KR0149895B1

KR0149895B1 - 미생물 발효를 이용한 부패 및 동결이 방지된 습사료의 제조방법

Info

Publication number: KR0149895B1
Application number: KR1019940030367A
Authority: KR
Inventors: 민선학; 황교열
Original assignee: 민선학
Priority date: 1994-11-18
Filing date: 1994-11-18
Publication date: 1999-03-20
Also published as: KR960016741A

Abstract

본 발명은 유기산 생산균 또는 효모 등을 배양시킨 후 균체 또는 발효액을 사료 원료와 혼합하여 습사료를 제조함으로써 부패 및 동결이 방지된 습사료를 제조하는 방법에 관한 것이다.

Description

미생물 발효를 이용한 부패 및 동결이 방지된 습사료의 제조 방법

본 발명은 미생물 발효를 이용하여 부패 및 동결이 방지된 습사료를 제조하는 방법에 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 본 발명는 습사료 제조시 젖산균 등의 유기산 생산균, 또는 효모 등의 미생물을 이용하여 유가공 폐기물을 발효시킨 후 균체 또는 발효액을 사료 원료와 혼합하는 것을 포함하는, 부패 및 동결이 방지된 습사료를 제조하는 방법에 관한 것이다.

지금까지는 가축용 사료로서 장기 보관시에도 부패할 가능성이 적고 겨울철에도 동결될 우려가 없어 보관이나 유통시 안정성이 보장되는 건조 사료가 주로 이용되어 왔으나, 최근에는 가축이 섭취하는데 용이하고, 사료 섭취율이 뛰어나며, 생산성이 향상되는 등 여러 측면에서 건조 사료보다 유리한 습사료의 이용률이 점차 증가하고 있다.

그러나 습사료는 사료내의 수분 함량이 30 내지 90%에 이르므로 일반적으로 사료내에 존재하는 오염균의 성장에 적당한 조건을 가지고 있다. 기존의 습사료들은 습사료 원료와 일반 원료를 혼합하여 포장한 후 자연 발효에 의존하였으므로, 이들 오염균이 성장하게 되면 사료내의 유효한 영양성분이 파괴되고, 부패 또는 이상 발효(과발효)로 악취가 발생하며, 가축이 사료 섭취를 기피하여 생산성이 저하되거나 심하게는 설사 등의 질병이 야기될 수 있다. 또한 기온이 영하일 때는 높은 수분 함량으로 인해 동결되기 쉬우므로 동물에게 급여할 때 급여의 불편, 가축의 사료섭취의 어려움 등의 문제가 발생한다. 따라서, 종래의 기술에 의해 제조된 습사료는 제조한 후 즉시 급여해야 하는 등, 보관 및 유통 안정성이 결여되어 있었다.

본 발명자들은 상기와 같은 선행 기술들의 문제점을 해결하고 부패 및 동결이 방지되는 습사료를 제조하기 위해 노력한 결과, 유기산 생산균, 젖산균 또는 효모 등의 미생물 또는 그의 발효액을 사료 원료에 혼합하여 습사료를 제조함으로써 습사료의 부패 및 동결을 방지할 수 있음을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 미생물의 균체 또는 그의 발효액을 포함하는 부패 및 동결이 방지된 습사료를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기의 부패 및 동결이 방지된 습사료의 제조 방법을 제공하는 것이다.

이하, 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.

본 발명은 젖산균 등의 유기산 생산균 또는 효모 등의 미생물을 배양한 후 균체 또는 발효액을 사료 원료와 혼합함으로써 제조된, 부패 및 동결이 방지된 습사료 및 그의 제조 방법을 제공한다.

본 발명에서 사용할 수 있는 미생물은 배양시 젖산 등의 유기산 또는 알콜을 생산할 수 있는 미생물들이며, 하기 표1에 기재된 미생물들이 바람직하게 사용될 수 있다.

