JPWO2020027237A1 - ペプチド融合タンパク質 - Google Patents
ペプチド融合タンパク質 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2020027237A1 JPWO2020027237A1 JP2020534727A JP2020534727A JPWO2020027237A1 JP WO2020027237 A1 JPWO2020027237 A1 JP WO2020027237A1 JP 2020534727 A JP2020534727 A JP 2020534727A JP 2020534727 A JP2020534727 A JP 2020534727A JP WO2020027237 A1 JPWO2020027237 A1 JP WO2020027237A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- fusion protein
- amino acid
- residue
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 258
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 118
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 118
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 103
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 44
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims abstract description 31
- 101710167800 Capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 101710130420 Probable capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 101710204410 Scaffold protein Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 71
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 70
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 claims description 40
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 claims description 40
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 claims description 40
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 40
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 39
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 33
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 26
- 108091005957 yellow fluorescent proteins Proteins 0.000 claims description 23
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 20
- 108010021843 fluorescent protein 583 Proteins 0.000 claims description 15
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 14
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 6
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 108010054624 red fluorescent protein Proteins 0.000 claims description 4
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 claims description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 45
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 39
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 29
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 29
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 28
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 18
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 16
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 16
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 15
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 14
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 14
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 13
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 12
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 11
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 10
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 10
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 10
- 108091005946 superfolder green fluorescent proteins Proteins 0.000 description 9
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 8
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 8
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 7
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 7
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 7
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 6
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 6
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 6
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 5
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 5
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 5
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 5
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 5
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 5
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 5
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 4
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 4
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 4
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 4
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 4
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 3
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000009149 molecular binding Effects 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 3
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- GVJXGCIPWAVXJP-UHFFFAOYSA-N 2,5-dioxo-1-oxoniopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound ON1C(=O)CC(S(O)(=O)=O)C1=O GVJXGCIPWAVXJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 2
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 2
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 description 2
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 2
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 2
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-L glutamate group Chemical group N[C@@H](CCC(=O)[O-])C(=O)[O-] WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-L 0.000 description 2
- 239000007973 glycine-HCl buffer Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012052 hydrophilic carrier Substances 0.000 description 2
- 238000001597 immobilized metal affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 2
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010011170 Ala-Trp-Arg-His-Pro-Gln-Phe-Gly-Gly Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N Cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 101000867232 Escherichia coli Heat-stable enterotoxin II Proteins 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- XZWYTXMRWQJBGX-VXBMVYAYSA-N FLAG peptide Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XZWYTXMRWQJBGX-VXBMVYAYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 