JPWO2020169577A5

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Publication number: JPWO2020169577A5
Application number: JP2021548232A
Authority: JP
Publication date: 2023-02-27

Claims

対応する野生型ヒトジアミンオキシダーゼ（ＤＡＯ）と比べて低下したグリコサミノグリカン結合親和性を有する組換えヒトＤＡＯであって、前記ＤＡＯが、配列番号１のナンバリングに関して、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合ドメインの５６８～５７５位の任意の１つのアミノ酸の少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む組換えヒトジアミンオキシダーゼ（ＤＡＯ）。
さらに、配列番号１のナンバリングに関してアミノ酸１２３位の溶媒露出システイン（ｃｙｓ１２３）の少なくとも１つの修飾を含み、特に前記システインの修飾が、アミノ酸の置換、欠失または化学的部分とのカップリングであり、より特にｃｙｓ１２３がアラニンによって置換されている、請求項１に記載の組換えＤＡＯ。
ＧＡＧ結合ドメインが、ヘパリン／ヘパラン硫酸結合ドメインである、請求項１または２に記載の組換えＤＡＯ。
ＧＡＧ結合ドメイン中の前記少なくとも１つのアミノ酸修飾が、アミノ酸の置換、欠失、挿入または化学的部分とのカップリングである、請求項１～３のいずれか一項に記載の組換えＤＡＯ。
ＧＡＧ結合ドメイン中に２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つまたは８つのアミノ酸置換を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の組換えＤＡＯ。
アミノ酸配列Ｘ１ＦＸ２Ｘ３Ｘ４ＬＰＸ５のＧＡＧ結合ドメインを含み、式中、
Ｘ１が、任意のアミノ酸であり得て、特にＡまたはＳ、より特にＳであり、
Ｘ２が、任意のアミノ酸であり得て、特にＫであり、
Ｘ３が、任意のアミノ酸であり得て、特にＡまたはＴ、より特にＴであり、
Ｘ４が、任意のアミノ酸であり得て、特にＫであり、
Ｘ５が、任意のアミノ酸であり得て、特にＫまたはＴ、より特にＴである、
請求項１～５のいずれか一項に記載の組換えＤＡＯ。
ＳＦＫＡＫＬＰＫ（配列番号３３）、ＡＦＫＡＫＬＰＴ（配列番号３４）、ＡＦＫＴＫＬＰＫ（配列番号３５）、ＳＦＫＴＫＬＰＫ（配列番号３６）、ＡＦＫＴＫＬＰＴ（配列番号３７）、ＳＦＫＡＫＬＰＫ（配列番号３８）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の組換えＤＡＯ。
さらに、配列番号１に関して１６８位でアミノ酸置換を含む、特にＡｓｎがＧｌｎで置換されている、請求項１～７のいずれか一項に記載の組換えＤＡＯ。
野生型ＤＡＯと比べて延長された血漿内半減期を有し、特に前記半減期が、野生型ＤＡＯと比べて少なくとも１．５倍、特に少なくとも２倍長い、請求項１～８のいずれか一項に記載の組換えＤＡＯ。
野生型ＤＡＯと比べて少なくとも１０倍に増大したＡＵＣを有する、請求項１～９のいずれか一項に記載の組換えＤＡＯ。
内皮細胞による内在化が、野生型ＤＡＯと比べて少なくとも１０％、２５％、５０％、６０％、７０％、８０％、特に９０％低下している、請求項１～１０のいずれか一項に記載の組換えＤＡＯ。
ＧＡＧ結合親和性が、特にヘパリン／ヘパラン硫酸結合親和性が、野生型ＤＡＯと比べて少なくとも１０％、２５％、５０％、６０％、７０％、８０％、特に９０％低下している、請求項１～１１のいずれか一項に記載の組換えＤＡＯ。
配列番号２～１６のいずれか一つのアミノ酸配列を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の組換えＤＡＯ。
