JPWO2020018615A5

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Publication number: JPWO2020018615A5
Application number: JP2021502525A
Authority: JP
Publication date: 2022-08-09

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低免疫誘導多能性幹細胞（ＨＩＰ細胞）から分化させられた単離低免疫心臓細胞であって、
内在性β－２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）遺伝子活性及び内在性クラスＩＩトランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）遺伝子活性が減少または排除され、ＣＤ４７発現が上昇している、単離低免疫心臓細胞。
Ｂ２Ｍ遺伝子活性の前記減少または排除が、前記Ｂ２Ｍ遺伝子の両アレルを破壊するクラスター化された規則的配置の短回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）／Ｃａｓ９反応の結果である、および／または、
任意に、ＣＩＩＴＡ遺伝子活性の前記減少または排除が、前記ＣＩＩＴＡ遺伝子の両アレルを破壊するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９反応の結果である、請求項１に記載の単離低免疫心臓細胞。
前記ＨＩＰ細胞がヒトｉＰＳＣであり、前記Ｂ２Ｍ遺伝子がヒトＢ２Ｍ遺伝子であり、前記ＣＩＩＴＡ遺伝子がヒトＣＩＩＴＡ遺伝子であり、前記ＣＤ４７発現上昇が、プロモーターの制御下でヒトＣＤ４７遺伝子の少なくとも１コピーを前記ｉＰＳＣに導入した結果である、請求項１または２に記載の単離低免疫心臓細胞。
前記ＨＩＰ細胞を死に誘導するトリガー物質により活性化される自殺遺伝子をさらに含み、
前記自殺遺伝子が、
（a）単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）遺伝子であり、前記トリガー物質がガンシクロビルであり、
任意に、前記ＨＳＶ－ｔｋ遺伝子が、配列番号４に対して少なくとも９０％の配列同一性を含むタンパク質をコードし、
任意に、前記ＨＳＶ－ｔｋ遺伝子が、配列番号４のアミノ酸配列を含むタンパク質をコードし、
（b）エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）シトシンデアミナーゼ（ＣＤ）遺伝子であり、前記トリガー物質が５－フルオロシトシン（５－ＦＣ）であり、
任意に、前記ＣＤ遺伝子が、配列番号５に対して少なくとも９０％の配列同一性を含むタンパク質をコードし、
任意に、前記ＣＤ遺伝子が、配列番号５のアミノ酸配列を含むタンパク質をコードし、
（c）誘導型カスパーゼ９タンパク質であり、前記トリガー物質が二量体誘導化合物（ＣＩＤ）であり、
任意に、前記誘導型カスパーゼ９タンパク質が、配列番号６に対して少なくとも９０％の配列同一性を含み、
任意に、前記誘導型カスパーゼ９タンパク質が、配列番号６のアミノ酸配列を含み、または
任意に、前記ＣＩＤが化合物ＡＰ１９０３である、
からなる群から選択される、請求項１～３の何れか１項に記載の単離低免疫心臓細胞。
減少または排除された内在性β－２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）遺伝子活性及び内在性クラスＩＩトランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）遺伝子活性および上昇したＣＤ４７発現を含む、単離低免疫心臓細胞であって、
任意に、Ｂ２Ｍ遺伝子活性の前記減少または排除が、前記Ｂ２Ｍ遺伝子の両アレルを破壊するクラスター化された規則的配置の短回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）／Ｃａｓ９反応の結果であり、