본 발명에서 사용할 수 있는 미생물 중 효모는 생활의 대부분을 구형 또는 난형으로 존재하면서 증식되는 단세포 미생물이다. 유성 및 무성 생식이 가능하고 백색의 콜로니를 형성하며, 통성 혐기성 균으로서 혐기적으로 발효가 될 때 알콜을 생산할 수 있으며 호기적 조건에서 유기산을 생산하는 효모로는 동물에게 무해한 사카로마이세스속(Saccharomyces)과 클루이베로마이세스속(Kluyveromyces)의 효모가 있다. 한편, 젖산균은 구균(coccus), 간균(bacillus), 쌍구균(dicoccus) 또는 무정형 등의 형태로 존재하며, 혐기성 또는 통성 혐기성 미생물로 발효가 될 때 공통적으로 젖산(lactic acid)을 생산하고, 다른 유기산과 이산화탄소를 생산한다.

표 1에 예시된 바와 같은 균들을 이용하여 각각의 균주에 적합한 통상의 배양배지, 또는 우유, 분유, 아이스크림 등의 유가공 부산물(폐기물)을 정당한 조건하에서 발효시킨 후, 그 균체 또는 발효물을 사료원료와 혼합하여 비닐포장지에 보관함으로써 2단계 발효를 유도하여 수분함량이 35 내지 85%인 습사료 내에서도 오염균의 부패, 이상발효(과발효) 및 동결이 방지되는 새로운 습사료를 제조할 수 있다.

본 발명에 사용되는 젖산균 등의 유기산 생성균 또는 효모균 등의 미생물들은 예를 들면 다음과 같이 배양할 수 있다.

젖산을 생산하는 젖산균은 한천이 포함된 락토바실러스(Lactobacillus) MRS 배지(1% Meat extract, 1% 펩톤, 0.5% 효모 추출물, 2% 글루코즈, 0.1% 트윈 80, 0.2% KHPO, 0.5% 초산나트륨, 0.2% 구연산 암모늄, 0.02% MgSO·7HO, 0.005% MnSO·4HO) 또는 로고사(ROGOSA) 배지 (1% 트립톤, 0.5% 효모 추출물, 2% 글루코즈, 0.1% 트윈 80, 0.6% KHPO, 0.2% 구연산 암모늄, 2.5% 초산나트륨, 0.132% 초산, 0.0516% MgSO·7HO, 0.014% MnSO·4HO, 0.0034% FeSO·7HO, pH 5.4)에서 보관하고, 사용할 때에는 삼각 플라스크에 한천이 없는 락토바실러스 MRS 또는 로고사 배지를 넣고 멸균한 다음, 여기에 젖산균을 접종하고 20 내지 45℃를 유지하면서 24 내지 36 시간 동안 균을 활성화시켜, 발효용 배지(5% 글루코즈, 2% 콘스틸리쿼(corn steep liquor, CSL), 0.1% KHPO, 0.02% MgSO·7HO, 0.005% MnSO·4HO, 0.015% ZnSO·7HO, 0.02% CaCO, pH 5.8)에 접종하여 온도를 20 내지 45℃로 유지하면서 24 내지 48 시간 동안 종균배양한다.

젖산 외의 유기산을 생산하는 유기산 생성균으로는 바실러스 종(Bacillus sp.), 바실러스 래보락티쿠스(B. laevolacticus) ATCC 23492, 바실러스 라세미락티쿠스(B. racemilacticus) ATCC 23496 등을 사용할 수 있으며, 상기 균주들은 효모 추출물-펩톤-전분 한천 배지(0.3% 효모 추출물, 1% 가용성 전분, 0.5% CaCO, 1% 펩톤, 0.5% 초산나트륨, 0.05% KHPO, 0.05% KHPO, 0.03% MgSO·7HO, 0.001% NaCl, 0.001% MnSO·5HO, 0.0001% CuSO·5HO, 0.0001% CoSO·6HO, 0.0001% FeSO·7HO, 0.0027% 구연산 나트륨, 1.8% 한천)에 접종하여 냉장고에서 보관하고, 사용시에는 한천이 들어 있지 않은 동일 배지에 균을 접종한 후 26 내지 35℃에서 2일간 진탕배양한다.

