JPWO2017138457A1 - 高リスク前立腺癌の検出方法、バイオマーカー及び診断薬 - Google Patents

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Abstract

【課題】ＰＳＡ検査での検査陽性患者に生検の必要性等の有用な情報を提供するために、高リスク前立腺癌の検出方法を提供する。
【解決手段】本発明の高リスク前立腺癌の検出方法は、前立腺癌が疑われるヒトから採取された尿からなる検体に含まれるＰＳＡに、（１）α１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以上（２５℃において）で示される親和性を有するという特性を持つフコースα１→６親和性レクチンを作用させることを含む。フコースα１→６親和性レクチンは、さらに（２）α１→６フコースを含まない糖鎖Ｎｏ．００３及びα１→６フコースを含まない糖脂質系糖鎖Ｎｏ．９０９に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以下（２５℃において）という特性を兼ね備えたフコースα１→６特異的レクチンであることが好ましい。
【選択図】図３

Description

本発明は、高リスク前立腺癌の検出方法、バイオマーカー及び診断薬に関し、より詳細には、レクチンを用いた前記検出方法、バイオマーカー及び診断薬に関する。
前立腺は、男性の膀胱の真下に尿道を取り囲むように存在する生殖器である。前立腺に発生する癌は、近年、増加している。罹患数やＰＳＡ検診数も増加傾向にあり、２０１５年の統計では患者数が男性では第一位である。
前立腺特異抗原（Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ、以下、「ＰＳＡ」という）は、前立腺に特異的に存在する抗原である。ＰＳＡには、プロテアーゼインヒビターであるα１−アンチキモトリプシン（ＡＣＴ）と結合して複合体を形成したコンプレックスＰＳＡ（ｐｒｏｓｔａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ−α１−ａｎｔｉｃｈｙｍｏｔｒｉｐｓｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ 、以下「ＰＳＡ−ＡＣＴ」ともいう）と、遊離型ＰＳＡとがある。ＰＳＡは、本明細書において、コンプレックスＰＳＡ及び遊離型ＰＳＡの合計を意味する。また、遊離型ＰＳＡを「ｆＰＳＡ」又は「フリーＰＳＡ」と呼ぶ。
健常なヒトの血中ＰＳＡ検査値（以下、血中ＰＳＡ値という）は、加齢とともに上昇するが、一般に、４ｎｇ／ｍＬ未満とされる。４ｎｇ／ｍＬ以上の異常高値が測定された場合は、前立腺癌が疑われ、泌尿器科医が前立腺癌を早期発見するきっかけとなる。
ＰＳＡ検査によってＰＳＡ異常値を示した前立腺癌が疑われる群は、確定診断を行うために、前立腺の生検を行う対象（検査陽性）となる。この生検法は、前立腺癌の悪性度や重症度（病期又は進行度）を示すリスク分類を得るための指標を提供する。リスク分類は、血中ＰＳＡ値、グリソンスコア、及び病期分類（ＴＮＭ分類）の３つの因子を組み合わせて総合的に判別される。
グリソンスコア（以下、ＧＳともいう）とは、前立腺針生検で採取した組織を顕微鏡で検査した際に、癌の悪性度を判断する指標である。癌の組織学形態を組織の状況と浸潤の状況からＧ１〜Ｇ５のパターンに分類したものを基本とする（前立腺癌取扱い規約第４版）。パターンＧ１やＧ２では判断が困難なため、Ｇ３〜Ｇ５を使って評価する。以下の通りである。
グリソンパターン
Ｇ３：明瞭な管腔を有する独立腺管よりなる。既存の非腫瘍性腺管の間に浸潤する。
Ｇ４：癒合腺管、篩状腺管、ｈｙｐｅｒｎｅｈｒｏｍａｔｏｉｄ、不明瞭な腺管形成を示すもの
Ｇ５：充実性増殖、索状配列、弧在性増殖、面疱状壊死を示すもの
最も多い病変である優勢病変のパターン判定（Ｇ○）と２番目に多い病変である随伴病変のパターン判定（Ｇ△）をそれぞれ行い、その数値の合計をグリソンスコアとする（ＧＳ＝Ｇ○＋Ｇ△）。グリソンスコアが高いほど、癌の悪性度が高い。グリソンスコアと前立腺癌の悪性度との関係は、具体的には、以下のとおりである。
グリソンスコア
ＧＳ６：比較的進行の遅い高分化型の前立腺癌
ＧＳ７：悪性度が中等度の前立腺癌
ＧＳ８以上：悪性度の高い低分化の前立腺癌
グリソンスコアは、一般的に、ＧＳ６〜ＧＳ９の間で表されることが多い。ＧＳ６（＝Ｇ３＋Ｇ３）が最も低いスコアである。ＧＳ６の癌は、転移せず、何も治療せずに経過観察で様子をみるＡｃｔｉｖｅ ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ法を取っても、外科的手術や放射線治療による予後と変わらない。ＧＳ６を癌と呼ぶ必要はないという議論も存在する。米国では、ＧＳ６患者の半分程度がＡｃｔｉｖｅ ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ治療法により処置されている。日本では、ＧＳ６の癌に対しても外科的手術や放射線治療が行われている。
ＴＮＭ分類とは、病期分類を示す国際規格である。ＴＮM分類の区分と病期の関係を、表１に示す。
Figure 2017138457
ＧＳ７以上の前立腺癌は、進行し、また転移するため、外科的手術、放射線、ホルモン療法等の治療を早期に行う必要がある高リスク群である。米国では、ＰＳＡ検診は、ＧＳ６の進行しない癌も同様に検出してしまうため、推奨されておらず、日本でも厚生労働省の「がん検診の適切な方法とその評価法の確立に関する研究」班がＰＳＡ検診は、早期診断には有用であるが、死亡率を減少させる効果は証明されていないため、公的な費用で行う住民検診として実施することは勧められないと結論づけている。低リスク群に対しては経過観察による予後は、外科的手術、放射線、ホルモン療法等の治療と比べて同等であるため、今後は、血中ＰＳＡ値が高くＧＳ７以上であるならば、癌の治療を行なうという流れになると予測される。
現在の診療アルゴリズムでは、血中ＰＳＡ検査で異常高値が測定された場合、グリソンスコアやＴＮM分類に関する情報を得るために、前立腺の生検が必須となる。生検は、前立腺針を用いて前立腺癌が疑われる領域から組織を採取し、採取された組織や細胞を病理組織学的検査にかける診断方法である。
血中ＰＳＡ検査は、治療の必要ない前立腺癌（ＧＳ６）を検査陽性と判断してしまう。血中ＰＳＡ値は、加齢、前立腺の炎症、及び前立腺肥大症によっても上昇する。血中ＰＳＡ値が１０ｎｇ／ｍＬ以上では、前立腺癌の確率は５０％である。血中ＰＳＡ値が４〜１０ｎｇ／ｍＬにある場合、前立腺癌の確率は３０％に低下する。血中ＰＳＡ値が基準値異常の患者を生検した場合、前立腺癌細胞の検出とＧＳ７〜９に基づく前立腺癌の可能性が指摘される割合は３０％程度である。残りの７０％は、癌細胞非検出や、ＧＳ６以下の手術の必要のない前立腺癌である。健康診断や人間ドックで血中ＰＳＡ値が高いと指摘されても、前立腺癌であるとは限らず、現在の技術では前立腺癌の見極めは非常に難しい。
侵襲性の高い生検は、被験者にとって大きな負担となる。被験者に侵襲性の少ない簡易な生理検査方法の開発が望ましい。さらに、その検査方法には、グリソンスコアと相関を持ち、生検を行なう前にグリソンスコアを予見できることが望まれる。
ＰＳＡ糖鎖の癌性変化を報告した非特許文献１には、正常ＰＳＡには２本鎖のアスパラギン結合型糖鎖（Ｎ−グリカン）がほとんど含まれず、ハイブリッドタイプや高マンノースタイプが主体であるのに対して、前立腺癌由来のＰＳＡには末端にシアル酸がα２−３ で結合した分岐Ｎ−グリカンが多いことが記載されている。
非特許文献２には、血中ＰＳＡ検査値が４〜１０ｎｇ／ｍＬであった前立腺癌又は前立腺肥大症患者の血中ｆＰＳＡをα１−２フコースに親和性を有するＵＥＡ−１レクチンを用いたＥＬＬＡにより測定したところ、前立腺癌の患者のｆＰＳＡは、前立腺肥大症の患者に比べて有意に高いフコシル化が検出されたことが報告されている。
特許文献１には、フコースα１−２ガラクトース残基と親和性のあるレクチンと、ＰＳＡを含む可能性のある試料とを接触させ、前記レクチンに親和性のあるＰＳＡの量を判定することを特徴とする、ＰＳＡの分析方法が開示されている。特許文献１の方法によれば、前立腺癌患者の血液から採取された検体はα１−２フコシル化ＰＳＡが増大するという知見に基づいて、前立腺癌と前立腺肥大症とを鑑別できるとされる。
ＷＯ２０１０／０９０２６４Ａ１（ＰＳＡの分析方法、及び前記分析方法を用いた前立腺癌と前立腺肥大症との鑑別方法） 特許４５１４１６３（フコースα１→６特異的レクチン） 特開２０１１−１４８７３６（ペプチド） 特開２０１１−１４８７３５（遺伝子）
Ｍ． Ｔａｊｉｒｉ ｅｔ ａｌ．， "Ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎ ｆｒｅｅ ａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｘｅｄ ｆｏｒｍｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｉｎ ｓｅｍｉｎａｌ ｐｌａｓｍａ： ａ ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅ ａｐｐｒｏａｃｈ．"， Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ． １８， Ｎｏ．１， ２００８， ｐ２−８ Ｍｅｒｉａｍ Ｖ．Ｄｗｅｋ ｅｔ ａｌ．， "Ａ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｓｓａｙ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｆｕｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ （ＰＳＡ） ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｂｅｎｉｇｎ ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ"， Ｃｌｉｎｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ， ４１， （２０１０）， ｐ１９３５−１９３９ Ｙｕｋａ Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，"Ａ Ｎｏｖｅｌ Ｃｏｒｅ Ｆｕｃｏｓｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｌｅｃｔｉｎ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｍｕｓｈｒｏｏｍ Ｐｈｏｌｉｏｔａ ｓｑｕａｒｒｏｓａ"，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２０１２，２８７，ｐ３３９７３−３３９８２
