KR102428299B1 - 노각나무 추출물을 포함하는 탈모예방 또는 양모촉진용 조성물 - Google Patents

노각나무 추출물을 포함하는 탈모예방 또는 양모촉진용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 탈모 예방 또는 양모 촉진용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 노각나무 추출물을 유효성분으로 포함하여, 탈모를 예방 또는 개선하고 모발 성장을 촉진하는 것을 특징으로 하는, 탈모 예방 또는 양모 촉진용 조성물을 개시한다.
본 발명에 따르면, 노각나무 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 두피세포 및 모유두세포를 증식함은 물론, 모성장 인자의 생성을 증가하고 모성장 억제인자를 저해함으로써 탈모예방 및 양모촉진 효능을 가진다. 따라서 본 발명의 조성물은 약학, 화장품, 식품, 의약외품 및 미용 등의 분야에서 다양하게 활용할 수 있는 효과가 있다.

Description

노각나무 추출물을 포함하는 탈모예방 또는 양모촉진용 조성물{Composition for preventing hair loss or promoting hair growth, comprising extracts of Stewartia pseudocamellia}
본 발명은 노각나무 추출물을 포함하는 탈모예방 및 양모용 조성물에 관한 것이다.
모발은 표피세포가 변화한 것으로 한선, 피지선과 함께 피부 부속 기관이라고 한다. 모발의 구조를 피부의 단면에서 관찰해 보면, 표피는 진피 쪽으로 움푹 파인 관강을 형성하는 데 이것을 모포(follicle)라고 한다. 모포의 위쪽에는 피지선이 붙어 있다. 이곳에서 피지를 분비하고 두피나 모발에 촉촉함을 부여하며 보호하고 있다.
모발은 손톱과 달리 이생 성장을 계속하지는 않는다. 따라서 모발 하나의 독립된 수명이 있으며 성장, 탈모, 신생을 반복하는데 이를 모발주기라 한다. 즉, 성장기(anagen), 퇴행기(catagen), 휴지기(telogen)의 3기로 나누어지고 모발은 성장기에만 생겨난다.
이러한 모발주기는 모낭 내의 인접하고 있는 모유두(dermal papilla cells; DPC), 진피초(dermal sheath cells), 줄기세포, 모아(hair germ) 세포들 사이의 상호작용에 의하여 조절된다.
그리고, 성장인자는 인체가 출생 시 가지고 태어나는 세포분열 활성화인자로 기능이 떨어진 세포를 자극하여 모발 성장과 모유두 세포의 세포 분열을 촉진시키며 모발 성장기를 연장시킨다. 모낭에서 발현되는 것으로 보고된 성장인자는 섬유아세포 성장인자(bFGF, basic Fibroblast Growth Factor), 혈관내피세포 성장인자(VEGF, Vascular endothelial Growth Factor), 인슐린 유사 성장인자(IGF-1, Insulinlike Growth Factor), Noggin(모낭자극성장인자), 줄기세포증식인자(SCF, Stem Cell Factor), 케라틴형성세포성장인자(KGF ,keratinocyte growth factor), 간세포성장인자(HGF, hepatocyte growth factor) 등이 있다. 이들 성장인자들은 각각 모낭과 모발의 형성을 촉진하며 모낭의 성장을 조절하고 모발의 성장기 유지에 기여하며 정상적인 성장주기로 컨트롤 한다.
한편, 탈모는 모낭의 성장주기 중 성장기의 모낭에서 자라는 모발보다 퇴행기 또는 휴지기의 모낭에서 자라는 모발의 비율이 높아져 비정상적으로 빠지는 모발이 증가하는 현상을 말한다. 이러한 탈모는 모낭의 축소화 및 성장기 모낭의 감소 등의 특징을 수반한다. 유적적인 요인 이외에도 노화, 스트레스, 호르몬 불균형, 약물 및 영양 부족 등 다양한 후천적 요인에 의해 발생한다.
대표적인 탈모 치료제로는 미국의 식품의약국(Food and Drug Administration; FDA)의 승인을 받은 피나스테라이드(finasteride, PROPECIA®)와 미녹시딜(minoxidil, Rogain®)이 있다. 피나스테라이드와 미녹시딜은 각각 전립선 비대증 및 고혈압 치료를 위해 개발되었으나, 두 약물 모두 모발성장을 촉진하는 효능이 밝혀져 발모제로 이용되고 있다. 특히 미녹시딜은 모낭 내 중배엽유래 세포인 모유두 세포의 apoptosis를 억제하여 모유두세포의 증식을 촉진하며, ATP-sensitive potassium channel (KATP 채널) 개방효과 및 Wnt/β-catenin 경로의 활성화 등이 육모효과를 유도하는 것으로 여겨지고 있다. 탈모 기전에 관여하는 많은 조절 인자들에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다.
한편, 노각나무는 차나무과(Theaceae)의 노각나무속(Stewartia)에 속하는 낙엽교목으로 한국, 중국, 일본, 미국을 중심으로 전세계에 30여 종이 분포하고 있으며, 한국에 자생하고 있는 노각나무는 Stewartia koreana Nakai로 지리산 지역을 중심으로 전라남북도와 경상남북도에 분포하고 있다. 노각나무는 공해에 강하고 관상적 가치가 높아서 가로수, 정원수, 공원수 등으로 많이 이용되어 왔으며, 예로부터 모란이라 불리는 노각나무 껍질과 뿌리 껍질은 타박상으로 인한 어혈을 풀어주고 풍습성으로 인한 사지마비와 동통에 효능이 있는 것으로 기록되어 있고, 노각나무 가지를 달여 먹으면 간염이나 간경화증, 지방간과 같은 간질환에 뛰어난 치료 효과가 있다고 알려져 있다.
노각나무의 생리활성에 관한 최근 연구에 의하면 노각나무의 가지와 잎에는 dihydrochalcone, flavonoid, phenolic compound, spinasterol glycoside, hyperin 등의 화합물이 존재하고 있고 이 화합물들은 항산화 활성, HIVprotease 억제 및 신생혈관촉진, 항균활성 등의 약리작용이 있다고 보고되었다.
본 발명자들은 탈모예방 및 양모에 효과가 있는 추출물로서 노각나무를 이용하여 실험을 거듭한 끝에, 노각나무 추출물이 항산화 활성은 물론, 두피 개선 및 모성장 활성을 나타냄을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
대한민국 공개특허 제2022-0008790호 탈모 방지 및 발모 촉진용 조성물
따라서 본 발명은 노각나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 탈모 예방 또는 양모 촉진용 조성물을 제공하는 것을 기술적 해결과제로 한다.