호기 및 혐기적으로 성장할 수 있고 발효과정 중 알콜을 생산할 수 있는 사카로마이세스속(Saccharomyces) 또는 클루이베로마이세스속(Kluyveromyces)의 균을 YM 배지(1% 글루코즈, 0.5% 펩톤, 0.3% 효모 추출물, 0.3% Malt extract)에 접종하여, 20 내지 45℃를 유지하면서 24 내지 48 시간 동안 활성화 시킨 후, YPD 배지(2% 글루코즈, 1% 펩톤, 1% 효모 추출물) 또는 발효용 배지 2ℓ에 접종하여 20 내지 45℃를 유지하면서 24 내지 48 시간 동안 종균 배양한다.

종균 배양시의 배지는 상기 배지외에도 사용균의 증식에 적합한 여러 가지 천연 배지 또는 상업적 가공 배지를 사용할 수 있다.

필요한 경우, 상기 종균 배양 후 젖산균 등의 유기산 생성균의 종균과 효모균 종균을 각각 또는 2종 이상 혼합하여 발효 용기내의 200 내지 400㎖의 배지에 접종한 다음, 온도 20 내지 40℃, pH 3.0 내지 9.0, 총 유기산량 0.5 내지 5.0%를 각각 유지하고, 통기하지 않고 교반하면서 2차 종균 발효를 진행시킨다. 발효도중 pH는 pH측정기로 측정하고, 젖산 등 유기산의 생성으로 pH가 저하될 때에는 수산화나트륨, 탄산칼슘, 수산화칼슘, 수산화암모늄 등으로 pH를 3.0 내지 9.0이 되도록 조정하며, 총 유기산량은 0.5 내지 5.0%가 되도록 유지한다.

총 유기산량의 측정은 채취된 발효액에 증류수를 첨가하여 10배 희석한 후 희석액에 페놀프탈레인 지시약을 2-3 방울 떨어뜨리고 0.1N 수산화나트륨 용액으로 적정하여 하기 식에 의해 계산한다.

총 유기산량(%,w/v) = 소비된 수산화나트륨 량 × 노르말 농도 × 90/50

총 유기산량은 pH의 조절을 통해 원하는 수준으로 유지시킬 수 있다.

상기와 같이 종균 발효가 완료된 종균을 이용하여 다음과 같이 본 발효를 수행한다. 우유, 분유, 아이스크림 등의 유가공 부산물 또는 폐기물 등의 천연 배지 또는 합성 배지 중 각 균주의 발효에 적당한 배지를 사용하는데, 예를 들면 유가공 부산물의 경우 우유, 분유, 또는 아이스크림 등의 유가공 부산물 1 내지 4ℓ를 물 또는 유청으로 2 내지 5배 희석한 후, 각각 약 1.0 × 10CFU/g의 젖산 종균 또는 효모 종균을 배지 용량의 1 내지 10%(V/V)의 양으로 각각 또는 혼합 접종하여 20 내지 45℃에서 1 내지 10일간 발효한다. 발효가 진행되면서 pH를 3.0 내지 9.0으로 유지하고, 총 유기산량은 0.5 내지 5.0%가 되도록 한다.

본 발효가 완료되면 발효액을 원료 사료와 혼합하는데, 원료 사료로는 발효 가능한 영양분 조성을 가진 것이면 무엇이나 대체로 사용할 수 있고, 바람직한 원료 사료는 하기 표 2와 같은 영양분 함량을 가진다. 이러한 원료 사료에 원료 사료 건조 중량 g당 1.0×10내지 1.0×10CFU, 바람직하게는 1.0×10내지 1.0×10CFU의 균주를 혼합하게 되는데, 예를 들어 ㎖당 5.0×10내지 5. 0×10CFU의 생존 균수를 갖는 상기 발효액을 사용할 경우, 원료 사료 건조 중량의 3 내지 20%(v/v)가 되도록 상기 발효액을 혼합하여 비닐포장지 등에 포장함으로써 본 발명의 습사료를 제조할 수 있으며, 포장 후 15 내지 45℃에서 1 내지 3 일간 고상발효를 진행시키는 것이 더욱 바람직하다.

