JPWO2018088507A1 - マラリアワクチン - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、マラリア原虫への感染又はマラリア感染症の発症を予防するためのワクチン用抗原等に関する。
〔1〕 以下のいずれかのアミノ酸配列からなるポリペプチド:
(a)配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列、
(b)配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列において1〜10個、好ましくは1〜5個、更に好ましくは1、2もしくは3個のアミノ酸が置換、欠失、付加又は挿入されたアミノ酸配列、及び
(c)配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列と95%以上、更に好ましくは97%以上、より好ましくは99%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列。
〔2〕 前記1に記載のポリペプチドが担体と連結されてなるポリペプチド。
〔3〕 担体が、ウイルス粒子、脂質粒子、もしくは担体蛋白質である、前記2に記載のポリペプチド。
〔4〕 マラリアワクチン抗原として使用するための、前記1〜3のいずれか一項に記載のポリペプチド。
〔5〕 前記1〜4のいずれか一項に記載のポリペプチドを含む、マラリアワクチン。
〔6〕 更に、CSP、TRAP、MSP1、AMA−1、SERA5、GAMA、EBA175、RH5、Pfs25及びPfs230から選択される少なくとも一つのマラリアワクチン抗原を含む、又は前記少なくとも一つのマラリアワクチン抗原と併用して投与される、前記5に記載のマラリアワクチン。
〔7〕 更に、ポリオ、ジフテリア、百日咳及び破傷風から選択される少なくとも一つの感染症に対するワクチン抗原を含む、又は前記少なくとも一つのワクチン抗原と併用して投与される、前記5又は6に記載のマラリアワクチン。
〔8〕 マラリア原虫の感染予防、マラリア原虫感染後の発症予防、又はマラリア感染症の治療のための前記5〜7のいずれか一項に記載のマラリアワクチン。
〔9〕 前記1に記載のポリペプチドをコードする核酸配列からなるポリヌクレオチド。
〔10〕 前記9に記載のポリヌクレオチドが、宿主細胞における発現を可能にするプロモーター及び/又は調節エレメントに連結されてなる、ポリヌクレオチド。
〔11〕 前記9又は10に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
〔12〕 前記9もしくは10に記載のポリヌクレオチド、又は前記11に記載の発現ベクターを含むマラリアワクチン。
〔13〕 前記11に記載のベクターにより形質転換された組換え宿主細胞。
〔14〕 細菌、酵母、昆虫細胞、または哺乳動物細胞である、前記13に記載の宿主細胞。
〔15〕 前記1に記載のポリペプチドを特異的に認識する抗体。
〔16〕 前記1〜4のいずれかに記載のポリペプチド、前記9もしくは10に記載のポリヌクレオチド、前記11に記載の発現ベクター、又は前記15に記載の抗体を有効成分として含有する医薬組成物。
本明細書において、アミノ酸、(ポリ)ペプチド、(ポリ)ヌクレオチドなどの略号による表示は、IUPAC−IUBの規定〔IUPAC-IUB Communication on Biological Nomenclature, Eur. J. Biochem., 138:9(1984) 〕、「塩基配列又はアミノ酸配列を含む明細書等の作成のためのガイドライン」(日本国特許庁編)および当該分野における慣用記号に従う。
ここで実質的に同一のアミノ酸配列としては、
(a)配列番号2で示されるアミノ酸配列において1〜10個、好ましくは1〜5個、更に好ましくは1、2もしくは3個のアミノ酸が置換、欠失、付加又は挿入されたアミノ酸配列、及び
(b)配列番号2で示されるアミノ酸配列と95%以上、更に好ましくは97%以上、より好ましくは99%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列、
が挙げられる。
本発明は、マラリアワクチン抗原として有用な、前述のRiprのアミノ酸配列の一部からなるフラグメントに関する。具体的には、配列番号2で示されるアミノ酸配列の第720番目〜第934番目又は第648番目〜第830番目のアミノ酸配列、すなわち配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列からなるポリペプチド(以下、本発明のポリペプチドと言う場合がある)である。