本発明の目的は、血中ＰＳＡ検査による前立腺癌のスクリーニングにおいて、血中ＰＳＡ値が、通常、４ｎｇ／ｍＬ以上と測定されたために前立腺癌が疑われた被験者や患者に対して、前立腺の生検実施前に生検の必要性等の有用な情報を提供する方法を提供することにある。さらに、血中ＰＳＡ値が、４ｎｇ／ｍＬ以上２０ｎｇ／ｍＬ未満、特に４ｎｇ／ｍＬ以上１０ｎｇ／ｍＬ以下と測定されたために前立腺癌であるか否か判別し難い患者や被験者（グレーゾーン）に対して、生検実施の必要性を判断する指標を提供する方法を提供することにある。
本発明者等は、上記課題を鋭意検討したところ、α１→６フコース糖鎖に結合するレクチンを尿中のＰＳＡという特定の対象に作用させると、意外にも、ＰＳＡ−レクチン複合体の検出レべルが前立腺癌の悪性度の進行に従って低下することを発見した。この知見に基づけば上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、前立腺癌が疑われるヒトから採取された尿からなる検体に含まれるＰＳＡに、α１→６フコース糖鎖に結合するレクチンを作用させることを含む高リスク前立腺癌の検出方法であって、前記レクチンが、以下の特性：
（１）下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、及びＦｕｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、及びフコースを意味する〕
を有するα１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以上（２５℃において）を有する、
を持つことを特徴とする、前記高リスク前立腺癌の検出方法を提供する。α１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５の構造は、図１に示される。上記（１）の特性を有するレクチンを、「フコースα１→６親和性レクチン」ということがある。
「前立腺癌が疑われるヒト」とは、本明細書において、血中ＰＳＡ値が健常者よりも異常に高い数値を示す者を意味する。「血中ＰＳＡ値」は、血液を用いた汎用の測定方法に従って測定されるＰＳＡ−ＡＣＴとｆＰＳＡとの合計（トータルＰＳＡ）を意味する。「高リスク前立腺癌」は、進行性前立腺癌を意味する。より、具体的には、例えばグリソンスコアを評価した場合に、グリソンスコアが７以上となる者を意味する。
非特許文献１〜２や特許文献１に開示の方法は、α１→６フコースの結合したＰＳＡを検出していない点で本発明の検出方法と明確に異なる。また、本発明の方法の検査対象は、「尿中のＰＳＡ」であることが重要である。従来技術の方法は、尿中のＰＳＡを対象としたものでもない。
本発明の検出方法では、例えば前記レクチンとＰＳＡとの反応によるシグナルが、グリソンスコア６の者から得られているシグナル（参照値）と比べて低い場合に、前記ヒトでの高リスク前立腺癌が示唆される。
前記検体の第一候補は、血中ＰＳＡ値が４ｎｇ／ｍＬ以上のヒトの尿である。血中ＰＳＡ値が４ｎｇ／ｍＬ以上の検体は、前立腺癌の発症が疑われる。
前記検体の第二候補は、血中ＰＳＡ値が２０ｎｇ／ｍＬ未満のヒトの尿である。上記範囲の血中ＰＳＡ値を有する患者は、前立腺の生検の検査陽性となるが、前立腺癌でない可能性の高いグレーゾーンの患者である。
前記ＰＳＡは、遊離型ＰＳＡ（ｆＰＳＡ）であることが好ましい。
前記レクチンは、さらに、以下の特性：
（２）下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、ＧｌｃＮＡｃ、及びＭａｎは、それぞれ、Ｎ−アセチルグルコサミン、及びマンノースを意味する〕
を有するα１→６フコースを含まない糖鎖Ｎｏ．００３、及び下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃ、及びＮｅｕ５Ａｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、フコース、及びＮ−アセチルノイラミン酸を意味する〕
を有するα１→６フコースを含まない糖脂質系糖鎖Ｎｏ．９０９に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以下（２５℃において）を有する、
を持つことが好ましい。前記糖鎖Ｎｏ．００３の構造は図１に示され、前記糖鎖Ｎｏ．９０９の構造は図２に示される。（１）に加えて（２）の特性を兼ね備えるレクチンは、（１）のみの特性を有するレクチンよりも、特異的にα１→６フコース糖鎖と結合する。上記（１）及び（２）の特性を有するレクチンを、以下、「フコースα１→６特異的レクチン」ということがある。
前記フコースα１→６特異的レクチンは、さらに、以下の特性：
（３）前記糖鎖Ｎｏ．４０５の非還元末端にシアル酸を有するα１→６フコース糖鎖に対して親和性を有する、
を持つことが好ましい。
前記フコースα１→６特異的レクチンは、さらに、以下の特性：
（４）α１→６フコースの結合したＮ結合型の一本鎖、二本鎖、三本鎖及び／又は四本鎖の糖鎖に対して結合定数（２５℃において）１．０×１０４Ｍ−１以上を有する、
を持つことが好ましい。
前記（１）の特性を有するフコースα１→６親和性レクチンとしては、例えばヒイロチャワンタケレクチン、麹菌レクチン、レンズマメレクチン、エンドウマメレクチン、スギタケレクチン、ツチスギタケレクチン、サケツバタケレクチン、クリタケレクチン、コムラサキシメジレクチン、及びベニテングタケレクチンである。
前記（１）に加えて、前記（２）の特性を有するフコースα１→６特異的レクチンは、例えばモエギタケ科、キシメジ科、テングタケ科又はタコウキン科に属する担子菌から抽出することができる。具体的には、前記（１）及び（２）の特性を有するフコースα１→６特異的レクチンは、例えばスギタケレクチン、ツチスギタケレクチン、サケツバタケレクチン、クリタケレクチン、コムラサキシメジレクチン、及びベニテングタケレクチンである。
前記レクチンは、標識されていることが好ましい。
本発明の検出方法は、前記レクチンと一種以上のレクチン又は抗体を用いて、ＰＳＡを検出することが好ましい。さらに、前記レクチンと抗ＰＳＡ抗体とを用いたアッセイにより、ＰＳＡを検出することが好ましい。
前記抗ＰＳＡ抗体が抗遊離型ＰＳＡ抗体（抗ｆＰＳＡ抗体）であり、そして前記ＰＳＡが遊離型ＰＳＡ（ｆＰＳＡ）であることが好ましい。
本発明はまた、ＰＳＡからなる高リスク前立腺癌診断用バイオマーカーであって、前記ＰＳＡが、以下の特性：
（１）下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、及びＦｕｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、及びフコースを意味する〕
を有するα１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以上（２５℃において）で示される親和性を有する
を持ったα１→６フコース糖鎖に結合するレクチンで識別可能であることを特徴とする、前記高リスク前立腺癌診断用バイオマーカーを提供する。このバイオマーカーは、血中ＰＳＡ値が高いために前立腺癌が疑われるヒトにおいて、前立腺癌の可能性が高いほど、尿中ＰＳＡ−レクチン複合体としての検出レベルが下がるという特徴を有する。
本発明は、また、ＰＳＡからなる高リスク前立腺癌診断用バイオマーカーであって、前記ＰＳＡが、
以下の特性：
（１）下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、及びＦｕｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、及びフコースを意味する〕
を有するα１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以上（２５℃において）で示される親和性を有する、及び
（２）下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、ＧｌｃＮＡｃ、及びＭａｎは、それぞれ、Ｎ−アセチルグルコサミン、及びマンノースを意味する〕
を有するα１→６フコースを含まない糖鎖Ｎｏ．００３、及び下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃ、及びＮｅｕ５Ａｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、フコース、及びＮ−アセチルノイラミン酸を意味する〕
を有するα１→６フコースを含まない糖脂質系糖鎖Ｎｏ．９０９に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以下（２５℃において）を有する、
を持ったα１→６フコース糖鎖に結合するレクチンで識別可能であることを特徴とする、前記高リスク前立腺癌診断用バイオマーカーを提供する。このバイオマーカーは、血中ＰＳＡ値が高いために前立腺癌が疑われるヒトにおいて、前立腺癌の可能性が高いほど、尿中ＰＳＡ−レクチン複合体としての検出レベルが下がるという特徴を有する。
前記ＰＳＡは、前立腺癌が疑われるヒトから採取された尿からなる検体であることが望ましい。
本発明は、また、以下の特性：
（１）下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、及びＦｕｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、及びフコースを意味する〕
を有するα１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以上（２５℃において）で示される親和性を有する、
を持ったα１→６フコース糖鎖に結合するレクチンを含む高リスク前立腺癌検出用診断薬であって、
前立腺癌が疑われるヒトから採取された尿からなる検体に含まれるＰＳＡと前記レクチンと反応させることを特徴とする、前記高リスク前立腺癌検出用診断薬を提供する。
本発明は、また、以下の特性：
（１）下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、及びＦｕｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、及びフコースを意味する〕