한편, 원료 습사료와 혼합할 균주는 상기와 같은 배양액 상태 외에도 살아있는 젖산균 분말 또는 과립, 살아있는 효모 분말 또는 과립, 그리고 젖산균 식음료 제조 찌꺼기 등의 상태에 있는 것도 사용할 수 있으며, 이 경우 생존 균주의 수를 확인하여 적정한 양을 혼합한다. 또한, 상기와 같은 배양액과 원료 습사료를 혼합한 후, 2단계 발효가 잘 진행되지 않고 부정적 발효가 진행될 때 별도로 젖산균이나 효모균을 습사료 원료 g 중량당 10~10CFU, 바람직하게는 2×10~2×10CFU의 양으로 재첨가하여 발효시킬 수 있다.

이러한 방법으로 제조된 본 발명의 습사료는 -15 내지 45℃에 20 내지 30일간 보관하여도 부패하거나 동결되지 않으므로 장기간의 보관이나 유통시 안정성이 있다. 또한, 더욱 장기간 보관할 경우에는 포장 후 1 내지 20℃, 바람직하게는 10 내지 20℃의 저온에서 사용시까지 계속 보관할 수 있다.

이하, 본 발명을 하기 비교 실시예 및 실시예에 의해 더욱 상세히 설명하고자 하지만 본 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다.

[비교 실시예 1]

하기 표 4의 조성을 갖는 사료 원료 600g과 지하수 400㎖를 잘 혼합하여 37℃에서 통기 보관한 결과 48시간 이후에는 부패가 발생하고 오염균의 이상증식으로 인해 심한 암모니아 냄새가 발생하여 동물에게 급여할 수 없는 사료가 되었으며, 색상이 어두운 색으로 변질되었다.

[비교 실시예 2]

사료 원료 600g과 지하수 400㎖를 잘 혼합하여 상온에서 밀폐 보관한 결과 12 내지 48시간 동안은 자연발효가 진행되지만 12 내지 48시간 이후에는 복합적인 오염균의 성장으로 액화 현상, 악취, 성상의 변화 등이 발생하여 사료가치가 상실되었다.

[실시예 1]

로고사 배지에 보관된 락코바실러스 액시도필러스(Lactobacillus acidophilus) ATCC 4356 균주를 250㎖ 삼각 플라스크에 들어있는 멸균된 MRS 액체 배지 50㎖에 한 백금이 접종하여 37℃에서 48 시간 동안 진탕 배양하였다. 수득된 배양액 50㎖를 MRS 액체 배지 또는 변형된 YPD 액체 배지(당농도를 12%로 증가시킨 것) 2ℓ에 접종하여 발효기에서 온도 37℃, 통기량 2-3 vvm, 교반속도 250 rpm으로 72시간 동안 발효시켰다. pH는 발효 개시 때 부터 5.5를 유지하였다. 발효가 종료된 후 발효액 100㎖, 지하수 300㎖ 및 비교 실시예 1에서 사용한 것과 같은 사료 원료 600g을 잘 혼합하여 37℃ 에서 72 시간 동안 보관하여 고상발효시킨 결과, 부패 또는 이상발효(과발효)는 나타나지 않았고 향기가 좋고 부드러운 유산 발효향이 있는 습사료가 제조되었다. 제조된 습사료를 37℃ 에서 20일 동안 보관한 결과, 부패 또는 이상발효(과발효)는 나타나지 않았다.

[실시예 2]

로고사 배지에 보관된 페디오코커스속의 균주(Pediococcus spp.)를 MRS 배지 5㎖가 들어 있는 시험관에 한 백금이 접종한 후 37℃에서 24 시간 동안 정치 배양하였다.