102220566687 GDNF family receptor alpha-1_F64L_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220566524 GDNF family receptor alpha-1_F99S_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220566706 GDNF family receptor alpha-1_S30R_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220566469 GDNF family receptor alpha-1_S65T_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220566479 GDNF family receptor alpha-1_S72A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220566708 GDNF family receptor alpha-1_Y39N_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220566451 GDNF family receptor alpha-1_Y66H_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220566455 GDNF family receptor alpha-1_Y66W_mutation Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical group ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229920002845 Poly(methacrylic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010028230 Trp-Ser- His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys Proteins 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- CWGJBBRZFIPXNZ-UHFFFAOYSA-N [C-]#N.Br Chemical compound [C-]#N.Br CWGJBBRZFIPXNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 125000004018 acid anhydride group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 1
- 238000012442 analytical experiment Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000013601 cosmid vector Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- GYZLOYUZLJXAJU-UHFFFAOYSA-N diglycidyl ether Chemical compound C1OC1COCC1CO1 GYZLOYUZLJXAJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000018459 dissociative disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000002977 intracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004898 n-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920000233 poly(alkylene oxides) Polymers 0.000 description 1
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 238000000164 protein isolation Methods 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 125000005372 silanol group Chemical group 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- RPENMORRBUTCPR-UHFFFAOYSA-M sodium;1-hydroxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].ON1C(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C1=O RPENMORRBUTCPR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical group O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 238000001105 surface plasmon resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 125000000101 thioether group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021241 α-lactalbumin Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
- C07K14/43595—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from coelenteratae, e.g. medusae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/60—Fusion polypeptide containing spectroscopic/fluorescent detection, e.g. green fluorescent protein [GFP]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