또한 본 발명은 상기 탈모 예방 또는 양모 촉진용 조성물을 포함하는 헤어 또는 두피용 제품을 제공하는 것을 기술적 해결과제로 한다.
상술한 기술적 과제를 해결하기 위하여 본 발명은, 노각나무 추출물을 유효성분으로 포함하여, 탈모를 예방 또는 개선하고 모발 성장을 촉진하는 것을 특징으로 하는, 탈모 예방 또는 양모 촉진용 조성물을 제공한다.
상기 본 발명에 있어서, 상기 조성물은 표피세포의 증식, 표피세포의 NO생성 증가 또는 모유두세포의 모성장억제인자 TGF-β1의 저해로 탈모를 예방 또는 개선하는 것을 특징으로 한다.
또한 본 발명에 있어서, 상기 조성물은 모유두세포의 증식 또는 모유두세포의 모성장인자 생성 증가로 모발 성장을 촉진하는 것을 특징으로 한다.
또한 본 발명에 있어서, 상기 모성장인자는 HGF 또는 FGF-7인 것을 특징으로 한다.
또한 본 발명에 있어서, 상기 조성물은 의약 조성물인 것을 특징으로 한다.
또한 본 발명에 있어서, 상기 조성물은 의약외품용 조성물인 것을 특징으로 한다.
또한 본 발명에 있어서, 상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 한다.
또한 본 발명에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물인 것을 특징으로 한다.
또한 상기 다른 기술적 과제를 해결하기 위한 본 발명은 상술한 탈모 예방 또는 양모 촉진용 조성물을 포함하는 헤어 또는 두피용 제품을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 제품은 발모제, 두피클리닉제, 두피스케일링제, 두피마사지제, 두피케어제, 세정제, 샴푸, 토닉, 헤어컨디셔너, 헤어로션, 젤, 팩, 크림, 에센스, 파우더, 스프레이, 오일, 비누, 연고, 헤어스타일링제, 염모제 및 펌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.
상술한 본 발명에 따르면, 노각나무 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 두피세포 및 모유두세포를 증식함은 물론, 모성장 인자의 생성을 증가하고 모성장 억제인자를 저해함으로써 탈모예방 및 양모촉진 효능을 가진다. 따라서 본 발명의 조성물은 약학, 화장품, 식품, 의약외품 및 미용 등의 분야에서 다양하게 활용할 수 있는 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 노각나무 추출물의 추출방법을 나타낸 모식도이다.
이하 본 발명에 따른 탈모 예방 및 양모 촉진용 조성물을 상세히 설명하기로 한다.
본 발명은 다양한 변경을 가할 수 있고 여러 가지 형태를 가질 수 있는바, 실시 예들을 본문에 상세하게 설명하고자 한다. 그러나 이는 본 발명을 특정한 개시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변경, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명에서 용어 "탈모"는 두피로부터 모발이 탈락하는 현상 또는 모발이 성기거나 가늘어지는 상태를 의미하며, 탈모 예방이라 함은 상술한 바와 같은 탈모 현상을 방지하고 억제하는 것을 의미하고, “양모 촉진”이라 함은 새로운 모발의 생성의 촉진뿐만 아니라 기존 모발이 건강하게 자라도록 하는 것을 의미한다.
일 양태로서 본 발명은, 노각나무 추출물을 유효성분으로 포함하여, 탈모를 예방 또는 개선하고 모발 성장을 촉진하는 것을 특징으로 하는, 탈모 예방 또는 양모 촉진용 조성물을 제공한다.
본 발명에서 용어, "추출물"은 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.
본 발명의 추출에 있어서, 상기 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다.
바람직하게는 상기 노각나무 추출물은 노각나무를 건조 및 분쇄하여 얻은 분말로부터 추출 처리를 통해 얻어진다.
이 때, 상기 노각나무는 노각나무의 잎, 줄기, 껍질 및 이들의 혼합물을 사용하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 잎, 줄기 및 껍질을 혼합하여 사용하는 것이 바람직하다.
또한 상기 노각나무의 건조는 직접적인 광조사를 통한 건조보다는, 음건건조 또는 60~80℃의 열풍건조 하되, 기간은 짧게는 3일간 길게는 1주일간 건조하는 것이 바람직하다. 만약 상기 열풍 온도가 60℃ 미만으로 건조하거나 3일간보다 짧게 건조하는 경우에는 노각나무가 함유한 수분이 남아 있음에 따라 추출물의 고유 효과가 떨어질 수 있기 때문이다. 반면 온도가 80℃를 초과하거나 건조일정이 1주일 이상을 넘어가는 경우에는 건조에 따른 효율이 나쁠 뿐만 아니라 원료의 온도에 따른 성질의 변화 및 그을림 등이 불량 원인이 될 수 있기 때문이다.
또한, 상기 분쇄된 노각나무는 잎의 경우에는 1mm 이하의 가루형태로 분쇄하는 것이 바람직하며, 줄기와 껍질은 1mm~20mm의 크기를 갖는 것이 바람직하다. 관련하여 상기와 같이 노각나무를 분쇄하는 것은 유효성분의 추출수율을 높이기 위함이다.
또한, 상기 노각나무 분말은 용매와 혼합하여 추출처리 하게 되는 바, 이 때 용매는 정제수를 포함한 물, 주정, C1~C4 저급 알콜, 염화메틸렌, 헥산, 초산에틸, 염화메틸렌 및 이들의 혼합용매를 사용하는 것이 바람직하다. 더 바람직하게는 정제수를 포함한 90~95% 에탄올을 포함하는 것이 더 바람직하다.
한편, 노각나무와 용매는 1 : 20의 중량비 비율로 혼합되는 것이 바람직한데, 이는 노각나무와 용매의 균일한 혼합 및 유효성분의 효율적 추출을 위함이다.
또한 추출방법으로는 열수추출, 환류추출 또는 초음파추출을 이용할 수 있다.
또한 본 발명의 일 실시예에 따르면, 노각나무 추출물이 두피표피세포인 HaCaT 세포에 대하여 저농도에서 농도의존적인 증식활성을 나타내고, 두피표피세포로 혈류흐름을 개선하는 NO의 생성이 증가하는 경향을 나타냄을 확인할 수 있는 바, 두피 표피세포의 증식을 통해 모발을 잡고있는 두피를 건강하게 하고, 두피 혈류 개선 및 이를 통한 모낭의 영양 공급에 도움을 줌으로써 탈모 예방 또는 개선을 가져오게 된다.