任意に、ＣＩＩＴＡ遺伝子活性の前記減少または排除が、前記ＣＩＩＴＡ遺伝子の両アレルを破壊するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９反応の結果であり、
任意に、前記Ｂ２Ｍ遺伝子がヒトＢ２Ｍ遺伝子であり、前記ＣＩＩＴＡ遺伝子がヒトＣＩＩＴＡ遺伝子であり、前記ＣＤ４７発現上昇が、プロモーターの制御下でヒトＣＤ４７遺伝子の少なくとも１コピーを心臓細胞またはその前駆細胞に導入した結果であり、
さらに任意に、前記心臓細胞は、トリガー物質により活性化される自殺遺伝子をさらに含み、
前記自殺遺伝子が、
（a）単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）遺伝子であり、前記トリガー物質がガンシクロビルであり、
任意に、前記ＨＳＶ－ｔｋ遺伝子が、配列番号４に対して少なくとも９０％の配列同一性を含むタンパク質をコードし、
任意に、前記ＨＳＶ－ｔｋ遺伝子が、配列番号４のアミノ酸配列を含むタンパク質をコードし、
（b）エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）シトシンデアミナーゼ（ＣＤ）遺伝子であり、前記トリガー物質が５－フルオロシトシン（５－ＦＣ）であり、
任意に、前記ＣＤ遺伝子が、配列番号５に対して少なくとも９０％の配列同一性を含むタンパク質をコードし、
任意に、前記ＣＤ遺伝子が、配列番号５のアミノ酸配列を含むタンパク質をコードし、
（c）誘導型カスパーゼ９タンパク質であり、前記トリガー物質が二量体誘導化合物（ＣＩＤ）であり、
任意に、前記誘導型カスパーゼ９タンパク質が、配列番号６に対して少なくとも９０％の配列同一性を含み、
任意に、前記誘導型カスパーゼ９タンパク質が、配列番号６のアミノ酸配列を含み、または
任意に、前記ＣＩＤが化合物ＡＰ１９０３である、
からなる群から選択される、単離低免疫心臓細胞。
ＣＤ４７および／または自殺遺伝子をコードする１つまたは複数の導入遺伝子が、セーフハーバー遺伝子座などの遺伝子座に導入される、請求項１～５の何れか１項に記載の単離低免疫心臓細胞。
前記心臓細胞は、多能性幹細胞のインビトロ分化によって作製される、請求項５に記載の単離低免疫心臓細胞。
前記多能性幹細胞はｉＰＳＣである、請求項７に記載の単離低免疫心臓細胞。
前記多能性幹細胞は低免疫原性である、請求項７または８に記載の単離低免疫心臓細胞。
前記単離低免疫心臓細胞が、心筋細胞、結節心筋細胞、伝導性心筋細胞、作業心筋細胞、心筋細胞前駆体、心筋細胞祖先細胞、心臓幹細胞及び心臓筋肉細胞からなる群から選択されるヒト細胞である、請求項１～９の何れか１項に記載の単離低免疫心臓細胞。
請求項１～１０の何れか１項に記載の単離低免疫心臓細胞の集団の治療的有効量を含む、心臓状態又は疾患に罹患している患者を処置する方法で使用するための組成物であって、
前記方法は、前記単離低免疫心臓細胞の集団の治療有効量を含む組成物を投与することを含み、
任意に、治療的に有効な担体をさらに含む、組成物。
前記投与が、前記患者の心臓組織への移植、静脈内注射、動脈内注射、冠動脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、心筋内注射、経心内膜注射、経心外膜注射又は点滴を含む、請求項１１に記載の使用のための組成物。
前記心臓状態又は疾患が、小児心筋症、加齢性心筋症、拡張型心筋症、肥大型心筋症、拘束型心筋症、慢性虚血性心筋症、周産期心筋症、炎症性心筋症、他の心筋症、心筋炎、心筋虚血性再灌流障害、心室機能不全、心不全、うっ血性心不全、冠動脈疾患、末期心疾患、アテローム性動脈硬化症、虚血、高血圧、再狭窄、狭心症、リウマチ性心臓、動脈炎又は循環器疾患からなる群から選択される、請求項１１又は１２に記載の使用のための組成物。