균이 성장한 것을 현미경으로 관찰한 후 YPD 배지 120㎖가 들어 있는 500㎖ 삼각 플라스크에 전량 접종하여 37℃ 에서 48 시간 동안 120 rpm으로 진탕배양하였다. 3 리터의 발효용 배지에 120㎖의 배양액 전량을 접종한 후 35 내지 38℃ 에서 통기량 3vvm, 교반속도 250rpm, pH 5.0을 유지하면서 72 시간 동안 발효시켰다.

상기에서 얻은 발효액 150㎖에 지하수 250㎖ 및 비교 실시예 1에서 사용한 것과 같은 사료 원료 600g을 넣어 잘 혼합한 뒤 35℃ 에서 3일간 보관하여 고상발효시킨 결과, 부패 또는 이상발효(과발효)는 나타나지 않았고 젖산 발효가 잘 진행된 습사료가 제조되었다.

[실시예 3]

락코바실러스 액시도필러스(Lactobacillus acidophilus) ATCC 4356 균주를 5㎖의 MRS 배지가 들어있는 시험관에 한 백금이 접종한 후 37℃ 온도에서 36 시간 정치 배양한 다음 0.1% 탄산칼슘을 추가로 함유한 YPD 배지 150㎖가 들어 있는 500㎖ 삼각 플라스크에 접종하여 37℃에서 120RPM의 교반속도로 2일간 배양하였다.

배양된 종균을 젖산 발효용 배지 (15% 글루코즈, 5% CSL, 1% 효모 추출물, 1.5% 펩톤, pH 5.0) 3 리터에 전량 접종하고 수산화나트륨을 이용하여 pH 4.8을 유지하면서 온도 34 내지 38℃, 통기량 0.2vvm, 교반속도 150 내지 250 rpm으로 3일간 젖산 발효시켰다.

발효가 끝난 발효액에 증류수를 가하여 5% 젖산 발효액으로 조정하고, 5% 젖산 발효액 50㎖와 활성 건조효모 2.5g을 비교 실시예 1에서 사용한 것과 같은 사료원료 600g과 혼합한 후 물 350㎖를 가하여 2일 동안 35℃에서 비닐 포장지에 보관하여 고상발효시킨 결과 발효가 잘 진행된 습사료가 제조되었다.

또한, 5% 젖산 발효액 100㎖와 활성 건조 효모 1.0g(활성균주수: 1 × 10CFU/g)을 이용하여 상기와 같이 습사료를 제조한 결과 역시 발효가 잘 진행되었으며, 사료원료 600g과 물 400㎖만으로 구성된 습사료는 영하의 온도에서 동결되었으나 본 실시예에서와 같이 젖산 발효액과 활성 건조효모가 들어가 발효된 습사료는 영하 10℃ 이하의 온도에서 장기간 보관하여도 동결되지 않았다.

[실시예 4]

절대 혐기성 균인 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum) ATCC 29521 균주를 다진 고기 (chopped meat) 배지에 배양하여 냉장고에 보관하면서 사용하였다.

산소가 완전히 제거된 100㎖ 병에 티올(thilo) 배지(Difco, USA, Cat. No. 0307) 80㎖를 준비하여 상기 균을 한 백금이 접종한 후 37℃ 혐기상태에서 2일간 배양하였다. 수득된 배양액 80㎖를 1% 포도당을 포함하는 멸균된 2배 희석된 우유에 혐기적으로 접종한 후 2일간 더 배양하였다. 발효 종료 후 발효액 80㎖, 지하수 320㎖, 비교 실시예 1에서 사용한 것과 같은 사료원료 600g을 혼합하여 35℃에서 3일간 보관하여 고상발효시킨 결과 부패 또는 이상발효(과발효) 현상이 없는 습사료가 제조되었다.