또한 본 발명의 일 실시예에 따르면, 노각나무 추출물은 높은 모유두세포 증식활성을 나타내어 모유두세포 성장효능을 나타냄을 확인하였다.
또한 본 발명의 일 실시예에 따르면, 노각나무 추출물은 모성장인자 HGF 또는 FGF-7의 함량을 증대시키고 모성장 억제인자인 TGF-β1의 함량을 감소시켰는 바, 모성장 활성을 통한 양모 촉진 및 모성장 억제를 저해함에 따른 탈모 예방에 효능이 있는 것으로 확인되었다.
따라서 노각나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 표피세포의 증식, 표피세포의 NO생성 증가 또는 모유두세포의 모성장억제인자 TGF-β1의 저해로 탈모를 예방 또는 개선하는 것을 특징으로 한다.
또한 본 발명의 조성물은 모유두세포의 증식 또는 모유두세포의 모성장인자 생성 증가로 모발 성장을 촉진하는 것을 특징으로 한다.
또한 본 발명에 있어서, 상기 모성장인자는 HGF 또는 FGF-7인 것을 특징으로 한다.
또한 본 발명의 일 양태에 있어서, 본 발명의 탈모 예방 또는 양모 촉진용 조성물은 의약 조성물, 의약외품용 조성물, 화장료 조성물 또는 건강기능식품 조성물로 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물은 통상적으로 피부에 적용시킬 수 있는 어떠한 형태로도 제형화될 수 있으나, 바람직하게 피부 외용제의 형태로 제형화될 수 있다. 본 발명의 조성물은 예를 들어 액상, 크림상, 페이스트상, 또는 고체상 등 피부에 적용시킬 수 있는 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 액상인 경우에는 담체 성분으로 용매, 용해화제 또는 유탁화제 등이 사용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더 등이 이용될 수 있다. 특히 스프레이 제형인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르 등과 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물에는 상기 유효성분 외에 피부에 적용시킬 수 있는 외용제로 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있다. 예를 들어 물, 계면활성제, 보습제, 저급알코올, 킬레이트제, 살균제, 산화방지제, 방부제, 색소 및 향료 등으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 첨가제가 추가로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 탈모 예방 또는 양모 촉진용 조성물을 포함하는 헤어 또는 두피용 제품을 제공한다. 상기 헤어 또는 두피용 제품은 발모제, 두피클리닉제, 두피스케일링제, 두피마사지제, 두피케어제, 세정제, 샴푸, 토 닉, 헤어컨디셔너, 헤어로션, 젤, 팩, 크림, 에센스, 파우더, 스프레이, 오일, 비누, 연고, 헤어스타일링제, 염 모제 및 펌제 등으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 탈모 예방 또는 양모 촉진용 조성물은 바람직하게 피부에 직접 도포하거나 살포하는 등의 경피 투여 방법으로 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 탈모 예방 또는 양모 촉진용 조성물을 포함하는 건강기능식품 조성물을 제공한다. 상기 건강기능식품 조성물은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조될 수 있다. 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 상기 건강기능식품의 제형 또한 건강기능식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다. 본 발명의 건강기능식품은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고 휴대성이 뛰어나 탈모 방지 또는 발모 촉진 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취될 수 있다.
본 발명에 기재된 모든 성분은, 바람직하게는, 한국, 중국, 미국, 유럽, 일본 등의 관련 법규, 규범(예를 들어, 화장품 안전 기준 등에 관한 규정(한국), 화장품 안전 기술 규범(중국), 식품공전(한국), 식품첨가물공전 (한국), 건강기능식품공전(한국)) 등에서 규정한 최대 사용치를 초과하지 않는다. 즉, 바람직하게, 본 발명에 따른 의약 조성물, 의약외품용 조성물, 화장료 조성물 또는 건강기능식품 조성물은 각국의 관련 법규, 규범에서 허용되는 함량 한도로 본 개시에 따른 성분들을 포함한다.
이하에서는 본 발명의 실시예를 들어 더욱 상세하게 설명한다. 다만, 이하의 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 예시일 뿐, 이에 의하여 본 발명의 권리 범위가 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 노각나무 추출물 제조
우선 노각나무의 잎과 줄기+껍질 2부분으로 나누어 여러 가지 방법으로 추출물을 제조하였다.
먼저 노각나무 잎 및 줄기, 껍질을 음건한 다음 각각 마쇄하여 분말화하였다. 추출물을 제조하기 위해 각 분말을 칭량하였다. 잎 분말은 100% 사용하였고 줄기와 껍질은 1:1 비율로 혼합하여 사용하였다.
추출방법은 열수 추출, 95% 에탄올 추출, 95% 에탄올을 이용한 초음파 추출하였으며 각 분말 대비 용매의 비율은 1:20으로 첨가하였다.
- 열수 추출은 분말 25 g에 증류수 500 ㎖를 첨가하여 이를 100℃에서 6시간 동안 추출하였다.
- 에탄올 추출은 분말 6 g에 95% 에탄올 120 ㎖를 첨가하여 이를 65℃에서 6시간 동안 환류 추출하였다.
- 초음파 추출은 분말 7.5 g에 95% 에탄올 150 ㎖를 첨가하여 이를 40℃에서 30분 동안 초음파기기(POWERSONIC 610, HWASHIN TECH, Daegu, Republic of Korea)를 이용하여 추출하였다.
각 추출공정은 도 2에 나타내었으며, 모든 추출물을 3㎛로 여과한 후 동결건조 또는 열풍건조하여 분말화하여 시료로 사용하였다.
실시예 2. 노각나무 추출물의 두피 개선에 따른 탈모 예방 확인
본 실시예에서는 노각나무 잎/줄기+껍질 추출물의 피부 표피세포(Human 유래)인 HaCaT 세포의 세포독성, 세포증식 활성 및 NO생성 활성을 측정하여 두피 개선에 따른 탈모 예방 효능을 측정하였다.
2-1 인간피부표피(HaCaT, Human keratinocyte) 배양
배지는 10% Fetal Bovine Serum (FBS, Gibco, CA, USA) medium을 함유한 DMEM Low glucose(SH30021.01, HyCloneTM, Logan, UT, USA) 배지를 이용하였다. 세포주는 습도 95%, 5% CO2, 37℃로 조절된 배양기에서 배양하였으며, 이때 미생물의 오염이나 증식을 억제하기 위해 배지용 항생제(Penicillin streptomycin, Gibco, CA, USA)를 사용하였다. 세포가 80% 정도 디쉬를 덮으면 phosphated-buffered saline-EDTA(PBS-EDTA)로 세척한 후 0.05% Trypsin EDTA를 1 ㎖ 처리하여 디쉬 바닥에 부착된 세포를 계대 배양하였다. 배지는 48시간마다 교환하여 세포를 배양하였다.
