JPWO2021142218A5

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Publication number: JPWO2021142218A5
Application number: JP2022536514A
Authority: JP
Publication date: 2024-01-16

Claims

細胞集団を精製するための方法であって、
流体培地中の生物学的細胞集団を増殖することであって、前記生物学的細胞集団が、支持されていない状態にある生物学的細胞を含み、前記生物学的細胞集団が、バイオリアクター内に含まれ、少なくとも１×１０^６細胞／ｍＬの細胞密度を有する、増殖することと、
前記バイオリアクターから前記流体培地を取り出して濾過することであって、前記流体培地が、フィルター部材を含むフィルター装置を通して濾過され、前記フィルター部材は、前記流体培地が引き抜かれるときに前記バイオリアクターから前記生物学的細胞が引き抜かれることを阻害する孔径を有する、取り出して濾過することと、
緩衝培地を前記生物学的細胞集団に加えることと、を含む、方法。
前記流体培地が、生物学的副産物を含有し、前記フィルター部材が、引き抜かれる前記流体培地と一緒に前記生物学的副産物が通過するのを可能にする孔径を有し、好ましくは、前記生物学的副産物が、タンパク質、血清、およびそれらの混合物を含み、好ましくは、前記流体培地が前記バイオリアクターから引き抜かれた後、前記生物学的細胞集団が、０．１重量％未満の量の前記生物学的副産物を含有する、請求項１に記載の方法。
前記流体培地の体積の約５０％超が引き抜かれ、少なくとも部分的に前記緩衝培地で置換され、好ましくは、前記流体培地が、前記バイオリアクター内の前記流体培地の体積の少なくとも５０％が１時間未満の期間で引き抜かれるような流量で、前記バイオリアクターから引き抜かれる、請求項１または２に記載の方法。
前記生物学的細胞集団および流体培地が、約１Ｌ～約１０Ｌの体積を有し、好ましくは、前記生物学的細胞集団および流体培地が、約５Ｌ～約７５Ｌの体積を有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
前記方法が、約２サイクル～約５サイクル繰り返される、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
前記生物学的細胞が、Ｔ細胞またはＮＫ細胞を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
前記生物学的細胞集団および緩衝培地を極低温保存のために可撓性袋容器内に分配するステップをさらに含み、好ましくは、前記生物学的細胞および緩衝培地がまた、極低温緩衝培地と組み合わされ、さらにより好ましくは、前記極低温緩衝培地がアルキルスルホキシドを含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
前記フィルター装置の前記フィルター部材が、約１ミクロン～９ミクロン、好ましくは約１ミクロン～６ミクロンの絶対孔径を有する、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
前記フィルター装置が、第１の開口部を画定する第１の端部と、第２の開口部を画定する対向する第２の端部と、を有する中空管状部材を含み、前記フィルター部材が、前記中空管状部材の前記第２の端部に位置し、前記フィルター部材が、前記第２の開口部を完全に取り囲んで密封し、前記フィルター部材が、内面および外面を画定し、好ましくは、前記フィルター部材の前記外面が、表面積を有し、前記表面積が、約２ｉｎ^２より大きく、約５０ｉｎ^２より小さい、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
前記生物学的細胞集団が、第１の細胞および第２の細胞を含む少なくとも２つの異なる細胞型を含み、前記方法が、前記生物学的細胞集団を含む前記流体培地内に１つ以上のマイクロキャリアを配置することであって、前記第１の細胞は前記１つ以上のマイクロキャリアに結合するが、前記第２の細胞は結合しない、配置することと、
前記バイオリアクターから前記流体培地を取り出して濾過することであって、前記流体培地が、フィルター部材を含む第２のフィルター装置を通して濾過され、前記フィルター部材が、前記第２の細胞の通過を可能にするが、前記第２の細胞から前記第１の細胞を分離するために前記１つ以上のマイクロキャリアの通過を阻害する孔径を有し、好ましくは、前記１つ以上のマイクロキャリアの少なくとも一部分が磁性である、取り出して濾過することと、をさらに含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