を有するα１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以上（２５℃において）を有する、及び
（２）下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、ＧｌｃＮＡｃ、及びＭａｎは、それぞれ、Ｎ−アセチルグルコサミン、及びマンノースを意味する〕
を有するα１→６フコースを含まない糖鎖Ｎｏ．００３、及び下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃ、及びＮｅｕ５Ａｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、フコース、及びＮ−アセチルノイラミン酸を意味する〕
を有するα１→６フコースを含まない糖脂質系糖鎖Ｎｏ．９０９に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以下（２５℃において）を有する、
を持ったα１→６フコース糖鎖に結合するレクチンを含む高リスク前立腺癌検出用診断薬であって、
前立腺癌が疑われるヒトから採取された尿からなる検体に含まれるＰＳＡと前記レクチンと反応させることを特徴とする、前記ハイリスク前立腺癌検出用診断薬を提供する。
本明細書において、「診断薬」という用語は、前記診断薬を含むキットの形態を含む意味で使用される。前立腺癌検出用診断薬は、さらに、抗ＰＳＡ抗体を含むことが好ましい。
高リスク前立腺癌検出用診断薬は、さらに、抗ＰＳＡ抗体を含むことが好ましい。
血中ＰＳＡ値が高いために前立腺癌が疑われるヒトにおいて、前立腺癌のリスク度（悪性度）が高いほど、尿中ＰＳＡ−レクチン複合体の検出レベルが低下する。尿中ＰＳＡ−レクチン複合体を検出する本発明の検出方法によれば、前立腺癌を高い確度で検出可能である。これは、後述の比較例に示されるように、抗ｆＰＳＡ抗体を用いても、高リスク前立腺癌を検出可能でないことと対称的である。
従来は、生検によりグリソンスコアを評価して、治療すべき患者を選抜していた。本発明の検出方法は、非侵襲性でありながら、本来治療すべき患者を適切に検出することを可能とする。本発明の方法は、また、検査陽性の患者に対して前立腺の生検実施に先立ち、前立腺癌有無について有用な情報を提供することも可能である。
従来のＰＳＡ検査は、血中ＰＳＡ値の測定が基本である。ＰＳＡは、血中にｎｇ／ｍＬという極微量レベルでしか存在しないため、前立腺癌の検出精度が低くなりやすい。また、血中ＰＳＡ値は前立腺肥大症や前立腺炎症等によっても上昇する点でも、検出精度が低い。また、血中ＰＳＡ値の評価では、悪性度の高い前立腺癌と悪性度の低い前立腺癌を区別することが困難である。一方、本発明の検出方法は、尿中ＰＳＡを検査対象とする。尿中には、ＰＳＡがμｇ／ｍＬオーダーで多量に存在し、その９０％以上がｆＰＳＡである。尿中ＰＳＡを検出する本発明の検出方法の測定精度は、血中ＰＳＡ検査よりも格段に高くなる。
血中ＰＳＡ値がグレーゾーンの患者にとっては、前記検出レベルの高低が生検実施の必要性を判断する指標となる。また、血中ＰＳＡ値が基準値より明らかに高い患者にとっては、前記検出レベルの高低が悪性度の判別の指標となる。
α１→６フコースオリゴ糖及び非α１→６フコースオリゴ糖の構造図である。 α１→６フコースオリゴ糖及び非α１→６フコースオリゴ糖の別の構造図である。 実施例１及び２並びに比較例１及び２の結果から作成したＲＯＣ曲線である。 実施例３及び４並びに比較例３及び４の結果から作成したＲＯＣ曲線である。
以下に、本発明の実施の形態をより詳細に説明する。本発明の高リスク前立腺癌の検出方法は、前立腺癌が疑われるヒトから採取された尿からなる検体に含まれるＰＳＡにα１→６フコース糖鎖に結合するレクチンを作用させることを含む。
本発明の検出方法の対象の第一候補は、ＰＳＡ検査で血中ＰＳＡ値が４ｎｇ／ｍＬ以上のヒトである。通常、血中ＰＳＡ値が４ｎｇ／ｍＬ以上であると、前立腺癌が疑われ、検査陽性となる。検査陽性の患者には、ＧＳ６のように治療の必要のない患者や、ＧＳ７〜８のように癌が進行した患者が含まれる。このようなヒトの尿中ＰＳＡを本発明の方法によって測定すると、前立腺癌の進行度に従って、ＰＳＡ−レクチン複合体の検出レベルが低下する。本発明の方法は、検出レベルに基づいて、生検を必要とするか判断する材料や患者の癌の悪性度に関する情報を提供可能である。特に、本発明の方法は、検査陽性の患者に対して前立腺の生検実施に先立ち、前立腺癌有無について有用な情報を提供可能である。
本発明の検出方法の対象の第二候補は、特に血中ＰＳＡ値が４ｎｇ／ｍＬ以上により検査陽性と診断され、血中ＰＳＡ値が２０ｎｇ／ｍＬ未満の患者である。このレベルの血中ＰＳＡ値を有する患者は、検査陽性であっても、前立腺癌でない可能性が高く、もしくは前立腺癌であってもＧＳ６で治療不要である可能性が高い。本発明の方法は、このような患者が生検を必要とするか判断する材料を提供可能である。
本発明の検出方法が測定するＰＳＡは、好ましくはｆＰＳＡである。血中ＰＳＡは、約８０％がＰＳＡ−ＡＣＴであり、約２０％がｆＰＳＡである。血中ＰＳＡ値は、ＰＳＡ−ＡＣＴとｆＰＳＡの合計（トータルＰＳＡ）を測定したものである。一方、尿中ＰＳＡは、９０％以上がｆＰＳＡである。血中ＰＳＡ検査は、大半を占めるＰＳＡ−ＡＣＴの挙動を調べるのに対して、本発明は、主要なｆＰＳＡの挙動を調べる点で、両者は明確に相違する。また、ヒトから採血した検体中のＰＳＡ−ＡＣＴ＋ｆＰＳＡ、ＰＳＡ−ＡＣＴ又はｆＰＳＡにα１→６フコース糖鎖に結合するレクチンを作用させても、血清不純物によってノイズが高いなどの問題がある。
本発明の第一の対象への検出方法に使用するフコースα１→６親和性レクチンは、α１→６フコース糖鎖に対して結合する（すなわち、親和性を有する）レクチンである。
このようなフコースα１→６親和性レクチンは、以下の特性：
（１）下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、及びＦｕｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、及びフコースを意味する〕
を有するα１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以上（２５℃において）で示される親和性を有する、
で定義される。α１→６フコースオリゴ糖及び非α１→６フコースオリゴ糖の構造図を図１及び２に示す。図１及び２において、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｇｌｃ、ＧａｌＮＡｃ、Ｍａｎ、Ｆｕｃ、Ｎｅｕ５Ａｃ、Ｎｅｕ５Ｇｃ、及びＸｙｌは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、グルコース、Ｎ−アセチルガラクトサミン、マンノース、フコース、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、及びキシロースを意味する。
前記フコースα１→６親和性レクチンの例としては、ヒイロチャワンタケレクチン（ＡＡＬ）、麹菌レクチン（ＡＯＬ）、レンズマメレクチン（ＬＣL）、エンドウマメレクチン（ＰＳL）、スギタケレクチン（ＰｈｏＳＬ）、ツチスギタケレクチン（ＰＴＬ）、サケツバタケレクチン（ＳＲＬ）、クリタケレクチン（ＮＳＬ）、コムラサキシメジレクチン（ＬＳＬ）、ベニテングタケレクチン（ＡＭＬ）等が挙げられる。
本発明の検出方法の対象の第一又は第二の候補には、グレーゾーンのリスク群が含まれる。グレーゾーンの候補を対象とする場合、使用するレクチンは、α１→６フコース糖鎖に対して高い親和性を有するだけでなく、特異的にα１→６フコース糖鎖と結合するレクチン（フコースα１→６特異的レクチン）であることが好ましい。
上記フコースα１→６特異的レクチンは、（１）α１→６フコース糖鎖に対する結合定数の下限と、（２）α１→６フコースを含まない糖鎖及びα１→６フコースを含まない糖脂質系糖鎖に対する結合定数の上限によって定義可能である。より具体的には、α１→６フコース特異的レクチンは、以下の特性：
（１）下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、及びＦｕｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、及びフコースを意味する〕
を有するα１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以上（２５℃において）で示される親和性を有する、及び
（２）下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、ＧｌｃＮＡｃ、及びＭａｎは、それぞれ、Ｎ−アセチルグルコサミン、及びマンノースを意味する〕
を有するα１→６フコースを含まない糖鎖Ｎｏ．００３、及び下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃ、及びＮｅｕ５Ａｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、フコース、及びＮ−アセチルノイラミン酸を意味する〕
を有するα１→６フコースを含まない糖脂質系糖鎖Ｎｏ．９０９に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以下（２５℃において）である
で定義される。
前記結合定数は、本明細書において、例えばフロンタルアフィニティクロマトグラフィー（ＦＡＣ法）を用い、分析温度２５℃において測定される数値を意味する。ＦＡＣ法の詳細は、例えば、本出願人の出願した特許文献２に記載されている。
前記レクチンのα１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対する結合定数（２５℃において）は、好ましくは５．０×１０４Ｍ−１以上、より好ましくは１．０×１０５Ｍ−１以上、さらに好ましくは２．０×１０５Ｍ−１以上である。
前記α１→６フコースを含まない糖鎖Ｎｏ．００３及びα１→６フコースを含まない糖脂質系糖鎖Ｎｏ．９０９に対する結合定数（２５℃において）は、通常、１．０×１０３Ｍ−１以下であり、好ましくは１．０×１０２Ｍ−１以下、特に好ましくは０であることを意味する。