2-2 인간피부표피세포(HaCaT) 독성 확인
HaCaT 세포주를 1×104 cells/well의 농도로 96 well plate에 분주하고, 24시간 동안 37℃, 습도 95%, CO2 5%로 조절된 CO2 배양기에서 배양하였다. 새로운 배지에 각 시료를 세포독성이 나타나지 않는 알맞은 농도 범위로 세포에 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 세포주의 생존율을 측정하기 위해 MTS (CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay, Promega, USA)를 이용하여 microplate reader (Molecular Devices, Versa Max ELISA Microplate Reader, USA)로 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포의 독성은 시료를 처리하지 않은 대조군에 대비한 시료 처리군의 흡광도로 표시하였다.
2-3 인간피부표피세포 (HaCaT)를 이용한 세포 증식 활성 확인
HaCaT 세포주를 5×103 cells/well의 농도로 96 well plate에 분주하고, 24시간 동안 37℃, 습도 95%, CO2 5%로 조절된 CO2 배양기에서 배양하였다. 새로운 배지에 각 시료를 세포독성이 나타나지 않는 알맞은 농도 범위로 세포에 처리한 후 1, 2일 동안 배양하였다. 세포주의 생존율을 측정하기 위해 Cell Counting Kit-8(CCK-8, Dojindo Mol. Tech., Rockville., MD, USA)를 이용하여 microplate reader(Molecular Devices, Versa Max ELISA Microplate Reader, USA)로 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포의 재생효능은 시료를 처리하지 않은 대조군에 대비한 시료 처리군의 흡광도로 표시하였다.
2-4 인간피부표피세포(HaCaT) NO 생성 활성 확인
96 well plate에 세포를 1×105 cells/well의 농도로 분주 후 습도 95%, 5% CO2, 37℃로 조절된 배양기에서 24시간 안정화하였다. 새로운 배지에 각 시료를 세포 독성이 나타나지 않는 알맞은 농도 범위로 세포에 처리한 후 습도 95%, 5% CO2, 37℃로 조절된 배양기에서 24시간 배양하였다.
NO 생성량은 Griess 시약을 사용하여 측정하였다. Griess 시약은 2.5%의 phosphate 용액에 1% sulfanilamide와 0.1% naphthylethylene-diamine-di-hydrochloride를 혼합하여 만들었다. 위에 배양한 세포의 상등액 50㎕를 96 well plate에 취하고 여기에 Griess 시약 50㎕를 가해 15분 동안 실온에서 반응시킨 후 microplate reader(Molecular Devices, VersaMax ELISA Microplate Reader, USA)를 이용하여 540㎚에서 흡광도를 측정하였다. NO 함량은 NaNO2를 이용하여 검량곡선을 작성한 후 대입하여 계산하였다.
결과
1. 인간피부표피세포(HaCaT) 독성
노각나무 잎/줄기+껍질 추출물 0.1~100㎍/㎖의 농도에서 HaCaT에 대한 독성 확인 결과 및 비교대조군으로서 노각나무에 함유된 성분인 우르솔릭산(Ursolic acid)를 사용한 독성 확인 결과는 하기 표 1 및 표 2에 나타내었다.
시료명 시료농도
(㎍/㎖) 		<잎 추출물 시료>
HaCaT 세포생존율(%) 		<줄기+껍질 추출물 시료>
HaCaT 세포생존율(%)
Control - 100.0±4.5 100.0±9.4

열수 추출		 0.1 98.7±6.6 87.8±7.2
0.5 90.6±7.1 88.5±5.7
1 104.1±4.9 86.3±5.4*
5 88.6±6.3* 89.2±4.5
10 89.1±10 83.2±7.2*
20 92.4±6.7 84.1±8.2*
50 87.2±9.4* 85.5±5.3*
100 85.6±6.1* 86.2±3.2*
에탄올 추출 0.1 124.9±8.0* 111.2±19.5
0.5 115.5±9.3* 103.7±19.1
1 113.4±6.5* 109.1±16.6
5 94.2±6.2 101.7±13.1
10 98.0±4.9 125.3±8.1*
20 93.9±6.8 125.8±8.1*
50 89.9±7.2 77.5±7.6*
100 28.4±0.9* 27.4±0.8*
초음파 추출 0.1 116.4±12.5 108.9±6.5
0.5 115.0±14.7 101.8±2.9
1 127.2±5.7* 117.1±3.4*
5 113.0±1.7* 115.5±6.1*
10 104.0±14.7 124.7±6.7*
20 103.3±4.6 89.6±4.5*
50 63.7±3.4* 29.2±0.4*
100 30.2±2.3* 29.9±0.7*
* p<0.05 indicates a significant difference as compared to the control group.
시료명 시료농도 (㎍/㎖) HaCaT 세포생존율(%)
Control - 100.0±5.9
우르솔릭산 1 94.4±7.2
5 73.3±4.2*
10 46.5±6.6*
20 31.3±5.8*
50 28.1±0.6*
100 29.5±1.2*
* p<0.05 indicates a significant difference as compared to the control group.
표 1 및 표 2를 참고하면, 노각나무 잎 /줄기+껍질 추출물의 HaCaT에 대해 독성을 나타내는 농도는 모두 달랐으며, 5㎍/㎖ 이상의 농도에서 독성을 나타내었고, 비교대조군인 우르솔릭산도 5㎍/㎖ 이상의 농도에서 나타내었다. 따라서 피부세포인 HaCaT 세포 증식 활성 측정 농도는 0.1~1㎍/㎖로 설정하였다.
2. 인간피부표피세포(HaCaT) 증식 활성
노각나무 잎/줄기+껍질 추출물과 우르솔릭산의 0.1-1㎍/㎖의 농도에서 HaCaT 증식 활성 확인 결과는 하기 표 3에 나타내었다.
시료명 시료농도 (㎍/㎖) HaCaT 세포 증식율(%)
Control - 100.0±7.8
잎 열수 추출물 0.1 143.8±2.2*
1 145.7±5.7*
에탄올 추출물 0.1 152.1±10.3*
1 151.6±5.4*
초음파 추출물 0.1 110.4±6.7
1 119.6±6.6*
줄기+껍질 열수 추출물 0.1 110.5±13.0
1 138.1±13.8*
에탄올 추출물 0.1 119.6±13.1*
1 162.5±9.1*
초음파 추출물 0.1 141.9±7.4*
1 139.1±12.2*
Control 100.0±2.2
우르솔릭산 0.1 98.0±5.2
1 89.9±5.3*
* p<0.05 indicates a significant difference as compared to the control group.