[실시예 5]

스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus) ATCC 19258 균주와 락토바실러스 액시도필러스(Lactobacillus acidophilus) ATCC 4356 균주 및 사카로마이세스 세레비지애 (Saccharomyces cerevisiae) H9343 균주를 냉장고에 보관하면서, 젖산균은 MRS 배지, 효모는 YM 배지 50㎖가 들어있는 250㎖ 삼각 플라스크에 접종하여 각각 37℃ 및 30℃에서 2일간 배양하였다.

아이스크림과 우유를 동량으로 혼합한 혼합액 200㎖에 지하수 800㎖ 및 포도당 50g을 첨가하고 잘 혼합하여 희석액을 만들고 이 희석액 500㎖를 함유한 1ℓ 삼각 플라스크에 상기 젖산균과 효모균을 각각 50㎖씩 접종한 후 37℃ 에서 3일간 정치 배양하였다. 이 배양액 300㎖, 지하수 100㎖, 비교 실시예 1에서 사용한 것과 같은 사료원료 600g을 혼합하여 비닐포장지에 35℃에서 3일간 보관하여 고상발효시킨 결과, 부패 및 이상발효(과발효)등의 현상은 나타나지 않았으며, 영하 15℃ 이하의 온도에서 2일 이상 보관하여도 동결되지 않는 습사료가 제조되었다.

[실시예 6]

류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) ATCC 8293 균을 토마토 쥬스 배지(1% 트립톤, 1% 효모 추출물, 20%(v/v) 토마토 쥬스, 1.2% 한천, pH 7.2)에서 배양한 후 냉장고에 보관하였다. 상기 균을 YM 배지 50㎖가 들어있는 250㎖ 삼각 플라스크에 한 백금이 접종한 뒤 35℃에서 2일간 정치 배양하였다.

50㎖의 상기 배양물을 젖산 생산균용 발효 배지 (12% 가수분해 전분 또는 환원당, 1.5% NaCl, 0.375% Malt spouts, 0.025% (NH)HPO, 0.15% CaCO, pH 5.5) 250㎖에 접종한 후 37℃에서 3일간 진탕 배양하였다. 수득된 발효배양액 300㎖, 지하수 100㎖ 및 비교 실시예 1에서 사용한 것과 같은 사료원료 600g을 혼합한 후 35℃에서 2일 동안 비닐포장지에 밀봉 보관하여 고상발효시킨 결과, 부패 및 이상발효(과발효) 현상이 없고 젖산 발효가 잘 진행된 습사료가 제조되었다.

[실시예 7]

스포로락토바실러스 이누리누스(Sporolactobacillus inulinus) ATCC 14897을 락코바실러스 MRS 배지액 50㎖에 접종하여 37℃, 120rpm으로 2일간 진탕 배양하였다. 이 배양액을 발효용 배지 250 에 전량 접종하여 37℃에서 140 rpm으로 2일간 진탕 배양하였다.

배양이 종료된 후 배양액 100㎖를 우유 200㎖와 혼합하여 3일간 정치배양하였으며, 정치배양이 끝난 후 이 발효액 200㎖, 지하수 200㎖ 및 비교 실시예 1에서 사용한 것과 같은 사료원료 600g을 혼합하여 1㎏용 비닐용기에 넣어 35℃에서 3일 동안 밀봉 보관하여 고상발효시킨 결과, 부패 및 이상발효(과발효) 현상이 없고 젖산 발효가 잘 진행된 습사료가 제조되었다.

[실시예 8]

젖산을 생성할 수 있는 바실러스속의 균인 바실러스 종(Bacillus spp.)균을 MRS 배지 50㎖에 접종하여 40℃, 120rpm의 속도로 2일간 진탕 배양하였다. 50㎖의 상기 배양액을 효모 추출물-펩톤-전분 배지((0.3% 효모 추출물, 1% 가용성 전분, 0.5% CaCO, 1% 펩톤, 0.5% 초산나트륨, 0.05% KHPO, 0.05% KHPO, 0.03% MgSO·7HO, 0.001% NaCl, 0.001% MnSO·5HO, 0.0001% CuSO·6HO, 0.0001% CoSl·6HO, 0.0001% FeSO·7HO, 0.0027% 구연산 나트륨) 250㎖에 접종하여 30℃에서 120 rpm의 속도로 2일간 진탕 배양하였다.

