JPWO2016103531A1 - 免疫賦活活性を有する核酸多糖複合体の抗腫瘍薬としての応用 - Google Patents
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Abstract
Description
(1)(a)ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチド及びポリデオキシアデニル酸を含む、オリゴデオキシヌクレオチドであって、ポリデオキシアデニル酸が、ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチドの3’側に配置されている、オリゴデオキシヌクレオチドと、
(b)β―1,3−グルカンとを
含む、複合体を含む抗がん剤。
(2)前記抗がん剤は、がん抗原なしで投与されることを特徴とする、項目(1)に記載の抗がん剤。
(3)前記抗がん剤は、細網内皮系および/またはリンパ節に送達されるように投与されることを特徴とする、項目(1)または(2)に記載の抗がん剤。
(4)前記細網内皮系および/またはリンパ節は、腫瘍および貪食細胞を含む、項目(3)に記載の抗がん剤。
(5)前記細網内皮系は脾臓および/または肝臓を含む、項目(3)または(4)に記載の抗がん剤。
(6)前記抗がん剤は、がん抗原なしで投与されることを特徴とする、項目(1)〜(5)のいずれか1項に記載の抗がん剤。
(7)前記投与は全身性投与を含む、項目(2)〜(6)のいずれか1項に記載の抗がん剤。
(8)前記全身性投与は、静脈内投与、腹腔内投与、経口投与、皮下投与、筋肉内投与、および腫瘍内投与から選択される、項目(7)に記載の抗がん剤。
(9)前記オリゴデオキシヌクレオチドはK3(配列番号1)、K3−dA40(配列番号2)、dA40−K3(配列番号3)、K3−dA20(配列番号4)、K3−dA25(配列番号5)、K3−dA30(配列番号6)およびK3−dA35(配列番号12→7)からなる群より選択される、項目1〜8のいずれか1項に記載の抗がん剤。
(10)前記β―1,3−グルカンはシゾフィラン(SPG)、レンチナン、スクレログルカン、カードラン、パーキマン、グリホランおよびラミナランからなる群より選択される、項目1〜9のいずれか1項に記載の抗癌剤。
(11)前記複合体は、K3−SPGである、項目1〜10のいずれか1項に記載の抗がん剤。
(細網内皮系(脾臓および/または肝臓を含む)および/またはリンパ節集積剤)
(12)(a)ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチド及びポリデオキシアデニル酸を含む、オリゴデオキシヌクレオチドであって、ポリデオキシアデニル酸が、ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチドの3’側に配置されている、オリゴデオキシヌクレオチドと、
(b)β―1,3−グルカンとを
含む、複合体
を含む、がんの死細胞を脾臓に集積させるための組成物。
(13)前記オリゴデオキシヌクレオチドはK3(配列番号1)、K3−dA40(配列番号2)、dA40−K3(配列番号3)、K3−dA20(配列番号4)、K3−dA25(配列番号5)、K3−dA30(配列番号6)およびK3−dA35(配列番号7)からなる群より選択される、項目(12)に記載の組成物。
(14)前記β―1,3−グルカンはシゾフィラン(SPG)、レンチナン、スクレログルカン、カードラン、パーキマン、グリホランおよびラミナランからなる群より選択される、項目(12)または(13)に記載の組成物。
(15)前記複合体は、K3−SPGである、項目(12)〜(14)のいずれか1項に記載の組成物。
(16) 前記細網内皮系および/またはリンパ節は、腫瘍および貪食細胞を含む、項目12〜15のいずれか1項に記載の組成物。
(17) 前記細網内皮系は脾臓および/または肝臓を含む、項目(12)〜(16)のいずれか1項に記載の組成物。
(18)前記投与は全身性投与を含む、項目(12)〜(17)のいずれか1項に記載の組成物。
(19)前記全身性投与は、静脈内投与、腹腔内投与、経口投与、皮下投与、筋肉内投与、および腫瘍内投与から選択される、項目(18)に記載の組成物。
<インターロイキン12(IL12)および/またはインターフェロン(IFN)γの発現またはその促進のための組成物>
(20)(a)ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチド及びポリデオキシアデニル酸を含む、オリゴデオキシヌクレオチドであって、ポリデオキシアデニル酸が、ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチドの3’側に配置されている、オリゴデオキシヌクレオチドと、