前記フコースα１→６特異的レクチンは、さらに糖鎖Ｎｏ．４０５の非還元末端にシアル酸を有するα１→６フコース糖鎖に対しても高い親和性を有してもよい。高い親和性とは、結合定数（２５℃において）が、好ましくは１．０×１０４Ｍ−１以上、より好ましくは５．０×１０４Ｍ−１以上、さらに好ましくは１．０×１０５Ｍ−１以上を意味する。一方、従来のレクチンは、非還元末端にシアル酸を有するα１→６フコース糖鎖に対して親和性が低いものもある。ここで低い親和性とは、結合定数（２５℃において）が１．０×１０３Ｍ−１以下を意味する。
前記フコースα１→６特異的レクチンは、さらにα１→６フコースの結合したＮ結合型の一本鎖、二本鎖、三本鎖及び／又は四本鎖の糖鎖に対する結合定数（２５℃において）が、好ましくは１．０×１０４Ｍ−１以上、より好ましくは５．０×１０４Ｍ−１以上、さらに好ましくは１．０×１０５Ｍ−１以上で示される親和性を有する。
前記フコースα１→６特異的レクチンのＳＤＳ電気泳動法による分子量は、通常、４，０００〜４０，０００であり、好ましくは４，０００〜２０，０００である。ここで、ＳＤＳ電気泳動法による分子量は、例えばＬａｅｍｍｉの方法（Ｎａｔｕｒｅ，２２７巻，６８０頁，１９７６年）に準じて測定されるものである。前記レクチンは、サブユニットが、通常、２〜１０個、好ましくは２〜６個、さらに好ましくは２〜３個結合したものでもよい。
天然物から取得するフコースα１→６特異的レクチンを概説する。上記天然物は、例えば担子菌、子嚢菌等のキノコである。モエギタケ科、キシメジ科、タコウキン科及びテングタケ科は、担子菌に属している。モエギタケ科としては、スギタケ、ツチスギタケ、サケツバタケ、クリタケ、ヌメリスギタケモドキ、ヌメリスギタケ等が挙げられる。キシメジ科としては、コムラサキシメジ等が挙げられる。タコウキン科としては、シロハカワラタケ、ツヤウチワタケ等が挙げられる。テングタケ科としては、ベニテングタケ等が挙げられる。
これらの担子菌又は子嚢菌のうち、フコースα１→６特異的レクチンのα１→６フコース糖鎖認識特異性とレクチンの回収効率の観点から、モエギタケ科、キシメジ科又はテングタケ科が特に好ましい。特に好ましくは、スギタケレクチン（ＰｈｏＳＬ）、ツチスギタケレクチン（ＰＴＬ）、サケツバタケレクチン（ＳＲＬ）、クリタケレクチン（ＮＳＬ）、コムラサキシメジレクチン（ＬＳＬ）、及びベニテングタケレクチン（ＡＭＬ）である。表２に、ＰｈｏＳＬ、ＳＲＬ、ＬＳＬ及びＮＳＬのアミノ酸配列を示す。
Figure 2017138457
配列番号１に示すＰｈｏＳＬは、スギタケから抽出することのできるレクチンである。配列番号１の第１０及び１７番目のＸａａは、任意のアミノ酸残基であってよいが、好ましくはＣｙｓである。第２０、２３、２７、３３、３５及び３９番目のＸａａは、それぞれ、Ｔｙｒ／Ｓｅｒ、Ｐｈｅ／Ｔｙｒ、Ａｒｇ／Ｌｙｓ／Ａｓｎ、Ａｓｐ／Ｇｌｙ／Ｓｅｒ、Ａｓｎ／Ａｌａ、及び、Ｔｈｒ／Ｇｌｎである。
配列番号２に示すＳＲＬは、サケツバタケから抽出することのできるレクチンである。配列番号２の第１０及び１７番目のＸａａは、任意のアミノ酸残基であってよいが、好ましくはＣｙｓである。第４、７、９、１３、２０、２７、２９、３３、３４及び３９番目のＸａａは、それぞれ、Ｐｒｏ／Ｇｌｙ、Ｇｌｕ／Ｌｙｓ、Ｖａｌ／Ａｓｐ、Ａｓｎ／Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｈｉｓ／Ｓｅｒ、Ｌｙｓ／Ｈｉｓ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ、Ｇｌｙ／Ａｓｎ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、及び、Ａｒｇ／Ｔｈｒである。
配列番号３に示すＬＳＬは、コムラサキシメジから抽出することのできるレクチンである。配列番号３の第１０及び１７番目のＸａａは、任意のアミノ酸残基であってよいが、好ましくはＣｙｓである。第１、４、７、８、９、１３、１６、２０、２２、２５、２７、３１及び３４番目のＸａａは、それぞれ、Ａｌａ／Ｇｌｎ、Ｐｒｏ／Ｌｙｓ、Ａｌａ／Ｓｅｒ、Ｍｅｔ／Ｉｌｅ／Ｖａｌ、Ｔｙｒ／Ｔｈｒ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｌｙｓ／Ｇｌｕ、Ａｌａ／Ａｓｎ、Ｖａｌ／Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ａｒｇ／Ｈｉｓ／Ａｓｎ、Ｇｌｎ／Ａｒｇ、及び、Ｔｈｒ／Ｖａｌである。
配列番号４に示すＮＳＬは、クリタケから抽出することのできるレクチンである。配列番号４の第１０及び１７番目のＸａａは、任意のアミノ酸残基であってよいが、好ましくはＣｙｓである。第１３、１４及び１６番目のＸａａは、それぞれ、Ａｓｐ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｌａ、及び、Ｇｌｎ／Ｌｙｓである。
配列番号５に示すＮＳＬもまた、クリタケから抽出することのできるレクチンである。配列番号５の第１０及び１８番目のＸａａは、任意のアミノ酸残基であってよいが、好ましくはＣｙｓである。第１４、１５及び１７番目のＸａａは、それぞれ、Ａｓｐ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｌａ、及び、Ｇｌｎ／Ｌｙｓである。なお、配列番号５は、配列番号４のペプチド中に１個のＡｓｎが挿入され、さらに、Ｃ末端に複数のアミノ酸が付加した変異体ともいえる。
フコースα１→６特異的レクチンは、（ａ）配列番号１〜５のいずれかに示すアミノ酸配列からなるタンパク質又はペプチドの他に、（ｂ）配列番号１〜５のいずれかに示すアミノ酸配列において、１又は複数のアミノ酸が欠失、挿入又は置換され、かつ、配列番号１〜５のいずれかに示すアミノ酸配列を有するタンパク質又はペプチドと機能的に同等なタンパク質又はペプチドであってもよい。
ここで、「機能的に同等」とは、α１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対して結合定数（２５℃において）が１．０×１０４Ｍ−１以上であり、好ましくは５．０×１０４Ｍ−１以上であり、より好ましくは１．０×１０５Ｍ−１以上、さらに好ましくは２．０×１０５Ｍ−１以上で示される親和性を有することを意味する。配列番号４に示すアミノ酸配列からなるタンパク質又はペプチドの変異体の一例が、配列番号５に示すアミノ酸配列からなるタンパク質又はペプチドである。
フコースα１→６特異的レクチンは、天然物から抽出及び／又は精製することができる。天然物由来のフコースα１→６特異的レクチンの入手方法は、本出願人の出願した特許文献２、及び本出願人の投稿した非特許文献３に詳細に記載されている。なお、特許文献２に記載のツチスギタケレクチン（ＰＴＬ）をスギタケレクチン（ＰｈｏＳＬ）と読み替える。
具体的には、水系媒体を抽出溶媒として用いて、担子菌及び／又は子嚢菌の水系媒体抽出物を得る工程を含む。これらの担子菌及び／又は子嚢菌の使用部位は、子実体であることが好ましい。この前記抽出物から、ＳＤＳ電気泳動法による分子量が、通常、４，０００〜４０，０００、好ましくは４，０００〜２０，０００、及びα１→６フコース糖鎖に対する結合定数（２５℃において）が、通常、１．０×１０４Ｍ−１以上、好ましくは５．０×１０４Ｍ−１以上、より好ましくは１．０×１０５Ｍ−１以上、さらに好ましくは２．０×１０５Ｍ−１以上で示される親和性を有するレクチンを得る。
フコースα１→６特異的レクチンは、また、上記天然物からの抽出の他に、天然由来のレクチンのアミノ酸配列に基づいて化学合成されたペプチドやタンパク質であってもよい。さらに、化学合成のペプチドやタンパク質は、天然由来のレクチンのアミノ酸配列中の１又は数個のアミノ酸がリジン及び／又はアルギニンで置換されかつ糖結合活性を有するペプチドであってもよい。その合成方法は、本出願人の出願した特許文献３に詳細に記載されている。
フコースα１→６特異的レクチンは、また、上記天然物からの抽出の他に、天然由来のレクチンのアミノ酸配列をコードする核酸を用いて天然由来とは異なる公知の宿主内で人工的に発現させたリコンビナントであってもよい。リコンビナントの発現方法は、特許文献４に詳細に記載されている。
フコースα１→６親和性レクチンであるＡＡＬ、ＡＯＬ、ＬＣＬ及びＰＳＬの各種糖鎖（図１〜２）に対する結合定数（２５℃において）を、表３〜６に示す。α１→６フコース特異的レクチンであるＰｈｏＳＬ、ＳＲＬ、ＮＳＬ及びＬＳＬの各種糖鎖に対する結合定数（２５℃において）もまた、表３〜６に示す。
Figure 2017138457
Figure 2017138457
Figure 2017138457
Figure 2017138457
フコースα１→６親和性レクチンのうち、ＡＡＬ及びＡＯＬは、フコースα１→６糖鎖（糖鎖Ｎｏ．０１５、２０１−２０３、４０１−４１８）に結合する一方、フコースα１→６を含まない糖脂質系糖鎖（糖鎖Ｎｏ．７１８、７２２、７２３、７２７、９０９、９１０、９３３）とも結合する。ＬＣＬ及びＰＳＬは、フコースα１→６糖鎖に結合するものの、α１→６フコースを含まない糖鎖（糖鎖Ｎｏ．００３、００５−０１４）にも結合する。一方、ＰｈｏＳＬ等のフコースα１→６特異的レクチンは、フコースα１→６糖鎖に確実に結合し、かつ、α１→６フコースを含まない糖鎖に全く結合しない。しかも、その結合定数（２５℃において）は、従来のレクチンよりも大きい（結合定数が１．０×１０４Ｍ−１以上）。さらに、フコースα１→６特異的レクチンは、フコースα１→６糖鎖にシアル酸が付加されていても、結合定数が下がらない（糖鎖Ｎｏ．６０１、６０２）。また、フコースα１→６特異的レクチンは、フコースα１→６糖鎖の三本鎖（糖鎖Ｎｏ．４０７−４１３）や四本鎖（糖鎖Ｎｏ．４１８）にも強く結合する。
本発明の検出方法は、具体的には、以下のステップ：
（Ａ）前立腺癌が疑われるヒトから採取された尿中のＰＳＡに前記α１→６フコース糖鎖に結合するレクチンと反応させ、ＰＳＡ−レクチン複合体を得る、及び
（Ｂ）前記ＰＳＡ−レクチン複合体を適宜の手段で検出する
を含む。
上記ステップ（Ａ）で得られたＰＳＡ−レクチン複合体をステップ（Ｂ）で検出するために、前記レクチンは、予め標識手段が組み込まれていることが好ましい。前記標識手段としては、特に制限なく、公知の標識化方法を適用することができ、例えば、放射性同位元素による標識化、標識化合物の結合等を挙げることができる。前記放射性同位元素としては、例えば１４Ｃ、３Ｈ及び３２Ｐが挙げられる。また、前記レクチンと結合する抗レクチン抗体を用いて検出してもよい。
前記標識化合物としては、例えば酵素標識（西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ等）、ビオチン標識、ジゴキシゲニン標識、蛍光標識（フロオレッセインイソチアシアナート、ＣｙＤｙｅ（登録商標）、４−アミノ安息香酸エチル（ＡＢＥＥ）、アミノピリジン、アロフィコシアニン、フィコエリスリン等）等を挙げることができる。これらの標識化合物は、常法によりレクチンと結合することができる。特に、ビオチン標識は、感度が高い点で好ましい。
上記方法において、前記レクチンと反応したα１→６フコース糖鎖を検出する手段は、特に制限されない。検出手段として、例えば、ＥＬＩＳＡ（直接吸着法、サンドウィッチ法、及び競合法）、レクチンアフィニティクロマトグラフィー、レクチン染色、レクチンチップ、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）法、凝集法、表面プラズモン共鳴法（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システム）、電気泳動、ビーズ等を使用可能である。いくつかの代表的な検出方法を、以下に概説する。
直接吸着ＥＬＩＳＡ法では、検体（尿）をプレートに添加して固定化する。次いで、ビオチン標識した前記レクチンを添加して、ＰＳＡと前記レクチンとを反応させる。２次標識化合物としてＨＲＰ（ホースラディッシュパーオキシダーゼ）標識ストレプトアビジン溶液を添加して、ビオチンとストレプトアビジンとを反応させる。次いで、ＨＲＰ用発色基質を加えて発色させ、発色強度を吸光光度計で測定する。予め、既知の濃度の糖鎖を含む標準試料によって検量線を作成しておけば、糖鎖の定量化も可能である。
サンドイッチＥＬＩＳＡ法では、ＰＳＡと親和性を有する一種以上のレクチンや抗体（例えば抗ｆＰＳＡ抗体）又はその断片をプレートに添加し固定化してから、検体（尿）を添加する。抗体は、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体のいずれでもよい。次いで、ビオチン標識した前記レクチンを添加して、尿中のＰＳＡと当該レクチンとを反応させる。この反応により、ＰＳＡと当該レクチンとの複合体が生成される。２次標識化合物としてＨＲＰ標識ストレプトアビジン溶液を添加して、ビオチンとストレプトアビジンとを反応させる。次いで、ＨＲＰ用発色基質を加えて発色させ、発色強度を吸光光度計で測定する。予め、既知の濃度の標準試料によって検量線を作成しておけば、α１→６フコース糖鎖の定量化も可能である。
レクチンアフィニティクロマトグラフィーは、担体に固定化されたレクチンが糖鎖と特異的に結合する性質を利用したアフィニティクロマトグラフィーである。ＨＰＬＣと組み合わせることでハイスループットを期待することができる。
レクチンの固定化担体としては、アガロース、デキストラン、セルロース、スターチ、ポリアクリルアミド等のゲル材が一般的である。これらには、市販のものを特に制限なく使用でき、例えばセファロース４Ｂやセファロース６Ｂ（共にＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）が挙げられる。レクチンクロマトグラフィーに用いるカラムとしては、マイクロプレートやナノウエルにレクチンを固定化したものも含まれる。
固定化するレクチンの濃度は、通常、０．００１〜１００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは０．０１〜２０ｍｇ／ｍＬである。担体がアガロースゲルの場合、それをＣＮＢｒ等で活性化してからレクチンとカップリングさせる。活性化スペーサーを導入したゲルにレクチンを固定化してもよい。さらには、ホルミル基を導入したゲルにレクチンを固定化してからＮａＣＮＢＨ３で還元してもよい。また、ＮＨＳ−セファロース（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）のような市販の活性化ゲルを使用してもよい。
検体（尿）をカラムに供与した後、洗浄の目的で緩衝液を流す。あるいは、緩衝液中に検体をカラムに供与する。緩衝液の一例は、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、グリシン緩衝液等であり、モル濃度が、通常、５〜５００ｍＭ、好ましくは１０〜５００ｍＭであり、ｐＨが、通常、４．０〜１０．０、好ましくは６．０〜９．０である。また、ＮａＣｌ含量が、通常、０〜０．５Ｍ、好ましくは０．１〜０．２Ｍであり、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２又はＭｎＣｌ２含量が、通常、０〜１０ｍＭ、好ましくは０〜５ｍＭの緩衝液である。
アフィニティカラムの洗浄後、糖鎖の溶出は、糖鎖を有効に溶出できる中性の非変性緩衝液中で、塩化ナトリウム、ハプテン糖等の脱着剤を用いて行われる。この緩衝液は、上記と同様であってもよい。脱着剤の濃度は、好ましくは、１〜５００ｍＭ、特に好ましくは１０〜２００ｍＭである。
ステップ（Ｂ）において、尿中のＰＳＡとレクチンとの複合体によるシグナル（反応値）を、グリソンスコア６以下、好ましくは６の患者で得られているシグナル（参照値）と比較することにより、高リスク前立腺癌の発症の有無や、発症の場合の悪性度を評価する。
尿中ＰＳＡとレクチンとの複合体によるシグナル（反応値）のレベルは、レクチンの種類と尿中ＰＳＡ濃度に依存する。そこで、ＰＳＡ標準品（濃度既知）を用いて、ＰＳＡ濃度とシグナル値との関係を表す検量線を作成することにより、シグナルを規格化することができる。各レクチンにおいて、抗ｆＰＳＡ抗体によるｆＰＳＡ濃度１０ｎｇ／ｍＬに対応する反応値を１０Ｕとする。
血中ＰＳＡ値が４ｎｇ／ｍＬ以上（検査陽性）である患者から採取した尿中ＰＳＡと前記フコースα１→６親和性レクチンとの反応値が、通常、１９７Ｕより低い場合、当該患者は、前立腺癌を発症している可能性が高い。逆に、前記反応値が、１９７Ｕ以上であれば、前記患者は前立腺肥大症又は前立腺炎症、若しくは精査・治療を要さない前立腺癌（ＧＳ６）に基づく血中ＰＳＡ値の上昇であると予測される。
血中ＰＳＡ値が４ｎｇ／ｍＬ以上（検査陽性）であるが、２０ｎｇ／ｍＬ未満、特に４ｎｇ／ｍＬ以上１０ｎｇ／ｍＬ以下であるグレーゾーンの患者から採取した尿中ＰＳＡと前記フコースα１→６親和性レクチンとの反応値が、通常、１９７Ｕより低い場合、当該患者は、前立腺癌を発症している可能性が高い。逆に、前記反応値が、１９７Ｕ以上であれば、前記患者は前立腺肥大症又は前立腺炎症、若しくは精査・治療を要さない前立腺癌（ＧＳ６）であると予測される。
血中ＰＳＡ値が４ｎｇ／ｍＬ以上（検査陽性）である患者から採取した尿中ＰＳＡと前記フコースα１→６特異的レクチンとの反応値が、通常、２７Ｕより低い場合、当該患者は、前立腺癌を発症している可能性が高い。逆に、前記反応値が、２７Ｕ以上であれば、前記患者は前立腺肥大症又は前立腺炎症、若しくは精査・治療を要さない前立腺癌（ＧＳ６）に基づく血中ＰＳＡ値の上昇であると予測される。
血中ＰＳＡ値が４ｎｇ／ｍＬ以上（検査陽性）であるが、２０ｎｇ／ｍＬ未満、特に４ｎｇ／ｍＬ以上１０ｎｇ／ｍＬ以下であるグレーゾーンの患者から採取した尿中ＰＳＡと前記フコースα１→６特異的レクチンとの反応値が、通常、２８Ｕより低い場合、当該患者は、前立腺癌を発症している可能性が高い。逆に、前記反応値が、２８Ｕ以上であれば、前記患者は前立腺肥大症又は前立腺炎症、若しくは精査・治療を要さない前立腺癌（ＧＳ６）であると予測される。
本発明は、また、ＰＳＡからなる高リスク前立腺癌診断用バイオマーカーであって、前記ＰＳＡが、
以下の特性：
（１）下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、及びＦｕｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、及びフコースを意味する〕
を有するα１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以上（２５℃において）で示される親和性を有する、
であるα１→６フコース糖鎖に結合するレクチン（フコースα１→６親和性レクチン）で識別可能であることを特徴とする、前記高リスク前立腺癌診断用バイオマーカーを提供する。前記ＰＳＡは前立腺癌が疑われるヒトから採取された尿からなる検体に含まれることが好ましい。本発明のバイオマーカーは、前立腺癌の可能性が高いほど、ＰＳＡ−レクチンからなる複合体の低い検出レベルを示す。
本発明は、また、ＰＳＡからなる高リスク前立腺癌診断用バイオマーカーであって、前記ＰＳＡが、
以下の特性：
（１）下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、及びＦｕｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、及びフコースを意味する〕
を有するα１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以上（２５℃において）で示される親和性を有する、及び
（２）下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、ＧｌｃＮＡｃ、及びＭａｎは、それぞれ、Ｎ−アセチルグルコサミン、及びマンノースを意味する〕
を有するα１→６フコースを含まない糖鎖Ｎｏ．００３、及び下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃ、及びＮｅｕ５Ａｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、フコース、及びＮ−アセチルノイラミン酸を意味する〕
を有するα１→６フコースを含まない糖脂質系糖鎖Ｎｏ．９０９に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以下（２５℃において）を有する、
を持ったα１→６フコース糖鎖に結合するレクチン（フコースα１→６特異的レクチン）で識別可能であることを特徴とする、前記高リスク前立腺癌診断用バイオマーカーを提供する。前記ＰＳＡは前立腺癌が疑われるヒトから採取された尿からなる検体に含まれることが好ましい。本発明のバイオマーカーは、前立腺癌の可能性が高いほど、ＰＳＡ−レクチンからなる複合体の低い検出レベルを示す。
本発明は、また、以下の特性：
（１）下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、及びＦｕｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、及びフコースを意味する〕
を有するα１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以上（２５℃において）で示される親和性を有する、
であるα１→６フコース糖鎖に結合するレクチン（フコースα１→６親和性レクチン）を含む前立腺癌検出用診断薬であって、
前立腺癌が疑われるヒトから採取された尿からなる検体に含まれるＰＳＡと前記レクチンと反応させることを特徴とする、前記高リスク前立腺癌検出用診断薬を提供する。
本発明は、また、以下の特性：
（１）下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、及びＦｕｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、及びフコースを意味する〕
を有するα１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以上（２５℃において）で示される親和性を有する、及び
（２）下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、ＧｌｃＮＡｃ、及びＭａｎは、それぞれ、Ｎ−アセチルグルコサミン、及びマンノースを意味する〕
を有するα１→６フコースを含まない糖鎖Ｎｏ．００３、及び下記構造式：
Figure 2017138457
 〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃ、及びＮｅｕ５Ａｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、フコース、及びＮ−アセチルノイラミン酸を意味する〕
を有するα１→６フコースを含まない糖脂質系糖鎖Ｎｏ．９０９に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以下（２５℃において）を有する、
を持ったα１→６フコース糖鎖に結合するレクチン（フコースα１→６特異的レクチン）を含む前立腺癌検出用診断薬であって、
前立腺癌が疑われるヒトから採取された尿からなる検体に含まれるＰＳＡと前記レクチンと反応させることを特徴とする、前記高リスク前立腺癌検出用診断薬を提供する。
前記診断薬は、適宜、各種の標識化合物、緩衝液、プレート、ビーズ、反応停止液等の検出キットに汎用のものを含んでもよい。該診断薬は、尿から取得した検体中に含まれるＰＳＡを抽出するための試薬（例えば、抗ＰＳＡ抗体や抗ｆＰＳＡ抗体又はその断片や類縁体）を含むことが好ましい。
以下に、本発明の実施例を示して、本発明をより詳細に説明する。しかし、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
［実施例１、比較例１〜３］
１．試料の準備
本発明の検出方法に使用する試薬を、以下の手順で用意した。
（１）固相化用抗ｆＰＳＡ抗体
固相化用抗ｆＰＳＡ抗体として、抗ｆＰＳＡ抗体は、ａｂｃａｍ社から購入し、非特許文献３に記載の方法に従って、抗体の糖鎖除去をしたものを使用した。
（２）標準品
検量線を作成するため、ｆＰＳＡ（標準品）をＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ社から入手した。
（３）検出用抗ｆＰＳＡ抗体
ビオチン標識抗ｆＰＳＡ抗体はＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ社から入手した。
（４）検出用レクチン
本発明の方法に用いるフコースα１→６特異的レクチンとして、スギタケからスギタケレクチン（ＰｈｏＳＬ、配列番号１）を非特許文献３に記載の方法に従って精製した。このスギタケレクチンを量り取り、０．１Ｍ 炭酸水素ナトリウム溶液を加え溶解した（濃度５ｍｇ／ｍＬ）。ジメチルスルホキシドに溶解したビオチン化試薬を、レクチン溶液に加えて反応させた。限外ろ過（３Ｋ）を用いて反応液を水に対して溶媒置換した。この液を凍結乾燥してビオチン標識ＰｈｏＳＬを得た。また、フコースα１→６親和性レクチンとして、ビオチン標識ヒイロチャワンタケレクチン（ビオチン標識ＡＡＬ、株式会社Ｊ−オイルミルズ社製）を用意した。
（５）使用する試薬等
（５−１）リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）
リン酸水素二ナトリウム５．７５ｇ、リン酸二水素カリウム１．０ｇ、塩化カリウム１．０ｇ、及び塩化ナトリウム４０．０ｇを水５Ｌに溶解して、ＰＢＳを得た。
（５−２）３％ ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）／ＰＢＳ
ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、シグマ・アルドリッチ社製）３ｇを１００ｍＬのＰＢＳに溶解して、濃度３％のＢＳＡのＰＢＳ溶液（以下、３％ＢＳＡ／ＰＢＳという）を得た。
（５−３）１％ ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）／ＰＢＳ
ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、シグマ・アルドリッチ社製）１ｇを１００ｍＬのＰＢＳに溶解して、濃度１％のＢＳＡのＰＢＳ溶液（以下、１％ＢＳＡ／ＰＢＳという）を得た。
（６）被験者試料
被験者試料として、大阪大学医学部付属病院で前立腺癌患者にインフォームドコンセントを行なった後、収集された尿を使用した。各検体には、患者の血中ＰＳＡ値及びグリソンスコアの情報が付記されていた。被験者試料の内容を表７に示す。
Figure 2017138457
Ｎｅｇａｔｉｖｅとは、血中ＰＳＡ値が高かったが、前立腺の生検で前立腺癌が見つからなかった群である。しかし、Ｎｅｇａｔｉｖｅであっても、生検の感度の問題から、５％〜３０％の確率で前立腺癌が含まれていると予想される。
２．サンドイッチＥＬＩＳＡの手順
（１）抗体固定化
糖鎖除去した抗ｆＰＳＡ抗体をＰＢＳで１μｇ／ｍＬに希釈した。この希釈液５０μＬを、ＥＬＩＳＡプレートの各ウェルに添加し、３７℃で１２時間放置後、添加液を廃棄した。
（２）洗浄
０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０（製品名：ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ナカライ社製）添加ＰＢＳ ２５０μＬを各ウェルに添加した後、添加液を廃棄した。この操作を合計３回繰り返した。
（３）ブロッキング
３％ ＢＳＡ／ＰＢＳ ２００μＬを各ウェルに添加して、３７℃で１時間放置後、添加液を廃棄した。
（４）洗浄
０．１％ Ｔｗｅｅ２０添加ＰＢＳ ２５０μＬを各ウェルに添加し、添加液を廃棄した。この操作を合計３回繰り返した。
（５）抗原抗体反応
被験者の尿５０μＬ、各ウェルに添加し、室温で１時間放置後、添加液を廃棄した。
（６）洗浄
０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０添加ＰＢＳ ２５０μＬを各ウェルに添加した後、添加液を廃棄した。この操作を合計３回繰り返した。
（７）抗ｆＰＳＡ抗体はたはレクチンの反応
ＰＢＳで濃度１μｇ／ｍＬに希釈されたビオチン標識抗ｆＰＳＡ抗体を５０μＬ、各ウェルに添加して、４℃で３０分間放置後、添加液を廃棄した。同様に、１％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液で濃度１μｇ／ｍＬに希釈されたビオチン標識ＰｈｏＳＬ又はビオチン標識AALを５０μＬ、各ウェルに添加して、４℃で３０分間放置後、添加液を廃棄した。
（８）洗浄
０．１％ Ｔｗｅｅ２０添加ＰＢＳ ２５０μＬを各ウェルに添加し、添加液を廃棄した。この操作を合計３回繰り返した。
（９）ＨＲＰ標識ストレプトアビジン反応
西洋ワサビペルオキジダーゼ（ＨＲＰ）標識ストレプトアビジン溶液（ベクター社製、濃度１μｇ／ｍＬ １％ＢＳＡ／ＰＢＳ）を５０μＬ、ウェルに添加し、室温で１時間放置後、添加液を廃棄した。
（１０）洗浄
０．１％ Ｔｗｅｅ２０添加ＰＢＳ ２５０μＬを各ウェルに添加し、添加液を廃棄した。この操作を合計３回繰り返した。
（１１）発色反応
ＨＲＰ用発色基質（製品名：ＴＭＢ、ＫＰＬ社製）を５０μＬ、各ウェルに添加し、室温で１５分間放置した。
（１２）反応停止
１Ｍ 硫酸を５０μＬ添加し、反応を停止させた。
（１３）吸光度測定
プレートリーダーを用いて波長４５０ｎｍ及び６３０ｎｍの吸光度（Ａｂ）を測定し、Ａｂ４５０からＡｂ６３０を引いた値を反応値（Ａｂ４５０−６３０）として求めた。
ユニットの算出を以下のようにおこなった。被験者の尿に変えて、標準品（ｆＰＳＡ）をＰＢＳで０〜４０ng/mlになるように調製し、ビオチン標識抗ｆＰＳＡ抗体でのシグナル（反応値）をプロットした検量線を作成した。
当該検量線で、ｆＰＳＡ濃度１０ｎｇ／ｍＬに対応する反応値（Ａｂ４５０−６３０）を算出した。ｆＰＳＡ濃度１０ｎｇ／ｍＬに対応するビオチン標識抗ｆＰＳＡ抗体の反応値（Ａｂ４５０−６３０）を１０Ｕとした。ビオチン標識ＰｈｏＳＬ又はビオチン標識ＡＡＬで検出した場合は、上記１０Uと同じ反応値（Ａｂ４５０−６３０）を１０Uとした。
Ｎｅｇａｔｉｖｅ及びＧＳ６群、並びにＧＳ７〜９群の二群における尿中ｆＰＳＡのＰｈｏＳＬ反応値、尿中ｆＰＳＡのＡＡＬ反応値、及び尿中ｆＰＳＡの抗ｆＰＳＡ抗体の反応値、並びに血中ＰＳＡ値（ＰＳＡ検査値）を、表８に示す。
尿中ｆＰＳＡとＰｈｏＳＬ又はＡＡＬとの反応性とグリソンスコアとの関係を、さらに検討した。グリソンスコアに基づく群分けと各群の測定人数、ＰｈｏＳＬ及びＡＡＬ反応値を表８に示す。比較のため、尿中ｆＰＳＡと抗ｆＰＳＡ抗体との反応値（比較例１）及び血中ＰＳＡ値（比較例２）を併記する。
Figure 2017138457
表８において、血中ＰＳＡ値は、グリソンスコアの上昇に伴い上昇する傾向があるものの、あまり有意ではない。尿中ｆＰＳＡと抗ｆＰＳＡ抗体との反応値は、グリソンスコアの上昇に伴い低下する傾向があるものの、あまり有意ではない。一方、ＰｈｏＳＬ及びＡＡＬ反応値は、グリソンスコアの上昇に伴い有意に低下する傾向を有する。特に、ＰｈｏＳＬ反応値は、明確に低下することが明らかとなった。
実施例１及び２のレクチン反応値を規格化すると、ＰｈｏＳＬ又はＡＡＬの反応値が２７Ｕ又は１９７Ｕである規格値以上であれば、グリソンスコアが低いことが予知される。よって、グレーゾーンのリスク群の患者の場合、レクチン反応値が規格値以上であれば、生検を行なわくてもよいことが示唆される。一方、レクチン反応値が規格値より低ければ、グリソンスコアが高いことが予知される。グレーゾーンのリスク群の患者の場合、レクチン反応値が規格値より低ければ、グリソンスコアが高く、詳細な診断のために前立腺の生検実施の必要性が示唆される。