インビトロ分化によって低免疫多能性細胞（ＨＩＰ細胞）の集団から低免疫心臓細胞の集団を作製する方法であって、前記ＨＩＰ細胞において、内在性β－２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）遺伝子活性及び内在性クラスＩＩトランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）遺伝子活性が減少または排除され、ＣＤ４７発現が上昇しており、
前記方法が、
（ａ）ＧＳＫ阻害剤を含む第１の培地中でＨＩＰ細胞の集団を培養し、
任意に、前記ＧＳＫ阻害剤が、ＣＨＩＲ－９９０２１、その誘導体又はその変異体であり、および／または、
任意に、前記ＧＳＫ阻害剤が、約２μＭ～約１０μＭの範囲の濃度であり、
（ｂ）前駆心臓細胞の集団を作製するために、ＷＮＴアンタゴニストを含む第２の培地中で前記ＨＩＰ細胞の集団を培養し、
任意に、前記ＷＮＴアンタゴニスが、ＩＷＲ１、その誘導体又はその変異体であり、および／または、
任意に、前記ＷＮＴアンタゴニスが、約２μＭ～約１０μＭの範囲の濃度であり、
（ｃ）心臓細胞の集団を作製するために、インスリンを含む第３の培地中で前記前駆心臓細胞の集団を培養し、
任意に、グルコース不含培地中で段階（ｃ）の前記前駆心臓細胞の集団を培養することをさらに含み、および／または、
任意に、前記ＨＩＰ細胞が自殺遺伝子を含む場合、トリガー物質を含む培地中で段階（ｂ）の前記前駆心臓細胞の集団を培養することをさらに含み、
前記自殺遺伝子が単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）遺伝子である場合、前記トリガー物質がガンシクロビルであるか、前記自殺遺伝子がエシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）シトシンデアミナーゼ（ＣＤ）遺伝子である場合、前記トリガー物質が５－フルオロシトシン（５－ＦＣ）であるか、又は前記自殺遺伝子が誘導型カスパーゼ９タンパク質をコードする場合、前記トリガー物質が二量体誘導化合物（ＣＩＤ）であり、および／または、
任意に、前記ＨＩＰ細胞が自殺遺伝子を含む場合、トリガー物質を含む培地中で段階（ｃ）の前記心臓細胞の集団を培養することをさらに含み、
前記自殺遺伝子が単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）遺伝子である場合、前記トリガー物質がガンシクロビルであるか、前記自殺遺伝子がエシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）シトシンデアミナーゼ（ＣＤ）遺伝子である場合、前記トリガー物質が５－フルオロシトシン（５－ＦＣ）であるか、又は前記自殺遺伝子が誘導型カスパーゼ９タンパク質をコードする場合、前記トリガー物質が二量体誘導化合物（ＣＩＤ）であり、および／または、
任意に、非心臓細胞から前記低免疫心臓細胞の集団を単離することをさらに含み、
任意に、単離した低免疫心臓細胞の集団を凍結保存することをさらに含む、
を含む、方法。
心臓細胞またはその前駆細胞を遺伝子改変することを含む、低免疫心臓細胞を作製する方法であって、
前記遺伝子改変は、内在性β－２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）遺伝子活性及び内在性クラスＩＩトランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）遺伝子活性が減少または排除され、ＣＤ４７発現が上昇することを含み、
任意に、Ｂ２Ｍ遺伝子活性の前記減少または排除が、前記Ｂ２Ｍ遺伝子の両アレルを破壊するクラスター化された規則的配置の短回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）／Ｃａｓ９反応の結果であり、
任意に、ＣＩＩＴＡ遺伝子活性の前記減少または排除が、前記ＣＩＩＴＡ遺伝子の両アレルを破壊するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９反応の結果であり、
任意に、前記Ｂ２Ｍ遺伝子がヒトＢ２Ｍ遺伝子であり、前記ＣＩＩＴＡ遺伝子がヒトＣＩＩＴＡ遺伝子であり、前記ＣＤ４７発現上昇が、プロモーターの制御下でヒトＣＤ４７遺伝子の少なくとも１コピーを前記心臓細胞またはその前駆細胞に導入した結果であり、