ここで配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、それぞれ、
(a)配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列において1〜10個、好ましくは1〜5個、更に好ましくは1、2もしくは3個のアミノ酸が置換、欠失、付加又は挿入されたアミノ酸配列、及び
(b)配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列と95%以上、更に好ましくは97%以上、より好ましくは99%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列、
が挙げられる。
(a)配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
(b)配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列において1〜10個、好ましくは1〜5個、更に好ましくは1、2もしくは3個のアミノ酸が置換、欠失、付加又は挿入されたアミノ酸配列からなり、それぞれ配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等の免疫学的活性を保持するポリペプチド、及び
(c)配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列と95%以上、更に好ましくは97%以上、より好ましくは99%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、それぞれ配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等の免疫学的活性を保持するポリペプチド、
から選択されるポリペプチドである。
(a)配列番号4で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、
(b)配列番号4で示されるアミノ酸配列において1〜10個、好ましくは1〜5個、更に好ましくは1、2もしくは3個のアミノ酸が置換、欠失、付加又は挿入されたアミノ酸配列からなり、配列番号4で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等の免疫学的活性を保持するポリペプチド、及び
(c)配列番号4で示されるアミノ酸配列と95%以上、更に好ましくは97%以上、より好ましくは99%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、配列番号4で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等の免疫学的活性を保持するポリペプチド、
から選択されるポリペプチドである。
本発明の態様として、本発明のポリペプチドをコードする核酸配列からなるポリヌクレオチド(以下、本発明のポリヌクレオチドという)が挙げられる。具体的には、配列番号2で示されるアミノ酸配列の第720番目〜第934番目又は第648番目〜第830番目のアミノ酸配列、すなわち配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであれば特に限定はなく、DNA及びRNAのいずれでもよく、また一本鎖の核酸配列及び二本鎖の核酸配列を共に含む。
ここで、配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードする核酸配列からなるポリヌクレオチドとしては、それぞれ、
(a)配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列において1〜10個、好ましくは1〜5個、更に好ましくは1、2もしくは3個のアミノ酸が置換、欠失、付加又は挿入されたアミノ酸配列、及び
(b)配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列と95%以上、更に好ましくは97%以上、より好ましくは99%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列、
をコードする核酸配列からなるポリヌクレオチドが挙げられる。
本発明のポリペプチドは、当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを適当な宿主細胞に発現させて製造する遺伝子組み換え法、無細胞系合成システムを使用する方法、化学的に合成する方法等、当業者に周知の方法で製造することができる。以下に説明する。
