JPWO2016136942A1 - 大腸炎抑制剤 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、ラクトバチルス属乳酸菌を有効成分とする大腸炎抑制剤に関する。
大腸炎は、大腸におこる炎症性疾患であり、大腸炎には、自己免疫性疾患である炎症性腸疾患、特発性疾患であるベーチェット症、虚血性腸炎、および感染症性腸炎などが含まれる。炎症性腸疾患(Inflammatory Bowel Disease)は、潰瘍性大腸炎とクローン病の2つに大別され、これらは共に日本の特定疾患に指定されている。これらの病因は不明であり、腸内細菌の関与や免疫機能の異常などが病因として考えられている。現在のところ、潰瘍性大腸炎の発症は、日本において、人口10万人あたり100人程度と、米国における半分以下であり、クローン病の発症は、日本において、人口10万人あたり27人程度と、米国における約10分の1であるが、将来には、日本においても、生活の欧米化に伴い、炎症性腸疾患の罹患率は増加すると考えられている。
(1)大腸細胞におけるヒートショックプロテイン(HSP)70の発現増強活性を有するラクトバチルス属乳酸菌を有効成分とする、大腸炎抑制剤。
(2)ラクトバチルス属乳酸菌が、ラクトバチルス ジョンソニ(Lactobacillus johnsonii)である、(1)に記載の大腸炎抑制剤。
(3)ラクトバチルス属乳酸菌が、ラクトバチルス ジョンソニ OLL203565株、ラクトバチルス ジョンソニ OLL204255株、およびラクトバチルス ジョンソニ OLL2978株から選択されるものである、(1)または(2)に記載の大腸炎抑制剤。
(4)ラクトバチルス属乳酸菌が、インビトロにて共に培養される大腸細胞におけるHSP70の発現量を、前記ラクトバチルス属乳酸菌を添加しないで培養される大腸細胞のそれと比較して1.5倍以上に増加させることができる、(1)〜(3)のいずれかに記載の大腸炎抑制剤。
(5)大腸炎が炎症性腸疾患である、(1)〜(4)のいずれかに記載の大腸炎抑制剤。
(6)炎症性腸疾患が潰瘍性大腸炎である、(5)に記載の大腸炎抑制剤。
(7)便性を改善するための、(1)〜(6)のいずれかに記載の大腸炎抑制剤。
(8)大腸細胞におけるHSP70の発現増強活性を有するラクトバチルス属乳酸菌を含有させることを特徴とする、大腸炎抑制剤の製造方法。
(9)大腸炎抑制剤の製造における、HSP70の発現増強活性を有するラクトバチルス属乳酸菌の使用。
(10)大腸炎を抑制するための、HSP70の発現増強活性を有するラクトバチルス属乳酸菌の使用。
(11)大腸炎を抑制するための、HSP70の発現増強活性を有するラクトバチルス属乳酸菌。
(12)大腸細胞におけるHSP70の発現増強活性を有するラクトバチルス属乳酸菌の有効量を、それを必要とする対象に摂取させることを含んでなる、大腸炎の抑制方法。
本発明の大腸炎抑制剤は、大腸細胞におけるHSP70の発現増強活性を有するラクトバチルス属乳酸菌を有効成分とすることを特徴としている。HSP70の発現増強活性を有するラクトバチルス属乳酸菌が、顕著な大腸炎抑制作用を有することは意外な事実である。
(1)生菌懸濁液とCaco−2細胞の調製
ラクトバチルス ジョンソニ OLL2978株、ラクトバチルス ジョンソニOLL203565株、ラクトバチルス ジョンソニ OLL204255株を、Difco(商標)Lactobacilli MRS broth培地(BD)を用いて、37℃、嫌気条件下にて1回の継代で培養した。そして、各菌を遠心分離処理(8,000rpm、5分間)して沈殿させ、リン酸緩衝液(PBS、 Phosphate Buffered Saline)で洗浄した後に、分光光度計(U−2810 Spectrophotometer, HITACHI)を用いて、波長650nmで濁度(OD)を測定した。ここで、PBSは、PBS(Phosphate Buffered Salts)タブレット(TaKaRa社)を蒸留水に溶解して調製した。その後に、PBSを用いて、各菌がOD=5となるように調整し、生菌懸濁液を調製した。
生菌懸濁液を20μl/wellで、前記の継代後のCaco−2細胞を含む6wellプレートに添加し、37℃、5%のCO2の環境下にて24時間で共培養した。この共培養を終了した直後に、これら培養液(培地)を吸引除去し、そこに、RNA later (Ambion社)を添加し、細胞を浸漬した。これら細胞から、NucleoSpin RNA II(MACHEREY−NAGEL)により、RNAを抽出してから、PrimeScript RT Master Mix(Perfect Real Time, TaKaRa社)を用いて、逆転写反応を行った。SYBR Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus, TaKaRa社)を用いて、Thermal Cycler Dice Real Time System TP−800(TaKaRa)により、リアルタイムPCRを行い、Caco−2細胞のHSPA1A遺伝子の発現解析を行った。
60℃、30秒間)×40サイクル → 95℃、15秒間 → 60℃、30秒間 → 95℃、15秒間 → 4℃とした。
ラクトバチルス ジョンソニ OLL203565株をマウスに投与し、デキストラン硫酸ナトリウム(DSS、分子量: 36,000〜50,000Da、MP Biomedicals社)で誘発される大腸炎への抑制効果を、動物実験により検討した。
Claims (12)
- 大腸細胞におけるヒートショックプロテイン(HSP)70の発現増強活性を有するラクトバチルス属乳酸菌を有効成分とする、大腸炎抑制剤。
- ラクトバチルス属乳酸菌が、ラクトバチルス ジョンソニである、請求項1に記載の大腸炎抑制剤。
- ラクトバチルス属乳酸菌が、ラクトバチルス ジョンソニ OLL203565株、ラクトバチルス ジョンソニ OLL204255株、およびラクトバチルス ジョンソニ OLL2978株から選択されるものである、請求項1または2に記載の大腸炎抑制剤。
- ラクトバチルス属乳酸菌が、インビトロにて共に培養される大腸細胞におけるHSP70の発現量を、前記ラクトバチルス属乳酸菌を添加しないで培養される大腸細胞のそれと比較して1.5倍以上に増加させることができる、請求項1〜3のいずれか一項に記載の大腸炎抑制剤。
- 大腸炎が炎症性腸疾患である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の大腸炎抑制剤。
- 炎症性腸疾患が潰瘍性大腸炎である、請求項5に記載の大腸炎抑制剤。
- 便性を改善するための、請求項1〜6のいずれか一項に記載の大腸炎抑制剤。
- 大腸細胞におけるHSP70の発現増強活性を有するラクトバチルス属乳酸菌を含有させることを特徴とする、大腸炎抑制剤の製造方法。
- 大腸炎抑制剤の製造における、HSP70の発現増強活性を有するラクトバチルス属乳酸菌の使用。
- 大腸炎を抑制するための、HSP70の発現増強活性を有するラクトバチルス属乳酸菌の使用。
- 大腸炎を抑制するための、HSP70の発現増強活性を有するラクトバチルス属乳酸菌。
- 大腸細胞におけるHSP70の発現増強活性を有するラクトバチルス属乳酸菌の有効量を、それを必要とする対象に摂取させることを含んでなる、大腸炎の抑制方法。
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