전분 150g 및 우유 부산물 250㎖(또는 아이스크림 부산물 200㎖)를 첨가하여 최종용량을 1ℓ로 만든 동일 배지에 상기에서 수득된 배양액 250㎖를 접종하여 30℃에서 120 rpm의 속도로 3일간 배양하였다. 배양이 종료된 후 배양액 200㎖, 지하수 200㎖ 및 비교 실시예 1에서 사용한 것과 같은 사료원료 600g을 잘 혼합하여 1㎏ 비닐포장용기에 넣어 35℃에서 3일 동안 밀봉 보관하여 고상발효시킨 결과, 부패 및 이상발효(과발효)가 없이 젖산 발효가 잘 진행된 양질의 습사료가 제조되었다.

[실시예 9]

사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) H9343과 클루이베로마이세스 프래질리스(Kluyveromyces fragilis) H9334균을 YM 한천 배지에 접종하여 냉장고에 보관하면서 사용하였다.

YM 배지 50㎖씩이 들어 있는 두 개의 250㎖ 삼각 플라스크에 상기 균주들을 각각 한 백금이씩 각각의 플라스크에 접종한 다음 28℃에서 2일간 진탕 배양하였다. 배양이 종료된 후 상기 배양액 각 300㎖씩을 우유 2배 희석액(또는 아이스크림 5배 희석액) 300㎖와 각각 혼합하여 상온에서 3일간 정치 배양하였다. 상기 배양액 각 200㎖를 비교 실시예 1에서 사용한 것과 같은 사료원료 600g 및 지하수 200㎖와 혼합하여 1㎏ 비닐용기에 넣어 밀봉한 뒤 실온에서 3일 이상 방치하여 고상발효시킨 결과, 부패 또는 이상발효(과발효)가 발생하지 않고 알코올 발효가 잘 진행된 습사료가 제조되었으며, 이 습사료는 영하 10℃ 이하의 온도엥 보관했을 때에도 동결되지 않았다.

[실시예 10]

젖산균 락토바실러스 액시도필러스(Lactobacillus acidophilus) ATCC 4356, 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus) ATCC 19258 및 비피도박테리움 롱굼(Bifidobacterium longum) ATCC 29521, 바실러스 종(Bacillus spp.), 효모 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) H9343 및 클루이베로마이세스 프래질리스(Kluyveromyces fragilis) H9334 균의 6종류의 균주를, 혐기성 균주인 비피도박테리움은 0.1% 티오글리콜레이트(thioglycollate)가 첨가되고 질소가스로 치환된 MRS 배지, 다른 젖산균은 MRS 배지, 효모는 YM 배지가 50㎖씩 들어 있는 삼각 플라스크에 각각 한 백금이씩 접종하여 각각 37℃, 37℃ 및 30℃에서 120 rpm의 교반속도로 2일간 진탕 배양하였다.

배양이 끝난 뒤 표 5와 같은 구성을 갖는 균주 혼합액을 제조하고, 비교 실시예 1에서 사용한 것과 같은 사료원료 600g, 지하수 300㎖ 및 상기에서 수득된, 균주 혼합액 100㎖를 잘 혼합하여 1㎏ 비닐용기에 포장하여 30℃에서 15일 동안 보관하여 고상발효시켰다.

그 결과, 부패 및 이상발효(과발효)가 없이 젖산 및 효모균 발효가 잘 진행된 습사료가 제조되었으며, 이 습사료는 영하 10℃이하의 온도에 보관하였을 때에도 동결되지 않았다.