(1)1以上の特異的結合能を有するペプチドと足場タンパク質とを含むペプチド融合タンパク質であって、前記ペプチドが、直接又はペプチドリンカーを介して、前記足場タンパク質のアミノ酸配列中に挿入されているか、並びに/又は前記足場タンパク質のN末端及び/若しくはC末端に連結されている、前記ペプチド融合タンパク質。
(2)前記特異的結合能を有するペプチドが抗体結合性ペプチドである、(1)記載のペプチド融合タンパク質。
(3)前記抗体結合性ペプチドが、IgG結合性ペプチド、IgA結合性ペプチド及びIgY結合性ペプチドから成る群より選択される、(2)記載のペプチド融合タンパク質。
(4)前記IgG結合性ペプチドが環状構造を有するペプチドである、(3)記載のペプチド融合タンパク質。
(5)2以上の前記ペプチドを含む、(1)〜(4)のいずれか1記載のペプチド融合タンパク質。
(6)前記足場タンパク質がβバレル構造を有するタンパク質である、(1)〜(5)のいずれか1記載のペプチド融合タンパク質。
(7)前記βバレル構造を有するタンパク質が緑色蛍光タンパク質(GFP)、赤色蛍光タンパク質(DsRed)又はそれらの変異体である、(6)記載のペプチド融合タンパク質。
(8)前記GFP変異体がSuperfolder GFP又はSuperfolder黄色蛍光タンパク質(YFP)である、(7)記載のペプチド融合タンパク質。
(9)前記ペプチドリンカーが1以上のアミノ酸配列:GGGGS(配列番号35)を含む、(1)〜(8)のいずれか1記載のペプチド融合タンパク質。
(10)前記ペプチドリンカーが前記ペプチドのN末端及び/又はC末端に連結されている、(1)〜(9)のいずれか1記載のペプチド融合タンパク質。
(11)(1)〜(10)のいずれか1記載のペプチド融合タンパク質を固定化した固相担体。
(12)前記ペプチド融合タンパク質と固相の間にスペーサーを有する、(11)記載の固相担体。
(13)(11)又は(12)記載の固相担体を含む、標的分子分離用カラム。
(14)(1)〜(10)のいずれか1記載のペプチド融合タンパク質をコードする核酸を有する細胞を培養する工程を含む、ペプチド融合タンパク質の製造方法。
(15)前記細胞が大腸菌である、(14)記載の方法。
(X1-3)-C-(X2)-H-(Xaa1)-G-(Xaa2)-L-V-W-C-(X1-3) (I)
[式中、
Xの各々は独立的にシステイン以外の任意のアミノ酸残基であり、
Cはシステイン残基であり、
Hはヒスチジン残基であり、
Xaa1はアルギニン残基、リシン残基、ロイシン残基又はアスパラギン残基であり、
Gはグリシン残基であり、
Xaa2はグルタミン酸残基又はアスパラギン残基であり、
Lはロイシン残基であり、
Vはバリン残基であり、且つ
Wはトリプトファン残基である]
によって表される、13〜17アミノ酸残基から成るアミノ酸配列を含み、且つ該ペプチドの外側の2つのシステイン残基がジスルフィド結合を介して結合している、ペプチドである。
(X1-3)-C-(X1)-Y-H-(Xaa1)-G-N-L-V-W-C-(X1-3) (I')
[式中、
Xの各々は独立的にシステイン以外の任意のアミノ酸残基であり、
Cはシステイン残基であり、
Yはチロシン残基であり、
Hはヒスチジン残基であり、
Xaa1はアルギニン残基、リシン残基、ロイシン残基又はアスパラギン残基であり、
Gはグリシン残基であり、
Nはアスパラギン残基であり、
Lはロイシン残基であり、
Vはバリン残基であり、且つ
Wはトリプトファン残基である]
によって表される、13〜17アミノ酸残基から成るアミノ酸配列を含む。
(X1-3)-C-A-(X1)-H-(Xaa1)-G-E-L-V-W-C-(X1-3) (I'')
[式中、
Xの各々は独立的にシステイン以外の任意のアミノ酸残基であり、
Cはシステイン残基であり、
Aはアラニン残基であり、
Hはヒスチジン残基であり、
Xaa1はアルギニン残基、リシン残基、ロイシン残基又はアスパラギン残基であり、
Gはグリシン残基であり、
Eはグルタミン酸残基であり、
Lはロイシン残基であり、
Vはバリン残基であり、且つ
Wはトリプトファン残基である]
によって表される、13〜17アミノ酸残基から成るアミノ酸配列を含む。
(X1-3)-C-(Xaa3)-(Xaa4)-H-(Xaa1)-G-(Xaa2)-L-V-W-C-(X1-3) (II)
[式中、
Xの各々は独立的にシステイン以外の任意のアミノ酸残基であり、
Cはシステイン残基であり、
Hはヒスチジン残基であり、
Xaa1はアルギニン残基、リシン残基、ロイシン残基又はアスパラギン残基であり、
Gはグリシン残基であり、
Xaa2はグルタミン酸残基又はアスパラギン残基であり、
Lはロイシン残基であり、
Vはバリン残基であり、
Wはトリプトファン残基であり、
Xaa3はアラニン残基、セリン残基又はトレオニン残基であり、且つ
Xaa4はチロシン残基又はトリプトファン残基である]
によって表される、13〜17アミノ酸残基から成るアミノ酸配列を含む。
(X1-3)-C-A-Y-H-(Xaa1)-G-E-L-V-W-C-(X1-3) (III)
[式中、
Xの各々は独立的にシステイン以外の任意のアミノ酸残基であり、
Cはシステイン残基であり、
Aはアラニン残基であり、
Yはチロシン残基であり、
Hはヒスチジン残基であり、
Xaa1はアルギニン残基、リシン残基、ロイシン残基又はアスパラギン残基であり、
Gはグリシン残基であり、
Eはグルタミン酸残基であり、
Lはロイシン残基であり、
Vはバリン残基であり、且つ
Wはトリプトファン残基である]
によって表される、13〜17アミノ酸残基から成るアミノ酸配列を含む。
1番目のアミノ酸残基= S、G、F又は、無し、
2番目のアミノ酸残基= D、G、A、S、P、又は、無し、
3番目のアミノ酸残基= S、D、T、N、E又はR、
15番目のアミノ酸残基= S、T又はD、
16番目のアミノ酸残基= H、G、Y、T、N、D、F、又は、無し、
17番目のアミノ酸残基= Y、F、H、M又は、無し、
5番目のアミノ酸残基= A又はT、
6番目のアミノ酸残基= Y又はW。
D-C-(Xaa3)-(Xaa4)-H-(Xaa1)-G-(Xaa2)-L-V-W-C-T (IV)
[式中、
Dはアスパラギン酸残基であり、
Cはシステイン残基であり、
Hはヒスチジン残基であり、
Xaa1はアルギニン残基、リシン残基、ロイシン残基又はアスパラギン残基であり、
Gはグリシン残基であり、
Xaa2はグルタミン酸残基又はアスパラギン残基であり、