(b)β―1,3−グルカンとを
含む、インターロイキン12(IL12)および/またはインターフェロン(IFN)γの発現またはその促進のための組成物。
(21)前記オリゴデオキシヌクレオチドはK3(配列番号1)、K3−dA40(配列番号2)、dA40−K3(配列番号3)、K3−dA20(配列番号4)、K3−dA25(配列番号5)、K3−dA30(配列番号6)およびK3−dA35(配列番号7)である、項目(20)に記載の組成物。
(22)前記β―1,3−グルカンはシゾフィラン(SPG)、レンチナン、スクレログルカン、カードラン、パーキマン、グリホランおよびラミナランからなる群より選択される、項目(20)または(21)に記載の組成物。
(23)前記複合体は、K3−SPGである、項目(20)〜(22)のいずれか1項に記載の組成物。
本発明のオリゴデオキシヌクレオチドに含まれるK型CpG ODNは、好ましくはヒト化されている。「ヒト化」とは、ヒトTLR9に対するアゴニスト活性を有することを意味する。従って、ヒト化K型CpG ODNを含む本発明のオリゴデオキシヌクレオチドは、ヒトに対してK型CpG ODNに特有の免疫賦活活性(例えば、ヒトB細胞を活性化してIL−6を産生させる活性)を有する。本発明において好適に用いられるK型CpG ODNは、10ヌクレオチド以上の長さであり、且つ式:
本発明は、上記本発明のオリゴデオキシヌクレオチド又は上記本発明の複合体を含む、医薬組成物を提供するものである。本発明の医薬組成物は、上記本発明のオリゴデオキシヌクレオチド又は上記本発明の複合体を常套手段に従って製剤化することにより得ることができる。本発明の医薬組成物は、本発明のオリゴデオキシヌクレオチド又は複合体と薬理学的に許容され得る担体を含む。また、本医薬組成物は抗原を更に含んでいても良い。このような医薬組成物は、経口又は非経口投与に適する剤形として提供される。
本発明のオリゴデオキシヌクレオチド及び複合体は、単独で抗がん作用を有することが見出された。このような効果は、アジュバント剤として開発されてきた本発明の特性からは予想外の効果であるといえる。それゆえ、これまでのアジュバントとしての使用のされ方、すなわち、がん抗原とともに投与することを必要とすることなく、しかも、特定のがん種に限定されることなく、汎用的な抗がん剤として身体にマイルドに作用する抗がん剤が提供されることになる。また、免疫賦活活性ももちろん有することから、他の疾患に対する免役賦活活性も期待され、体力の弱ったがん患者に対して相乗的な効果を有することも期待される。
以下に本発明の好ましい実施形態を説明する。以下に提供される実施形態は、本発明のよりよい理解のために提供されるものであり、本発明の範囲は以下の記載に限定されるべきでないことが理解される。従って、当業者は、本明細書中の記載を参酌して、本発明の範囲内で適宜改変を行うことができることは明らかである。また、本発明の以下の実施形態は単独でも使用されあるいはそれらを組み合わせて使用することができることが理解される。
1つの局面では、本発明は、(a)ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチド及びポリデオキシアデニル酸を含む、オリゴデオキシヌクレオチドであって、ポリデオキシアデニル酸が、ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチドの3’側に配置されている、オリゴデオキシヌクレオチドと、(b)β―1,3−グルカンとを含む、複合体を含む抗がん剤を提供する。本発明では、本発明の複合体自体が抗がん剤として作用することを見出した。従来は、この複合体は、アジュバントとして用いられることを本発明者らが見出し出願したにすぎず、直接、単剤として抗がん剤として用いることができるとは予想していなかった。したがって、がん抗原なしで使用されるという点で予想外の効果をもたらすといえる。
別の局面において、本発明は、(a)ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチド及びポリデオキシアデニル酸を含む、オリゴデオキシヌクレオチドであって、ポリデオキシアデニル酸が、ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチドの3’側に配置されている、オリゴデオキシヌクレオチドと、(b)β―1,3−グルカンとを含む、複合体を含む、がんの死細胞を細網内皮系(脾臓および/または肝臓を含む)および/またはリンパ節に集積させるための組成物を提供する。理論に束縛されることを望まないが、本発明の複合体は、がんの死細胞を細網内皮系(脾臓および/または肝臓を含む)および/またはリンパ節に集積させることができることを見出した。