표 3을 참고하면, 노각나무 잎 에탄올 추출물이 0.1㎍/㎖에서 152.1%, 1㎍/㎖에서 149.6%의 세포 증식 활성으로 가장 높았고, 그 다음으로는 노각나무 줄기+껍질 에탄올 추출물은 0.1㎍/㎖에서 138.9%, 1㎍/㎖에서 158.3%의 세포 증식 활성을 확인하였다. 또한 각 부위의 추출물에서 유의적인 피부세포증식활성을 확인하여 노각나무추출물의 두피개선 효능을 확인할 수 있었다. 또한 비교대조군인 우르솔릭산은 모든 농도에서 세포 증식 활성은 없었다.
3. 인간피부표피세포(HaCaT)의 NO 생성 활성
노각나무 잎/줄기+껍질 추출물의 두피 혈류 개선 효과를 측정하기 위해 HaCaT의 NO 생성 활성을 측정한 결과는, 하기 표 4에 나타내었다.
시료명 시료농도 ㎍/㎖) NO 생성율(%)
Control - 100.0±4.8
잎 열수 추출물 0.1 101.6±7.7
1 103.1±8.7
에탄올 추출물 0.1 100.9±7.5
1 112.4±14.8
초음파 추출물 0.1 122.8±12.0*
1 138.7±11.3*
줄기+
껍질		 열수 추출물 0.1 106.2±10.5
1 103.5±7.3
에탄올 추출물 0.1 104.3±10.1
1 125.1±6.6*
초음파 추출물 0.1 111.8±13.8
1 105.2±6.5
Control - 100.0±7.2
우르솔릭산 0.1 101.5±6.1
1 98.9±8.1
* p<0.05 indicates a significant difference as compared to the control group.
표 4를 참고하면, 시료의 농도 0.1㎍/㎖ 및 1㎍/㎖ 에서 실시하였고, 노각나무 잎 초음파 추출물과 노각나무 줄기+껍질 에탄올 추출물이 각각 125.1%, 138.7%로 농도 의존적인 증가를 보였고, NO생성활성이 가장 높았다. 또한 1㎍/㎖의 고농도에서 NO 생성이 증가하는 경향을 보여 두피의 혈류개선에 도움을 줄 것으로 판단된다.
실시예 3. 노각나무 추출물의 모성장 활성 확인
본 실시예에서는 노각나무 잎/줄기+껍질 추출물의 모유두세포(HFDPC)의 세포독성, 세포 증식활성, HGF, FGF-7 및 TGF-β1의 변화를 측정하여 모성장 활성을 확인하였다.
3-1 모유두세포(HFDPC, Human Follicle Dermal Papilla Cells) 배양
모유두세포(HFDPC, Human Follicle Dermal Papilla Cells)는 Promocell(C-12071, Heidelberg, Germany)에서 분양받아 사용하였다. 배지는 10% Fl BS(FBS, Lonza, Valais, Switzerland) medium을 함유한 Follicle Dermal Papilla Cell Growth Medium(C-26502, Heidelberg, Germany)을 이용하였다. 세포는 습도 95%, 5% CO2, 37℃로 조절된 배양기에서 배양하였으며, 이때 미생물의 오염이나 증식을 억제하기 위해 배지용 항생제(Penicillin streptomycin, Gibco, CA, USA)를 사용하였다. 세포가 80% 정도 디쉬를 덮으면 phosphated-buffered saline-EDTA(PBS-EDTA, Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, USA)로 세척한 후 0.05% Trypsin-EDTA(Gibco, Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, USA)를 1 ㎖ 처리하여 디쉬 바닥에 부착되어 있는 세포를 떼어내 계대 배양하였다. 배지는 48~72 시간마다 교환하여 세포를 배양하였다.
3-2 모유두세포(HFDPC) 독성 확인
모유두세포(HFDPC, Human Follicle Dermal Papilla Cells)의 독성 측정은 MTS (CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay, Promega, USA)시약을 이용하여 세포의 독성을 측정하였다. 96 well plate에 세포를 1×104 cells/well의 농도로 분주 후 습도 95%, 5% CO2, 37℃로 조절된 배양기에서 24시간 안정화한다. 이 후 시료를 농도별로 처리하여 습도 95%, 5% CO2, 37℃로 조절된 배양기에서 24시간 배양하였다. MTS 시약을 처리하고, 37℃에서 60분간 반응 후 microplate reader(Molecular Devices, VersaMax ELISA Microplate Reader, USA)로 490nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포의 생존율은 시료를 처리하지 않은 대조군에 대비한 시료 처리군의 흡광도로 표시하였다.
3-3 모유두세포(HFDPC)의 세포 증식 활성 확인
모유두세포 (HFDPC, Human Follicle Dermal Papilla Cells)를 5×103 cells/㎖의 농도로 96 well plate에 100㎕ 분주하고, 24시간 동안 37℃, 습도 95%, CO2 5%로 조절된 CO2 배양기에서 배양하였다. 새로운 배지에 세포독성이 나타나지 않는 농도 범위에서 시료를 처리하여 1, 2일 동안 배양하였다. 세포주의 생존율을 측정하기 위해 Cell Counting Kit-8(CCK-8, Dojindo Mol. Tech., Rockville., MD, USA)를 이용하여 microplate reader(Molecular Devices, Versa Max ELISA Microplate Reader, USA)로 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포의 재생효능은 시료를 처리하지 않은 대조군에 대비한 시료 처리군의 흡광도로 나타내었다.
3-4 모유두세포(HFDPC)의 HGF 함량 확인
HGF(Hepatocyte growth factor)는 모낭의 길이성장촉진, 건강한 모발유지 및 모발성장기 강화를 하는 간세포 성장인자로서 알려져 있다.
모유두세포 (HFDPC, Human Follicle Dermal Papilla Cells)를 2×105 cells/well의 농도로 24 well plate에 분주하고, 24시간 동안 37℃, 습도 95%, CO2 5%로 조절된 CO2 배양기에서 배양하였다. 새로운 배지에 각 시료를 세포독성이 나타나지 않는 농도 범위에서 세포에 처리한 후 24시간 동안 시료에 처리하였다. 배양액을 취하여 HGF 함량을 측정하였다.
