JPWO2020206330A5 - - Google Patents

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年４月５日に出願された米国仮特許出願第６２／８３０，１３０号の出願日の優先権を主張し、その出願の開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、その全容を参照によって本明細書に援用する配列表を含む。ＡＳＣＩＩコピーは、２０２０年７月９日に作成され、ＴＮＯ－００１６－ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔの名前が付けられており、そのサイズは１２１，３１０バイトである。

多価人工抗体を産生するための様々な方法が、２つ以上の抗体の可変ドメインを組換え的に融合することによって開発されてきた。いくつかの実施形態では、ポリペプチド上の第１及び第２の抗原結合ドメインを、ポリペプチドリンカーによって接続する。そのようなポリペプチドリンカーの１つの非限定的な例は、４つのグリシン残基とそれに続く１つのセリン残基のアミノ酸配列を有するＧＳリンカーであり、ＧＳリンカー中でこの配列はｎ回繰り返され、ｎは、１～約１０の範囲の整数、例えば、２、３、４、５、６、７、８、または９である（配列番号９４）。そのようなリンカーの非限定的な例として、ＧＧＧＧＳ（配列番号７３）（ｎ＝１）及びＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７４（ｎ＝２）が挙げられる。他の適切なリンカーも使用することができ、例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２０１３ Ｏｃｔｏｂｅｒ １５；６５（１０）：１３５７－６９に記載されており、その開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。

本発明の抗ＰＳＭＡ抗体のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、以下の構造式に包含され得、式中、Ｘは、可変アミノ酸を示しており、これは、以下に示すように特定のアミノ酸であり得る。
ＣＤＲ１
ＧＦＸ_１ＦＸ_２Ｘ_３ＹＧ（配列番号７０）
式中、Ｘ_１は、ＳまたはＩまたはＴであり、
Ｘ_２は、ＳまたはＴまたはＲまたはＩであり、及び
Ｘ_３は、ＲまたはＳであり、ならびに
ＣＤＲ２
ＩＸ_４ＹＤＧＳＮＸ_５（配列番号７１）
式中、Ｘ_４はＷまたはＳであり、及び
Ｘ_５は、ＲまたはＫであり、ならびに
ＣＤＲ３
ＡＲＥＰＲＸ_６ＧＹＹＹＸ_７Ｘ_８ＳＧＹＸ_９ＳＬＤＹ（配列番号７２）
式中、Ｘ_６は、ＩまたはＶであり、
Ｘ_７は、ＥまたはＤであり、
Ｘ_８は、ＳまたはＴであり、及び
Ｘ _９ は、ＹまたはＤである。

実施例３：バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）による組換えタンパク質の結合
バイオレイヤー干渉法を使用して、クローンＩＤ３４５４９７とクローンＩＤ３４６１８１がメンバーである２つの抗体ファミリー間の結合競合を評価した。抗原－抗体エピトープビニング分析を、Ｏｃｔｅｔ ＱＫ－３８４（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）で実施した。簡潔に述べると、抗ペンタＨＩＳ捕捉（ＨＩＳ１Ｋ）センサー（配列番号９５として開示された「ペンタＨＩＳ」）を使用して、抗原－組換えヒトＰＳＭＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ カタログ番号：４２３４－ＺＮ）を１２０秒間固定化した。ベースラインの読み取り後、抗体１（３２５８６７）を含有する溶液にセンサーを３００秒間浸し、別のベースラインを６０秒間設定した。次いで、センサーを、ブロッキングの陽性対照としての抗体１か、または抗体２（３２５９２０）のいずれかを含有するウェルに浸した。結合速度及び解離速度を、それぞれ３００秒間及び６００秒間測定した。Ｏｃｔｅｔ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ＨＴ ｖ１１．０（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用してデータ分析を実施した。図３に示すように、３２５９２０は、３２５８６７抗体と事前に結合させたＰＳＭＡタンパク質に結合したが、このことは、これら２つの抗体がＰＳＭＡ上の重複しないエピトープを認識することを示している。結合シグナルのシフトはナノメートルで報告している。

Claims (32)

1. 三本鎖抗体様分子であって：
   （ａ）（ｉ）式ＧＧＳＩＳＳＸ _１ Ｘ _２ ＹＸ _３ （配列番号６７）のＣＤＲ１配列であって：
   式中、Ｘ _１ が、ＳまたはＮであり、Ｘ _２ が、ＳまたはＮであり、及びＸ _３ が、ＹまたはＦである、ＣＤＲ１配列；ならびに
   式Ｘ _４ Ｘ _５ Ｘ _６ ＳＧＸ _７ Ｔ（配列番号６８）のＣＤＲ２配列であって：
   式中、Ｘ _４ が、ＩまたはＶであり、Ｘ _５ が、ＤまたはＹであり、Ｘ _６ が、ＹまたはＤであり、及びＸ _７ が、ＹまたはＳである、ＣＤＲ２配列；ならびに
   配列番号１８のＣＤＲ３配列；
   を含む、ＰＳＭＡ結合重鎖可変領域、及び／または
   （ｉｉ）式ＧＦＸ _１ ＦＸ _２ Ｘ _３ ＹＧ（配列番号７０）のＣＤＲ１配列であって：
   式中、Ｘ _１ が、Ｓ、ＩまたはＴであり、Ｘ _２ が、Ｓ、Ｔ、ＲまたはＩであり、及びＸ _３ が、ＲまたはＳである、ＣＤＲ１配列；ならびに
   式ＩＸ _４ ＹＤＧＳＮＸ _５ （配列番号７１）のＣＤＲ２配列であって：
   式中、Ｘ _４ が、ＷまたはＳであり、及びＸ _５ が、ＲまたはＫである、ＣＤＲ２配列；ならびに
   式ＡＲＥＰＲＸ _６ ＧＹＹＹＸ _７ Ｘ _８ ＳＧＹＸ _９ ＳＬＤＹ（配列番号７２）のＣＤＲ３配列であって：
   式中、Ｘ _６ が、ＩまたはＶであり、Ｘ _７ が、ＥまたはＤであり、Ｘ _８ が、ＳまたはＴであり、及びＸ _９ が、ＹまたはＤである、ＣＤＲ３配列；
   を含む、ＰＳＭＡ結合重鎖可変領域
   ならびに
   （ｂ）軽鎖可変領域とペア形成するＣＤ３結合重鎖可変領域
   を含む、三本鎖抗体様分子。
2. ＣＤ３結合重鎖可変領域が、配列番号６５の重鎖可変領域配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含み、且つ
   軽鎖可変領域が、配列番号６６の軽鎖可変領域と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
3. ＣＤ３結合重鎖可変領域が、配列番号５９のＣＤＲ１配列、配列番号６０のＣＤＲ２配列、及び配列番号６１のＣＤＲ３配列を含み、且つ
   軽鎖可変領域が、配列番号６２のＣＤＲ１配列、配列番号６３のＣＤＲ２配列、及び配列番号６４のＣＤＲ３配列を含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
4. ＰＳＭＡ結合重鎖可変領域が、
   式ＧＧＳＩＳＳＸ _１ Ｘ _２ ＹＸ _３ （配列番号６７）のＣＤＲ１配列であって：
   式中、Ｘ _１ が、ＳまたはＮであり、Ｘ _２ が、ＳまたはＮであり、及びＸ _３ が、ＹまたはＦである、ＣＤＲ１配列；ならびに
   式Ｘ _４ Ｘ _５ Ｘ _６ ＳＧＸ _７ Ｔ（配列番号６８）のＣＤＲ２配列であって：
   式中、Ｘ _４ が、ＩまたはＶであり、Ｘ _５ が、ＤまたはＹであり、Ｘ _６ が、ＹまたはＤであり、及びＸ _７ が、ＹまたはＳである、ＣＤＲ２配列；ならびに
   配列番号１８のＣＤＲ３配列；
   を含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
5. ＰＳＭＡ結合重鎖可変領域が、
   式ＧＦＸ _１ ＦＸ _２ Ｘ _３ ＹＧ（配列番号７０）のＣＤＲ１配列であって：
   式中、Ｘ _１ が、Ｓ、ＩまたはＴであり、Ｘ _２ が、Ｓ、Ｔ、ＲまたはＩであり、及びＸ _３ が、ＲまたはＳである、ＣＤＲ１配列；ならびに
   式ＩＸ _４ ＹＤＧＳＮＸ _５ （配列番号７１）のＣＤＲ２配列であって：
   式中、Ｘ _４ が、ＷまたはＳであり、及びＸ _５ が、ＲまたはＫである、ＣＤＲ２配列；ならびに
   式ＡＲＥＰＲＸ _６ ＧＹＹＹＸ _７ Ｘ _８ ＳＧＹＸ _９ ＳＬＤＹ（配列番号７２）のＣＤＲ３配列であって：
   式中、Ｘ _６ が、ＩまたはＶであり、Ｘ _７ が、ＥまたはＤであり、Ｘ _８ が、ＳまたはＴであり、及びＸ _９ が、ＹまたはＤである、ＣＤＲ３配列；
   を含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
6. ＰＳＭＡ結合重鎖可変領域が、配列番号１～３のいずれか１つのＣＤＲ１配列、配列番号１１～１３のいずれか１つのＣＤＲ２配列、及び配列番号１８のＣＤＲ３配列を含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
7. ＰＳＭＡ結合重鎖可変領域が、配列番号４～１０のいずれか１つのＣＤＲ１配列、配列番号１４～１７のいずれか１つのＣＤＲ２配列、及び配列番号１９～２３のいずれか１つのＣＤＲ３配列を含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
8. ＰＳＭＡ結合重鎖可変領域が、
   配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１１のＣＤＲ２配列、及び配列番号１８のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号１８のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号２のＣＤＲ１配列、配列番号１１のＣＤＲ２配列、及び配列番号１８のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号３のＣＤＲ１配列、配列番号１３のＣＤＲ２配列、及び配列番号１８のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号４のＣＤＲ１配列、配列番号１４のＣＤＲ２配列、及び配列番号１９のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号４のＣＤＲ１配列、配列番号１４のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号４のＣＤＲ１配列、配列番号１４のＣＤＲ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号４のＣＤＲ１配列、配列番号１６のＣＤＲ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号５のＣＤＲ１配列、配列番号１４のＣＤＲ２配列、及び配列番号１９のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号５のＣＤＲ１配列、配列番号１４のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号５のＣＤＲ１配列、配列番号１５のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号５のＣＤＲ１配列、配列番号１５のＣＤＲ２配列、及び配列番号２２のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号５のＣＤＲ１配列、配列番号１７のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号６のＣＤＲ１配列、配列番号１４のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号６のＣＤＲ１配列、配列番号１４のＣＤＲ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号７のＣＤＲ１配列、配列番号１４のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号７のＣＤＲ１配列、配列番号１５のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号７のＣＤＲ１配列、配列番号１６のＣＤＲ２配列、及び配列番号２１のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号７のＣＤＲ１配列、配列番号１６のＣＤＲ２配列、及び配列番号２３のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号８のＣＤＲ１配列、配列番号１５のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号９のＣＤＲ１配列、配列番号１５のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列を含む；または
   配列番号１０のＣＤＲ１配列、配列番号１５のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列を含む
   請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
9. ＰＳＭＡ結合重鎖可変領域が、配列番号２のＣＤＲ１配列、配列番号１１のＣＤＲ２配列、及び配列番号１８のＣＤＲ３配列を含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
10. ＰＳＭＡ結合重鎖可変領域が、配列番号７のＣＤＲ１配列、配列番号１５のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列を含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
11. ＰＳＭＡ結合重鎖可変領域が、配列番号２４～５８の配列のいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列を含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
12. ＰＳＭＡ結合重鎖可変領域が、配列番号２４～５８からなる群から選択される重鎖可変領域配列を含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
13. ＰＳＭＡ結合重鎖可変領域が、配列番号２４～２８からなる群から選択される重鎖可変領域配列を含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
14. ＰＳＭＡ結合重鎖可変領域が、配列番号２９～５８からなる群から選択される重鎖可変領域配列を含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
15. ＰＳＭＡ結合重鎖可変領域が、配列番号２５の重鎖可変領域配列を含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
16. ＰＳＭＡ結合重鎖可変領域が、配列番号３８の重鎖可変領域配列を含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
17. ＣＤ３結合重鎖可変領域が、配列番号６５の重鎖可変領域配列を含み、且つ軽鎖可変領域が、配列番号６６の軽鎖可変領域配列を含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
18. ＣＤ３結合重鎖可変領域が、配列番号６５の重鎖可変領域配列を含み；且つ
    軽鎖可変領域が、配列番号６６の軽鎖可変領域配列を含み；且つ
    ＰＳＭＡ結合重鎖可変領域が、配列番号２５の重鎖可変領域配列を含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
19. Ｆｃバリアントを含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
20. Ｆｃバリアントを含む、請求項１８に記載の三本鎖抗体様分子。
21. サイレンシングされたＦｃを含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
22. サイレンシングされたＦｃを含む、請求項１８に記載の三本鎖抗体様分子。
23. 配列番号８６を含む第１のポリペプチド；
    配列番号８７を含む第２のポリペプチド；及び
    配列番号８８、８９、９０、９１、９２または９３を含む第３のポリペプチドを含む、請求項１に記載の三本鎖抗体様分子。
24. 前記第３のポリペプチドが、配列番号８８を含む、請求項２３に記載の三本鎖抗体様分子。
25. 請求項１～２４のいずれか一項に記載の三本鎖抗体様分子、及び薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
26. ＰＳＭＡの発現を特徴とする障害の治療における使用のための医薬組成物であって、請求項１～２４のいずれか一項に記載の三本鎖抗体様分子を含む、医薬組成物。
27. 前記障害が前立腺癌である、請求項２６に記載の使用のため医薬組成物。
28. 前記障害が固形腫瘍である、請求項２６に記載の使用のため医薬組成物。
29. 請求項１～２４のいずれか一項に記載の三本鎖抗体様分子をコードするポリヌクレオチド。
30. 請求項２９に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
31. 請求項３０に記載のベクターを含む細胞。
32. 請求項３１に記載の細胞を、前記三本鎖抗体様分子の発現を許容する条件下で増殖させ、前記細胞から前記三本鎖抗体様分子を単離することを含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の三本鎖抗体様分子の産生方法。