任意に、前記遺伝子改変は、トリガー物質により活性化される自殺遺伝子をさらに含み、
前記自殺遺伝子が、
（a）単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）遺伝子であり、前記トリガー物質がガンシクロビルであり、
任意に、前記ＨＳＶ－ｔｋ遺伝子が、配列番号４に対して少なくとも９０％の配列同一性を含むタンパク質をコードし、
任意に、前記ＨＳＶ－ｔｋ遺伝子が、配列番号４のアミノ酸配列を含むタンパク質をコードし、
（b）エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）シトシンデアミナーゼ（ＣＤ）遺伝子であり、前記トリガー物質が５－フルオロシトシン（５－ＦＣ）であり、
任意に、前記ＣＤ遺伝子が、配列番号５に対して少なくとも９０％の配列同一性を含むタンパク質をコードし、
任意に、前記ＣＤ遺伝子が、配列番号５のアミノ酸配列を含むタンパク質をコードし、
（c）前記自殺遺伝子が誘導型カスパーゼ９タンパク質であり、前記トリガー物質が二量体誘導化合物（ＣＩＤ）であり、
任意に、前記誘導型カスパーゼ９タンパク質が、配列番号６に対して少なくとも９０％の配列同一性を含み、
任意に、前記誘導型カスパーゼ９タンパク質が、配列番号６のアミノ酸配列を含み、または
任意に、前記ＣＩＤが化合物ＡＰ１９０３である、
からなる群から選択される、方法。
前記心臓細胞は、多能性幹細胞のインビトロ分化によって作製される、請求項１５に記載の方法。
前記多能性幹細胞はｉＰＳＣである、請求項１６に記載の方法。
前記多能性幹細胞は低免疫原性である、請求項１６または１７に記載の方法。
ＣＤ４７発現が上昇している、低免疫誘導多能性幹細胞（ＨＩＰ細胞）から分化させられた単離低免疫膵島細胞であって、
内在性β－２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）遺伝子活性及び内在性クラスＩＩトランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）遺伝子活性が減少または排除され、
任意に、Ｂ２Ｍ遺伝子活性の前記減少または排除が、前記Ｂ２Ｍ遺伝子の両アレルを破壊するクラスター化された規則的配置の短回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）／Ｃａｓ９反応の結果であり、および／または、
任意に、ＣＩＩＴＡ遺伝子活性の前記減少または排除が、前記ＣＩＩＴＡ遺伝子の両アレルを破壊するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９反応の結果である、単離低免疫膵島細胞。
前記ＨＩＰ細胞がヒトｉＰＳＣであり、前記Ｂ２Ｍ遺伝子がヒトＢ２Ｍ遺伝子であり、前記ＣＩＩＴＡ遺伝子がヒトＣＩＩＴＡ遺伝子であり、前記ＣＤ４７発現上昇が、プロモーターの制御下でヒトＣＤ４７遺伝子の少なくとも１コピーを前記ｉＰＳＣに導入した結果である、請求項１９に記載の単離低免疫膵島細胞。
前記ＨＩＰ細胞を死に誘導するトリガー物質により活性化される自殺遺伝子をさらに含み、
前記自殺遺伝子が、
（a）単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）遺伝子であり、前記トリガー物質がガンシクロビルであり、
任意に、前記ＨＳＶ－ｔｋ遺伝子が、配列番号４に対して少なくとも９０％の配列同一性を含むタンパク質をコードし、
任意に、前記ＨＳＶ－ｔｋ遺伝子が、配列番号４のアミノ酸配列を含むタンパク質をコードし、
（b）エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）シトシンデアミナーゼ（ＣＤ）遺伝子であり、前記トリガー物質が５－フルオロシトシン（５－ＦＣ）であり、
任意に、前記ＣＤ遺伝子が、配列番号５に対して少なくとも９０％の配列同一性を含むタンパク質をコードし、
任意に、前記ＣＤ遺伝子が、配列番号５のアミノ酸配列を含むタンパク質をコードし、
（c）誘導型カスパーゼ９タンパク質であり、前記トリガー物質が二量体誘導化合物（ＣＩＤ）であり、
任意に、前記誘導型カスパーゼ９タンパク質が、配列番号６に対して少なくとも９０％の配列同一性を含み、
任意に、前記誘導型カスパーゼ９タンパク質が、配列番号６のアミノ酸配列を含み、
任意に、前記ＣＩＤが化合物ＡＰ１９０３である、
からなる群から選択される、請求項１９または２０に記載の単離低免疫膵島細胞。
内在性β－２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）遺伝子活性及び内在性クラスＩＩトランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）遺伝子活性が減少または排除され、ＣＤ４７発現が上昇している、単離低免疫膵島細胞であって、
任意に、Ｂ２Ｍ遺伝子活性の前記減少または排除が、前記Ｂ２Ｍ遺伝子の両アレルを破壊するクラスター化された規則的配置の短回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）／Ｃａｓ９反応の結果であり、
任意に、前記Ｂ２Ｍ遺伝子がヒトＢ２Ｍ遺伝子であり、前記ＣＩＩＴＡ遺伝子がヒトＣＩＩＴＡ遺伝子であり、前記ＣＤ４７発現上昇が、プロモーターの制御下でヒトＣＤ４７遺伝子の少なくとも１コピーを膵島細胞またはその前駆細胞に導入した結果であり、
さらに任意に、前記膵島細胞は、トリガー物質により活性化される自殺遺伝子をさらに含み、
前記自殺遺伝子が、
（a）単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）遺伝子であり、前記トリガー物質がガンシクロビルであり、
任意に、前記ＨＳＶ－ｔｋ遺伝子が、配列番号４に対して少なくとも９０％の配列同一性を含むタンパク質をコードし、
任意に、前記ＨＳＶ－ｔｋ遺伝子が、配列番号４のアミノ酸配列を含むタンパク質をコードし、
（b）エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）シトシンデアミナーゼ（ＣＤ）遺伝子であり、前記トリガー物質が５－フルオロシトシン（５－ＦＣ）であり、
任意に、前記ＣＤ遺伝子が、配列番号５に対して少なくとも９０％の配列同一性を含むタンパク質をコードし、
任意に、前記ＣＤ遺伝子が、配列番号５のアミノ酸配列を含むタンパク質をコードし、
（c）誘導型カスパーゼ９タンパク質であり、前記トリガー物質が二量体誘導化合物（ＣＩＤ）であり、
任意に、前記誘導型カスパーゼ９タンパク質が、配列番号６に対して少なくとも９０％の配列同一性を含み、
任意に、前記誘導型カスパーゼ９タンパク質が、配列番号６のアミノ酸配列を含み、または
任意に、前記ＣＩＤが化合物ＡＰ１９０３である、
からなる群から選択される、単離低免疫膵島細胞。
ＣＤ４７および／または自殺遺伝子をコードする１つまたは複数の導入遺伝子が、セーフハーバー遺伝子座などの遺伝子座に導入される、請求項１９～２２の何れか１項に記載の単離低免疫膵島細胞。
前記膵島細胞は、多能性幹細胞のインビトロ分化によって作製される、請求項２２に記載の単離低免疫膵島細胞。
前記多能性幹細胞はｉＰＳＣである、請求項２４に記載の単離低免疫膵島細胞。
前記多能性幹細胞は低免疫原性である、請求項２４または２５に記載の単離低免疫膵島細胞。
前記単離低免疫膵島細胞が、ベータ様膵臓細胞、膵島祖先細胞、未熟膵島細胞及び成熟膵島細胞からなる群から選択されるヒト細胞である、請求項１９～２６の何れか１項に記載の単離低免疫膵島細胞。
治療的有効量の請求項１９～２７の何れか１項に記載の単離低免疫膵島細胞の集団を含む、糖尿病に罹患している患者を処置する方法で使用するための組成物であって、
前記方法は、前記単離低免疫膵島細胞の集団の治療有効量を含む組成物を投与することを含み、
任意に、前記組成物が治療的に有効な担体をさらに含み、および／または、
任意に、前記単離低免疫膵島細胞の集団が生体分解性足場上にあり、および／または、
任意に、前記投与が移植又は注入を含む、方法。
インビトロ分化により低免疫原性多能性細胞（ＨＩＰ細胞）の集団から低免疫膵島細胞の集団を作製する方法であって、低免疫原性ｉＰＳＣにおいて、内在性β－２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）遺伝子活性及び内在性クラスＩＩトランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）遺伝子活性が減少または排除され、ＣＤ４７発現が上昇しており、
前記方法が、
（ａ）未熟膵島細胞の集団を作製するために、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＥＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、ソニックヘッジホッグ（ＳＨＨ）及び血管内皮胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子－β（ＴＧＦβ）スーパーファミリー、骨形成タンパク質－２（ＢＭＰ２）、骨形成タンパク質－７（ＢＭＰ７）、ＧＳＫ３β阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＢＭＰ１型受容体阻害剤及びレチノイン酸からなる群から選択される１つ以上の因子を含む第１の培地中で前記ＨＩＰ細胞の集団を培養すること、および
（ｂ）膵島細胞の集団を作製するために、前記第１の培地とは異なる第２の培地中で前記未熟膵島細胞の集団を培養すること、
を含み、
任意に、前記ＧＳＫ３β阻害剤が、ＣＨＩＲ－９９０２１、その誘導体又はその変異体であり、および／または、
任意に、前記ＧＳＫ３β阻害剤が、約２μＭ～約１０μＭの範囲の濃度であり、および／または、
任意に、前記ＡＬＫ阻害剤が、ＳＢ－４３１５４２、その誘導体又はその変異体であり、および／または、
任意に、前記ＡＬＫ阻害剤が、約１μＭ～約１０μＭの範囲の濃度であり、および／または、
任意に、前記第１の培地及び／又は第２の培地が動物血清を欠き、および／または、
任意に、前記ＨＩＰ細胞が自殺遺伝子を含む場合、トリガー物質を含む培地中で段階（ａ）の前記未熟膵島細胞の集団を培養することをさらに含み、
前記自殺遺伝子が単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）遺伝子である場合、前記トリガー物質がガンシクロビルであるか、前記自殺遺伝子がエシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）シトシンデアミナーゼ（ＣＤ）遺伝子である場合、前記トリガー物質が５－フルオロシトシン（５－ＦＣ）であるか、又は前記自殺遺伝子が誘導型カスパーゼ９タンパク質をコードする場合、前記トリガー物質が二量体誘導化合物（ＣＩＤ）である、および／または、
任意に、前記ＨＩＰ細胞が自殺遺伝子を含む場合、トリガー物質を含む培地中で段階（ｂ）の前記膵島細胞の集団を培養することをさらに含み、前記自殺遺伝子が単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）遺伝子である場合、前記トリガー物質がガンシクロビルであるか、前記自殺遺伝子がエシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）シトシンデアミナーゼ（ＣＤ）遺伝子である場合、前記トリガー物質が５－フルオロシトシン（５－ＦＣ）であるか、又は前記自殺遺伝子が誘導型カスパーゼ９タンパク質をコードする場合、前記トリガー物質が二量体誘導化合物（ＣＩＤ）であり、および／または、
任意に、非膵島細胞から前記低免疫膵島細胞の集団を単離することをさらに含み、
任意に、前記単離された低免疫膵島細胞の集団を凍結保存することをさらに含む、方法。
前記膵島細胞は、多能性幹細胞のインビトロ分化によって作製される、請求項２９に記載の方法。
前記多能性幹細胞はｉＰＳＣである、請求項３０に記載の方法。
前記多能性幹細胞は低免疫原性である、請求項３０または３１に記載の方法。