請求項１～１２のいずれか一項に記載の組換えＤＡＯとヒトＩｇＧのＦｃドメインまたはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）とを含む融合ポリペプチドであって、組換えＤＡＯの機能活性を保持する融合ポリペプチド。
請求項１～１３のいずれか一項に記載のＤＡＯをコードする、特に配列番号１７～３２のいずれか一つの配列を含む、単離されたヌクレオチド配列。
請求項１５に記載のヌクレオチド配列を含む組換えベクターであって、特に、細菌、酵母、バキュロウイルス、植物または哺乳類の発現ベクターである組換えベクター。
調節エレメントに作動可能に連結された、請求項１５に記載のヌクレオチド配列を含む発現カセット。
請求項１～１３のいずれか一項に記載の組換えＤＡＯを含む組換え宿主細胞または宿主細胞株であって、宿主細胞が、ＣＨＯ細胞、ベロ細胞、ＭＤＣＫ細胞、ピキア酵母（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）細胞、ＳＦ９細胞からなる群から選択される組換え宿主細胞または宿主細胞株。
請求項１６に記載のベクターまたは請求項１７に記載の発現カセットおよび請求項１８に記載の宿主細胞または宿主細胞株を含む発現系。
請求項１～１２のいずれか一項に記載の組換えＤＡＯの産生方法であって、
ｉ．請求項１～１３のいずれか一項に記載のＤＡＯをコードするヌクレオチド配列を発現ベクターにクローニングする工程と、
ｉｉ．前記ベクターを用いて宿主細胞を形質転換する工程と、
ｉｉｉ．ＤＡＯが発現される条件下において、形質転換された宿主細胞を培養する工程と、
ｉｖ．場合により宿主細胞の破砕により、宿主細胞培養からＤＡＯを単離する工程と、および場合により
ｖ．ＤＡＯを精製する工程
を含む産生方法。
請求項１～１３のいずれか一項に記載の組換えＤＡＯおよび場合により１つ以上の賦形剤を含む医薬組成物。
請求項２１記載の医薬組成物であって、過剰ヒスタミンと関連する状態の治療用であり、特に慢性アレルギー疾患の治療用、より特にアナフィラキシー、アナフィラキシーショック、慢性蕁麻疹、急性蕁麻疹、喘息、花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、ヒスタミン中毒、頭痛、アトピー性皮膚炎、炎症性疾患、肥満細胞症、肥満細胞活性化症候群（ＭＣＡＳ）、子癇前症、妊娠悪阻、早期分娩、消化性潰瘍、呑酸、掻痒症、または敗血症の治療用である、前記医薬組成物。
過剰ヒスタミンと関連する状態の治療用、特に慢性アレルギー疾患の治療用、より特にアナフィラキシー、アナフィラキシーショック、慢性蕁麻疹、急性蕁麻疹、喘息、花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、ヒスタミン中毒、頭痛、アトピー性皮膚炎、炎症性疾患、肥満細胞症、消化性潰瘍、呑酸、掻痒症、または敗血症の治療用の医薬品を製造するための、請求項１～１３のいずれか一項に記載の組換えＤＡＯの使用。
ＤＡＯのＧＡＧ結合ドメインに、特に、配列番号１のナンバリングに関して５６８～５７５位のアミノ酸の１つ以上に特異的に結合する標的特異的リガンド。
ＤＡＯのヘパリン結合を調節する化合物の同定方法であって、
（ａ）配列番号１のＤＡＯ配列のアミノ酸の構造座標によって定義されるＧＡＧ結合ドメインのコンピュータモデルを構築する工程と、
（ｂ）（ｉ）前記化合物への分子断片のアセンブリング、
（ｉｉ）小分子データベースからの化合物の選択、および
（ｉｉｉ）前記化合物のｄｅｎｏｖｏリガンド設計
からなる群から選択される方法によって、潜在的調節化合物を選択する工程と、
（ｃ）ヘパリン結合ドメイン中での前記化合物のエネルギー最小化配置を供給するために、前記化合物のコンピュータモデルとＧＡＧ結合ドメインのコンピュータモデルとの間のフィッティングプログラム操作を行う計算手段を使用する工程と、
（ｄ）前記化合物とヘパリン／ヘパラン硫酸結合ドメインとの間の会合を定量するために前記フィッティング操作の結果を評価して、前記化合物の、前記ヘパリン結合ドメインとの会合能力を評価する工程
を含む同定方法。