上記結果から、ＲＯＣ曲線（Ｒｅｃｅｉｖｅｒ Ｏｐｅｒａｔｏｒａｔｉｎｇ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｃｕｒｖｅ、受信者動作特性曲線）を作成した。その結果を図３に示す。
ＲＯＣ曲線から得られたＡＵＣ（ＲＯＣ曲線下面積）を表９に示す。ＡＵＣは、０．５〜１．０の値を取り、１．０に近いほど、予測能・診断能が高い。
Figure 2017138457
 ＲＯＣ曲線の結果から、実施例１のＰｈｏＳＬと実施例２のＡＡＬが、比較例１の抗ｆＰＳＡ抗体と比べて前立腺癌検出の特異度が高く、特にＰｈｏＳＬの特異度が高いことがわかった。
［実施例３〜４、比較例３〜４］
実施例１及び２、並びに比較例１及び２の結果を、血中ＰＳＡ値が２０ｎｇ／ｍＬ未満（以下、「＜２０ｎｇ／ｍＬ」と記載する）の被験者に限定して整理した。Ｎｅｇａｔｉｖｅ及びＧＳ６群、並びにＧＳ７〜９群の二群（ただし血中ＰＳＡ値＜２０ｎｇ／ｍＬ）における尿中ｆＰＳＡのＰｈｏＳＬ反応値（実施例３）、尿中ｆＰＳＡのＡＡＬ反応値（実施例４）、及び尿中ｆＰＳＡの抗ｆＰＳＡ抗体反応値（比較例３）、並びに血中ＰＳＡ値（比較例４）を、表１０に示す。
血中ＰＳＡ値が陽性、かつ＜２０ｎｇ／ｍＬの群に限定して、尿中ｆＰＳＡとＰｈｏＳＬ又はＡＡＬとの反応性と、グリソンスコアとの関係を詳細に検討した。グリソンスコアにおける群分けと各群の対象人数、ＰｈｏＳＬ及びＡＡＬ反応値を表１０に示す。比較のため、各群の抗ｆＰＳＡ抗体反応値及び血中ＰＳＡ値も表１０に示す。
Figure 2017138457
表１０において、比較例４の血中ＰＳＡ値とグリソンスコアとの間には、相関関係が見つからなかった。比較例３の抗ｆＰＳＡ抗体反応値は、グリソンスコアが上昇するにつれて低下しているものの、有意差は見られない。一方、実施例３のＰｈｏＳＬ反応値及び実施例４のＡＡＬ反応値は、グリソンスコアの上昇に伴い有意に低下している。よって、検体を、血中ＰＳＡ値が４ｎｇ／ｍＬ以上（生検の検査陽性）、かつ２０ｎｇ／ｍＬ未満のグレーゾーン群に限定した場合にも、尿中ＰＳＡをα１→６フコース糖鎖に結合するレクチンで検出することが有効である。
ＰｈｏＳＬ反応値とＡＡＬ反応値とを比べると、ＰｈｏＳＬ反応値の方がＡＡＬ反応値よりも明確に区別できる。ＰｈｏＳＬのようなフコースα１→６特異的レクチンは、血中ＰＳＡ値で＜２０ｎｇ／ｍＬのグレーゾーン群に最も有効であるといえる。
実施例３及び４のレクチン反応値を規格化すると、ＰｈｏＳＬ又はＡＡＬの反応値が２８Ｕ又は１９７Ｕである規格値以上であれば、グリソンスコアが低いことが予知される。よって、グレーゾーンのリスク群の患者の場合、レクチン反応値が規格値以上であれば、生検を行なわなくてもよいことが示唆される。一方、レクチン反応値が規格値より低ければ、グリソンスコアが高いことが予知される。グレーゾーンのリスク群の患者の場合、レクチン反応値が規格値より低ければ、グリソンスコアが高く、詳細な診断のために前立腺の生検実施の必要性が示唆される。
血中ＰＳＡ値を２０ｎｇ／ｍＬ未満の群に限定した場合、ＰｈｏＳＬ（実施例３）及びＡＡＬ（実施例４）では、ＧＳ７〜９群の反応値が、Ｎｅｇａｔｉｖｅ及びＧＳ６群よりも低くなることがわかった。抗ｆＰＳＡ抗体（比較例３）及び血中ＰＳＡ（比較例４）では、そのような差は見られなかった。このことから、血中ＰＳＡ値が４ｎｇ／ｍＬ以上２０ｎｇ／ｍＬ未満のリスク群（グレーゾーンの患者）に対しては、尿中ｆＰＳＡに対するＰｈｏＳＬ又はＡＡＬの反応性を測定することで、前立腺の生検実施の必要性を判断する指標とすることができる。
上記結果に基づいて、ＲＯＣ曲線を作成した。その結果を図４に示す。また、ＲＯＣ曲線から得られたＡＵＣ（ＲＯＣ曲線下面積）を表１１に示す。
Figure 2017138457
表１１のＡＵＣから、前立腺癌検出の特異度は、実施例３の尿中ｆＰＳＡとＰｈｏＳＬとの反応値で最も高いことがわかる。
ＡＵＣに関して、実施例１と比較例２との差分（表９）と、実施例３と比較例４との差分（表１１）とを比べると、表１１の差分の方が大きい。このことから、ＰｈｏＳＬのようなフコースα１→６特異的レクチンは、血中ＰＳＡ値＜２０ｎｇ／ｍＬのグレーゾーンの患者に最も有効であるといえる。

Claims (23)

  1. 前立腺癌が疑われるヒトから採取された尿からなる検体に含まれるＰＳＡに、α１→６フコース糖鎖に結合するレクチンを作用させることを含む高リスク前立腺癌の検出方法であって、前記レクチンが、以下の特性：
    （１）下記構造式：
    Figure 2017138457
     〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、及びＦｕｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、及びフコースを意味する〕
    を有するα１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以上（２５℃において）を有する、
    を持つことを特徴とする、前記高リスク前立腺癌の検出方法。
  2. 前記ＰＳＡと前記レクチンとの反応によるシグナル（反応値）が、グリソンスコア６の者から得られているシグナル（参照値）と比べて低い場合に、前記ヒトでの高リスク前立腺癌が示唆される、請求項１に記載の高リスク前立腺癌の検出方法。
  3. 前記検体は、血中ＰＳＡ値が４ｎｇ／ｍＬ以上のヒトの尿であることを特徴とする、請求項１に記載の高リスク前立腺癌の検出方法。
  4. 前記検体は、血中ＰＳＡ値が２０ｎｇ／ｍＬ未満のヒトの尿であることを特徴とする、請求項３に記載の高リスク前立腺癌の検出方法。
  5. 前記ＰＳＡが遊離型ＰＳＡ（ｆＰＳＡ）である、請求項１に記載の高リスク前立腺癌の検出方法。
  6. 前記レクチンは、ヒイロチャワンタケレクチン、麹菌レクチン、レンズマメレクチン、エンドウマメレクチン、スギタケレクチン、ツチスギタケレクチン、サケツバタケレクチン、クリタケレクチン、コムラサキシメジレクチン、及びベニテングタケレクチンからなる群から選ばれる少なくとも一種である、請求項１に記載の高リスク前立腺癌の検出方法。
  7. 前記レクチンが、さらに、以下の特性：
    （２）下記構造式：
    Figure 2017138457
     〔式中、ＧｌｃＮＡｃ、及びＭａｎは、それぞれ、Ｎ−アセチルグルコサミン、及びマンノースを意味する〕
    を有するα１→６フコースを含まない糖鎖Ｎｏ．００３、及び下記構造式：
    Figure 2017138457
     〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃ、及びＮｅｕ５Ａｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、フコース、及びＮ−アセチルノイラミン酸を意味する〕
    を有するα１→６フコースを含まない糖脂質系糖鎖Ｎｏ．９０９に対して、結合定数１．０×１０４Ｍ−１以下（２５℃において）を有する、
    を持つことを特徴とする請求項１に記載の高リスク前立腺癌の検出方法。
  8. 前記レクチンが、さらに、以下の特性：
    （３）前記糖鎖Ｎｏ．４０５の非還元末端にシアル酸を有するα１→６フコース糖鎖に対して親和性を有する、
    を持つことを特徴とする、請求項７に記載の高リスク前立腺癌の検出方法。
  9. 前記レクチンが、さらに、以下の特性：
    （４）α１→６フコースの結合したＮ結合型の一本鎖、二本鎖、三本鎖及び／又は四本鎖糖鎖に対して結合定数（２５℃において）１．０×１０４Ｍ−１以上を有する、
    を持つことを特徴とする、請求項８に記載の高リスク前立腺癌の検出方法。
  10. 前記レクチンは、モエギタケ科、キシメジ科、テングタケ科又はタコウキン科に属する担子菌から抽出されたものである、請求項８に記載の高リスク前立腺癌の検出方法。
  11. 前記レクチンは、スギタケレクチン、ツチスギタケレクチン、サケツバタケレクチン、クリタケレクチン、コムラサキシメジレクチン、及びベニテングタケレクチンである、請求項１０に記載の高リスク前立腺癌の検出方法。
  12. 前記レクチンは、標識されていることを特徴とする、請求項１に記載の高リスク前立腺癌の検出方法。
  13. 前記レクチンと一種以上のレクチン又は抗体を用いて前記ＰＳＡを検出することを特徴とする、請求項１に記載の高リスク前立腺癌の検出方法。
  14. 前記レクチンと抗ＰＳＡ抗体とを用いたアッセイにより、前記ＰＳＡを検出することを特徴とする、請求項１３に記載の高リスク前立腺癌の検出方法。
  15. 前記抗ＰＳＡ抗体が抗遊離型ＰＳＡ抗体（抗ｆＰＳＡ抗体）であり、そして前記ＰＳＡが遊離型ＰＳＡ（ｆＰＳＡ）である、請求項１４に記載の高リスク前立腺癌の検出方法。
  16. ＰＳＡからなる高リスク前立腺癌診断用バイオマーカーであって、前記ＰＳＡが、
    以下の特性：
    （１）下記構造式：
    Figure 2017138457
     〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、及びＦｕｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、及びフコースを意味する〕
    を有するα１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以上（２５℃において）を有する、
    を持ったα１→６フコース糖鎖に結合するレクチンで識別可能であることを特徴とする、前記高リスク前立腺癌診断用バイオマーカー。
  17. ＰＳＡからなる高リスク前立腺癌診断用バイオマーカーであって、前記ＰＳＡが、以下の特性：
    （１）下記構造式：
    Figure 2017138457
     〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、及びＦｕｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、及びフコースを意味する〕
    を有するα１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以上（２５℃において）を有する、及び
    （２）下記構造式：
    Figure 2017138457
     〔式中、ＧｌｃＮＡｃ、及びＭａｎは、それぞれ、Ｎ−アセチルグルコサミン、及びマンノースを意味する〕