Lはロイシン残基であり、
Vはバリン残基であり、
Wはトリプトファン残基であり、
Tはトレオニン残基であり、
Xaa3はアラニン残基又はトレオニン残基であり、且つ、
Xaa4はチロシン残基又はトリプトファン残基である]
によって表される、13アミノ酸残基から成るアミノ酸配列を含む。
1)DCAYH(Xaa1)GELVWCT(配列番号1)、
2)GPDCAYH(Xaa1)GELVWCTFH(配列番号2)、
3)RCAYH(Xaa1)GELVWCS(配列番号3)、
4)GPRCAYH(Xaa1)GELVWCSFH(配列番号4)、
5)SPDCAYH(Xaa1)GELVWCTFH(配列番号5)、
6)GDDCAYH(Xaa1)GELVWCTFH(配列番号6)、
7)GPSCAYH(Xaa1)GELVWCTFH(配列番号7)、
8)GPDCAYH(Xaa1)GELVWCSFH(配列番号8)、
9)GPDCAYH(Xaa1)GELVWCTHH(配列番号9)、
10)GPDCAYH(Xaa1)GELVWCTFY(配列番号10)、
11)SPDCAYH(Xaa1)GELVWCTFY(配列番号11)、
12)SDDCAYH(Xaa1)GELVWCTFY(配列番号12)、
13)RGNCAYH(Xaa1)GQLVWCTYH(配列番号13)、
14)DCTYH(Xaa1)GNLVWCT(配列番号14)、
15)DCAYH(Xaa1)GNLVWCT(配列番号15)、
16)DCTYH(Xaa1)GELVWCT(配列番号16)、及び
17)DCAWH(Xaa1)GELVWCT(配列番号17)
(式中、Xaa1はアルギニン残基、リシン残基、ロイシン残基又はアスパラギン残基である)。
1)DCAYH(Xaa1)GELVWCT(配列番号1、但し、Xaa1はR)、
2)GPDCAYH(Xaa1)GELVWCTFH(配列番号2、但し、Xaa1はR、L又はK)、及び
4)GPRCAYH(Xaa1)GELVWCSFH(配列番号4、但し、Xaa1はR)、
が挙げられ、特に好ましい例として、GPDCAYHRGELVWCTFH(配列番号18)が挙げられる。
D-C-(Xaa2)-(Xaa3)-(Xaa4)-(Xaa1)-G-(Xaa5)-L-(Xaa6)-W-C-T (V)
[式中、
Dはアスパラギン酸残基であり、
Cはシステイン残基であり、
Gはグリシン残基であり、
Lはロイシン残基であり、
Wはトリプトファン残基であり、
Tはトレオニン残基であり、
Xaa1はアルギニン残基、リシン残基、ロイシン残基又はアスパラギン残基であり、
Xaa2はアラニン残基、セリン残基又はトレオニン残基であり、
Xaa3はトリプトファン残基又はチロシン残基であり、
Xaa4はヒスチジン残基、アルギニン残基、セリン残基又はトレオニン残基であり、
Xaa5はグルタミン酸残基、アスパラギン残基、アルギニン残基、又はアスパラギン酸残基であり、且つ
Xaa6はイソロイシン残基又はバリン残基である]
によって表される、13アミノ酸残基から成るアミノ酸配列を含み、且つ該ペプチドの外側の2つのシステイン残基がジスルフィド結合を介して結合している、ペプチドである。
18)DCTYT(Xaa1)GNLVWCT(配列番号19)、
19)DCAYT(Xaa1)GNLVWCT(配列番号20)、
20)DCSYT(Xaa1)GNLVWCT(配列番号21)、
21)DCTWT(Xaa1)GNLVWCT(配列番号22)、
22)DCTYH(Xaa1)GNLVWCT(配列番号23)、
23)DCTYR(Xaa1)GNLVWCT(配列番号24)、
24)DCTYS(Xaa1)GNLVWCT(配列番号25)、
25)DCTYT(Xaa1)GNLVWCT(配列番号26)、
26)DCTYT(Xaa1)GELVWCT(配列番号27)、
27)DCTYT(Xaa1)GRLVWCT(配列番号28)、
28)DCTYT(Xaa1)GDLVWCT(配列番号29)、及び
29)DCTYT(Xaa1)GNLIWCT(配列番号30)
(式中、Xaa1はアルギニン残基、リシン残基、ロイシン残基、又はアスパラギン残基である)。
配列番号62:ヒト血清アルブミン(HSA);
配列番号63:IgG;
配列番号64:組織型プラスミノーゲンアクチベーター(t-PA);
配列番号65:抗GM-CSF Mab;
配列番号66:ヒト前立腺特異抗体(PSA);
配列番号67:ヒートショックオーガナイジングタンパク質(Heat shock organizing protein);
配列番号68:フィブリノーゲン;
配列番号69:IgG;
配列番号70:IgG;
配列番号71:IgG;
配列番号72:α-アミラーゼ;
配列番号73:α-ラクトアルブミン;
配列番号74:ブドウ球菌エンテロトキシンB(SEB);
配列番号75:フォン・ヴィレブランド因子(vWF);
配列番号76:IgG;
配列番号77:IgG;
配列番号78:IgG;
配列番号79:IgG;
配列番号80:マウスIgG;
配列番号81:IgG-Fc(ヒトIgG-Fc)。
配列番号43で表されるアミノ酸配列から成るタンパク質(sfGFP-C-1Opt1)をコードするDNA(配列番号42)をpET17bベクターのNdeI/HindIIIサイトに挿入し、発現プラスミドを構築した。
比較例1として、IgG結合ペプチドが融合していない足場タンパク質(Hisタグを有するsfGFP;DNA配列:配列番号40、アミノ酸配列:配列番号41)を実施例1と同様の方法で発現・精製し、親和性の測定を行った。
IgG結合ペプチドを2つ含む、それぞれ配列番号45、配列番号47、配列番号49で表されるアミノ酸配列から成るタンパク質(sfGFP-N C-2Opt1GSl2(DNA配列:配列番号44)、sfGFP-173 C-2Opt1GSl2(DNA配列:配列番号46)、sfGFP-173 C-2Opt1GSl3(DNA配列:配列番号48))を実施例1と同様の方法で発現・精製し、親和性の測定を行った。
比較例2として、化学合成によって作製されたペプチド(アミノ酸配列:配列番号18)の親和性測定を実施例1と同様の方法で実施した。
IgG結合性ペプチド2価融合タンパク質が、ヒト抗体精製アフィニティーリガンドとして利用可能か、実施例2で作製したタンパク質(sfGFP-173 C-2Opt1GSl2)をNHS活性化プレパックカラム(GE Healthcare)に固定化し、吸着性能評価を実施した。タンパク質固定化カラムは以下の方法で作製した。なお、溶液の送液にはシリンジを用いた。
比較例3として、化学合成によって作製されたペプチド(アミノ酸配列:配列番号18)を実施例3のタンパク質と等モル(0.5 mg)固定化したカラムを作製し、DBC測定を実施した。