[실시예 11]

여러종류의 유가공 부산물이 혼합된 유가공 폐기물 혼합물 1ℓ에 유가공 제품(요구르트 등)의 제조에 사용하는 젖산균(락코바실러스 액시도필러스 5.0 × 10CFU/g 이상 및 스트렙토코커스 써모필러스 3.0 × 10(CFU/g 이상) 분말 5g과 포도당 20g을 첨가하여 3일간 35℃에 방치하여 발효시킨 다음 물로 2배 희석한 발효액 1ℓ와 비교 실시예 1에서 사용한 것과 같은 습사료 원료 1.5㎏을 혼합하여 2㎏ 비닐포장용기에 넣어 밀봉 보관한 결과 젖산 발효가 잘 진행되고, 향이 좋은 습사료가 제조되었다.

[실시예 12]

유가공 부산물(폐기물) 2-5배 희석액에 최종 농도 1%가 되도록 젖산을 넣은 후 잘 저었다. 수득된 혼합액 1ℓ에 젖산균(락토바실러스 액시도필러스 5.0 × 10CFU/g 및 스트렙토코커스 써모필러스 3.0 × 10CFU/g) 분말 5g, 탄산칼슘 1g, 유청 10g, 및 포도당 10g을 넣은 후 잘 혼합하여 실온에 방치하였다. 36시간 경과 후에 상기 발효액 200㎖를 비교 실시예 1에서 사용한 것과 같은 사료 원료 600g 및 지하수 200㎖와 혼합하여 1㎏ 비닐포장용기에 넣은 후 상온에서 보관하여 고상발효시킨 결과 젖산 발효가 잘 진행된, 습사료가 제조되었다.

상기 실시예에 의해 설명된 바와 같이 본 발명의 습사료는 부패, 이상발효(과발효) 및 동결이 방지되는 진보된 습사료로서 젖산균, 효모균 또는 젖산을 포함한 유기산 및 알코올을 이용하여 습사료의 변질을 방지함으로써 가축의 증체, 사료섭취율 증가, 유량 증대, 항질병 효과 등 가축의 생산성 향상에 크게 기여할 수 있다.

Claims

(1) 유기산 생산균 및 효모 균주중 적어도 하나를 배지에서 발효시키는 단계; 및 (2) 상기 균주 발효액을 수분 30 내지 90%, 조단백 2 내지 30%, 조섬유질 2 내지 30%, 조 지방질 0.1 내지 10%, 총회분 1 내지 10%로 이루어진 사료원료에 혼합한 다음 15 내지 40℃에서 1 내지 3일 동안 고상 발효시키는 단계를 포함하는, 부패, 이상발효(과발효) 및 동결이 방지된 습사료의 제조 방법.
제1항에 있어서, 상기 균주가 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) H9343, 클루이베로마이세스 프래질리스(Kluyveromyces fragilis) H9334, 바실러스 종(Bacillus spp.), 비피도박테리움 롱굼(Bifidobacterium longum) ATCC 29521, 락토바실러스 액시도필러스(Lactobacillus acidophilus) ATCC 4356, 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus) ATCC 11842, 락토바실러스 플랜타룸(Lactobacillus plantarum) ATCC 14917, 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) ATCC 8293, 페이오코커스 종(Pediococcus spp.), 스포로락토바실러스 종(Sporolactobacillus spp.), 스트렙토코커스 락티스(Streptococcus lactis) ATCC 19435, 또는 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus) ATCC 19258인 방법.
제1항에 있어서, 상기 (1)단계에서 유기산 생산균 및 효모 균주중 적어도 하나를 사료원료 건조 중량 1g당 1.0 × 10⁵내지 1.0 × 10¹⁰콜로니 형성단위(CFU)로 사료 원료에 혼합하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 (1)단계에서 배지가 유가공 부산물 또는 폐기물인 것을 특징으로 하는 방법.
1항에 있어서, 상기 (2)단계에서 고상 발효 후의 습사료가 30 내지 90%의 함량의 수분을 갖는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항, 제2항 및 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항의 방법에 따라 제조된, 부패, 이상발효(과발효) 또는 동결이 방지된 습사료.