前記第１の細胞または前記第２の細胞のうちの少なくとも一方が、Ｔ細胞またはＮＫ細胞、好ましくは支持されていないＴ細胞を含み、さらにより好ましくは、前記支持されていないＴ細胞が、可溶性四量体抗体複合体などの、Ｔ細胞活性化のための主シグナルおよび共シグナルを提供する抗体を前記バイオリアクターに加えることによって活性化される、請求項１０に記載の方法。
前記フィルター装置が、バックフラッシュモードで定期的に動作するか、または連続灌流のために構成される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
バイオリアクターでの使用に好適なフィルター装置であって、
バイオリアクターから流体を濾過するための中空管状部材であって、前記中空管状部材が、第１の開口部を画定する第１の端部と、第２の開口部を画定する対向する第２の端部と、を有する、中空管状部材と、
前記中空管状部材の前記第２の端部に位置するフィルター部材であって、前記フィルター部材が、前記第２の開口部を完全に取り囲んで密封し、前記フィルター部材が、内面および外面を画定し、前記フィルター部材が、多孔質材料を含み、前記多孔質材料が、約１ミクロン～約９ミクロンの絶対孔径を有する、フィルター部材と、を含む、フィルター装置。
前記フィルター部材が、多孔質メッシュを含むか、
前記多孔質材料が、約１ミクロン～約６ミクロンの絶対孔径を有するか、
前記フィルター部材が、焼結金属繊維から形成された不織布メッシュを含み、好ましくは、前記焼結金属繊維が、ステンレス鋼を含むか、または
前記フィルター部材の遠位端部が、閉じた非多孔質端部である、請求項１３に記載のフィルター装置。
前記フィルター部材が、前記中空管状部材の軸方向に沿った長さを有し、前記フィルター部材の前記長さが１インチ以上かつ約１２インチ以下であり、好ましくは、前記フィルター部材の前記長さが、２インチ以上かつ約８インチ以下である、請求項１３または１４に記載のフィルター装置。
前記フィルター部材の前記外面が、表面積を有し、前記表面積が、約０．５ｉｎ^２超であり、好ましくは、前記表面積が、約２ｉｎ^２超であり、かつ約１０ｉｎ^２未満である、請求項１３～１５のいずれか一項に記載のフィルター装置。
前記第２の開口部の断面積と前記フィルター部材の前記表面積との比が、約１：５～約１：２００、例えば、約１：１５～約１：１００である、請求項１３～１６のいずれか一項に記載のフィルター装置。
前記中空管状部材が、
ステンレス鋼もしくは熱可塑性ポリマーからなり、好ましくは、前記フィルター部材が、ポリマーメッシュもしくは不織布を含み、さらにより好ましくは、前記ポリマーメッシュもしくは不織布が、ポリアミドもしくはポリオレフィンを含み、または
約０．２インチ～約０．７インチの直径を有する、請求項１３～１７のいずれか一項に記載のフィルター装置。
前記フィルター部材の前記内面が、絶対孔径を有し、前記フィルター部材の前記外面が、絶対孔径を有し、前記内面の前記絶対孔径が、前記外面の前記絶対孔径よりも大きく、前記外面の前記絶対孔径が、約１ミクロン～約９ミクロンであり、好ましくは、前記フィルター部材の前記内面の前記絶対孔径が、約５ミクロン～約２０ミクロンである、請求項１３～１８のいずれか一項に記載のフィルター装置。
前記中空管状部材が、第１のストレートセクションと、第２のストレートセクションと、前記第１のストレートセクションと前記第２のストレートセクションとの間に配置された角度付きセクションとを含み、前記角度付きセクションが、回転するインペラに接触することなく、前記第２の開口部およびフィルター部材をバイオリアクター内の位置に位置する、請求項１３～１９のいずれか一項に記載のフィルター装置。
前記中空管状部材が、前記第２の端部に隣接して位置する角度部材を含み、前記中空管状部材が、前記角度部材に遷移するストレートセクションを含み、前記角度部材が、約５０°～約９０°の前記ストレートセクションに対する角度にある、請求項１３に記載のフィルター装置。
前記中空管状部材および前記フィルター部材が、折りたたみ式ベローズ内に移動可能に密封され、前記折りたたみ式ベローズが、前記バイオリアクターの一致する無菌接続ポートに接続するための一方の端部上の無菌接続ポートを含む、請求項１３に記載のフィルター装置。
前記フィルター部材が、バイオリアクターの側壁または底壁にメッシュパッチを含み、前記フィルター部材が、前記メッシュパッチを前記中空管状部材に接続する円錐をさらに含む、請求項１３に記載のフィルター装置。
細胞増殖を培養するための方法であって、
生物学的細胞をバイオリアクターに播種することであって、前記バイオリアクターが細胞成長のための流体培地を含有する、播種することと、
請求項１３～２３のいずれか一項に記載のフィルター装置を前記バイオリアクターに挿入することによって、前記バイオリアクターに含有される前記流体培地を灌流することと、
細胞増殖を促進するために、前記バイオリアクター内で前記流体培地を補充することと、を含む、方法。