実施例で例証されているように、K3−SPGのような本発明の複合体による処置は、IL12p40およびIFN−Iの両方に依存する態様で、腫瘍細胞死を誘発することが実証された。このような作用を複合体が有することは従来予想されておらず、その意味で予想外の作用効果が達成されたといえる。すなわち、CpGが腫瘍微小環境における食細胞に標的化されるというものである。がんの死細胞が細網内皮系(脾臓および/または肝臓を含む)および/またはリンパ節に集積されると、その後、放出された腫瘍死細胞は複数の腫瘍抗原に対する抗腫瘍CTLを誘発し、身体にあるがん細胞が散弾銃で攻撃されるかのように殺傷され、根治させることも可能である。理論に束縛されることを望まないが、腫瘍微小環境におけるIL12およびIFN−Iサイトカインの両方を産生することは、K3−SPG単剤治療に必須とまではいえないが、重要である。
さらに別の局面では、本発明は、(a)ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチド及びポリデオキシアデニル酸を含む、オリゴデオキシヌクレオチドであって、ポリデオキシアデニル酸が、ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチドの3’側に配置されている、オリゴデオキシヌクレオチドと、(b)β―1,3−グルカンとを含む、インターロイキン12(IL12)および/またはインターフェロン(IFN)γの発現またはその促進のための組成物を提供する。腫瘍微小環境におけるIL12およびIFN−Iサイトカインの両方を産生することは、K3−SPG単剤治療における重要な作用効果であり、このような効果は、抗がん剤としての作用のほか、他の用途においても重要である。そのような処置の対象としては、がんのほか、ウイルスなどの慢性感染症疾患、ウイルス感染予防などを挙げることができるがそれらに限定されない。
本発明は、上記種々の形態の医薬(治療薬または予防薬)として提供される。
本明細書において用いられる分子生物学的手法、生化学的手法、微生物学的手法は、当該分野において周知であり慣用されるものであり、例えば、Sambrook J.et al.(1989).Molecular Cloning: A Laboratory Manual,Cold Spring Harborおよびその3rd Ed.(2001); Ausubel,F.M.(1987).Current Protocols in Molecular Biology,Greene Pub.Associates and Wiley−Interscience; Ausubel,F.M.(1989).Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology,Greene Pub.Associates and Wiley−Interscience; Innis,M.A.(1990).PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications,Academic Press; Ausubel,F.M.(1992).Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology,Greene Pub.Associates; Ausubel,F.M. (1995).Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology,Greene Pub.Associates; Innis,M.A.et al.(1995).PCR Strategies,Academic Press;Ausubel,F.M.(1999).Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology,Wiley,and annual updates;Sninsky,J.J.et al.(1999).PCR Applications: Protocols for Functional Genomics,Academic Press、別冊実験医学「遺伝子導入&発現解析実験法」羊土社、1997などに記載されており、これらは本明細書において関連する部分(全部であり得る)が参考として援用される。
以下のCpG ODNsは、(株)ジーンデザインで合成された(下線はホスホロチオエート結合を示す)。