HGF assay kit(Cat#ELH-HGF)는 RayBio사에서 구매하여 사용하였다. 배양액을 plate에 100㎕씩 분주 후 2시간 30분 동안 교반 상온 배양하였다. Plate를 wash buffer로 세척 후 Antibody 100㎕ 처리하여 1시간 교반 상온 배양하였다. Plate를 wash buffer로 세척 후 HRP 100㎕ 처리하여 1시간 교반 상온 배양하였다. Plate를 wash buffer로 세척 후 TMB solution을 100㎕ 처리하여 30분 교반 상온 배양하였다. STOP solution 50㎕를 분주 후 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 키트시약에 포함된 HGF 표준용액을 이용하여, 표준검량곡선에 따라 HGF의 함량을 계산하고, HGF 생성 유도효능은 시료를 처리하지 않은 대조군에 대비한 시료 처리군의 HGF 함량으로 계산하였다.
3-5 모유두세포(HFDPC)의 FGF-7 함량 확인
FGF-7(Fibroblast growth factor)는 모성장과정에서 퇴행기에서 초기성장기를 유도하는 인자로 알려져 있다. 또한 섬유아 세포의 콜라겐 합성을 증가시킬 수 있으며, 상피세포에서는 세포분열을 촉진시킴으로서 상피층의 두께를 증가시키는 작용을 한다.
모유두세포(HFDPC, Human Follicle Dermal Papilla Cells)를 2×105 cells/well의 농도로 24 well plate에 분주하고, 24시간 동안 37℃, 습도 95%, CO2 5%로 조절된 CO2 배양기에서 배양하였다. 새로운 배지에 각 시료를 세포독성이 나타나지 않는 농도 범위로 세포에 처리한 후 24시간 동안 시료에 처리하였다. 배양 상등액을 취하여 FGF-7 함량을 측정하였다.
FGF-7 assay kit(Cat#ELH-FGF7)는 RayBio사에서 구매하여 사용하였다. 배양액을 plate에 100㎕씩 분주 후 2시간 30분 동안 교반 상온 배양하였다. Plate를 wash buffer로 세척 후 Antibody 100㎕ 처리하여 1시간 교반 상온 배양하였다. Plate를 wash buffer로 세척 후 HRP 100㎕ 처리하여 1시간 교반 상온 배양하였다. Plate를 wash buffer로 세척 후 TMB solution을 100 ㎕ 처리하여 30분 교반 상온 배양하였다. STOP solution 50㎕를 분주 후 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 키트시약에 포함된 FGF-7 표준용액을 이용하여, 표준검량곡선에 따라 FGF-7의 함량을 계산하고, FGF-7 생성 유도효능은 시료를 처리하지 않은 대조군에 대비한 시료 처리군의 FGF-7 함량으로 계산하였다.
3-6 모유두세포(HFDPC)를 이용한 TGF-β1 함량 확인
TGF-β1(Transforming growth factor beta 1)은 모발의 성장기에서 모발 성장을 억제하는 인자로 알려져 있다. DHT에 반응하여 모유두세포에서 TGF-β의 합성이 촉진되며 TGF-β1은 안드로겐에 반응하여 모유두세포로부터 분비되는 성장억제제이다. TGF-β는 퇴행기 유발인자로 케라티노사이트 증식 억제제이며 케라티노사이트 세포 사멸 유도제로 작용한다.
모유두세포(HFDPC, Human Follicle Dermal Papilla Cells)를 2×105 cells/well의 농도로 24 well plate에 분주하고, 24시간 동안 37℃, 습도 95%, CO2 5%로 조절된 CO2 배양기에서 배양하였다. 새로운 배지에 각 시료를 세포독성이 나타나지 않는 농도 범위로 세포에 처리한 후 24 시간 동안 시료에 처리하였다. 배양상등액을 취하여 TGF-β1 함량을 측정하였다.
TGF-β1 assay kit(Cat#ELH-TGF-b1)는 RayBio사에서 구매하여 사용하였다. 세포 배양 상등액을 활성화 하기위해 먼저 배양 상등액 500 ㎕에 1N HCl 100 ㎕를 첨가하여 실온에서 10분간 방치하였다. 그 후 1.2 N NaOH/0.5 M HEPES 100 ㎕를 첨가하여 중화하여 실험에 사용하였다. 활성화된 배양액을 plate에 100 ㎕씩 분주 후 2시간 30분 동안 교반 상온 배양하였다. Plate를 wash buffer로 세척 후 Antibody 100㎕ 처리하여 1시간 교반 상온 배양하였다. Plate를 wash buffer로 세척 후 HRP 100㎕ 처리하여 1시간 교반 상온 배양하였다. Plate를 wash buffer로 세척 후 TMB solution을 100㎕ 처리하여 30분 교반 상온 배양하였다. STOP solution 50㎕를 분주 후 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 키트시약에 포함된 TGF-β1 표준용액을 이용하여, 표준검량곡선에 따라 TGF-β1의 함량을 계산하고, TGF-β1 생성 유도효능은 시료를 처리하지 않은 대조군에 대비한 시료 처리군의 TGF-β1 함량으로 계산하였다.
결과
1. 모유두세포(HFDPC)에 대한 세포독성 확인
노각나무 잎/줄기+껍질 추출물의 모유두세포(HFDPC)에 대한 독성을 측정하기 위해 각 시료를 0.1-100 ㎍/㎖ 농도로 세포에 처리하였으며 결과는 하기 표 5에 나타내었고, 비교대조군으로서 우르솔릭산에 대한 세포독성 측정 결과는 표 6에 나타내었다.
시료명 시료농도
(㎍/㎖) 		<잎 추출물 시료>
HFDPC 세포 생존율(%) 		<줄기+껍질 추출물 시료>
HFDPC 세포 생존율(%)
Control - 100.0±2.4 100.0±11.8

열수 추출		 0.1 105.5±6.4 95.0±6.0
0.5 104.2±14.1 90.2±1.7
1 105.6±12.1 88.1±2.7
5 104.2±2.3* 90.5±4.0
10 109.5±5.0* 98.7±6.8
20 113.2±15.6 101.2±4.7
50 130.4±18.8* 108.8±2.7
100 134.1±22.0* 110.9±4.5
에탄올 추출 0.1 107.6±3.9* 90.9±6.0
0.5 113.1±8.9* 99.3±9.5
1 131.1±13.2* 88.7±3.0
5 121.4±22.4 103.7±8.8
10 121.7±10.2* 93.3±1.0
20 146.0±4.7* 106.4±2.3
50 149.4±12.0* 136.4±8.3*
100 58.9±9.1* 40.2±1.7*
초음파 추출 0.1 103.9±4.4 101.6±4.6
0.5 97.2±4.0 102.8±5.6
1 103.7±6.0 102.5±10.0
5 98.0±5.2 104.6±10.4
10 103.3±4.8 111.1±8.1*
20 139.2±5.5* 127.9±12.2*
50 53.1±0.3* 74.8±8.1*
100 53.5±0.7* 40.3±1.5*
* p<0.05 indicates a significant difference as compared to the control group.
시료명 시료농도 (㎍/㎖) HFDPC cell Viability (%)
Control - 100.0±5.5
우르솔릭산 0.1 93.5±4.1
0.5 107.9±3.5
1 98.1±5.9
5 92.6±2.0
10 100.4±10.0
20 46.1±0.8*
50 45.1±0.6*
100 52.7±3.6*
* p<0.05 indicates a significant difference as compared to the control group.
표 5 및 표 6을 참고하면, 노각나무 잎/줄기 에탄올 추출물과 초음파 추출물의 50㎍/㎖ 이상의 농도에서 HFDPC 세포에 대한 독성이 나타났다. 비교대조군인 우르솔릭산은 20㎍/㎖ 이상의 농도에서 나타내었다.
따라서 모성장 활성 측정 농도는 20 ㎍/㎖ 이하의 농도에서 측정하였다.
2. 모유두세포(HFDPC)의 세포 증식 활성
노각나무 잎/줄기+껍질 추출물의 모유두세포 증식 활성을 측정하기 위해 독성이 없는 농도인 10-20㎍/㎖에서 세포 증식 활성을 측정하였으며 결과는 하기 표 7에 나타내었다.
시료명 시료
농도
(㎍/㎖) 		HFDPC 세포 증식율(%) 시료
농도
(㎍/㎖) 		HFDPC 세포 증식율(%)
DAY 1 DAY 2 DAY 1 DAY 2
Control - 100.0±4.9 100.0±7.9 - 100.0±4.9 100.0±7.9
잎 열수 추출물 10 115.0±8.1* 146.3±18.9* 20 123.1±6.5* 139.1±6.3*
에탄올 추출물 114.1±1.3* 124.1±12.9* 129.9±2.4* 141.3±7.8*
초음파 추출물 135.9±11.4* 135.1±8.9* 144.2±4.3* 155.6±7.3*
줄기+
껍질
열수 추출물 126.9±13.6* 161.0±2.9* 129.3±7.8* 152.1±11.5*
에탄올 추출물 104.2±6.2 127.0±2.0* 129.4±8.4* 140.4±10.8*
초음파추출물 138.3±13.2* 131.8±7.5* 142.1±5.4* 135.8±4.1*
Control - 100.0±10.1 100.0±17.2 - 100.0±6.6 100.0±17.0
Ursolic acid 10 101.5±9.7 97.3±16.7 20 55.2±3.9* 43.5±1.1*
* p<0.05 indicates a significant difference as compared to the control group.
표 7을 참고하면, 노각나무 잎/ 줄기+껍질 및 모든 추출방법에서 높은 모유두세포 증식활성을 확인하였다. 특히 농도 10㎍/㎖에서의 증식 활성보다 20㎍/㎖일 때 더 유의적인 활성을 보였으며, 노각나무 잎 초음파 추출물과 노각나무 줄기+껍질 열수 추출물이 2일차 20㎍/㎖에서 세포 증식 활성이 각각 155.6%, 152.1%로 가장 우수하였다. 노각나무는 부위와 상관없이 모유두세포 성장효능을 보여 탈모방지 및 양모 효능을 나타낼 수 있는 것으로 판단된다.
비교대조군으로 사용한 우르솔릭산은 10㎍/㎖에서는 증식활성이 없었고, 20㎍/㎖ 에서는 독성이 확인되었다.
3. 모유두세포(HFDPC)의 HGF 함량
노각나무 잎/줄기+껍질 추출물에 따른 HGF 함량 측정 결과는 하기 표 8에 나타내었다.
시료명 시료농도(㎍/㎖) Hepatocyte Growth Factor(%)
Control - 100.0±4.2
잎 열수 추출물 20 86.8±14.2
에탄올 추출물 147.6±5.6*
초음파 추출물 136.9±9.3*
줄기+
껍질		 열수 추출물 99.8±14.0
에탄올 추출물 150.4±21.6*
초음파 추출물 104.4±5.5
Control - 100.0±6.1
Ursolic acid 20 72.8±8.5*
* p<0.05 indicates a significant difference as compared to the control group.
표 8을 참고하면, 노각나무 잎 에탄올 추출물, 초음파 추출물 및 노각나무 줄기+껍질 에탄올 추출물에서 높은 생성 함량을 확인하였다. 특히 노각나무 잎 에탄올 추출물과 노각나무 줄기+껍질 추출물은 각각 147.6%와 150.4%로 유의적으로 HGF 함량이 증가하였다. 또한 우르솔릭산은 오히려 감소하였다.
4. 모유두세포(HFDPC)의 FGF-7 함량
노각나무 잎/줄기+껍질 추출물에 따른 FGF-7 함량 측정 결과는 하기 표 9에 나타내었다.
시료명 시료농도(㎍/㎖) Fibroblast Growth Factor-7(%)
Control - 100.0±5.8
잎 열수 추출물 20 115.0±12.6
에탄올 추출물 111.5±6.5
초음파 추출물 113.0±5.5*
줄기+
껍질		 열수 추출물 90.8±4.4
에탄올 추출물 97.3±20.5
초음파 추출물 104.5±7.2
Control - 100.0±3.2
Ursolic acid 20 102.5±0.6
* p<0.05 indicates a significant difference as compared to the control group.
표 9를 참고하면, 무처리군 대비 노각나무 잎 초음파 추출물은 113.0%로 FGF-7 함량의 유의적인 증가를 확인하였다. 이를 제외한 모든 시료에서 무처리군 대비 FGF-7 함량의 유의적인 차이는 없었다. 비교대조군인 우르솔릭산에도 효과는 나타나지 않았다.
5. 모유두세포(HFDPC)의 TGF-β1 함량
노각나무 잎/줄기+껍질 추출물에 따른 TGF-β1 함량 측정 결과는 하기 표 10에 나타내었다.
시료명 시료농도(㎍/㎖) Transforming Growth Factor Beta-1 (%)
Control - 100.0±10.1
잎 열수 추출물 20 102.1±1.9
에탄올 추출물 99.4±4.1
초음파 추출물 74.9±1.9*
줄기+
껍질		 열수 추출물 99.3±3.5
에탄올 추출물 90.7±3.0*
초음파 추출물 86.8±12.1
Control - 100.0±9.1
Ursolic acid 20 108.1±3.7
* p<0.05 indicates a significant difference as compared to the control group.
표 10을 참고하면, 무처리군 대비 노각나무 잎 초음파 추출물은 TGF-β1 함량이 74.9%로 약 25%의 TGF-β1 저해 활성을 나타냈다. 또한 노각나무 줄기+껍질 초음파 추출물도 13.2%의 TGF-β1 저해 활성을 확인하였다. 이를 제외한 모든 시료에서 무처리군 대비 TGF-β1 함량의 유의적인 차이는 없었다 모성장을 억제하는 TGF-β1의 생성저해는 노각나무 잎 초음파추출물에서 확인할 수 있었다.
이와같이 상기 실시예 2의 결과로부터 50ppm 이상의 높은 농도에서는 두피표피세포인 HaCaT 세포에 대한 독성이 있었으나, 저농도인 0.1㎍/㎖ 과 1㎍/㎖의 농도에서는 농도의존적인 증식활성을 보이는 것을 확인할 수 있었다. 모발을 잡고 있는 두피가 건강해서 탈모를 예방할 수 있는 바, 이러한 두피세포 증식활성으로부터 본 발명의 노각나무 추출물이 탈모예방에 효과가 있음을 확인할 수 있다.
또한 두피의 혈액순환에 장애가 생김에 따라 두피에 열이 발생하고 이에 따라 탈모증상이 발생하는 바, 두피 혈류 개선을 통하여 탈모 방지 및 예방에 도움이 된다. 이에 두피세포로 혈류흐름을 개선하는 NO의 생성량을 측정한 결과, 특히 잎과 줄기의 에탄올 및 초음파 추출물에서 NO 생성이 증가하는 경향을 나타내었다. 즉, 본 발명의 노각나무 추출물은 두피의 혈류흐름을 개선하여 모낭의 영양 공급에 도움을 줌으로써 탈모예방 효과를 가져올 것으로 판단된다.
또한 상기 실시예 3의 모유두세포의 증식활성 확인 결과, 노각나무의 모든 추출방법에서 높은 모유두세포 증식활성을 확인할 수 있었다. 특히 농도 10㎍/㎖에서의 증식 활성보다 20 ㎍/㎖일 때 더 유의적인 활성을 보였으며, 노각 잎 초음파 추출물과 노각 줄기+껍질 열수 추출물이 2일차 20 ㎍/㎖에서 세포 증식 활성이 각각 155.6%, 152.1%로 가장 우수하였다. 즉 본 발명의 노각나무 추출물은 부위와 상관없이 모유두세포 성장효능을 나타냄으로써 탈모 예방 및 양모 촉진에 효능이 있는 것으로 확인된다.
또한 상기 실시예 3의 모성장인자 및 모성장 억제인자의 활성을 확인하였는 바, 특히, 모성장인자 HGF는 노각 잎 에탄올 추출물, 초음파 추출물 및 노각 줄기+껍질 에탄올 추출물 처리시 높은 함량 증가를 보였고, 특히 노각나무 잎 에탄올 추출물과 노각나무 줄기+껍질 추출물은 각각 147.6%와 150.4%로 유의적으로 HGF 함량이 증가하였다. FGF-7는 노각 잎 초음파 추출물 처리시 113.0%로 유의적인 증가활성을 확인하였다. 모성장을 억제하는 인자인 TGF-β1의 경우 노각나무 잎 초음파 추출물은 약 25%, 노각나무 줄기+껍질 초음파 추출물은 13.2%의 생성 저해 활성을 확인하였다. 즉, 본 발명의 노각나무 추출물은 모성장인자 HGF 또는 FGF-7의 함량을 증대시키고 모성장 저해인자인 TGF-β1의 함량이 감소시켰는 바, 모성장 활성을 통한 양모 촉진 및 모성장 억제를 저해함에 따른 탈모 예방에 효능이 있는 것으로 확인되었다.
이와 같이 상기 실시예의 결과로부터 노각나무의 잎과 줄기+껍질을 분리하지 않고, 혼합한 용액으로 에탄올 또는 초음파를 이용하여 추출하는 공정으로 탈모예방 및 양모효능 원료로써 노각나무 추출물을 수득할 수 있음을 확인할 수 있다.
따라서 노각나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 두피세포 및 모유두세포를 증식함은 물론, 모성장 인자의 생성을 증가하고 모성장 억제인자를 저해함으로써 탈모예방 및 양모촉진 효능을 가지는 바, 약학, 화장품, 식품, 의약외품 및 미용 등의 분야에서 다양하게 활용 가능하다.

Claims (10)

  1. 탈모 예방 또는 양모 촉진용 조성물에 있어서,
    노각나무 추출물을 유효성분으로 포함하여,
    탈모를 예방 또는 개선하고 모발 성장을 촉진하되,
    상기 조성물은 인간피부표피세포(HaCat)의 증식, 인간피부표피세포의 NO생성 증가 또는 모유두세포의 모성장억제인자 TGF-β1(Transforming growth factor beta 1)의 저해로 탈모를 예방 또는 개선하며,
    모유두세포의 증식 또는 모유두세포의 모성장인자 생성 증가로 모발 성장을 촉진하고
    상기 모성장인자는 HGF(Hepatocyte growth factor) 또는 FGF(Fibroblast growth factor)-7인 것을 특징으로 하는 탈모 예방 또는 양모 촉진용 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제1 항에 있어서,
    상기 조성물은 의약 조성물인, 탈모 예방 또는 양모 촉진용 조성물.
  6. 제1 항에 있어서,
    상기 조성물은 의약외품용 조성물인, 탈모 예방 또는 양모 촉진용 조성물.
  7. 제1 항에 있어서,
    상기 조성물은 식품 조성물인, 탈모 예방 또는 양모 촉진용 조성물.
  8. 제1 항에 있어서,
    상기 조성물은 화장료 조성물인, 탈모 예방 또는 양모 촉진용 조성물.
  9. 제1 항에 따른 탈모 예방 또는 양모 촉진용 조성물을 포함하는 헤어 또는 두피용 제품.
  10. 제9 항에 있어서,
    상기 제품은 발모제, 두피클리닉제, 두피스케일링제, 두피마사지제, 두피케어제, 세정제, 샴푸, 토닉, 헤어컨디셔너, 헤어로션, 젤, 팩, 크림, 에센스, 파우더, 스프레이, 오일, 비누, 연고, 헤어스타일링제, 염모제 및 펌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤어 또는 두피용 제품.
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