本発明の一態様として、本発明のポリペプチドを特異的に認識する抗体(以下、本発明の抗体という)が挙げられる。本明細書でいう「抗体」には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、およびFabフラグメント、Fab発現ライブラリーなどによって生成されるフラグメントのような抗原結合性を有する上記抗体の一部が包含される。
本発明のポリペプチド、本発明のポリヌクレオチド、本発明の発現ベクター、または本発明のポリペプチドを特異的に認識する抗体は、マラリア原虫の感染予防、マラリア原虫感染後の発症予防、又はマラリア感染症の治療に有用である。すなわち、本発明のポリペプチド、本発明のポリヌクレオチド、本発明の発現ベクター、または本発明の抗ポリペプチド抗体を含む医薬組成物も又、本発明の一態様である。ある実施形態において、本発明の医薬組成物は、マラリアワクチンである。
ここで(i)細菌の死菌としては、例えば溶連菌粉末(例えばピシバニール;中外製薬株式会社)、死菌浮遊物カクテル(例えばブロンカスマ・ベルナ;三和化学研究所)、あるいはヒト型結核菌の死菌等が挙げられる。
(ii)細菌由来のCWSとしては、マイクバクテリア属由来のCWS(例えばマイコバクテリア属ウシ型結核菌であるBCG株のCWS)、ノカルディア属由来のCWS(例えばノカルディア・ノブラのCWS)、あるいはコリネバクテリア属由来のCWS等が挙げられる。
(iii)菌体由来の特定の成分又はその誘導体としては、例えば菌体由来多糖類であるヒト型結核菌由来多糖類成分(例えばアンサー;ゼリア新薬工業株式会社)や担子菌由来多糖類(例えばレンチナン;味の素、クレスチン;三共株式会社、担子菌カワラタケ)、またムラミルジペプチド(MDP)関連化合物、リポ多糖(LPS)、リピドA関連化合物(MPL)、糖脂質トレハロースジマイコレート(TDM)、細菌由来のDNA(例えばCpGオリゴヌクレオチド)、ウイルス由来の核酸、あるいはこれらの誘導体(例えばpoly I:C)などが挙げられる。
コムギにコドン改変したRipr合成DNAのC末端にHisタグを付加した配列を組み込んだpEU−E01−MCSベクター、およびRiprコドン改変DNAからサブクローニングした11種類の分断体のC末端にHisタグを付加した配列を組み込んだpEU−E01−GST−TEV−N2ベクターを鋳型として転写を行った。いずれのペプチドも、N末端にMet、C末端に6×Hisをコードする配列を付加した配列を鋳型として合成した。
Ripr full(全長Ripr):配列番号2の第21番目〜第1086番目のアミノ酸配列からなるペプチド
Ripr 1-1:配列番号2の第21番目〜第197番目のアミノ酸配列からなるペプチド
Ripr 1-2:配列番号2の第198番目〜第377番目のアミノ酸配列からなるペプチド
Ripr 1-3:配列番号2の第378番目〜第557番目のアミノ酸配列からなるペプチド
Ripr 1-4:配列番号2の第558番目〜第719番目のアミノ酸配列からなるペプチド
Ripr 1-5:配列番号2の第720番目〜第934番目のアミノ酸配列からなるペプチド(配列番号4)
Ripr 1-6:配列番号2の第935番目〜第1086番目のアミノ酸配列からなるペプチド
Ripr 2-1:配列番号2の第108番目〜第287番目のアミノ酸配列からなるペプチド
Ripr 2-2:配列番号2の第288番目〜第467番目のアミノ酸配列からなるペプチド
Ripr 2-3:配列番号2の第468番目〜第647番目のアミノ酸配列からなるペプチド
Ripr 2-4:配列番号2の第648番目〜第830番目のアミノ酸配列からなるペプチド(配列番号8)
Ripr 2-5:配列番号2の第831番目〜第1007番目のアミノ酸配列からなるペプチド
Ripr1-5
CDLSCPSNKVCVIENGKQTCKCSERFVLENGVCICANDYKMEDGINCIAKNKCKRKEYENICTNPNEMCAYNEETDIVKCECKEHYYRSSRGECILNDYCKDINCKENEECSIVNFKPECVCKENLKKNNKGECIYENSCLINEGNCPKDSKCIYREYKPHECVCNKQGHVAVNGKCVLEDKCVHNKKCSENSICVNVMNKEPICVCTYNYYKKD(配列番号4)
Ripr2-4
STCYGNRFNYDCFCDNPYISKYGNKLCERPNDCESVLCSQNQVCQILPNDKLICQCEEGYKNVKGKCVPDNKCDLSCPSNKVCVIENGKQTCKCSERFVLENGVCICANDYKMEDGINCIAKNKCKRKEYENICTNPNEMCAYNEETDIVKCECKEHYYRSSRGECILNDYCKDINCKENEEC(配列番号8)
バキュロウイルスにコドン改変したRipr1-5コード配列(配列番号10)のN末端にGp67分泌シグナル、C末端にHisタグを付加した配列を組み込んだpFastBac1ベクターをサブクローニングした。この発現ベクターとDH10Bacコンピテントセルを用いて、組換えバクミドを作製した。次いで、組換えバクミドをCellfectin II試薬によりSf9昆虫細胞へトランスフェクションし、バキュロウイルスを作製し、増幅した。この組換えバキュロウイルスをSf9昆虫細胞に感染させ、Ripr1-5を発現させた。培養上清を回収し、Ni-NTAアフィニティーカラムおよびSuperdex 200ゲルろ過カラムを用いてRipr1-5を精製した。
配列番号4:配列番号2の第720番目〜第934番目のアミノ酸配列
配列番号5:配列番号2の第21番目〜第1086番目のアミノ酸配列をコードするコムギコドン配列
配列番号6:配列番号2の第720番目〜第934番目のアミノ酸配列をコードするコムギコドン配列
配列番号7:配列番号2の第648番目〜第830番目のアミノ酸配列をコードする核酸配列
配列番号8:配列番号2の第648番目〜第830番目のアミノ酸配列
配列番号9:配列番号2の第648番目〜第830番目のアミノ酸配列をコードするコムギコドン配列
配列番号10:配列番号2の第720番目〜第934番目のアミノ酸配列をコードするバキュロウイルスコドン配列
Claims (16)
- 以下のいずれかのアミノ酸配列からなるポリペプチド:
(a)配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列、
(b)配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列において1〜10個、好ましくは1〜5個、更に好ましくは1、2もしくは3個のアミノ酸が置換、欠失、付加又は挿入されたアミノ酸配列、及び
(c)配列番号4又は配列番号8で示されるアミノ酸配列と95%以上、更に好ましくは97%以上、より好ましくは99%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列。 - 請求項1に記載のポリペプチドが担体と連結されてなるポリペプチド。
- 担体が、ウイルス粒子、脂質粒子、もしくは担体蛋白質である、請求項2に記載のポリペプチド。
- マラリアワクチン抗原として使用するための、請求項1〜3のいずれか一項に記載のポリペプチド。
- 請求項1〜4のいずれか一項に記載のポリペプチドを含む、マラリアワクチン。
- 更に、CSP、TRAP、MSP1、AMA−1、SERA5、GAMA、EBA175、RH5、Pfs25及びPfs230から選択される少なくとも一つのマラリアワクチン抗原を含む、又は前記少なくとも一つのマラリアワクチン抗原と併用して投与される、請求項5に記載のマラリアワクチン。
- 更に、ポリオ、ジフテリア、百日咳及び破傷風から選択される少なくとも一つの感染症に対するワクチン抗原を含む、又は前記少なくとも一つのワクチン抗原と併用して投与される、請求項5又は6に記載のマラリアワクチン。
- マラリア原虫の感染予防、マラリア原虫感染後の発症予防、又はマラリア感染症の治療のための請求項5〜7のいずれか一項に記載のマラリアワクチン。
- 請求項1に記載のポリペプチドをコードする核酸配列からなるポリヌクレオチド。
- 請求項9に記載のポリヌクレオチドが、宿主細胞における発現を可能にするプロモーター及び/又は調節エレメントに連結されてなる、ポリヌクレオチド。
- 請求項9又は10に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
- 請求項9もしくは10に記載のポリヌクレオチド、又は請求項11に記載の発現ベクターを含むマラリアワクチン。
- 請求項11に記載のベクターにより形質転換された組換え宿主細胞。
- 細菌、酵母、昆虫細胞、または哺乳動物細胞である、請求項13に記載の宿主細胞。
- 請求項1に記載のポリペプチドを特異的に認識する抗体。
- 請求項1〜4のいずれかに記載のポリペプチド、請求項9もしくは10に記載のポリヌクレオチド、請求項11に記載の発現ベクター、又は請求項15に記載の抗体を有効成分として含有する医薬組成物。
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