JPWO2019054396A1 - フソバクテリウム属細菌および/またはステレラ属細菌の菌数抑制剤 - Google Patents
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Abstract
Description
(1)1−ケストースを主成分とする錠剤の調製
1−ケストース(純度98質量%以上;物産フードサイエンス)800gおよびステアリン酸マグネシウム8gをよく混合した後、連続打錠機(RT−S−9、菊水製作所)に供して打錠することにより、直径8mm、重量400mgの錠剤2000錠(1−ケストース含有量396mg/1錠)を得た。
試験期間を3ヶ月として、5頭のビーグル犬に、本実施例1(1)の錠剤を1日当たり2g(1日当たりの1−ケストース摂取量が1980mg)摂取させながら2ヶ月間飼育した。その後、経過観察の為に、錠剤を摂取させずに1ヶ月間飼育した。試験開始時、試験開始から1ヶ月後、2ヶ月後、および3ヶ月後(試験終了時)に、採便容器スプーン型キットを用いて直腸便を採取し、−80℃で凍結保存した。
〈Shunsuke Takahashiら、PLosONE、第9巻、第8号、e105592、2014年8月〉に記載の方法に従って、本実施例1(2)の糞便から総DNAを抽出した。具体的には、まず、4Mのグアニジンチオシアネート、100mMのトリスHCl(pH9.0)および40mMのEDTAを含む水溶液に、氷上で融解した糞便100mgを懸濁し、FastPrep FP100A(MP Biomedicals)を用いてジルコニアビーズで粉砕して懸濁液を得た。Magtration System 12GC(Precision System Science)およびGC series MagDEA DNA 200(Precision System Science)を用いて、この懸濁液からDNAを抽出した。DNAの濃度を分光測光器ND-1000(NanDrop Technologies)を用いて測定し、10ng/μLとなるように調製して、これを糞便由来総DNAとした。
本実施例1(2)の糞便に含まれる、細菌および古細菌の種類と存在比率の網羅的解析を行った。具体的には、〈Shunsuke Takahashiら、PLosONE、第9巻、第8号、e105592、2014年8月〉に記載の方法に従い、ユニバーサルプライマーを用いて、本実施例1(3)の糞便由来総DNAに含まれる、細菌由来の16S rDNAを増幅した後、次世代シークエンサーMiSeq(Illumina)によりその塩基配列を解読した。得られた塩基配列データから、データの質(クオリティ)が低いものおよびキメラ配列由来のものを排除した後、相同性が高い配列を1つの群としてまとめ、これを1菌種(または1属)として扱った。当該1群の中で出現頻度が最も高い配列を代表配列として、配列データベースとの相同性解析を行い菌種を同定した。存在比率は、総リード数に占める各群のリード数の割合を百分率として算出した。なお、キメラ配列のチェックは〈Robert C. Edgarら、BIOINFORMATICS、第27巻、16号、第2194−2200頁、2011年6月〉に、相同性解析は〈Chika Kasaiら、BMC Gastroenterology、第15巻、記事100号、2015年8月〉に、それぞれ記載の方法に準じて行った。
本実施例1(2)の糞便中のフソバクテリウム属細菌およびステレラ属細菌の菌数を、リアルタイムPCR法により定量した。具体的には、本実施例1(3)の糞便由来総DNAを鋳型として、Fusobacterium Detection Kit(Cat. No. RO-0005)(テクノスルガ・ラボ)、リアルタイムPCR試薬「SYBR Premix Ex Taq II (T1i RNase H Plus)」(タカラ)およびリアルタイムPCR装置「Rotor-Gene Q 」(キアゲン)を用いて、添付の使用書に従ってリアルタイムPCRを行い、糞便1gあたりのフソバクテリウム属細菌の16S rDNAコピー数を定量した。
Claims (8)
- 1−ケストースを有効成分とする、フソバクテリウム属細菌および/またはステレラ属細菌の菌数抑制剤。
- イヌにおけるフソバクテリウム属細菌および/またはステレラ属細菌の菌数を抑制するために用いられる、請求項1に記載の菌数抑制剤。
- 急性出血性下痢の予防または治療に用いられることを特徴とする、請求項1または2に記載の菌数抑制剤。
- 1−ケストースを有効成分とする、フソバクテリウム属細菌および/またはステレラ属細菌の菌数抑制用食品組成物。
- 1−ケストースを有効成分とする、フソバクテリウム属細菌および/またはステレラ属細菌の菌数抑制用動物用飼料。
- ヒトまたは動物に1−ケストースを摂取させることにより前記ヒトまたは動物の体内におけるフソバクテリウム属細菌および/またはステレラ属細菌の菌数を抑制する工程を有する、フソバクテリウム属細菌および/またはステレラ属細菌の菌数抑制方法。
- 急性出血性下痢を罹患している、または、罹患する可能性があるヒトもしくは動物に、1−ケストースを摂取させることにより、前記ヒトもしくは動物の体内におけるフソバクテリウム属細菌および/またはステレラ属細菌の菌数を抑制する工程を有する、急性出血性下痢の予防または治療方法。
- 急性出血性下痢の予防または治療用医薬品を製造するための1−ケストースの使用。
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SUCHODOLSKI, J. S. ET AL: "The Fecal Microbiome in Dogs with Acute Diarrhea and Idiopathic Inflammatory Bowel Disease", PLOS ONE, vol. Vol.7, Issue 12, JPN6022034985, 2012, pages 51907, ISSN: 0004856357 * |
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