実施例3で作製したカラムを用い、IgGの吸脱着が可能か検討した。液体クロマトグラフィー装置AKTA pure 25 (GE Healthcare)にカラムをセットし、吸着溶液で平衡化した後、1 mg/mLヒト血清由来γ-グロブリンを1 mL/minの流速で500 μL送液した。5 mLの吸着溶液でカラムを洗浄した後、溶出溶液 (20 mM クエン酸, pH2.5)を通液することにより、吸着成分を溶出した。クロマトグラムを図5に示した。
他の足場タンパク質においてもIgG結合性ペプチドが機能するかを検証するため、黄色蛍光タンパク質(sfYFP)にIgG結合性ペプチドが融合した分子(DNA配列:配列番号54、アミノ酸配列:配列番号55)を設計し、実施例1と同様にタンパク質の発現・精製並びに親和性解析を行った。親和性測定装置、解析ソフトウェアはそれぞれBiacore X100、Biacore X100 Evalution Softwareを用いた。
比較例4として、IgG結合ペプチドが融合していない黄色蛍光タンパク質(sfYFP、DNA配列:配列番号52、アミノ酸配列:配列番号53)を実施例5と同様の方法で発現・精製し、親和性の測定を行った。実施例5及び比較例4の結果を図6に示した。
他の特異的結合能を有するペプチドにおいても、IgG結合性ペプチドと同様に機能するかを検証するため、緑色蛍光タンパク質(sfGFP)にIgA、IgY結合性ペプチドが融合した分子(それぞれ、DNA配列:配列番号56及びアミノ酸配列:配列番号57、DNA配列:配列番号58及びアミノ酸配列:配列番号59)を設計し、実施例5と同様にタンパク質の発現・精製並びに親和性解析を行った。
実施例6で作製した緑色蛍光タンパク質(sfGFP)にIgA、IgY結合性ペプチドが融合した分子10 mgを固定化したカラムを用い、IgA、IgYの吸脱着が可能か検討した。液体クロマトグラフィー装置AKTA pure 25 (GE Healthcare)にカラムをセットし、吸着溶液で平衡化した後、0.2 mg/mLヒト血清由来IgA、もしくはニワトリIgYを1 mL/minの流速で500 μL送液した。5 mLの吸着溶液でカラムを洗浄した後、溶出溶液 (20 mM クエン酸, pH2.5)を通液することにより、吸着成分を溶出した。クロマトグラムを図8に示した。
Claims (15)
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2018145323 | 2018-08-01 | ||
JP2018145323 | 2018-08-01 | ||
PCT/JP2019/030115 WO2020027237A1 (ja) | 2018-08-01 | 2019-08-01 | ペプチド融合タンパク質 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2020027237A1 true JPWO2020027237A1 (ja) | 2021-08-02 |
JP7202577B2 JP7202577B2 (ja) | 2023-01-12 |
Family
ID=69232554
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020534727A Active JP7202577B2 (ja) | 2018-08-01 | 2019-08-01 | ペプチド融合タンパク質 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11643474B2 (ja) |
EP (1) | EP3831855A4 (ja) |
JP (1) | JP7202577B2 (ja) |
CN (1) | CN112469736A (ja) |
WO (1) | WO2020027237A1 (ja) |
Citations (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000027872A1 (fr) * | 1998-11-11 | 2000-05-18 | Mitsubishi Chemical Corporation | Proteine de detection et utilisation de celle-ci |
JP2002526108A (ja) * | 1998-10-08 | 2002-08-20 | ライジェル・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | スキャフォルド・タンパク質のランダム・ペプチドライブラリィとの融合 |
JP2007244285A (ja) * | 2006-03-16 | 2007-09-27 | Kaneka Corp | 抗体結合性ペプチド |
WO2008069232A1 (ja) * | 2006-12-08 | 2008-06-12 | The University Of Tokyo | 分子モジュール |
WO2009025300A1 (ja) * | 2007-08-21 | 2009-02-26 | Regenetiss Inc. | イミュノグロブリン結合能を有するペプチド |
JP2011521653A (ja) * | 2008-06-05 | 2011-07-28 | アフィボディ・アーベー | ポリペプチド |
WO2013027796A1 (ja) * | 2011-08-24 | 2013-02-28 | 大塚化学株式会社 | IgG結合性ペプチド及びそれによるIgGの検出および精製方法 |
WO2013081037A1 (ja) * | 2011-11-30 | 2013-06-06 | 国立大学法人鹿児島大学 | IgA結合性ペプチド及びそれによるIgAの精製 |
JP2014503790A (ja) * | 2010-10-19 | 2014-02-13 | ジョージア ステート ユニバーシティ リサーチ ファウンデーション インコーポレイテッド | 分析物センサー、そのようなセンサーを調製および使用するための方法、および分析物の活性を検出する方法 |
WO2014115229A1 (ja) * | 2013-01-28 | 2014-07-31 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 抗体結合性ペプチド |
JP2015501299A (ja) * | 2011-10-10 | 2015-01-15 | シティ・オブ・ホープCity of Hope | メディトープおよびメディトープ結合性抗体ならびにそれらの使用 |
