피를 실시한 후 에탄올-부탄올 용액에서 재결정하여 순수한 진세노사이드 Rb2를 얻었다(HPLC로 순도 확인 : 95% 이상의 순도).

[참고예 2]

진세노사이드 Rg1

인삼을 70%의 에탄올 수용액으로 추출한 후, 이를 부탄올로 용매 분획하고, C-18 칼럼에 넣어 25%의 메탄올 용액으로 용출시켜 진세 노사이드 Rg1 분획을 얻고, 이를 에탄올-메탄올 용액에서 재결정하여 순수한 진세노사이드 Rg1을 얻었다(HPLC로 순도 확인 : 94% 이상의 순도).

[참고예 3]

진세노사이드 Rb1

인삼을 70%의 에탄올 수용액으로 추출한 후, 이를 부탄올로 용매 분획하고, 클로로포름/메탄올/물 = 65/30/4를 용리액으로 하여 실리카겔 칼럼크로마토그래피를 실시하여 진세노사이드 Rb1 분획을 얻고, 이를 다시 수포화 부탄올을 용리액으로 하여 실리카겔 칼럼크로마토그래피를 실시한 후 에탄올-부탄올 용액에서 재결정하여 순수한 진세노사이드 Rb1을 얻었다.(HPLC로 순도 확인 : 92% 이상의 순도).

[참고예 4]

진세노사이드 Rc

인삼을 70%의 에탄올 수용액으로 추출한 후, 이를 부탄올로 용매 분획하고, 클로로포름/메탄올/물 = 65/30/4를 용리액으로 하여 실리카겔 칼럼크로마토그래피를 실시하여 진세노사이드 Rc 분획을 얻고, 이를 다시 수포화 부탄올을 용리액으로 하여 실리카겔 칼럼크로마토그래피를 실시한 후 물로 재결정하여 순수한 진세노사이드 Rc를 얻었다(HPLC로 순도 확인 : 93% 이상의 순도).

[참고예 5]

진세노사이드 Rd

인삼을 70%의 에탄올 수용액으로 추출한 후, 이를 부탄올로 용매 분획하고, 클로로포름/메탄올/물 = 65/30/4를 용리액으로 하여 실리카겔 칼럼크로마토그래피를 실시하여 진세노사이드 Rd 분획을 얻고, 이를 다시 수포화 부탄올을 용리액으로 하여 실리카겔 칼럼크로마토그래피를 실시한 후 에탄올-에틸아세테이트 용액에서 재결정하여 순수한 진세노사이드 Rd를 얻었다(HPLC로 순도 확인 : 93% 이상의 순도).

[참고예 6]

진세노사이드 Re

인삼을 70%의 에탄올 수용액으로 추출한 후, 이를 부탄올로 용매 분획하고, 클로로포름/메탄올/물 = 65/30/4를 용리액으로 하여 실리카겔 칼럼크로마토그래피를 실시하여 진세노사이드 Re 분획을 얻고, 이를 아민 칼럼에 넣어 85%의 아세토 니트릴로 용출시킨 후 물-메탄올 용액에서 재결정하여 순수한 진세노사이드 Re를 얻었다(HPLC로 순도 확인 : 92% 이상의 순도)

[참고예 7]

진세노사이드 Rf

인삼을 70%의 에탄올 수용액으로 추출한 후, 이를 부탄올로 용매 분획하고, 클로로포름/메탄올/물 = 65/30/4를 용리액으로 하여 실리카겔 칼럼크로마토그래피를 실시하여 진세노사이드 Rf 분획을 얻고, 이를 다시 클로로포름/메탄올/에틸아세테이트/물 = 2/2/4/2을 용리액으로 하여 실리카겔 칼럼크로마토그래피를 실시하여 순수한 진세노사이드 Rf를 얻었다.(HPLC로 순도 확인 : 92% 이상의 순도).

[참고예 8]

진세노사이드 Rg2

인삼을 70%의 에탄올 수용액으로 추출한 후, 이를 부탄올로 용매 분획하고, C-18 칼럼에 넣어 25%의 메탄올 용액으로 용출시켜 진세노사이드 Rg2 분획을 얻고, 이를 에탄올 용액에서 재결정하여 순수한 진세노사이드 Rg2를 얻었다(HPLC로 순도 확인 : 94% 이상의 순도).

[시험예 1]

상처치유 효과측정(동물 실험)

탈모 마우스(Hairless mice)에 해부용 칼로 진피 깊이로 길이 2㎝ 가량의 상처를 인위적으로 만들었다. 이를 외과용 봉합실로 봉합한 후, 수술 부위에 참고예 1-8에서 얻은 여러 인삼 성분들을 생리 식염수에 10㎎/㎖씩으로 녹여 10㎕씩 매일 1회 6일간 상처 부위에 처리하였다. 처리 기간중 육안으로 상처 치유 정도를 관찰하였으며, 6일후 상처 부위의 조직을 생검하였다. 대조군으로는 생리 식염수(negative control), 마데카솔(positive control)을 사용하여 위와 동일한 방법으로 실험하였다. 그 결과를 표1에 나타내었다.

상기한 결과로부터, 진세노사이드 Rb2와 진세노사이드 Rg1이 인삼의 상처 치유 효과를 나타내는 주요 성분임을 알 수 있다.

본 발명을 좀 더 명확이 하기 위해 진세노사이드 Rb2와 진세노사이드 Rg1의 농도에 따른 상처 치유 효과를 관찰하였다. 실험방법은 위와 동일하게 실시하였다. 그 결과를 표 2에 나타내었다.

상기 결과로부터, 진세노사이드 Rb2와 진세노사이드 Rg1의 농도가 증가할수록 상처치유 효과가 커지는 것을 알 수 있었다.

[실시예 1∼2 및 비교예 1]

[표 1]

[시험예 2]

상처 치유 효과 실험(임상 실험)

20명의 압박 궤양이 있는 남녀 환자를 대상으로 실시예 1∼3 및 비교예 1의 조성물들과 마데카솔을 매일 2회 10일간 상처 부위에 처리하였다. 상처 치유 효과는 육안으로 확인하였으며, 결과의 판정은 이중맹검법에 따랐다. 그 결과는 표 3과 같다.

상기 결과에서 보는 바와 같이, 진세노사이드 Rb2 또는 진세노사이드 Rg1를 첨가한 조성물들이, 첨가하지 않은 비교예 1에서 보다 압박 궤양의 치료 효과가 매우 우수함을 알 수 있었으며, 마데카솔에 비해서도 그 효과가 뛰어남을 알 수 있었다.

Claims (2)

1. 인삼의 사포닌 성분을 함유하는 조성물에 있어서, 상기 사포닌 성분이 진세노사이드 Rb2 또는 진세노사이드 Rg1임을 특징으로 하는 외상 치료용 조성물.
2. 제1항에 있어서, 진세노사이드 Rb2 또는 진세노사이드 Rg1을 조성물 총중량에 대해 0.01∼3중량%의 양으로 함유함을 특징으로 하는 외상 치료용 조성물.