7.22mgのK3−dA40を水(3.7mL)に溶解した。SPG(三井製糖)15mgを0.25N NaOH(1mL)に溶解した。1mLの330mM NaH2PO4をDNA溶液に加え、次にSPG溶液をDNA/NaH2PO4溶液に加え、4℃にて一晩維持することにより複合体化を完了した。モル比(MSPG/MDNA)は、0.27に固定した。複合体の形成は、マイクロチップ電気泳動装置(SHIMADZU:MultiNA)によって確認した複合体の形成は、サイズ排除クロマトグラフィーを用い、CpG ODNの高分子量側へのシフトを、260nmにおける吸収をモニタリングすることによって確認した(System:Agilent 1100series、Column:Asahipak GF7M−HQ(Shodex)2本連結、Flow rate:0.8mL/min、Buffer:10mM EDTA PBS,pH7.4、Temperature:40°C)。
以下の実施例において、強い腫瘍縮小を誘発する腫瘍微小環境における貪食細胞を標的とするナノ粒子状TLR9アゴニストによる全身性の単剤治療が可能であることを示した。
以下に、本実施例で用いられる試薬、材料、動物、細胞およびその方法について説明する。適宜、各実施例においても補充して説明する。
6週齢の雌性C57BL/6JマウスをNihon CLEAから購入した。Il12p40欠損マウスおよびBatf3欠損マウスをJackson Laboratoryから購入した。Ifnar2欠損マウス、Myd88欠損マウスおよびDectin−1欠損マウスは以前記載した通りである(Kobiyama,K.,et al.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.111,3086−3091(2014))。全ての動物実験を、医薬基盤研究所の機関ガイドラインに従って行った。K3はGene Designにより合成された。オバルブミン(OVA)を生化学工業から購入した。
EL4およびOVA発現EL4(EG7)は、C57BL/6Jマウスの胸腺腫細胞株であり、ATCCから購入した。B16(黒色腫)をJapanese Collection of Research Bioresoursesから購入した。B16F10(黒色腫)を理研細胞バンクから購入し、MC38(結腸がん)は、F.JAMES Primus博士により提供された。Pan02(膵臓がん)をJackson’s Laboratoryから購入した。EL4、EG7、MC38、およびPan02を、完全RPMI(10%(v/v)ウシ胎児血清(FBS)、ペニシリン、およびストレプトマイシンが追加されたRPMI 1640)で培養した。B16およびB16F10を、完全DMEM(10%(v/v)ウシ胎児血清(FBS)、ペニシリン、およびストレプトマイシンが追加されたDMEM)で培養した。
EG7、EL4、B16、B16F10、およびMC38細胞(10%マトリゲル/PBS中に5×106細胞/mLで100μl)を、マウスの右側腹部の皮下(s.c)に接種した。腫瘍サイズを、腫瘍の長さ(L)、幅(W)、および高さ(H)で測定し、腫瘍体積(V)をV=L×W×Hとして計算した。腫瘍内注射(i.t.)では、腫瘍部位に直接注射した。CpG治療は、腫瘍体積が約100mm3に達してから開始し、その時期は、EG7およびB16F10の接種の7日後、B16の接種の10日後、ならびにMC38の接種の14日後であった。腫瘍保有マウスを、K3(30μg)またはK3−SPG(10μg)で1日おきに3回処置した。
Pan02の腹膜播種モデルにおいて、1×106個のPan02細胞(PBS中に1×107細胞/mLで100μl)を、腹腔内に注射した。CpG治療を接種11日後に開始し、全ての腫瘍小結節を21日目にマウスの腹膜から摘出し、その後これらの重量(g)を測定した。CpG治療での投与量は上記のとおりである。
K3およびK3−SPGの局在を評価するために、C57BL/6マウスに、EG7を0日目にs.c.接種し、PBS(コントロール)、Alexa 647−K3(30μg)、またはAlexa 647−K3−SPG(10μg)を12日目にi.v.投与した。投与1時間後、マウスをIVIS(登録商標)Lumina Imaging Systemおよび分析ソフトウェア(Ver.2.6、Xenogen)で分析し、相対的蛍光で測定されたイメージを、表面放射輝度の物理単位(光子/秒/cm2/sr)に変換した。in vivoで標識されたCD8+T細胞を検出するために、脾細胞を、7、9、11日目にK3−SPGで処置されたか、または処置されていない、EG7を保有するC57BL/6マウスまたはIl12p40−Ifnar2ダブルノックアウトマウスから14日目に回収した。脾細胞の懸濁後、赤血球をACK溶解緩衝液(150mM NH4Cl、10mM KHCO3、0.1mM Na2EDTA)で溶解し、細胞を完全RPMI中に維持した。CD8α+T細胞をMACS(Miltenyi Biotec)によりソートした。CD8α+T細胞を陰性選択の方法でソートした。その後、ソートされたCD8α+T細胞を、Xenolight DiR(登録商標)で染色した。染色されたCD8α+T細胞を、14日目にレシピエントマウス(0日目にEG7を接種し、7、9、11日目にK3−SPGでi.v.処置されたか、または処置されていないC57BL/6マウスまたはIl12p40−Ifnar2ダブルノックアウトマウス)に移した。染色した細胞を移して24時間後に、マウスをIVIS(登録商標)Lumina Imaging System(Ver.2.6)で分析した。目的の領域を腫瘍領域に集約し、蛍光強度をLiving Image Software(Ver.2.6、Xenogen)で分析した。
C57BL/6Jマウス(6−8週齢、雌、日本クレア)に、Alexa 647−K3(30μg)、Alexa 647−K3−SPG(10μg)、およびデキストラン−PE(20μg)を尾静脈からi.v.注射した。腫瘍を注射後1時間後に回収し、凍結切片を、4%(w/v)パラホルムアルデヒドで10分間固定し、Hoechst 33258と一緒に抗CD3e抗体、抗CD8β抗体で染色した。細胞をOlympus IX81システムを使用して撮影した。イメージデータをMetaMorphで分析した。
食細胞(樹状細胞およびマクロファージ)を枯渇させるために、C57BL/6マウスに、クロドロネートリポソームまたはコントロールリポソーム(100nm)(片山化学)をEG7の接種の5日後にi.v.注射した。CD8+T細胞を枯渇させるために、200μgの抗CD8α抗体を、EG7接種の6日後および13日後に尾静脈にi.v.注射した。
脾細胞を、7、9、11日目にK3−SPGでi.v.処置されたか、処置されていない、EG7を保有するC57BL/6マウスまたはIl12p40−Ifnar2ダブルノックアウトマウスから14日目に回収した。脾細胞の調製後、赤血球をACK溶解緩衝液で溶解し、細胞を完全RPMIで維持した。脾細胞をH−2Kb OVAテトラマー(MBL)、抗CD8α抗体(KT15)、抗TCRβ抗体(H57−597)、抗CD62L抗体(MEL−14)、および抗CD44抗体(IM7)、ならびに7−アミノアクチノマイシンD(7AAD)で染色した。OVAテトラマー+CD44+CD8α+TCRβ+の細胞数を、フローサイトメトリーで決定した。他の実験については、調製された脾細胞を、抗CD45抗体、抗CD3e抗体、抗CD8α抗体、および抗CD11a抗体と共にインキュベートし、その後フローサイトメトリーで分析した。
脾細胞を、7、9、11日目にK3−SPGでi.v.処置されたか、処置されていない、EG7を保有するC57BL/6マウスまたはIl12p40−Ifnar2ダブルノックアウトマウスから12日目に回収した。脾細胞の調製後、赤血球をACK溶解緩衝液で溶解し、細胞を完全RPMI中に維持した。脾細胞を抗CD45抗体(APC)で染色し、CD45−細胞の数をフローサイトメトリーで決定した。さらに、アポトーシス細胞、ネクローシス細胞、およびCD45陰性生細胞の集団を、PIおよびHoechst 33342で染色し、その後フローサイトメトリーで分析した。次に、CD45−細胞を、K3−SPGで処置された腫瘍保有C57BL/6マウスから、INFLUX(BD Bioscience)によってソートした。
C57BL/6マウスに、5×105個のCD45−細胞を−7日目にi.v.投与した。免疫化7日後、マウスに5×105個のEG7細胞を0日目にs.c.接種した。
マウスIL−12p40、マウスIL−13、およびヒトIFNγのレベルを、R&DのELISAキットを用いて測定した。
Mann−WhitneyのU検定、Studentのt検定またはBonferroniの多重比較検定を含む一元分散分析を、統計分析に用いた(*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001)。統計分析をGraphPad Prism software(La Jolla、CA、USA)を用いて行った。
本実施例では、K3−SPGの静脈内注射により、腫瘍抗原を全く追加しなくても強い腫瘍成長の抑制が誘発されることを実証した。
C57BL/6マウスに、EG7(OVA発現マウス胸腺腫細胞株)を右側腹部に0日目に接種し、尾基部付近の皮下(i.d.)投与、腫瘍内(i.t.)投与、または静脈内(i.v.)投与の3つの異なる経路を介して、PBS、および等モル量のK3(30μg)またはK3−SPG(10μg)で3回処置した(接種の7、9、11日後)。腫瘍サイズを23日目まで2〜3日毎に測定した。
結果は図2(A〜B)以下に表す。PBSの群(コントロール)において、腫瘍成長はいずれの投与経路を介しても抑制されなかった(図2a、b、c(図2A))。K3処置において、腫瘍縮小がi.t.でのみ観察されたが、他の経路においては観察されなかった(図2d、e、f(図2A))。K3−SPG処置において、i.t.およびi.v.の両方で強い腫瘍縮小が観察されたが、i.d.投与は、腫瘍成長に対する影響を示さなかった(図2g、h、i(図2A))。コントロール、K3およびK3−SPGを比較して示した図を図(図2a、d、g(図2A))に示す。
このK3−SPG全身性単剤治療の潜在性を調査するために、他の腫瘍細胞株もまた、EG7モデルにおいて使用された同様のプロトコルで試験した。
K3−SPGの静脈内投与は、黒色腫(B16およびB16F10)および結腸がん(MC38)の成長も抑制した(図2j、k、l(図2B))。本発明者らは、さらにより臨床的悪性度の高い腫瘍播種性モデルを作製することによって試験した。マウス膵臓腫瘍株、Pan02(1×106細胞)を、腹腔内(「i.p.」とも称する)に接種し、その後、K3またはK3−SPGによる治療(1日おきに3回)を接種の11日後に開始した。21日目に全てのマウスを屠殺し、腹腔の腫瘍の総重量を評価した(図2m(図2B))。腫瘍成長は、K3−SPG i.v.処置群において顕著に抑制されたが、K3 i.p.およびK3−SPG i.p.処置群においては抑制されなかった(図2m(図2B))。それに応じて、顕著な生存の延長が、K3−SPG i.v.処置群において観察されたが、K3 i.v.群では観察されなかった(図2n(図2B))。これらの結果は、K3−SPGの全身性i.v.投与が、多くの異なるがんに対する有望な単剤治療であり、いずれの腫瘍ペプチドおよび抗原もさらに必要としないことを実証するものである。
次に、本発明者らは、K3−SPGの腫瘍微小環境におけるメカニズムを解明した。
in vivoでの分布を試験するために、K3およびK3−SPGを蛍光標識した。EG7腫瘍保有マウスにPBS、Alexa647−K3(30μg)、またはAlexa647−K3−SPG(10μg)をi.v.注射し、その後、蛍光の分布をin vivoイメージングシステム(IVIS)によって試験した。
次に、本実施例では、本発明者らは、K3−SPG単剤治療の成功に必要とされる因子について試験した。
(結果)
本実施例では、K3−SPG処置は、IL12p40およびIFN−Iの両方に依存する態様で、腫瘍細胞死を誘発することを実証した。
本実施例では、放出された腫瘍死細胞は複数の腫瘍抗原に対する抗腫瘍CTLを誘発することを実証した。
Rag2マウスの結果は、K3−SPGの腫瘍抑制効果もまた、適応免疫応答に依存することを示した。それゆえ、本発明者らは、K3−SPG治療に必要なCD8T細胞を試験した。in vivoにおけるCD8 T細胞の枯渇は、K3−SPGの抗腫瘍効果を顕著に抑止し(図10a(図10A))、CD8T細胞がこのK3−SPG治療における重要なエフェクター細胞であることを示している。また、K3−SPGによる腫瘍縮小は、Batf3(交差提示CD8α+ DCを欠損している)にも依存し(図10b(図10A))、K3−SPG単剤治療が、CD8α+ DC媒介性交差提示をも増強したことを示している。本発明者らは、CD8T細胞の腫瘍浸潤と腫瘍成長との間の明らかな関連性を観察した。CD8T細胞は、K3−SPG i.v.群において腫瘍領域で蓄積したが、i.d.群では蓄積しなかった(図10c(図10A))。
(考察)
製剤化する場合の組成をご教示ください
製剤は、例えば、7.22mgのK3−dA40(配列番号2)を水(3.7mL)に溶解し、SPG(15mg)を0.25N NaOH(1mL)に溶解した。1mLの容積の330mM NaH2PO4をDNA溶液に加え、次いで、SPG溶液をこのDNA/NaH2PO4溶液に加え、4℃で一晩維持して、複合体化を完了させた。モル比(MSPG/MDNA)は0.27に固定して製造することができる。
配列番号2:K3−dA40
配列番号3:dA40−K3
配列番号4:K3−dA20
配列番号5:K3−dA25
配列番号6:K3−dA30
配列番号7:K3−dA35
[配列表]
Claims (23)
- (a)ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチド及びポリデオキシアデニル酸を含む、オリゴデオキシヌクレオチドであって、ポリデオキシアデニル酸が、ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチドの3’側に配置されている、オリゴデオキシヌクレオチドと、
(b)β―1,3−グルカンとを
含む、複合体を含む抗がん剤。 - 前記抗がん剤は、がん抗原なしで投与されることを特徴とする、請求項1に記載の抗がん剤。
- 前記抗がん剤は、細網内皮系および/またはリンパ節に送達されるように投与されることを特徴とする、請求項1または2に記載の抗がん剤。
- 前記細網内皮系および/またはリンパ節は、腫瘍および貪食細胞を含む、請求項3に記載の抗がん剤。
- 前記細網内皮系は脾臓および/または肝臓を含む、請求項3または4に記載の抗がん剤。
- 前記抗がん剤は、がん抗原なしで投与されることを特徴とする、請求項1〜5のいずれか1項に記載の抗がん剤。
- 前記投与は全身性投与を含む、請求項2〜6のいずれか1項に記載の抗がん剤。
- 前記全身性投与は、静脈内投与、腹腔内投与、経口投与、皮下投与、筋肉内投与、および腫瘍内投与から選択される、請求項7に記載の抗がん剤。
- 前記オリゴデオキシヌクレオチドはK3(配列番号1)、K3−dA40(配列番号2)、dA40−K3(配列番号3)、K3−dA20(配列番号4)、K3−dA25(配列番号5)、K3−dA30(配列番号6)およびK3−dA35(配列番号7)からなる群より選択される、請求項1〜8のいずれか1項に記載の抗がん剤。
- 前記β―1,3−グルカンはシゾフィラン(SPG)、レンチナン、スクレログルカン、カードラン、パーキマン、グリホランおよびラミナランからなる群より選択される、請求項1〜9のいずれか1項に記載の抗癌剤。
- 前記複合体は、K3−SPGである、請求項1〜10のいずれか1項に記載の抗がん剤。
- (a)ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチド及びポリデオキシアデニル酸を含む、オリゴデオキシヌクレオチドであって、ポリデオキシアデニル酸が、ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチドの3’側に配置されている、オリゴデオキシヌクレオチドと、
(b)β―1,3−グルカンとを
含む、複合体
を含む、がんの死細胞を細網内皮系および/またはリンパ節に集積させるための組成物。 - 前記オリゴデオキシヌクレオチドはK3(配列番号1)、K3−dA40(配列番号2)、dA40−K3(配列番号3)、K3−dA20(配列番号4)、K3−dA25(配列番号5)、K3−dA30(配列番号6)およびK3−dA35(配列番号7)からなる群より選択される、請求項12に記載の組成物。
- 前記β―1,3−グルカンはシゾフィラン(SPG)、レンチナン、スクレログルカン、カードラン、パーキマン、グリホランおよびラミナランからなる群より選択される、請求項12または13に記載の組成物。
- 前記複合体は、K3−SPGである、請求項12〜14のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記細網内皮系および/またはリンパ節は、腫瘍および貪食細胞を含む、請求項12〜15のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記細網内皮系は脾臓および/または肝臓を含む、請求項12〜16のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記投与は全身性投与を含む、請求項12〜17のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記全身性投与は、静脈内投与、腹腔内投与、経口投与、皮下投与、筋肉内投与、および腫瘍内投与から選択される、請求項18に記載の組成物。
- (a)ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチド及びポリデオキシアデニル酸を含む、オリゴデオキシヌクレオチドであって、ポリデオキシアデニル酸が、ヒト化K型CpGオリゴデオキシヌクレオチドの3’側に配置されている、オリゴデオキシヌクレオチドと、
(b)β―1,3−グルカンとを
含む、インターロイキン12(IL12)および/またはインターフェロン(IFN)γの発現またはその促進のための組成物。 - 前記オリゴデオキシヌクレオチドはK3(配列番号1)、K3−dA40(配列番号2)、dA40−K3(配列番号3)、K3−dA20(配列番号4)、K3−dA25(配列番号5)、K3−dA30(配列番号6)およびK3−dA35(配列番号7)である、請求項20に記載の組成物。
- 前記β―1,3−グルカンはシゾフィラン(SPG)、レンチナン、スクレログルカン、カードラン、パーキマン、グリホランおよびラミナランからなる群より選択される、請求項20または21に記載の組成物。
- 前記複合体は、K3−SPGである、請求項20〜22のいずれか1項に記載の組成物。
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