    を有するα１→６フコースを含まない糖鎖Ｎｏ．００３、及び下記構造式：
    Figure 2017138457
     〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃ、及びＮｅｕ５Ａｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、フコース、及びＮ−アセチルノイラミン酸を意味する〕
    を有するα１→６フコースを含まない糖脂質系糖鎖Ｎｏ．９０９に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以下（２５℃において）を有する、
    を持ったα１→６フコース糖鎖に結合するレクチンで識別可能であることを特徴とする、前記高リスク前立腺癌診断用バイオマーカー。
  18. 前記ＰＳＡが、前立腺癌が疑われるヒトから採取された尿からなる検体に含まれることである、請求項１６に記載の前記高リスク前立腺癌診断用バイオマーカー。
  19. 前記ＰＳＡが、前立腺癌が疑われるヒトから採取された尿からなる検体に含まれることである、請求項１７に記載の前記高リスク前立腺癌診断用バイオマーカー。
  20. 以下の特性：
    （１）下記構造式：
    Figure 2017138457
     〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、及びＦｕｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、及びフコースを意味する〕
    を有するα１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以上（２５℃において）で示される親和性を有する、
    を持ったα１→６フコース糖鎖に結合するレクチンを含む高リスク前立腺癌検出用診断薬であって、
    前立腺癌が疑われるヒトから採取された尿からなる検体に含まれるＰＳＡと前記レクチンと反応させることを特徴とする、前記高リスク前立腺癌検出用診断薬。
  21. 以下の特性：
    （１）下記構造式：
    Figure 2017138457
     〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｍａｎ、及びＦｕｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、及びフコースを意味する〕
    を有するα１→６フコース糖鎖Ｎｏ．４０５に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以上（２５℃において）を有する、及び
    （２）下記構造式：
    Figure 2017138457
     〔式中、ＧｌｃＮＡｃ、及びＭａｎは、それぞれ、Ｎ−アセチルグルコサミン、及びマンノースを意味する〕
    を有するα１→６フコースを含まない糖鎖Ｎｏ．００３、及び下記構造式：
    Figure 2017138457
     〔式中、Ｇａｌ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃ、及びＮｅｕ５Ａｃは、それぞれ、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、フコース、及びＮ−アセチルノイラミン酸を意味する〕
    を有するα１→６フコースを含まない糖脂質系糖鎖Ｎｏ．９０９に対して結合定数１．０×１０４Ｍ−１以下（２５℃において）を有する、
    を持ったα１→６フコース糖鎖に結合するレクチンを含む高リスク前立腺癌検出用診断薬であって、
    前立腺癌が疑われるヒトから採取された尿からなる検体に含まれるＰＳＡと前記レクチンと反応させることを特徴とする、前記高リスク前立腺癌検出用診断薬。
  22. さらに、抗ＰＳＡ抗体を含む、請求項２０に記載の高リスク前立腺癌検出用診断薬。
  23. さらに、抗ＰＳＡ抗体を含む、請求項２１に記載の高リスク前立腺癌検出用診断薬。
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20200264182A1 (en) * 2017-09-29 2020-08-20 J-Oil Mills, Inc. Method for detecting prostate cancer
WO2020013097A1 (ja) * 2018-07-11 2020-01-16 公益財団法人がん研究会 前立腺がんに特異的な糖鎖、及びこれを用いた検査方法
EP4217399A1 (en) * 2020-09-22 2023-08-02 Roche Diagnostics GmbH Antibodies specific for alpha-1,6-core-fucosylated psa and fucosylated fragments thereof

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4514163B2 (ja) * 2008-07-22 2010-07-28 株式会社Ｊ−オイルミルズ フコースα１→６特異的レクチン
JP2011149826A (ja) * 2010-01-21 2011-08-04 J-Oil Mills Inc 大腸癌の判別方法
JP2011529184A (ja) * 2008-07-25 2011-12-01 ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティ Ｐｓａ糖鎖付加パターンを用いる前立腺癌の検出
JP2013509565A (ja) * 2009-10-30 2013-03-14 国立大学法人東京工業大学 Ｐｓａの分析方法、及び前記分析方法を用いた前立腺癌と前立腺肥大症との鑑別方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4514919B2 (ja) * 2000-08-14 2010-07-28 力 大山 前立腺特異抗原の糖鎖構造の違いに基づく前立腺癌と前立腺肥大とを識別する方法
EP2395357B1 (en) 2009-02-04 2015-05-06 Tokyo Institute of Technology Method for analyzing PSA, and method for distinguishing between prostate cancer and prostatomegaly employing the analysis method
JP5531290B2 (ja) 2010-01-21 2014-06-25 株式会社Ｊ−オイルミルズ 遺伝子
JP5480644B2 (ja) 2010-01-21 2014-04-23 株式会社Ｊ−オイルミルズ ペプチド
EP2940473B1 (en) * 2012-12-28 2018-08-01 Konica Minolta, Inc. Immunoassay method less affected by impurities

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4514163B2 (ja) * 2008-07-22 2010-07-28 株式会社Ｊ−オイルミルズ フコースα１→６特異的レクチン
JP2011529184A (ja) * 2008-07-25 2011-12-01 ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティ Ｐｓａ糖鎖付加パターンを用いる前立腺癌の検出
JP2013509565A (ja) * 2009-10-30 2013-03-14 国立大学法人東京工業大学 Ｐｓａの分析方法、及び前記分析方法を用いた前立腺癌と前立腺肥大症との鑑別方法
JP2011149826A (ja) * 2010-01-21 2011-08-04 J-Oil Mills Inc 大腸癌の判別方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JANKOVIC, M.M. ET AL.: "Gylcosylation of urinary prostate-specific antigen in benign hyperplasia and cancer: assessment by l", CLINICAL BIOCHEMISTRY, vol. 38, no. 1, JPN6020050380, January 2005 (2005-01-01), pages 58 - 65, ISSN: 0004416772 *
JAYAPALAN, J. J. ET AL.: "Urine of patients with early prostate cancer contains lower levels of light chain fragments of inter", ELECTROPHORESIS, vol. 34, no. 11, JPN6020050378, 20 April 2013 (2013-04-20), pages 1663 - 1669, XP055249434, ISSN: 0004416771, DOI: 10.1002/elps.201200583 *
KOSANOVIC, M.M. ET AL.: "Sialylation and fucosylation of cancer-associated prostate specific antigen", JOURNAL OF BUON, vol. 10, no. 2, JPN6020050381, 2005, pages 247 - 250, XP055508346, ISSN: 0004416773 *
LI, Q. K. ET AL.: "Serum Fucosylated Prostate-specific Antigen (PSA) Improves the Differentiation of Aggressive from No", THERANOSTICS, vol. 5, no. 3, JPN6020050376, 1 January 2015 (2015-01-01), pages 267 - 276, XP055379307, ISSN: 0004416770, DOI: 10.7150/thno.10349 *

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