JPWO2020034043A5

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Publication number: JPWO2020034043A5
Application number: JP2021532503A
Authority: JP
Publication date: 2022-08-23

Claims

ドナー臓器からＡ抗原を酵素的に切断するための灌流流体であって、前記灌流流体は、
（ａ）精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質と、
（ｂ）精製ガラクトサミニダーゼタンパク質と、
を含む、灌流流体。
（ａ）ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼは、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号１７、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、および配列番号３５から選択される１つ以上の精製タンパク質であり、
（ｂ）ガラクトサミニダーゼは、配列番号７、配列番号９、配列番号１０、配列番号１９、配列番号２１、配列番号３６、および配列番号３７から選択される１つ以上の精製タンパク質である、請求項１に記載の灌流流体。
請求項１に記載の灌流流体であって、前記灌流流体は、配列番号２、４、５、１７、２３、２９、３１、および３２～３５のうちの１つの配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列から本質的になるＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ活性を有する精製酵素と、配列番号７、９、１０、１９、２１、３６および３７のうちの１つの配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列から本質的になるガラクトサミニダーゼ活性を有する精製酵素とを含む、灌流流体。
請求項１または２に記載の灌流流体であって、前記灌流流体は、
（ａ）配列番号２、配列番号４および配列番号５の精製フラボニフラクター・プラウティＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質から選択される１つ以上の前記精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質と、
（ｂ）配列番号７、配列番号９および配列番号１０の精製フラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼタンパク質から選択される１つ以上の前記精製ガラクトサミニダーゼタンパク質と、
を含む、灌流流体。
請求項１または２に記載の灌流流体であって、前記灌流流体は、
（ａ）配列番号１７または配列番号３２の精製クロストリジウム・テルチウムＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質から選択される１つ以上の前記精製ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質と、
（ｂ）配列番号１９または配列番号３６の精製クロストリジウム・テルチウムガラクトサミニダーゼタンパク質から選択される１つ以上の前記精製ガラクトサミニダーゼタンパク質と
を含む、灌流流体。
前記灌流流体が、下記（i）～(iii)
（i）１μｇ／ｍｌ以下の濃度でＡ抗原を切断することができる、
(ii) ６．５と７．５との間のｐＨでＡ抗原切断活性を有する、
(iii) ４℃と３７℃との間の温度でＡ抗原切断活性を有する、
の少なくとも１つを満たす、請求項１～５のいずれか１つに記載の灌流流体。
前記灌流流体が、Ｓｔｅｅｎ（商標）、Ｐｅｒｆａｄｅｘ（商標）、ＰｅｒｆａｄｅｘＰｌｕｓ（商標）、ＥｕｒｏＣｏｌｌｉｎｓ溶液、ヒスチジン－トリプトファン－ケトグルタル酸（ＨＴＫ）溶液、ウィスコンシン大学溶液（ＵＷ）、Ｃｅｌｓｉｏｒ溶液、腎臓灌流溶液（ＫＰＳ－１）、京都大学溶液、ＩＧＬ－１溶液、およびクエン酸塩溶液から選択される、緩衝細胞外溶液をさらに含む、請求項１～６のいずれか１つに記載の灌流流体。
ドナー臓器からｅｘｖｉｖｏでＡ抗原を酵素的に切断する方法であって、
（ａ）Ａ型抗原を提示するドナー臓器を、ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質およびガラクトサミニダーゼタンパク質を含む流体で、酵素がドナー臓器からＡ型抗原の切断を可能にするのに十分な時間灌流する工程、または、
（ｂ）Ａ型抗原を提示するドナー臓器を、ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質およびガラクトサミニダーゼタンパク質を含む流体と、酵素がドナー臓器からＡ抗原の切断を可能にするのに十分な時間インキュベートする工程を含む、方法。
前記ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼが、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号１７、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、および配列番号３５から選択される１つ以上の精製タンパク質であり、前記ガラクトサミニダーゼが、配列番号７、配列番号９、配列番号１０、配列番号１９、配列番号２１、配列番号３６、および配列番号３７から選択される１つ以上の精製タンパク質である、請求項８に記載の方法。
前記流体が、配列番号２、４、５、１７、２３、２９、３１、および３２～３５のうちの１つの配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列から本質的になるＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ活性を有する精製酵素と、配列番号７、９、１０、１９、２１、３６および３７のうちの１つの配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列から本質的になるガラクトサミニダーゼ活性を有する精製酵素とを含む、請求項8に記載の方法。
前記ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼが配列番号４または配列番号５の精製フラボニフラクター・プラウティＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質であり、前記ガラクトサミニダーゼが配列番号９または配列番号１０の精製フラボニフラクター・プラウティガラクトサミニダーゼタンパク質である、請求項８に記載の方法。
前記ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質および前記ガラクトサミニダーゼタンパク質が、Ｓｔｅｅｎ（商標）、Ｐｅｒｆａｄｅｘ（商標）、ＰｅｒｆａｄｅｘＰｌｕｓ（商標）、ＥｕｒｏＣｏｌｌｉｎｓ溶液、ヒスチジン－トリプトファン－ケトグルタル酸（ＨＴＫ）溶液、ウィスコンシン大学溶液（ＵＷ）、Ｃｅｌｓｉｏｒ溶液、腎臓灌流溶液（ＫＰＳ－１）、京都大学溶液、ＩＧＬ－１溶液、およびクエン酸塩溶液から選択される、緩衝細胞外溶液中に存在する、請求項８～１１のいずれか１つに記載の方法。
前記ドナー臓器が固形臓器である、請求項８～１２のいずれか１つに記載の方法。
前記固形臓器が、肺、腎臓、肝臓、心臓、膵臓、および腸から選択される、請求項１３に記載の方法。
前記固形臓器が肺であり、
前記ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質および前記ガラクトサミニダーゼタンパク質は、ｅｘｖｉｖｏで前記肺を含む緩衝細胞外溶液と混合され、前記肺を通って循環され、それによって、前記ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼタンパク質および前記ガラクトサミニダーゼタンパク質は、前記肺の血管系からＡ抗原を実質的に除去するのに十分な時間、前記肺の血管系と接触する、請求項１４に記載の方法。
前記肺の血管系からＡ抗原を除去する時間は、１時間以内である、請求項１５に記載の方法。
前記方法はさらに、前記ドナー臓器を洗浄して、ＧａｌＮＡｃデアセチラーゼ、ガラクトサミニダーゼおよび切断されたＡ抗原を除去する工程を含む、請求項８～１６のいずれか１つに記載の方法。
前記流体が、下記（i）～(iii)
（i）１μｇ／ｍｌ以下でＡ抗原を切断することができる
(ii) ６．５と７．５との間のｐＨでＡ抗原切断活性を有する、
（iii）４℃と３７℃との間の温度でＡ抗原切断活性を有する,
の少なくとも１つを満たす、請求項８～１７のいずれか１つに記載の方法。