WO2015053353A1 (ja) * | 2013-10-09 | 2015-04-16 | 国立大学法人鹿児島大学 | IgY特異的結合ペプチド及びそれによるIgYの精製法 |
WO2016052073A1 (ja) * | 2014-09-29 | 2016-04-07 | 富士フイルム株式会社 | 抗体結合性ポリペプチド、抗体結合性融合ポリペプチドおよび吸着材料 |
JP2016202044A (ja) * | 2015-04-20 | 2016-12-08 | 学校法人麻布獣医学園 | 形質転換細胞を用いた変異原性試験法 |
WO2016204198A1 (ja) * | 2015-06-16 | 2016-12-22 | 国立大学法人名古屋大学 | タンパク質の発現方法 |
WO2017200461A1 (en) * | 2016-05-17 | 2017-11-23 | Härd Torleif | Antibody binding nanofibrils |
WO2018043629A1 (ja) * | 2016-09-01 | 2018-03-08 | 国立研究開発法人産業技術総合研究所 | 非天然型立体構造を形成した抗体に親和性を示すポリペプチド |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5998515A (ja) | 1982-11-27 | 1984-06-06 | 帝国通信工業株式会社 | コンデンサ巻取装置におけるリ−ド線の供給及び取付装置 |
US20030203355A1 (en) * | 2002-04-24 | 2003-10-30 | Los Alamos National Laboratory | Fluorobodies: binding ligands with intrinsic fluorescence |
EP2135093B1 (en) * | 2007-04-16 | 2015-04-15 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Analysis of phosphorylated glycans, glcopeptides or glycoproteins by imac |
EP2578681B1 (en) | 2010-05-24 | 2015-07-01 | Kagoshima University | Iga-binding peptide and iga purification using same |
WO2012104791A1 (en) * | 2011-02-01 | 2012-08-09 | Bernd Helmut Adam Rehm | Fusion polypeptides and uses thereof |
CN104619726B (zh) * | 2012-03-23 | 2018-05-18 | 苏州鲲鹏生物技术有限公司 | 由超折叠绿色荧光蛋白构成的融合蛋白及其用途 |
US10107729B2 (en) * | 2013-02-15 | 2018-10-23 | Douglas T. Gjerde | Isolation, detection and use of biological cells |
CN110267969B (zh) | 2016-11-18 | 2023-11-21 | 国立大学法人鹿儿岛大学 | 含有IgG结合肽的固相载体以及IgG的分离方法 |
JP2018145323A (ja) | 2017-03-07 | 2018-09-20 | Dic株式会社 | 粘着テープ、滑り防止材、液晶表示モジュール及び液晶表示装置 |
CN112261954A (zh) * | 2018-06-14 | 2021-01-22 | 味之素株式会社 | 具有针对抗体的亲和性物质和生物正交性官能团的化合物或其盐 |
CN112789295B (zh) * | 2018-10-10 | 2023-08-15 | 国立大学法人鹿儿岛大学 | 包含IgG结合肽的固相担载体及IgG的分离方法 |
-
2019
- 2019-08-01 JP JP2020534727A patent/JP7202577B2/ja active Active
- 2019-08-01 CN CN201980049450.0A patent/CN112469736A/zh active Pending
- 2019-08-01 WO PCT/JP2019/030115 patent/WO2020027237A1/ja unknown
- 2019-08-01 US US17/264,577 patent/US11643474B2/en active Active
- 2019-08-01 EP EP19845061.1A patent/EP3831855A4/en active Pending
Patent Citations (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002526108A (ja) * | 1998-10-08 | 2002-08-20 | ライジェル・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | スキャフォルド・タンパク質のランダム・ペプチドライブラリィとの融合 |
WO2000027872A1 (fr) * | 1998-11-11 | 2000-05-18 | Mitsubishi Chemical Corporation | Proteine de detection et utilisation de celle-ci |
JP2007244285A (ja) * | 2006-03-16 | 2007-09-27 | Kaneka Corp | 抗体結合性ペプチド |
WO2008069232A1 (ja) * | 2006-12-08 | 2008-06-12 | The University Of Tokyo | 分子モジュール |
WO2009025300A1 (ja) * | 2007-08-21 | 2009-02-26 | Regenetiss Inc. | イミュノグロブリン結合能を有するペプチド |
JP2011521653A (ja) * | 2008-06-05 | 2011-07-28 | アフィボディ・アーベー | ポリペプチド |
JP2014503790A (ja) * | 2010-10-19 | 2014-02-13 | ジョージア ステート ユニバーシティ リサーチ ファウンデーション インコーポレイテッド | 分析物センサー、そのようなセンサーを調製および使用するための方法、および分析物の活性を検出する方法 |
WO2013027796A1 (ja) * | 2011-08-24 | 2013-02-28 | 大塚化学株式会社 | IgG結合性ペプチド及びそれによるIgGの検出および精製方法 |
JP2015501299A (ja) * | 2011-10-10 | 2015-01-15 | シティ・オブ・ホープCity of Hope | メディトープおよびメディトープ結合性抗体ならびにそれらの使用 |
WO2013081037A1 (ja) * | 2011-11-30 | 2013-06-06 | 国立大学法人鹿児島大学 | IgA結合性ペプチド及びそれによるIgAの精製 |
WO2014115229A1 (ja) * | 2013-01-28 | 2014-07-31 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 抗体結合性ペプチド |
WO2015053353A1 (ja) * | 2013-10-09 | 2015-04-16 | 国立大学法人鹿児島大学 | IgY特異的結合ペプチド及びそれによるIgYの精製法 |
WO2016052073A1 (ja) * | 2014-09-29 | 2016-04-07 | 富士フイルム株式会社 | 抗体結合性ポリペプチド、抗体結合性融合ポリペプチドおよび吸着材料 |
JP2016202044A (ja) * | 2015-04-20 | 2016-12-08 | 学校法人麻布獣医学園 | 形質転換細胞を用いた変異原性試験法 |
WO2016204198A1 (ja) * | 2015-06-16 | 2016-12-22 | 国立大学法人名古屋大学 | タンパク質の発現方法 |
WO2017200461A1 (en) * | 2016-05-17 | 2017-11-23 | Härd Torleif | Antibody binding nanofibrils |
WO2018043629A1 (ja) * | 2016-09-01 | 2018-03-08 | 国立研究開発法人産業技術総合研究所 | 非天然型立体構造を形成した抗体に親和性を示すポリペプチド |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
J. PEPT. SCI., vol. 23(10), JPN6022051620, 2017, pages 790 - 797, ISSN: 0004937628 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2020027237A1 (ja) | 2020-02-06 |
US20210332152A1 (en) | 2021-10-28 |
US11643474B2 (en) | 2023-05-09 |
JP7202577B2 (ja) | 2023-01-12 |
CN112469736A (zh) | 2021-03-09 |
EP3831855A4 (en) | 2021-11-03 |
EP3831855A1 (en) | 2021-06-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5994068B2 (ja) | IgG結合性ペプチド及びそれによるIgGの検出および精製方法 | |
JP7002733B2 (ja) | IgG結合ペプチドを含む固相担体及びIgGの分離方法 | |
JP7117741B2 (ja) | IgG結合性ペプチドを含む固相担体及びIgGの分離方法 | |
JPWO2011148952A1 (ja) | IgA結合性ペプチド及びそれによるIgAの精製 | |
WO2016052073A1 (ja) | 抗体結合性ポリペプチド、抗体結合性融合ポリペプチドおよび吸着材料 | |
WO2017082214A1 (ja) | 単鎖抗体のスクリーニング方法及び単鎖抗体 | |
JP7202577B2 (ja) | ペプチド融合タンパク質 | |
JP6396303B2 (ja) | アルブミン結合を含有するタンパク質の分離方法 | |
EP2787079A1 (en) | IgA-BINDING PEPTIDE AND PURIFICATION OF IgA THEREBY | |
KR20230038529A (ko) | 친화도 정제를 위한 면역글로불린 결합 단백질 | |
JP7370538B2 (ja) | 分離剤 | |
WO2020004671A1 (ja) | 分離剤 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20201207 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211102 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211227 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20220510 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220810 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20220810 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20220810 |
|
C11 | Written invitation by the commissioner to file amendments |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C11 Effective date: 20220906 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20221007 |
|
C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20221011 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20221206 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221216 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7202577 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |