JPWO2016031869A1 - スチルベン化合物を有効成分とする角結膜疾患又は老視の予防及び/又は治療のための医薬組成物 - Google Patents
スチルベン化合物を有効成分とする角結膜疾患又は老視の予防及び/又は治療のための医薬組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2016031869A1 JPWO2016031869A1 JP2016545584A JP2016545584A JPWO2016031869A1 JP WO2016031869 A1 JPWO2016031869 A1 JP WO2016031869A1 JP 2016545584 A JP2016545584 A JP 2016545584A JP 2016545584 A JP2016545584 A JP 2016545584A JP WO2016031869 A1 JPWO2016031869 A1 JP WO2016031869A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- compound
- formula
- group
- smoking
- compound represented
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
- A61K31/05—Phenols
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
- A61P27/04—Artificial tears; Irrigation solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
- A61P27/10—Ophthalmic agents for accommodation disorders, e.g. myopia
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Description
本願は、2014年8月28日に出願した特願2014-174332号明細書の優先権の利益を主張するものであり、当該明細書はその全体が参照により本明細書中に援用される。
(技術分野)
本発明は、スチルベン化合物を含有する角結膜疾患又は老視の予防及び/又は治療のための医薬組成物に関する。
本発明の目的は、角結膜疾患又は老視の予防及び/又は治療に有効な新規なスチルベン化合物を提供することである。
本発明の別の目的は、強力な抗酸化作用を有する新規なスチルベン化合物を提供することである。
項1.式(I)で表される化合物、その塩又はプロドラッグを有効成分として含有する角結膜疾患又は老視の予防及び/又は治療のための医薬組成物。
式(I)で表される化合物の各芳香環は置換されていてもよい。)
項2.m及びnがそれぞれ1から3までの整数である項1に記載の医薬組成物。
項3.前記化合物が、式(II)で表される化合物、その塩又はプロドラッグである項2に記載の医薬組成物。
項4.前記化合物が、式(III)で表される化合物、その塩又はプロドラッグである項3に記載の医薬組成物。
項5.式(I)で表される化合物、その塩又はプロドラッグを有効成分として含有する角結膜疾患又は老視の予防及び/又は治療剤。
項6.角結膜疾患又は老視を予防及び/又は治療するために使用される式(I)で表される化合物、その塩又はプロドラッグ。
式(I)で表される化合物の各芳香環は置換されていてもよい。)
項7.有効量の式(I)で表される化合物、その塩又はプロドラッグを患者に投与することを含む、角結膜疾患又は老視を予防及び/又は治療するための方法。
式(I)で表される化合物の各芳香環は置換されていてもよい。)
本発明の化合物は以下の式(I)で表される化合物を含む。
まず、エチルフェニルスルホン (EtSO2Ph)のテトラヒドロフラン(THF)溶液を冷却し、ブチルリチウム(BuLi)を滴下、撹拌したものに、芳香環の水酸基をメチル基で保護したメトキシベンズアルデヒド(1)のTHF溶液を反応混合物に滴下し、さらに撹拌する。反応混合物を分液し、有機層を乾燥させる。減圧留去後、残渣を塩化メチレン(CH2Cl2) およびジメチルホルムアミド(DMF)に溶解させ、さらにモレキュラーシーブスおよび二クロム酸ピリジニウム(PDC)を加え撹拌し、反応混合物に酢酸エチルを加え、セライトろ過によりクロム酸塩を除去した後、ろ液を減圧留去する。残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製し、式(2)の化合物を得る。
次に、アルゴン雰囲気下にて、塩化テトラブチルアンモニウム(Bu4NCl)及びジエチレングリコールジメチルエーテル(diglyme)の混合物に臭化メチルマグネシウム(MeMgBr)を滴下、撹拌する。反応混合物を冷却した後、式(2)の化合物のTHF溶液を滴下し、さらに撹拌する。反応混合物を分液し、有機層を乾燥させる。減圧留去後、残査をカラムクロマトグラフィーにより精製し、式(3)の化合物を得る。
次に、アルゴン雰囲気下にて、式(3)の化合物の塩化メチレン溶液に、4-N,N-ジメチルアミノピリジン(DMAP) 、N-エチルジイソプロピルアミン(i-Pr2NEt)および無水トリフルオロ酢酸 (F3CCO)2O)を加え撹拌する。反応混合物を分液し、有機層を乾燥させる。減圧留去により得られた残渣を無水トルエンに溶解した後、アルゴン雰囲気下においてジアザビシクロウンデセン(DBU)を加え、さらに撹拌する。反応混合物を分液し、有機層を乾燥させる。減圧留去により得られた残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製し、式(4)の化合物を得る。
次に、アルゴン雰囲気下、式(4)の化合物、水素化トリブチルスズ (Bu3SnH)、アゾビスイソブチロニトリル(AIBN)およびN-エチルジイソプロピルアミンのベンゼン溶液を加熱還流させる。反応混合物を分液し、有機層を乾燥させる。減圧留去により得られた残渣を四塩化炭素 (CCl4)に溶解させた後、アルゴン雰囲気下においてヨウ素を加え撹拌する。反応混合物を分液し、有機層を減圧留去する。得られた残渣をさらに分液し、有機層を乾燥させる。減圧留去により得られた残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製し、式(5)の化合物を得る。
次に、式(5)の化合物、メトキシ(メチル基は1又は複数)フェニルボロン酸 、炭酸ナトリウム および蒸留水 のDMF の懸濁液を撹拌する。反応混合物にPd(PPh3)4を加え、加熱撹拌する。反応混合物を分液し、有機層を乾燥させた後、減圧留去する。残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製し、式(6)の化合物をシス体とトランス体との混合物として得る。なお、このシス体とトランス体はHPLCにより分離可能である。
次に、アルゴン雰囲気下において、式(6)の化合物 (シス体とトランス体との混合物) の脱水塩化メチレン溶液に三臭化ホウ素 (BBr3)を滴下する。反応混合物を撹拌した後、さらに撹拌する。反応混合物を分液し、水層をさらに別の溶媒で分液する。得られた有機層を乾燥した後、減圧留去する。残渣をカラムクロマトグラフィーにより粗精製し、式(7)の化合物を混合物として得る。
レスべラトロールはSigma-Aldrich社より入手した(製品番号R5010-100MG)。本発明の式(V)で表される化合物である (E)-5-[3-(4-ヒドロキシフェニル)ブタ-2-エン-2-イル]ベンゼン-1,3-ジオール(DR、以下「ジメチルレスベラトロール」と称する)及び式(VI)で表される化合物である(E)-4-[3-(3,5-ジヒドロキシフェニル)ブタ-2-エン-2-イル]ベンゼン-1,2-ジオール(DHR、以下「ジメチルヒドロキシレスベラトロール」と称する)を下記のスキームに従って製造した。
エチルフェニルスルホン(EtSO2Ph) (7.72 g, 45.1 mmol) のTHF (60 mL) 溶液を−80 ℃に冷却し、ブチルリチウム (2.66 mol/L n−ヘキサン(以下、単に「ヘキサン」とする)溶液, 17.0 mL, 45.1 mmol) を滴下した後40分間撹拌した。3,5-ジメトキシベンズアルデヒド (1) (5.0 g, 30.09 mmol) のTHF (30 mL) 溶液を反応混合物に滴下し、さらに30分間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液および酢酸エチルで分液し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧留去の後、得られた残渣を塩化メチレン (50 mL) およびDMF (10 mL)に溶解させた。さらにモレキュラーシーブス4Å (10 g) およびPDC (56.6 g, 150.5 mmol) を加え、室温にて18時間撹拌した。反応混合物に酢酸エチル (50 mL)を加えた後、セライトろ過によりクロム酸塩を除去した後、ろ液を減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、ヘキサン/塩化メチレン/酢酸エチル = 20/20/1(体積比))により精製し、化合物2 (8.16 g, 81%)を白色固体として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) 0. 1.57 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 3.83 (s, 6H), 6.67-6.68 (m, 1H), 7.07 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 7.51-7.55 (m, 2H), 7.64-7.68 (m, 1H), 7.80-7.82 (m, 2H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) 13.3, 55.6, 65.1, 106.4, 106.8, 128.9, 129.8, 134.2, 136.1, 138.0, 160.9; FAB-MS m/z 335 (M++H).
アルゴン雰囲気下0℃において、塩化テトラブチルアンモニウム (167 mg, 0.6 mmol) およびジエチレングリコールジメチルエーテル (1.28 mL, 9.0 mmol) の混合物に臭化メチルマグネシウム (1.0 mol/L THF溶液, 9.0 mL, 9.0 mmol) を滴下し30分間撹拌した。反応混合物を−40℃に冷却した後、化合物2 (1.0 g, 3.0 mmol) のTHF (15 mL) 溶液を滴下しさらに25時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液および酢酸エチルで分液し、有機層を無水硫酸ナトリウムにより乾燥させた。減圧留去の後、残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、ヘキサン/塩化メチレン/酢酸エチル = 15/15/1(体積比))により精製し、化合物3 (661 mg, 63%)を無色アメ状物質として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) 0.96 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.92 (s, 3H), 3.50 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 3.79 (s, 6H), 3.95 (s, 1H), 6.34 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 7.54-7.59 (m, 2H), 7.63-7.67 (m, 1H), 7.85-7.88 (m, 2H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) 12.4, 30.8, 55.4, 67.7, 75.7, 98.7, 103.1128.3, 129.2, 133.8, 139.1, 148.0, 160.7; FAB-MS m/z 351 (M++H).
アルゴン雰囲気下0℃において、化合物3 (1.71 g, 4.89 mmol) の塩化メチレン (40 mL)溶液に、4-N,N-ジメチルアミノピリジン (597 mg, 4.89 mmol)、N-エチルジイソプロピルアミン (1.7 mL, 9.77mmol)および無水トリフルオロ酢酸 (1.38 mL, 9.77 mmol) を加え、室温にて90分間撹拌した。反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および塩化メチレンにより分液し、有機層を無水硫酸ナトリウムにより乾燥させた。減圧留去により得られた残渣を無水トルエン (40 mL) に溶解した後、アルゴン雰囲気下0℃においてジアザビシクロウンデセン(DBU) (2.92 mL, 19.5 mmol) を加え、室温にてさらに80分間撹拌した。反応混合物を0.5規定塩酸および酢酸エチルで分液し、有機層を無水硫酸ナトリウムにより乾燥させた。減圧留去により得られた残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、ヘキサン/酢酸エチル = 3/1(体積比))により精製し、化合物4 (990 mg, 61%) を白色固体として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.6-1.87 (m, 3H), 2.44-2.45 (m, 3H), 3.77 (s, 6H), 6.19 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 6.38 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.55-7.59 (m, 2H), 7.62-7.64 (m, 1H), 7.94-7.96 (m, 2H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) 17.7, 22.4, 55.4, 99.2, 104.5, 127.2, 129.1, 133.1, 133.7, 141.4, 144.9, 149.7, 161.0; FAB-MS m/z 333 (M++H).
アルゴン雰囲気下、化合物4 (580 mg, 1.75 mmol), 水素化トリブチルスズ (1.41 mL, 5.24 mmol)、アゾビスイソブチロニトリル(AIBN)(143 mg, 0.87 mmol)およびN-エチルジイソプロピルアミン (0.91 mL, 5.24 mmol) のベンゼン (17 mL) 溶液を20時間加熱還流させた。反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液およびヘキサンで分液し、有機層を無水硫酸ナトリウムにより乾燥させた。減圧留去により得られた残渣を四塩化炭素 (17 mL)に溶解させた後、アルゴン雰囲気下0℃においてヨウ素 (1.77 g, 6.98 mmol) を加え、室温にて90分間撹拌した。反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液 (100 mL)、飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液 (100 mL) および塩化メチレンで分液し、有機層を減圧留去した。得られた残渣をさらに10%フッ化カリウム水溶液および塩化メチレンで分液し、有機層を無水硫酸ナトリウムにより乾燥させた。減圧留去により得られた残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、ヘキサン/酢酸エチル = 20/1(体積比))により精製し、化合物5 (533 mg, 96%, 2;1の混合物) を油状物質として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) 2.07-2.08 (m, 1H), 2.21-2.22 (m, 2H), 2.42-2.43 (m, 2H), 2.63-2.64 (m, 1H), 3.78 (s, 4H), 3.80 (s, 2H), 6.27-6.28 (m, 2H), 6.36-6.38 (m, 1H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) 20.5, 30.6, 31.7, 55.3, 94.5, 98.1, 98.8, 98.9, 105.7, 141.8, 142.1, 142.9, 150.3, 160.5, 160.6; FAB-MS m/z 319 (M++H).
化合物5 (450 mg, 1.41 mmol)、4-メトキシフェニルボロン酸 (321 mg, 2.12 mmol)、炭酸ナトリウム (448 mg, 4.23 mmol) および蒸留水 (0.7 mL) のDMF (7 mL) の懸濁液を室温にて15分間撹拌した。反応混合物にPd(PPh3)4 (163 mg, 0.14 mmol) を加え、90℃にて90分間撹拌した。反応混合物を飽和食塩水および酢酸エチルで分液し、有機層を無水硫酸ナトリウムにより乾燥させた後減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、ヘキサン/酢酸エチル = 30/1(体積比))により精製し、化合物6 (316 mg, 75%、固体) を2:1の混合物として得た。HPLC (カラム:SHIMADZU Shim Pack PRC-SIL (250 × 20 mm), 測定波長: 254 nm, 移動相:ヘキサン/酢酸エチル = 30/1(体積比)、流速:20 mL/min) により、それぞれ (E)-6 (Rt = 5.6 min) および (Z)-6 (Rt = 6.4 min)を分離し機器分析用のサンプルとした。
(E)-6; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.88 (s, 6H), 3.82 (s, 6H), 3.83 (s, 3H), 6.37 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 6.41 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 6.89-6.93 (m, 2H), 7.18-7.21 (m, 2H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) 22.4, 22.5, 55.2, 55.3, 98.2, 106.3, 113.5, 129.3, 132.4, 132.8, 136.5, 146.9, 158.0, 160.6; FAB-MS m/z 299 (M++H).(Z)-6; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 2.13 (s, 6H), 3.58 (s, 6H), 3.72 (s, 3H), 6.13 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 6.16 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 6.64-6.66 (m, 2H), 6.90-6.93 (m, 2H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) 21.3, 21.5, 55.1, 55.1, 98.0, 107.4, 113.0, 129.9, 132.2, 132.5, 137.1, 146.8, 157.5, 159.9; FAB-MS m/z 299 (M++H).
アルゴン雰囲気下−20℃において、化合物 6 (2;1の混合物、400 mg, 1.34 mmol) の脱水塩化メチレン (10 mL) 溶液に三臭化ホウ素 (1.0 mol/L CH2Cl2溶液, 6.7 mL, 6.7 mmol) を滴下した。反応混合物を−20℃で95分間撹拌した後、室温でさらに95分間撹拌した。反応混合物を蒸留水および塩化メチレンで分液し、水層をさらに酢酸エチルで分液した。得られた有機層を無水硫酸ナトリウムにより乾燥させた後減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、ヘキサン/酢酸エチル = 1/1(体積比))により粗精製し、化合物7 (330 mg) を混合物として得た。
1H NMR (400 MHz, CD3OD) 1.79 (s, 3H), 1.82 (s, 3H), 6.15-6.16 (m, 3H), 6.76 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.04 (d, J = 8.6 Hz, 2H); 13C NMR (125 MHz, CD3OD) 22.7, 22.9, 101.5, 107.7, 115.9, 130.3, 133.4, 134.0, 136.9, 148.3, 156.8, 159.3; HRMS (FAB+): calcd for C16H17O3 257.1178, Found 257.1168 [M++H].
化合物5 (1.64 g, 5.15 mmol)、3,4-ジメトキシフェニルボロン酸 (1.41 g, 7.72mmol)、炭酸ナトリウム (1.64 g, 15.4 mmol) および蒸留水 (5 mL) のDMF (25 mL) の懸濁液を室温にて15分間撹拌した。反応混合物にPd(PPh3)4 (595 mg, 0.52 mmol) を加え、90℃にて19時間撹拌した。反応混合物を飽和食塩水および酢酸エチルで分液し、有機層を無水硫酸ナトリウムにより乾燥させた後減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル)により精製し、化合物 (E)-8 (ヘキサン/塩化メチレン=2/1(体積比)、870 mg, 52%、固体) および化合物 (Z)-8 (ヘキサン/塩化メチレン/酢酸エチル=20/20/1(体積比)、388 mg, 23%、固体)をそれぞれ得た。
(E)-8; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.89 (s, 6H), 3.82 (s, 6H), 3.91 (s, 3H), 3.91 (s, 3H), 6.38 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 6.42 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 6.79-6.83 (m, 2H), 6.88 (d, J = 8.0 Hz, 1H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) 22.4, 22.6, 55.3, 55.9, 98.2, 106.3, 110.8, 111.6, 120.4, 132.6, 132.9, 136.9, 146.8, 147.4, 148.5, 160.6; FAB-MS m/z 329 (M++H).
(Z)-8; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 2.14 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 3.58 (s, 3H), 3.59 (s, 6H), 3.80 (s, 3H), 6.15-6.17 (m, 3H), 6.47 (d, J = 2.0 Hz), 6.63 (dd, J = 8.0 and 2.0 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 8.0 Hz, 1H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) 21.2, 21.3, 55.1, 55.6, 55.7, 97.9, 107.3, 1103, 113.0, 120.7, 132.4, 132.4, 137.2, 146.9, 147.0, 147.8, 160.1; FAB-MS m/z 329 (M++H).
アルゴン雰囲気下、化合物 (E)-8 (183 mg, 0.56 mmol) の塩化メチレン(5.6 mL)溶液を−20 ℃に冷却し、三臭化ホウ素 (1.0 mol/L CH2Cl2溶液, 3.35 mL, 3.35 mmol) を滴下し80分間撹拌した。室温にてさらに90分間撹拌した後、蒸留水 (50 mL)を加えた。反応混合物を塩化メチレンにより抽出した後、さらに水層を酢酸エチルにより抽出した。得られた有機層を合わせて減圧留去した。残渣をHPLC (カラム:SHIMADZU Shim Pack PRC-SIL (250 × 20 mm), 測定波長: 254 nm, 移動相:ヘキサン/酢酸エチル = 1/2(体積比)、流速:20 mL/min)により生成し、化合物9 (Rt = 4.2 min, 55 mg, 36%) を固体として得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD) 1.80 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 6.14 (br-s, 3H), 6.53 (dd, J = 8.0 and 2.4 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H); 13C NMR (125 MHz, CD3OD) 20.9, 22.9, 101.4, 107.7, 116.1, 116.5, 120.7, 133.6, 133.8, 137.6, 144.7, 145.9, 159.3; FAB-MS m/z 273 (M++H). HRMS (FAB+): calcd for C16H17O4 273.1127, Found 273.1084 [M++H].
標準物質であるラジカルに対し、レスベラトロール(R)並びに本発明の化合物であるジメチルレスベラトロール(DR)及びジメチルヒドロキシレスベラトロール(DHR)を加えたときのチロシンラジカル及びヒドロキシラジカルの残存量を調べた。チロシンラジカルとしてミオグロビンを使用し、50mM NaPi緩衝液(pH7.4)、10mM DMPO、1.6mM ミオグロビン、及び1mM H2O2からなる標準溶液を調製した。また、ヒドロキシラジカルとしてFe2+-EDTAを使用し、50mM NaPi緩衝液(pH7.4)、10mM DMPO、0.1mM Fe2+-EDTA、及び1mM H2O2からなる標準溶液を調製した。これらの標準溶液に対し、5μM、50μM、500μMのレスベラトロール(R)、ジメチルレスベラトロール(DR)及びジメチルヒドロキシレスベラトロール(DHR)を加え、ESR測定装置RX-1(日本電子株式会社製)を用いて電子スピン共鳴(ESR)にてチロシンラジカルの量及びヒドロキシラジカルの量を吸収スペクトルの変化に対し測定した。ESRの設定はマイクロ波出力 10 mW、 調整周波数100 KHz、調整磁場 0.1 G、受信器利得1000、及び時定数0.3 sとした。結果をそれぞれ図1(A)及び図1(B)に示す。
WO2012/161112に記載された通り、以下に示す方法でドライアイによる角結膜上皮障害モデルを作製し、レスベラトロール(R)、ジメチルレスベラトロール(DR)及びジメチルヒドロキシレスベラトロール(DHR)の角結膜上皮障害に対する治癒効果を評価した。
(実験方法)
雄性SDラット(6週齢)に喫煙処理を施し、ドライアイ及び老視モデルを作製した。
(角膜上皮のフルオレセイン染色スコア判断基準)
0:染色されない(点状蛍光なし)
1:わずかに点状蛍光がみられる
2:比較的多く点状蛍光がみられる
3:密に点状蛍光がみられる
水晶体硬度は電子天秤とハイトゲージを組み合わせて測定した。あらかじめ短軸長を測定した水晶体を電子天秤の上に置き、重さを0に合わせた。水晶体の上からハイトゲージのハンドルを操作して、先端部分が水晶体に接するようにした。さらにハンドルを操作して短軸長の5-10%程度先端を下げ、水晶体に圧力をかけた。この時の重さの変化を電子天秤で測定し、重さをハイトゲージに示された移動距離で割り硬度とした。値が大きいほど硬いことを示す。
(結果)
体重は、有意差はないものの、喫煙処理群(Smoking)では喫煙非処理群(Non smoking)に比べて低下傾向にあった(図2)(喫煙非処理群及び喫煙処理群でそれぞれ308.2±10.4g及び285.9±12.2 g)。
ヒドロキシルラジカルやペルオキシルラジカル等の活性酸素は抗酸化物質および様々な有機化合物に対して反応性が非常に高く、また可視部に吸収を持たないため、抗酸化物質のラジカル消去能について速度論的解析を行うことは非常に困難である。一方、Galvinoxyl Radical(GO・)は428nmに特徴的な極大吸収を持つ比較的安定な有機酸素ラジカルであるため、活性酸素に変わって紫外可視分光法で抗酸化ラジカル消去能の速度論的解析が可能である。そこで、GO・と抗酸化物質であるレスベラトロール(R)、ジメチルレスベラトロール(DR)又はジメチルヒドロキシレスベラトロール(DHR)との反応で減少する428nmの変化を速度論的解析することで、これらの抗酸化物質のラジカル消去活性を求めた。ラジカル消去活性の測定方法については公知文献(K. Fukuhara, et al., Chem. Res. Toxicol, 21, 282-287(2008); K. Imai, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 24, 2582-2584(2014))に記載されている。
本実験はstopped flow法を用いてラジカル消去速度の測定を行った。また、使用した試薬は以下の通りである。
アセトニトリル(ナカライテスク,00433-95),
Galvinoxyl Radical(Aldrich,G30-7)
GO・のアセトニトリル溶液(約2.4×10-6M)を7分間アルゴンバブリングし、分子状酸素を除去した。また、抗酸化物質(レスベラトロール、ジメチルレスベラトロール、ジメチルヒドロキシレスベラトロール)をアセトニトリルに溶解し、2.4×10-5M〜2.5×10-3Mの範囲で5点以上の濃度の異なる溶液を調整し、7分間アルゴンバブリングして分子状酸素を除去した。次にstopped flow法により、GO・と化合物のアセトニトリル溶液を同時に混ぜた後、GO・の吸収極大(428nm)の経時変化を測定した。
GO・に由来する428nmの吸光度の減少は抗酸化物質の濃度がGO・の濃度の10倍以上の条件下([抗酸化剤]) > 10[GO・])では抗酸化剤の濃度([抗酸化物質])に対して擬一次速度式に従う(方程式(1))。
-d[GO・] / dt = kobs[GO・] (1)
ここでkobsは擬一次速度定数である。方程式(1)の両辺を積分すると方程式(2)が得られる。
ln([GO・] / [GO・]0) = - kobs t (2)
ここで[GO・]0はt=0のときのGO・の濃度である。
[GO・] / [GO・]0 = (At - A∞) / (A0 - A∞) (3)
ln(At - A∞) = - kobst + ln(A0 - A∞) (4)
方程式(4)は、ln(At - A∞)を時間tに対してプロットすると、直線が得られ、その傾きから擬一次速度定数kobsが求められることを示している。実際、ln(At - A∞)を時間tに対してプロットすると直線が得られ、この傾きからkobsを決定した。得られたkobsは抗酸化物質の濃度の増加に比例して増加した。
kobs= kHT [抗酸化物質] (5)
以上より全体の反応速度は方程式(6)で表され、GO・と抗酸化剤のそれぞれの濃度に対して一次反応であることがわかった。
Rate = d[GO・] / dt = kHT[GO・][抗酸化物質] (6)
kobsを縦軸に、[抗酸化物質]を横軸に取ったグラフの直線の傾き(GO・への水素移動速度定数(kHT))が各抗酸化物質のラジカル消去活性であり、本実施例で試験した抗酸化物質のラジカル消去活性は以下の通りである。ジメチルヒドロキシレスベラトロールはレスベラトロール及びジメチルレスベラトロールに対し、予想外の高いラジカル消去活性を有することが分かった。
レスベラトロール:4.1 M-1s-1
ジメチルレスベラトロール:0.96 M-1s-1
ジメチルヒドロキシレスベラトロール:2300 M-1s-1
実施例3に記載した方法でドライアイによる角結膜上皮障害モデルを作製し、ジメチルレスベラトロール(DR)及び市販のドライアイ治療剤である3%ジクアス(登録商標)点眼液(参天製薬株式会社、有効成分 ジクアホソナルナトリウム)の、角結膜上皮障害に対する治癒効果を比較した。
(結果)
体重は、喫煙非処理群(Non smoking)、喫煙処理群(Smoking)、ジメチルレスベラトロール群、及びジクアホソナルナトリウム群で有意差はなかった(喫煙非処理群、喫煙処理群、DR群、及びジクアホソナルナトリウム群でそれぞれ281.6±7.4g、280.0±5.8 g、271.0±7.5g、及び273.8±4.3g)。
喫煙処理も薬剤による処理も施していないラットの角膜及びジメチルレスベラトロール薬剤(300μM PBS溶液)で1週間処理したラットの角膜について、ヘマトキシリン・エオジン染色を行った。それぞれの組織切片の写真を図8(A)及び(B)に示す。
レスべラトール及びジメチルレスベラトロール(DR)の固体および10mM DMSO溶液(10% DMSO in water) を、25℃、60%相対湿度で放置し、一定時間後のそれぞれの化合物の量をHPLCで測定して安定性を評価した。化合物の量は、
(一定時間後の化合物の量)/(試験開始時の化合物の量)×100(%)
として計算した。結果を表1に示す。
Claims (5)
- m及びnがそれぞれ1から3までの整数である請求項1に記載の医薬組成物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014174332 | 2014-08-28 | ||
JP2014174332 | 2014-08-28 | ||
PCT/JP2015/074052 WO2016031869A1 (ja) | 2014-08-28 | 2015-08-26 | スチルベン化合物を有効成分とする角結膜疾患又は老視の予防及び/又は治療のための医薬組成物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2016031869A1 true JPWO2016031869A1 (ja) | 2017-06-15 |
JP6590223B2 JP6590223B2 (ja) | 2019-10-16 |
Family
ID=55399754
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016545584A Active JP6590223B2 (ja) | 2014-08-28 | 2015-08-26 | スチルベン化合物を有効成分とする角結膜疾患又は老視の予防及び/又は治療のための医薬組成物 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9968566B2 (ja) |
EP (1) | EP3187179A4 (ja) |
JP (1) | JP6590223B2 (ja) |
WO (1) | WO2016031869A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPWO2022107735A1 (ja) | 2020-11-17 | 2022-05-27 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006298876A (ja) * | 2005-04-25 | 2006-11-02 | Saisentan Igaku Kenkyusho:Kk | サーチュインの活性化剤を含む各種眼疾患治療用組成物 |
US20060111318A1 (en) | 2003-04-18 | 2006-05-25 | Advanced Medicine Research Institute | Agent for treating eye diseases |
ITRM20050446A1 (it) * | 2005-08-19 | 2007-02-20 | Tubilux Pharma S P A | Uso di stilbeni idrossilati e glucosidati per la prevenzione ed il trattamento di patologie oculari. |
JP2008110962A (ja) * | 2006-08-02 | 2008-05-15 | Santen Pharmaceut Co Ltd | Nrf2活性化物質を有効成分として含む角結膜障害の予防または治療剤 |
EP2376425A4 (en) * | 2008-12-09 | 2012-12-26 | Univ Florida | KINASE INHIBITORS COMPOUNDS |
TWI586645B (zh) * | 2011-10-12 | 2017-06-11 | Jnc Corp | 聚合性化合物、液晶組成物及液晶顯示元件 |
KR101373246B1 (ko) | 2011-12-29 | 2014-03-12 | 연세대학교 산학협력단 | Pge2 합성 억제제를 포함하는 안구 통증 치료용 약학 조성물 |
WO2013100660A2 (ko) * | 2011-12-29 | 2013-07-04 | 연세대학교 산학협력단 | Pge2 합성 억제제를 포함하는 안구 통증 치료용 약학 조성물 |
-
2015
- 2015-08-26 US US15/506,893 patent/US9968566B2/en active Active
- 2015-08-26 EP EP15836816.7A patent/EP3187179A4/en not_active Withdrawn
- 2015-08-26 WO PCT/JP2015/074052 patent/WO2016031869A1/ja active Application Filing
- 2015-08-26 JP JP2016545584A patent/JP6590223B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20170246122A1 (en) | 2017-08-31 |
JP6590223B2 (ja) | 2019-10-16 |
EP3187179A4 (en) | 2018-02-07 |
US9968566B2 (en) | 2018-05-15 |
EP3187179A1 (en) | 2017-07-05 |
WO2016031869A1 (ja) | 2016-03-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2024038066A (ja) | (s)-ノルケタミンおよびその塩の医薬品としての応用 | |
JP2018535963A5 (ja) | ||
EP2526094B1 (en) | Substituted chlorocyclopentanols for therapeutic applications | |
JP4933897B2 (ja) | 眼内移行性促進水性点眼剤 | |
JP2011510965A (ja) | 高眼圧症の治療のためのジフルオロビフェニルアミド誘導体 | |
EP1006112A1 (en) | 3-Hydroxy-2(1H)-pyridinone or 3-hydroxy-4(1H)-pyridinone derivatives useful as reactive oxygen species (ROS) scavengers | |
KR20160060656A (ko) | 폴리에틸렌글리콜 함유 조성물 | |
US10703745B2 (en) | Acyl phosphonamidates and acyl benzylamines that are Bcl family antagonists for use in clinical management of conditions caused or mediated by senescent cells and for treating cancer | |
JPWO2005079845A1 (ja) | 片頭痛予防薬 | |
JPH0427976B2 (ja) | ||
JP6590223B2 (ja) | スチルベン化合物を有効成分とする角結膜疾患又は老視の予防及び/又は治療のための医薬組成物 | |
EP1669345A1 (en) | Ester derivative and medicinal use thereof | |
JP2016056207A (ja) | プロスタグランジンアゴニストのプロドラッグの安定した水性組成物およびその使用方法 | |
JP2018100222A (ja) | 角膜損傷の治療剤、改善剤または予防剤 | |
JP6520019B2 (ja) | 新規スチルベン誘導体 | |
EP1027335A1 (en) | Ortho-hydroxypyridinone derivatives as iron chelating and antioxidant agents | |
JP6588475B2 (ja) | 治療用化合物としての新規のep4アゴニスト | |
KR101061764B1 (ko) | 신경보호효과를 가지는 피루베이트 유도체, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 약제학적 조성물 | |
WO2022201097A1 (en) | 1,3-substituted cyclobutyl derivatives and uses thereof | |
US20070054901A1 (en) | Dihydrothiazine prodrugs of thiazolium agents | |
JP2006348023A (ja) | アミン誘導体を有効成分として含む血管新生阻害剤 | |
JP2016050174A (ja) | カテキン又はカテキン誘導体を有効成分とする角結膜疾患又は老視の予防及び/又は治療剤 | |
US20140275060A1 (en) | Compounds for the treatment of neurologic disorders | |
KR20140050080A (ko) | N,n-디알킬알킬레닐 에스테르, 이의 조성물, 및 그의 사용 방법 | |
KR20070018077A (ko) | 신경인성 동통제어 조성물 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170221 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180710 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180710 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190514 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190614 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190806 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190904 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6590223 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |