JPWO2015083816A1 - 新規ｎｋ３受容体アゴニスト - Google Patents
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Abstract
本発明は、高活性・高選択的かつ生体内で持続的に作用することが期待される新規ＮＫ３受容体選択的リガンドを提供することを課題とする。式（Ｉ）Ｘ１−Ａ２−Ａ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｍｅｔ−ＮＨ２［式中の各記号は、明細書に記載の通りである。］で示される化合物又はその医薬上許容される塩は、高活性、高選択的なＮＫ３受容体アゴニスト活性を有し、タキキニン類の分泌の過剰もしくは欠乏に伴う疾患の治療薬、例えば、疼痛、性ホルモン分泌の過剰・欠乏にともなう性機能障害の改善に向けた薬剤等として有用である。
Description
本発明は、ニューロキニン（ＮＫ）受容体アゴニスト作用を有するペプチド及びその用途に関する。より詳細には本発明は、ＮＫ３受容体への選択的且つ強力な結合親和性及びアゴニスト作用を有し、且つ生体内で持続的に作用することが可能なペプチド及びその用途に関する。
視床下部前方のキスペプチンニューロン集団は、エストロジェンの正のフィードバック作用により性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）のサージ状分泌を制御する排卵中枢であり、キスペプチン類は排卵誘発を調節する新しい薬剤として期待されている。
一方、近年、卵胞発育に関与するとされるＧｎＲＨのパルス状分泌に関する種々の報告がなされており、視床下部弓状核のキスペプチンニューロンがニューロキニンＢ（ＮＫＢ）およびダイノルフィンを同時に発現し（非特許文献１）、ＧｎＲＨのパルス状分泌を促す中枢としての役割を担っていることが報告された（非特許文献２）。また、このニューロンにおける発火活動を、多ニューロン発火活動（ＭＵＡ）の一過性の上昇（ＭＵＡボレー）として記録することに成功し、ＭＵＡボレーは黄体形成ホルモン（ＬＨ）パルスと完全に同期していることが報告されている（非特許文献３及び４）。
こうした背景のもと、本発明者らは、ＮＫＢの受容体として知られるＮＫ３受容体リガンド（アゴニスト）が、ＧｎＲＨパルスおよびＬＨパルスを調節し、卵胞発育を制御する薬剤になりうると想定し、新規ＮＫ３受容体リガンドの創製に着手した。
これまでに報告されているＮＫ３受容体選択的アゴニストとして、［ＭｅＰｈｅ７］−ＮＫＢおよびsenktideが挙げられる（非特許文献５及び６）。すでに研究用試薬として市販されているこれらのペプチドは、タキキニン類およびニューロキニン受容体が関連する各種基礎研究等に利用されている。本発明者らは、これまでに［ＭｅＰｈｅ７］−ＮＫＢの活性および受容体選択性の構造要求特性に関する知見を得る目的で構造活性相関研究を展開し、この過程でＮＫ３受容体に対し高活性かつ高選択性で作用する新規ＮＫＢ誘導体を見出している（特許文献１、非特許文献７）。
一方、近年、卵胞発育に関与するとされるＧｎＲＨのパルス状分泌に関する種々の報告がなされており、視床下部弓状核のキスペプチンニューロンがニューロキニンＢ（ＮＫＢ）およびダイノルフィンを同時に発現し（非特許文献１）、ＧｎＲＨのパルス状分泌を促す中枢としての役割を担っていることが報告された（非特許文献２）。また、このニューロンにおける発火活動を、多ニューロン発火活動（ＭＵＡ）の一過性の上昇（ＭＵＡボレー）として記録することに成功し、ＭＵＡボレーは黄体形成ホルモン（ＬＨ）パルスと完全に同期していることが報告されている（非特許文献３及び４）。
こうした背景のもと、本発明者らは、ＮＫＢの受容体として知られるＮＫ３受容体リガンド（アゴニスト）が、ＧｎＲＨパルスおよびＬＨパルスを調節し、卵胞発育を制御する薬剤になりうると想定し、新規ＮＫ３受容体リガンドの創製に着手した。
これまでに報告されているＮＫ３受容体選択的アゴニストとして、［ＭｅＰｈｅ７］−ＮＫＢおよびsenktideが挙げられる（非特許文献５及び６）。すでに研究用試薬として市販されているこれらのペプチドは、タキキニン類およびニューロキニン受容体が関連する各種基礎研究等に利用されている。本発明者らは、これまでに［ＭｅＰｈｅ７］−ＮＫＢの活性および受容体選択性の構造要求特性に関する知見を得る目的で構造活性相関研究を展開し、この過程でＮＫ３受容体に対し高活性かつ高選択性で作用する新規ＮＫＢ誘導体を見出している（特許文献１、非特許文献７）。
Goodman RL, Lehman MN, Smith JT, Coolen LM, de Oliveira CV, Jafarzadehshirazi MR, Pereira A, Iqbal J, Caraty A, Ciofi P, Clarke IJ. Endocrinology, 148, 5752-5760 (2007)
Maeda K, Ohkura S, Uenoyama Y, Wakabayashi Y, Oka Y, Tsukamura H, Okamura H. Brain Res. 1364, 103-115 (2010)
Ohkura S, Takase K, Matsuyama S, Mogi K, Ichimaru T, Wakabayashi Y, Uenoyama Y, Mori Y, Steiner RA, Tsukamura H, Maeda KI, Okamura H. J. Neuroendocrinol. 21, 813-821(2009)
Wakabayashi Y, Nakada T, Murata K, Ohkura S, Mogi K, Navarro VM, Clifton DK, Mori Y, Tsukamura H, Maeda KI, Steiner RA, Okamura H. J. Neurosci. 30, 3124-3132 (2010)
Drapeau G, D'Orleans-Juste P, Dion S, Rhaleb NE, Rouissi NE, Regoli D. Neuropeptides. 10(1) 43-54 (1987)
Laufer R, Gilon C, Chorev M, Selinger Z. J Biol Chem. 261:10257-10263 (1986)
Misu R, Noguchi T, Ohno H, Oishi S, Fujii N. Bioorg. Med. Chem. 21(8) 2413-2417 (2013)
本発明は、高活性・高選択的かつ生体内で持続的に作用することが期待される新規ＮＫ３受容体選択的リガンドを提供することを目的とする。
これまでにＮＫ３受容体選択的アゴニストの１つとしてsenktideが報告されている。senktideはＮＫ３受容体に対して高いアゴニスト活性及び受容体選択性を示すペプチド性リガンドであるが、その発見はサブスタンスＰをリード化合物とするＮＫ１受容体選択的リガンドの創製研究の中で偶然見出されたものであり、senktideの詳細な構造活性相関研究はなされていなかった。
本発明者らは、これまでに報告されているタキキニン類の構造活性相関情報に基づき、senktideの誘導体を化学合成し、ヒトの３種類のニューロキニン受容体に対する生物活性をin vitroで評価した。また、合成したsenktide誘導体のin vivo生物活性を、senktide誘導体の末梢投与後のヤギのＭＵＡボレーの応答変化を指標として評価した。
その結果、senktideのAsp１をL-Glu、D-Glu、L-Aadに、Ｎ末端のスクシニル基をオキサリル基等にそれぞれ変換した誘導体がＮＫ３受容体のみに選択的かつsenktideよりも低濃度で結合親和性を示すことを見出した。これらの誘導体は、いずれもＮＫ３受容体発現細胞株の細胞内Ｃａ２＋濃度の上昇を誘引し、強力なＮＫ３受容体アゴニストであることを確認した。また、これらの誘導体がsenktideと同様に、末梢投与により中枢作用を示すことをヤギを用いた動物実験により確認した。
続いて、本発明者らは、NKB分解酵素として知られるネプリライシンに対するsenktideの分解特性を精査し、senktideがニューロキニンＢ（ＮＫＢ）の分解酵素であるネプリライシンにより、Gly-Leu間において切断を受けることを明らかにした。この分解特性に基づき、senktideのGly-Leu間のペプチド結合を、各種ペプチド等価体に変換した誘導体を設計・合成した。その結果、senktideと同等の生物活性を維持しつつ、ネプリライシンに対して高い安定性を示す新規誘導体を見出して本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、以下の通りである。
［１］式（Ｉ）
本発明者らは、これまでに報告されているタキキニン類の構造活性相関情報に基づき、senktideの誘導体を化学合成し、ヒトの３種類のニューロキニン受容体に対する生物活性をin vitroで評価した。また、合成したsenktide誘導体のin vivo生物活性を、senktide誘導体の末梢投与後のヤギのＭＵＡボレーの応答変化を指標として評価した。
その結果、senktideのAsp１をL-Glu、D-Glu、L-Aadに、Ｎ末端のスクシニル基をオキサリル基等にそれぞれ変換した誘導体がＮＫ３受容体のみに選択的かつsenktideよりも低濃度で結合親和性を示すことを見出した。これらの誘導体は、いずれもＮＫ３受容体発現細胞株の細胞内Ｃａ２＋濃度の上昇を誘引し、強力なＮＫ３受容体アゴニストであることを確認した。また、これらの誘導体がsenktideと同様に、末梢投与により中枢作用を示すことをヤギを用いた動物実験により確認した。
続いて、本発明者らは、NKB分解酵素として知られるネプリライシンに対するsenktideの分解特性を精査し、senktideがニューロキニンＢ（ＮＫＢ）の分解酵素であるネプリライシンにより、Gly-Leu間において切断を受けることを明らかにした。この分解特性に基づき、senktideのGly-Leu間のペプチド結合を、各種ペプチド等価体に変換した誘導体を設計・合成した。その結果、senktideと同等の生物活性を維持しつつ、ネプリライシンに対して高い安定性を示す新規誘導体を見出して本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、以下の通りである。
［１］式（Ｉ）
［式中、Ｘ１は、Ｒ１−Ａ１、もしくは、ジカルボン酸残基を表し；
Ｒ１は、水素原子、アセチル基、オキサリル基、スクシニル基、アミノカルボニル基、ヒドロキシアミノカルボニル基、ヒドラジノカルボニル基、メトキシジカルボニル基、アミノジカルボニル基、アミノスルホニル基、Ｎ，Ｎ−ジカルボキシメチルアスパラギン酸、もしくは、Ｎ−カルボキシメチルアスパラギン酸を表し；
Ａ１は、Ｌ−アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｄ−グルタミン酸、もしくは、Ｌ−α−アミノアジピン酸残基を表し；
Ａ２は、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−チロシン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、もしくは、Ｄ−グルタミン酸残基を表し；
Ａ３は、Ｌ−Ｎ−メチルフェニルアラニン、Ｌ−Ｎ−メチルバリン、Ｌ−Ｎ−メチルイソロイシン、Ｌ−Ｎ−メチルチロシン、もしくは、Ｌ−Ｎ−メチルトリプトファン残基を表し；
Ｘ４−Ｘ５は、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、もしくは、そのジペプチド等価体を表し；
Ｇｌｙは、グリシン残基を表し；
Ｌｅｕは、ロイシン残基を表し；
Ｍｅｔ−ＮＨ２は、メチオニンアミドを表す］で示される化合物又はその生理学的に許容される塩。
［２］Ｘ１が、
Ｒ１は、水素原子、アセチル基、オキサリル基、スクシニル基、アミノカルボニル基、ヒドロキシアミノカルボニル基、ヒドラジノカルボニル基、メトキシジカルボニル基、アミノジカルボニル基、アミノスルホニル基、Ｎ，Ｎ−ジカルボキシメチルアスパラギン酸、もしくは、Ｎ−カルボキシメチルアスパラギン酸を表し；
Ａ１は、Ｌ−アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｄ−グルタミン酸、もしくは、Ｌ−α−アミノアジピン酸残基を表し；
Ａ２は、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−チロシン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、もしくは、Ｄ−グルタミン酸残基を表し；
Ａ３は、Ｌ−Ｎ−メチルフェニルアラニン、Ｌ−Ｎ−メチルバリン、Ｌ−Ｎ−メチルイソロイシン、Ｌ−Ｎ−メチルチロシン、もしくは、Ｌ−Ｎ−メチルトリプトファン残基を表し；
Ｘ４−Ｘ５は、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、もしくは、そのジペプチド等価体を表し；
Ｇｌｙは、グリシン残基を表し；
Ｌｅｕは、ロイシン残基を表し；
Ｍｅｔ−ＮＨ２は、メチオニンアミドを表す］で示される化合物又はその生理学的に許容される塩。
［２］Ｘ１が、
（式中、Ｒａ及びＲａ’は同一又は異なってスクシニル基又はオキサリル基であり；Ｒｂ及びＲｂ’は同一又は異なってスクシニル基又はオキサリル基であり；Ｒｃ及びＲｃ’は同一又は異なってスクシニル基又はオキサリル基であり；Ｒｄ及びＲｄ’は同一又は異なってスクシニル基又はオキサリル基である）
である、上記［１］記載の化合物又はその生理学的に許容される塩。
［３］該ジペプチド等価体が、
である、上記［１］記載の化合物又はその生理学的に許容される塩。
［３］該ジペプチド等価体が、
である、上記［１］又は［２］記載の化合物又はその生理学的に許容される塩。
［４］該化合物又はその生理学的に許容される塩が、以下の配列で示されるいずれか１つのペプチド又は生理学的に許容される塩である、上記［１］記載の化合物又はその生理学的に許容される塩；
［４］該化合物又はその生理学的に許容される塩が、以下の配列で示されるいずれか１つのペプチド又は生理学的に許容される塩である、上記［１］記載の化合物又はその生理学的に許容される塩；
［５］該化合物又はその生理学的に許容される塩が、以下の配列で示されるいずれか１つのペプチド又は生理学的に許容される塩である、上記［１］記載の化合物又はその生理学的に許容される塩；
［６］上記［１］〜［５］のいずれかに記載の化合物又はその生理学的に許容される塩を含有してなる医薬。
［７］ニューロキニン受容体アゴニストである、上記［６］記載の医薬。
［８］ニューロキニン受容体が、ＮＫ３受容体である、上記［７］記載の医薬。
［９］タキキニン類及び／又はニューロキニン受容体がその発症や進行に関与する疾患の治療薬である、上記［６］記載の医薬。
［１０］該疾患が、疼痛又は性ホルモン分泌の過剰・欠乏にともなう性機能障害である、上記［９］記載の医薬。
［１１］タキキニン類及び／又はニューロキニン受容体がその発症や進行に関与する疾患を治療するための、式（Ｉ）
［７］ニューロキニン受容体アゴニストである、上記［６］記載の医薬。
［８］ニューロキニン受容体が、ＮＫ３受容体である、上記［７］記載の医薬。
［９］タキキニン類及び／又はニューロキニン受容体がその発症や進行に関与する疾患の治療薬である、上記［６］記載の医薬。
［１０］該疾患が、疼痛又は性ホルモン分泌の過剰・欠乏にともなう性機能障害である、上記［９］記載の医薬。
［１１］タキキニン類及び／又はニューロキニン受容体がその発症や進行に関与する疾患を治療するための、式（Ｉ）
［式中、Ｘ１は、Ｒ１−Ａ１、もしくは、ジカルボン酸残基を表し；
Ｒ１は、水素原子、アセチル基、オキサリル基、スクシニル基、アミノカルボニル基、ヒドロキシアミノカルボニル基、ヒドラジノカルボニル基、メトキシジカルボニル基、アミノジカルボニル基、アミノスルホニル基、Ｎ，Ｎ−ジカルボキシメチルアスパラギン酸、もしくは、Ｎ−カルボキシメチルアスパラギン酸を表し；
Ａ１は、Ｌ−アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｄ−グルタミン酸、もしくは、Ｌ−α−アミノアジピン酸残基を表し；
Ａ２は、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−チロシン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、もしくは、Ｄ−グルタミン酸残基を表し；
Ａ３は、Ｌ−Ｎ−メチルフェニルアラニン、Ｌ−Ｎ−メチルバリン、Ｌ−Ｎ−メチルイソロイシン、Ｌ−Ｎ−メチルチロシン、もしくは、Ｌ−Ｎ−メチルトリプトファン残基を表し；
Ｘ４−Ｘ５は、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、もしくは、そのジペプチド等価体を表し；
Ｇｌｙは、グリシン残基を表し；
Ｌｅｕは、ロイシン残基を表し；
Ｍｅｔ−ＮＨ２は、メチオニンアミドを表す］で示される化合物又はその生理学的に許容される塩。
［１２］該疾患が、疼痛又は性ホルモン分泌の過剰・欠乏にともなう性機能障害である、上記［１１］記載の化合物又はその生理学的に許容される塩。
［１３］上記［１］〜［５］のいずれかに記載の化合物又はその生理学的に許容される塩の有効量を、それを必要とする対象に投与することを特徴とする、タキキニン類及び／又はニューロキニン受容体がその発症や進行に関与する疾患を治療する方法。
［１４］該疾患が、疼痛又は性ホルモン分泌の過剰・欠乏にともなう性機能障害である、上記［１３］記載の方法。
［１５］上記［１］〜［５］のいずれかに記載の化合物又はその生理学的に許容される塩を含有してなる試薬。
［１６］タキキニン類及び／又はニューロキニン受容体がその発症や進行に関与する疾患の診断用及び／又は研究用である、上記［１５］記載の試薬。
Ｒ１は、水素原子、アセチル基、オキサリル基、スクシニル基、アミノカルボニル基、ヒドロキシアミノカルボニル基、ヒドラジノカルボニル基、メトキシジカルボニル基、アミノジカルボニル基、アミノスルホニル基、Ｎ，Ｎ−ジカルボキシメチルアスパラギン酸、もしくは、Ｎ−カルボキシメチルアスパラギン酸を表し；
Ａ１は、Ｌ−アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｄ−グルタミン酸、もしくは、Ｌ−α−アミノアジピン酸残基を表し；
Ａ２は、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−チロシン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、もしくは、Ｄ−グルタミン酸残基を表し；
Ａ３は、Ｌ−Ｎ−メチルフェニルアラニン、Ｌ−Ｎ−メチルバリン、Ｌ−Ｎ−メチルイソロイシン、Ｌ−Ｎ−メチルチロシン、もしくは、Ｌ−Ｎ−メチルトリプトファン残基を表し；
Ｘ４−Ｘ５は、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、もしくは、そのジペプチド等価体を表し；
Ｇｌｙは、グリシン残基を表し；
Ｌｅｕは、ロイシン残基を表し；
Ｍｅｔ−ＮＨ２は、メチオニンアミドを表す］で示される化合物又はその生理学的に許容される塩。
［１２］該疾患が、疼痛又は性ホルモン分泌の過剰・欠乏にともなう性機能障害である、上記［１１］記載の化合物又はその生理学的に許容される塩。
［１３］上記［１］〜［５］のいずれかに記載の化合物又はその生理学的に許容される塩の有効量を、それを必要とする対象に投与することを特徴とする、タキキニン類及び／又はニューロキニン受容体がその発症や進行に関与する疾患を治療する方法。
［１４］該疾患が、疼痛又は性ホルモン分泌の過剰・欠乏にともなう性機能障害である、上記［１３］記載の方法。
［１５］上記［１］〜［５］のいずれかに記載の化合物又はその生理学的に許容される塩を含有してなる試薬。
［１６］タキキニン類及び／又はニューロキニン受容体がその発症や進行に関与する疾患の診断用及び／又は研究用である、上記［１５］記載の試薬。
本発明化合物は、senktideと同等以上の生物活性を維持しつつ、ネプリライシンに対して高い安定性を有する。従って、本発明により得られた高活性・高選択的ＮＫ３受容体アゴニストは、タキキニン類の分泌の過剰もしくは欠乏に伴う疾患の治療薬、例えば、疼痛、性ホルモン分泌の過剰・欠乏にともなう性機能障害の改善に向けた薬剤、これらの疾患の治療薬開発に向けた基礎科学実験用試薬等として有用である。
以下、本明細書で用いられる各記号の定義について詳述する。
本明細書において、アミノ酸等を略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ Commission on Biochemical Nomenclature による略号あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、「L-」と示される場合はL体を示し（例えば、「L-Ala」はL体のAla）、「D-」と示される場合はD体を示し（例えば、「D-Ala」はD体のAla）、「DL-」と示される場合はD体及びL体のラセミ体を示すものとする(例えば、「DL-Ala」はD体のAla及びL体のAlaのラセミ体混
合物)。本発明においてアミノ酸残基はD体であってもL体であってもよいが、好ましくはL体である。
Ｇｌｙ又はＧ ：グリシン
Ａｌａ又はＡ ：アラニン
Ｖａｌ又はＶ ：バリン
Ｌｅｕ又はＬ ：ロイシン
Ｉｌｅ又はＩ ：イソロイシン
Ｓｅｒ又はＳ ：セリン
Ｔｈｒ又はＴ ：スレオニン
Ｃｙｓ又はＣ ：システイン
Ｍｅｔ又はＭ ：メチオニン
Ｇｌｕ又はＥ ：グルタミン酸
Ａｓｐ又はＤ ：アスパラギン酸
Ｌｙｓ又はＫ ：リジン
Ａｒｇ又はＲ ：アルギニン
Ｈｉｓ又はＨ ：ヒスチジン
Ｐｈｅ又はＦ ：フェニルアラニン
Ｔｙｒ又はＹ ：チロシン
Ｔｒｐ又はＷ ：トリプトファン
Ｐｒｏ又はＰ ：プロリン
Ａｓｎ又はＮ ：アスパラギン
Ｇｌｎ又はＱ ：グルタミン
ｐＧｌｕ ：ピログルタミン酸
ＭｅＰｈｅ ：Ｎ−メチルフェニルアラニン
ＭｅＶａｌ ：Ｎ−メチルバリン
ＭｅＩｌｅ ：Ｎ−メチルイソロイシン
ＭｅＴｙｒ ：Ｎ−メチルチロシン
ＭｅＴｒｐ ：Ｎ−メチルトリプトファン
ＭｅＬｅｕ ：Ｎ−メチルロイシン
ＭｅＡｓｐ ：Ｎ−メチルアスパラギン酸
Ａａｄ ：２−アミノアジピン酸
Succinyl ：-CO-CH2CH2-COOH
Oxalyl ：-CO-COOH
Ac ：アセチル基（-COCH3）
本明細書において、アミノ酸等を略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ Commission on Biochemical Nomenclature による略号あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、「L-」と示される場合はL体を示し（例えば、「L-Ala」はL体のAla）、「D-」と示される場合はD体を示し（例えば、「D-Ala」はD体のAla）、「DL-」と示される場合はD体及びL体のラセミ体を示すものとする(例えば、「DL-Ala」はD体のAla及びL体のAlaのラセミ体混
合物)。本発明においてアミノ酸残基はD体であってもL体であってもよいが、好ましくはL体である。
Ｇｌｙ又はＧ ：グリシン
Ａｌａ又はＡ ：アラニン
Ｖａｌ又はＶ ：バリン
Ｌｅｕ又はＬ ：ロイシン
Ｉｌｅ又はＩ ：イソロイシン
Ｓｅｒ又はＳ ：セリン
Ｔｈｒ又はＴ ：スレオニン
Ｃｙｓ又はＣ ：システイン
Ｍｅｔ又はＭ ：メチオニン
Ｇｌｕ又はＥ ：グルタミン酸
Ａｓｐ又はＤ ：アスパラギン酸
Ｌｙｓ又はＫ ：リジン
Ａｒｇ又はＲ ：アルギニン
Ｈｉｓ又はＨ ：ヒスチジン
Ｐｈｅ又はＦ ：フェニルアラニン
Ｔｙｒ又はＹ ：チロシン
Ｔｒｐ又はＷ ：トリプトファン
Ｐｒｏ又はＰ ：プロリン
Ａｓｎ又はＮ ：アスパラギン
Ｇｌｎ又はＱ ：グルタミン
ｐＧｌｕ ：ピログルタミン酸
ＭｅＰｈｅ ：Ｎ−メチルフェニルアラニン
ＭｅＶａｌ ：Ｎ−メチルバリン
ＭｅＩｌｅ ：Ｎ−メチルイソロイシン
ＭｅＴｙｒ ：Ｎ−メチルチロシン
ＭｅＴｒｐ ：Ｎ−メチルトリプトファン
ＭｅＬｅｕ ：Ｎ−メチルロイシン
ＭｅＡｓｐ ：Ｎ−メチルアスパラギン酸
Ａａｄ ：２−アミノアジピン酸
Succinyl ：-CO-CH2CH2-COOH
Oxalyl ：-CO-COOH
Ac ：アセチル基（-COCH3）
本発明は、ニューロキニン受容体、具体的にはＮＫ３受容体に特異的なアゴニスト作用を有する化合物を提供する。具体的には、式（Ｉ）
［式中、Ｘ１は、Ｒ１−Ａ１、もしくは、ジカルボン酸残基を表し；
Ｒ１は、水素原子、アセチル基、オキサリル基、スクシニル基、アミノカルボニル基、ヒドロキシアミノカルボニル基、ヒドラジノカルボニル基、メトキシジカルボニル基、アミノジカルボニル基、アミノスルホニル基、Ｎ，Ｎ−ジカルボキシメチルアスパラギン酸、もしくは、Ｎ−カルボキシメチルアスパラギン酸を表し；
Ａ１は、Ｌ−アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｄ−グルタミン酸、もしくは、Ｌ−α−アミノアジピン酸残基を表し；
Ａ２は、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−チロシン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、もしくは、Ｄ−グルタミン酸残基を表し；
Ａ３は、Ｌ−Ｎ−メチルフェニルアラニン、Ｌ−Ｎ−メチルバリン、Ｌ−Ｎ−メチルイソロイシン、Ｌ−Ｎ−メチルチロシン、もしくは、Ｌ−Ｎ−メチルトリプトファン残基を表し；
Ｘ４−Ｘ５は、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、もしくは、そのジペプチド等価体を表し；
Ｇｌｙは、グリシン残基を表し；
Ｌｅｕは、ロイシン残基を表し；
Ｍｅｔ−ＮＨ２は、メチオニンアミドを表す］で示される化合物（本明細書中、化合物（Ｉ）とも称する）又はその生理学的に許容される塩を提供する。
Ｒ１は、水素原子、アセチル基、オキサリル基、スクシニル基、アミノカルボニル基、ヒドロキシアミノカルボニル基、ヒドラジノカルボニル基、メトキシジカルボニル基、アミノジカルボニル基、アミノスルホニル基、Ｎ，Ｎ−ジカルボキシメチルアスパラギン酸、もしくは、Ｎ−カルボキシメチルアスパラギン酸を表し；
Ａ１は、Ｌ−アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｄ−グルタミン酸、もしくは、Ｌ−α−アミノアジピン酸残基を表し；
Ａ２は、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−チロシン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、もしくは、Ｄ−グルタミン酸残基を表し；
Ａ３は、Ｌ−Ｎ−メチルフェニルアラニン、Ｌ−Ｎ−メチルバリン、Ｌ−Ｎ−メチルイソロイシン、Ｌ−Ｎ−メチルチロシン、もしくは、Ｌ−Ｎ−メチルトリプトファン残基を表し；
Ｘ４−Ｘ５は、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、もしくは、そのジペプチド等価体を表し；
Ｇｌｙは、グリシン残基を表し；
Ｌｅｕは、ロイシン残基を表し；
Ｍｅｔ−ＮＨ２は、メチオニンアミドを表す］で示される化合物（本明細書中、化合物（Ｉ）とも称する）又はその生理学的に許容される塩を提供する。
上記式（Ｉ）中、Ｘ１は、Ｒ１−Ａ１、もしくは、ジカルボン酸残基を表す。ここで、Ｒ１は、水素原子、アセチル基、オキサリル基、スクシニル基、アミノカルボニル基、ヒドロキシアミノカルボニル基、ヒドラジノカルボニル基、メトキシジカルボニル基、アミノジカルボニル基、アミノスルホニル基、Ｎ，Ｎ−ジカルボキシメチルアスパラギン酸、もしくは、Ｎ−カルボキシメチルアスパラギン酸を表し、Ａ１は、Ｌ−アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｄ−グルタミン酸、もしくは、Ｌ−α−アミノアジピン酸残基を表す。Ｘ１としてのジカルボン酸残基としては、２つのカルボキシル基を有する構造であれば特に限定されない。好ましいＸ１として、以下の構造で示される基が挙げられる。
上記式中、Ｒａ及びＲａ’は同一又は異なってスクシニル基又はオキサリル基であり、好ましくは、Ｒａ及びＲａ’は同一でスクシニル基又はオキサリル基である。Ｒｂ及びＲｂ’は同一又は異なってスクシニル基又はオキサリル基であり、好ましくは、Ｒｂ及びＲｂ’は同一でスクシニル基又はオキサリル基である。Ｒｃ及びＲｃ’は同一又は異なってスクシニル基又はオキサリル基であり、好ましくは、Ｒｃ及びＲｃ’は同一でスクシニル基又はオキサリル基である。Ｒｄ及びＲｄ’は同一又は異なってスクシニル基又はオキサリル基であり、好ましくは、Ｒｄ及びＲｄ’は同一でスクシニル基又はオキサリル基である。
上記式（Ｉ）中、Ａ２は、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−チロシン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、もしくは、Ｄ−グルタミン酸残基を表す。
上記式（Ｉ）中、Ａ３は、Ｌ−Ｎ−メチルフェニルアラニン、Ｌ−Ｎ−メチルバリン、Ｌ−Ｎ−メチルイソロイシン、Ｌ−Ｎ−メチルチロシン、もしくは、Ｌ−Ｎ−メチルトリプトファン残基を表す。
上記式（Ｉ）中、Ｘ４−Ｘ５は、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、もしくは、そのジペプチド等価体を表す。Ｇｌｙ−Ｌｅｕはグリシンとロイシンがペプチド結合によって結合したジペプチドの残基を表し、以下の構造で示される。
Ｇｌｙ−Ｌｅｕのジペプチド等価体とはＧｌｙ−Ｌｅｕのペプチド結合(-CONH-)が他の結合に置き換えられたものであって、当該他の結合としては、-CH=CH-, -CH2-CH2-, -CH2-CH=, -C(=N-OH)-NH-, -C(=NH)-NH-等が挙げられる。このようなジペプチド等価体を本明細書中ＧｌｙψＬｅｕと表記する場合がある。
化合物（Ｉ）として、好ましくは以下の表１〜７に記載のペプチドが例示される。
４０ｂ１及び４０ｂ２、４０ｄ１及び４０ｄ２、並びに４０ｇ１及び４０ｇ２はそれぞれ原料としてシス及びトランスの混合物を用いて合成された、異なる立体化学構造を有する化合物である。１１２は原料としてシス体を用いて得られた化合物であり、１１３はシス及びトランスの混合物を用いて合成した化合物である。
１１７は原料としてシス体を用いて得られた化合物であり、１１８はシス及びトランスの混合物を用いて合成した化合物である。
より好ましくは、
の配列で示されるいずれか１つのペプチド又は生理学的に許容される塩であり、いっそう好ましくは、
の配列で示されるいずれか１つのペプチド又は生理学的に許容される塩である。
化合物（Ｉ）は塩の形態であってもよい。このような塩としては、例えば金属塩、アンモニウム塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩、塩基性又は酸性アミノ酸との塩等が挙げられる。金属塩の好適な例としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩等のアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩等が挙げられる。有機塩基との塩の好適な例としては、例えばトリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、２，６−ルチジン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、シクロヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン等との塩が挙げられる。無機酸との塩の好適な例としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸等との塩が挙げられる。有機酸との塩の好適な例としては、例えばギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フタル酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等との塩が挙げられる。塩基性アミノ酸との塩の好適な例としては、例えばアルギニン、リジン、オルニチン等との塩が挙げられ、酸性アミノ酸との塩の好適な例としては、例えばアスパラギン酸、グルタミン酸等との塩が挙げられる。
このうち、薬学的に許容し得る塩が好ましい。例えば、化合物内に酸性官能基を有する場合にはアルカリ金属塩（例、ナトリウム塩、カリウム塩等）、アルカリ土類金属塩（例、カルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩等）等の無機塩、アンモニウム塩等が、また、化合物内に塩基性官能基を有する場合には、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸を伴う無機酸との塩、又は酢酸、フタル酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の有機酸との塩が好ましい。
このうち、薬学的に許容し得る塩が好ましい。例えば、化合物内に酸性官能基を有する場合にはアルカリ金属塩（例、ナトリウム塩、カリウム塩等）、アルカリ土類金属塩（例、カルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩等）等の無機塩、アンモニウム塩等が、また、化合物内に塩基性官能基を有する場合には、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸を伴う無機酸との塩、又は酢酸、フタル酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の有機酸との塩が好ましい。
化合物（Ｉ）は、ペプチドであり、自体公知のペプチドの合成法に従って製造することができる。ペプチドの合成法としては、例えば固相合成法、液相合成法のいずれによっても良い。すなわち、化合物（Ｉ）を構成し得る部分ペプチドもしくはアミノ酸と残余部分とを所望配列通りに縮合させることを繰り返し、目的のペプチドを製造することができる。所望配列を有する生成物が保護基を有する場合は保護基を脱離することにより目的のペプチドを製造することができる。公知の縮合方法や保護基の脱離法としてはたとえば、以下の（１）〜（５）に記載された方法が挙げられる。
（１）M. Bodanszky 及び M.A. Ondetti、ペプチド シンセシス (Peptide Synthesis),Interscience Publishers, New York (1966年)
（２）Schroeder及びLuebke、ザ ペプチド(The Peptide), Academic Press, New York (1965年)
（３）泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株) （1975年）
（４）矢島治明 及び榊原俊平、生化学実験講座 1、 タンパク質の化学IV、 205、(1977年)
（５）矢島治明監修、続医薬品の開発 第14巻 ペプチド合成 広川書店
また、反応後は通常の精製法、たとえば、溶媒抽出・蒸留・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー・再結晶等を組み合わせて本発明のペプチドを精製単離することができる。上記方法で得られるペプチドが遊離体である場合は公知の方法によって適当な塩に変換することができるし、逆に塩で得られた場合は、公知の方法によって遊離体に変換することができる。
なお、原料化合物は塩であってもよく、このような塩としては、本発明のペプチドの塩として上述したものと同様のものが挙げられる。
（１）M. Bodanszky 及び M.A. Ondetti、ペプチド シンセシス (Peptide Synthesis),Interscience Publishers, New York (1966年)
（２）Schroeder及びLuebke、ザ ペプチド(The Peptide), Academic Press, New York (1965年)
（３）泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株) （1975年）
（４）矢島治明 及び榊原俊平、生化学実験講座 1、 タンパク質の化学IV、 205、(1977年)
（５）矢島治明監修、続医薬品の開発 第14巻 ペプチド合成 広川書店
また、反応後は通常の精製法、たとえば、溶媒抽出・蒸留・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー・再結晶等を組み合わせて本発明のペプチドを精製単離することができる。上記方法で得られるペプチドが遊離体である場合は公知の方法によって適当な塩に変換することができるし、逆に塩で得られた場合は、公知の方法によって遊離体に変換することができる。
なお、原料化合物は塩であってもよく、このような塩としては、本発明のペプチドの塩として上述したものと同様のものが挙げられる。
保護されたアミノ酸又はペプチドの縮合に関しては、ペプチド合成に使用できる各種活性化試薬を用いることができるが、特に、トリスフォスフォニウム塩類、テトラメチルウロニウム塩類、カルボジイミド類等がよい。トリスフォスフォニウム塩類としてはベンゾトリアゾール-1-イルオキシトリス（ピロリジノ）フォスフォニウムヘキサフルオロフォスフェイト(PyBOP)、ブロモトリス（ピロリジノ）フォスフォニウムヘキサフルオロフォスフェイト(PyBroP)、7-アザベンゾトリアゾール-１-イルオキシトリス（ピロリジノ）フォスフォニウムヘキサフルオロフォスフェイト(PyAOP)、テトラメチルウロニウム塩類としては2-(1H-ベンゾトリアゾル-1-イル)-1,1,3,3-ヘキサフルオロフォスフェイト(HBTU)、2-(7-アザベンゾトリアゾル-1-イル)-1,1,3,3-ヘキサフルオロフォスフェイト(HATU)、2-(1H-ベンゾトリアゾル-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレイト(TBTU)、2-(5-ノルボルネン-2,3-ジカルボキシイミド)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレイト(TNTU)、O-(N-スクシミジル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレイト(TSTU)、カルボジイミド類としてはDCC、N,N'-ジイソプロピルカルボジイミド(DIPCDI)、N-エチル-N'-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(EDCI・HCl)等が挙げられる。これらによる縮合にはラセミ化抑制剤（例えば、N-ヒドロキシ-5-ノルボルネン-2,3-ジカルボキシイミド(HONB), 1−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt), 1−ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール(HOAt), 3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-4-オキソ-1,2,3-ベンゾトリアジン(HOOBt)等）の添加が好ましい。縮合に用いられる溶媒としては、ペプチド縮合反応に使用しうることが知られている溶媒から適宜選択されうる。たとえば無水又は含水のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン等の酸アミド類、塩化メチレン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類、トリフルオロエタノール、フェノール等のアルコール類、ジメチルスルホキシド等のスルホキシド類、ピリジン等の三級アミン類、ジオキサン、テトラヒドロフラン等のエーテル類、アセトニトリル、プロピオニトリル等のニトリル類、酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類あるいはこれらの適宜の混合物等が用いられる。反応温度はペプチド結合形成反応に使用され得ることが知られている範囲から適宜選択され、通常約−２０℃〜５０℃の範囲から適宜選択される。活性化されたアミノ酸誘導体は通常１．５から６倍過剰で用いられる。固相合成の場合にはニンヒドリン反応を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合には保護基の脱離を行うことなく縮合反応を繰り返すことにより十分な縮合を行うことができる。反応を繰り返しても十分な縮合が得られないときには、無水酢酸又はアセチルイミダゾール等を用いて未反応アミノ酸をアシル化して、後の反応に影響を及ぼさないようにすることができる。
原料アミノ酸のアミノ基の保護基としては、例えば、ベンジルオキシカルボニル(Ｚ)、tert-ブトキシカルボニル(Boc)、tert-ペンチルオキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、Cl-Z、Br-Z、アダマンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホルミル、２−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホスフィノチオイル、9-フルオレニルメチルオキシカルボニル(Fmoc)、トリチル（Trt）等が挙げられる。
原料アミノ酸のカルボキシル基の保護基としては、例えば、tert-ブチル（But）基、ベンジル(Bzl)基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ３−１０シクロアルキル基、Ｃ７−１４アラルキル基の他、アリル、２−アダマンチル、４−ニトロベンジル、４−メトキシベンジル、４−クロロベンジル、フェナシル及びベンジルオキシカルボニルヒドラジド、tert-ブトキシカルボニルヒドラジド、トリチルヒドラジド等が挙げられる。
セリン及びスレオニンの水酸基は、例えばエステル化又はエーテル化によって保護することができる。このエステル化に適する基としては、例えばアセチル基等の低級（Ｃ２−４）アルカノイル基、ベンゾイル基等のアロイル基等、及び有機酸から誘導される基等が挙げられる。また、エーテル化に適する基としては、例えばベンジル、テトラヒドロピラニル、But、Trt等である。
チロシンのフェノール性水酸基の保護基としては、例えばBzl、2,6-ジクロルベンジル、２−ニトロベンジル、Br-Z、But等が挙げられる。
ヒスチジンのイミダゾールの保護基としては、例えばp-トルエンスルホニル(Tos)、４-メトキシ-2,3,6-トリメチルベンゼンスルホニル(Mtr)、2,4-ジニトロフェニル(DNP)、ベンジルオキシメチル(Bom)、tert-ブトキシメチル(Bum)、Boc、Trt、Fmoc等が挙げられる。
アルギニンのグアニジノ基の保護基としては、例えばTos、Z、4-メトキシ-2,3,6-トリメチルベンゼンスルフォニル(Mtr)、p-メトキシベンゼンスルフォニル(MBS)、2,2,5,7,8-ペンタメチルクロマン-6-スルフォニル(Pmc)、メシチレン-2-スルフォニル(Mts)、2,2,4,6,7-ペンタメチルジヒドロベンゾフラン-5-スルホニル(Pbf)、Boc、Z、NO2等が挙げられる。
リジンの側鎖アミノ基の保護基としては、例えばZ、Cl-Z、トリフルオロアセチル、Boc、Fmoc、Trt、Mtr、4,4-ジメチル-2,6-ジオキソサイクロヘキシリデンエイル（Dde）等が挙げられる。
トリプトファンのインドリル保護基としては、例えばホルミル(For)、Z、Boc、Mts、Mtr等が挙げられる。
アスパラギン、グルタミンの保護基としては、例えばTrt、キサンチル(Xan)、4,4'-ジメトキシベンズヒドリル(Mbh)、2,4,6-トリメトキシベンジル(Tmob)等が挙げられる。
原料のカルボキシル基の活性化されたものとしては、例えば対応する酸無水物、アジド、活性エステル［アルコール（たとえば、ペンタクロロフェノール、2,4,5-トリクロロフェノール、2,4-ジニトロフェノール、シアノメチルアルコール、パラニトロフェノール、HONB、N-ヒドロキシスクシミド、HOBt、HOAtとのエステル）等が挙げられる。原料のアミノ基の活性化されたものとしては、たとえば対応する亜リン酸アミドが挙げられる。
原料アミノ酸のカルボキシル基の保護基としては、例えば、tert-ブチル（But）基、ベンジル(Bzl)基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ３−１０シクロアルキル基、Ｃ７−１４アラルキル基の他、アリル、２−アダマンチル、４−ニトロベンジル、４−メトキシベンジル、４−クロロベンジル、フェナシル及びベンジルオキシカルボニルヒドラジド、tert-ブトキシカルボニルヒドラジド、トリチルヒドラジド等が挙げられる。
セリン及びスレオニンの水酸基は、例えばエステル化又はエーテル化によって保護することができる。このエステル化に適する基としては、例えばアセチル基等の低級（Ｃ２−４）アルカノイル基、ベンゾイル基等のアロイル基等、及び有機酸から誘導される基等が挙げられる。また、エーテル化に適する基としては、例えばベンジル、テトラヒドロピラニル、But、Trt等である。
チロシンのフェノール性水酸基の保護基としては、例えばBzl、2,6-ジクロルベンジル、２−ニトロベンジル、Br-Z、But等が挙げられる。
ヒスチジンのイミダゾールの保護基としては、例えばp-トルエンスルホニル(Tos)、４-メトキシ-2,3,6-トリメチルベンゼンスルホニル(Mtr)、2,4-ジニトロフェニル(DNP)、ベンジルオキシメチル(Bom)、tert-ブトキシメチル(Bum)、Boc、Trt、Fmoc等が挙げられる。
アルギニンのグアニジノ基の保護基としては、例えばTos、Z、4-メトキシ-2,3,6-トリメチルベンゼンスルフォニル(Mtr)、p-メトキシベンゼンスルフォニル(MBS)、2,2,5,7,8-ペンタメチルクロマン-6-スルフォニル(Pmc)、メシチレン-2-スルフォニル(Mts)、2,2,4,6,7-ペンタメチルジヒドロベンゾフラン-5-スルホニル(Pbf)、Boc、Z、NO2等が挙げられる。
リジンの側鎖アミノ基の保護基としては、例えばZ、Cl-Z、トリフルオロアセチル、Boc、Fmoc、Trt、Mtr、4,4-ジメチル-2,6-ジオキソサイクロヘキシリデンエイル（Dde）等が挙げられる。
トリプトファンのインドリル保護基としては、例えばホルミル(For)、Z、Boc、Mts、Mtr等が挙げられる。
アスパラギン、グルタミンの保護基としては、例えばTrt、キサンチル(Xan)、4,4'-ジメトキシベンズヒドリル(Mbh)、2,4,6-トリメトキシベンジル(Tmob)等が挙げられる。
原料のカルボキシル基の活性化されたものとしては、例えば対応する酸無水物、アジド、活性エステル［アルコール（たとえば、ペンタクロロフェノール、2,4,5-トリクロロフェノール、2,4-ジニトロフェノール、シアノメチルアルコール、パラニトロフェノール、HONB、N-ヒドロキシスクシミド、HOBt、HOAtとのエステル）等が挙げられる。原料のアミノ基の活性化されたものとしては、たとえば対応する亜リン酸アミドが挙げられる。
保護基の除去（脱離）方法としては、例えばPd黒あるいはPd炭素等の触媒の存在下での水素気流中での接触還元や、また、無水フッ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、臭化トリメシルシラン（TMSBr）、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート、テトラフルオロホウ酸、トリス(トリフルオロ)ホウ素、三臭化ホウ素あるいはこれらの混合液等による酸処理や、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ピペリジン、ピペラジン等による塩基処理、また液体アンモニア中ナトリウムによる還元等も挙げられる。上記酸処理による脱離反応は一般に−２０℃〜４０℃の温度で行われるが、酸処理においてはアニソール、フェノール、チオアニソール、メタクレゾール、パラクレゾールのようなカチオン捕捉剤や、ジメチルスルフィド、1,4-ブタンジチオール、1,2-エタンジチオール等の添加が有効である。また、ヒスチジンのイミダゾール保護基として用いられる2,4-ジニトロフェニル基はチオフェノール処理により除去され、トリプトファンのインドール保護基として用いられるホルミル基は上記の1,2-エタンジチオール、1,4-ブタンジチオール等の存在下の酸処理による脱保護以外に、希水酸化ナトリウム、希アンモニア等によるアルカリ処理によっても除去される。
原料の反応に関与すべきでない官能基の保護及び保護基、ならびにその保護基の脱離、反応に関与する官能基の活性化等は公知の保護基あるいは公知の手段から適宜選択しうる。
原料の反応に関与すべきでない官能基の保護及び保護基、ならびにその保護基の脱離、反応に関与する官能基の活性化等は公知の保護基あるいは公知の手段から適宜選択しうる。
化合物（Ｉ）は、Ｃ末端にメチオニンアミドを有する。ペプチドのアミド体を得る方法としては、アミド体合成用樹脂を用いて固相合成するか又はカルボキシル末端アミノ酸のα−カルボキシル基をアミド化した後、アミノ基側にペプチド鎖を所望の鎖長まで延ばした後、該ペプチド鎖のＮ末端のα−アミノ基の保護基のみを除いたペプチドとＣ末端のカルボキシル基の保護基のみを除いたペプチド（又はアミノ酸）とを製造し、この両ペプチドを上記したような混合溶媒中で縮合させる。縮合反応の詳細については上記と同様である。縮合により得られた保護ペプチドを精製した後、上記方法によりすべての保護基を除去し、所望の粗ポリペプチドを得ることができる。この粗ペプチドは既知の各種精製手段を駆使して精製し、主要画分を凍結乾燥することで所望のペプチドのアミド体を得ることができる。
化合物（Ｉ）が、エナンチオマー、ジアステレオマー等のコンフィギュレーショナル アイソマー（配置異性体）、コンフォーマー（配座異性体）等として存在する場合には、これらも化合物（Ｉ）として含有されると共に、所望により、自体公知の手段、前記の分離、精製手段によりそれぞれを単離することができる。また、化合物（Ｉ）がラセミ体である場合には、通常の光学分割手段によりＳ体及びＲ体に分離することができる。
化合物（Ｉ）に立体異性体が存在する場合には、この異性体が単独の場合及びそれらの混合物の場合も化合物（Ｉ）に含まれる。
また、化合物（Ｉ）は、溶媒和物（例、水和物）又は無溶媒和物（例、非水和物）であってもよい。
化合物（Ｉ）は、同位元素（例、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、１２５Ｉ）等で標識されていてもよい。
さらに、化合物（Ｉ）は、１Ｈを２Ｈ（Ｄ）に変換した重水素変換体であってもよい。
化合物（Ｉ）に立体異性体が存在する場合には、この異性体が単独の場合及びそれらの混合物の場合も化合物（Ｉ）に含まれる。
また、化合物（Ｉ）は、溶媒和物（例、水和物）又は無溶媒和物（例、非水和物）であってもよい。
化合物（Ｉ）は、同位元素（例、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、１２５Ｉ）等で標識されていてもよい。
さらに、化合物（Ｉ）は、１Ｈを２Ｈ（Ｄ）に変換した重水素変換体であってもよい。
本明細書におけるペプチドはペプチド標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端がＣ末端（カルボキシル末端）である。ペプチドのＮ末端アミノ酸において「Ｈ−」と標記された場合は、末端アミノ基が誘導体化されていないことを示す。ペプチドのＣ末端アミノ酸において「−ＮＨ２」と標記された場合は末端カルボキシル基がアミド化されていることを示す。
化合物（Ｉ）は、結晶であってもよく、該結晶の結晶形は単一であっても複数であってもよい。結晶は、自体公知の結晶化法を用いて製造することができる。
化合物（Ｉ）は、薬学的に許容され得る共結晶または共結晶塩であってもよい。ここで、共結晶または共結晶塩とは、各々が異なる物理的特性（例えば、構造、融点、融解熱、吸湿性、溶解性および安定性等）を持つ、室温で二種またはそれ以上の独特な固体から構成される結晶性物質を意味する。共結晶または共結晶塩は、自体公知の共結晶化法に従い製造することができる。
化合物（Ｉ）の結晶は、物理化学的性質（例、融点、溶解度、安定性）及び生物学的性質（例、体内動態（吸収性、分布、代謝、排泄）、薬効発現）に優れ、医薬として極めて有用である。
化合物（Ｉ）は、薬学的に許容され得る共結晶または共結晶塩であってもよい。ここで、共結晶または共結晶塩とは、各々が異なる物理的特性（例えば、構造、融点、融解熱、吸湿性、溶解性および安定性等）を持つ、室温で二種またはそれ以上の独特な固体から構成される結晶性物質を意味する。共結晶または共結晶塩は、自体公知の共結晶化法に従い製造することができる。
化合物（Ｉ）の結晶は、物理化学的性質（例、融点、溶解度、安定性）及び生物学的性質（例、体内動態（吸収性、分布、代謝、排泄）、薬効発現）に優れ、医薬として極めて有用である。
化合物（Ｉ）は、ＮＫ３受容体アゴニスト作用を有する。該作用から、化合物（Ｉ）は、哺乳動物（例、ヒト、サル、ネコ、ブタ、ウマ、ウシ、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ウサギ等）に対し、タキキニン類及び／又はニューロキニン受容体がその発症や進行に関与する疾患や病態の予防又は治療薬として有用である。従って、本願発明は、化合物（Ｉ）の有効量を、それを必要とする対象（例、ヒト、サル、ネコ、ブタ、ウマ、ウシ、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ウサギ等；特にヒト）に投与することを含む、タキキニン類及び／又はニューロキニン受容体がその発症や進行に関与する疾患を治療する方法を提供する。
このような疾患、病態としては、例えば、性ホルモン分泌の過剰・過少による性機能不全症・発育不全、良性腫瘍、悪性腫瘍、代謝異常等が挙げられる。
このような疾患、病態としては、例えば、性ホルモン分泌の過剰・過少による性機能不全症・発育不全、良性腫瘍、悪性腫瘍、代謝異常等が挙げられる。
化合物（Ｉ）は、そのままあるいは薬理学的に許容される担体とともに、自体公知の手段、例えば、日本薬局方に記載の方法に従って製剤化することによって、医薬として用いられる。
化合物（Ｉ）を含有してなる医薬は、毒性が低く、医薬製剤の製造法で一般的に用いられている自体公知の手段に従って、化合物（Ｉ）をそのままあるいは薬理学的に許容される担体と混合して、例えば、錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠、舌下錠、口腔内崩壊錠を含む）、散剤、顆粒剤、カプセル剤（ソフトカプセル、マイクロカプセルを含む）、液剤、トローチ剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤、注射剤（例、皮下注射剤、静脈内注射剤、筋肉内注射剤、腹腔内注射剤等）、外用剤（例、経鼻投与製剤、経皮製剤、軟膏剤）、坐剤（例、直腸坐剤、膣坐剤）、ペレット、経鼻剤、経肺剤（吸入剤）、点滴剤等の医薬製剤として、経口的又は非経口的（例、局所、直腸、静脈投与等）に安全に投与することができる。
また、これらの製剤は、速放性製剤又は徐放性製剤等の放出制御製剤（例、徐放性マイクロカプセル）であってもよい。
なお、医薬製剤中の化合物（Ｉ）の含有量は、製剤全体の約０.０１ないし約１００重量％である。
化合物（Ｉ）の投与量は、投与対象、症状、投与方法等により適宜選択される。例えば、本発明化合物を経口投与する場合、ヒト（体重６０ｋｇとして）に対する投与量は、一日につき約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。化合物（Ｉ）を非経口的に投与する場合、ヒト（体重６０ｋｇとして）に対する投与量は、一日につき約０．０１〜３０ｍｇ、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ、より好ましくは約０．５〜１０ｍｇである。この量を１日１〜数回に分けて投与することができる。
また、これらの製剤は、速放性製剤又は徐放性製剤等の放出制御製剤（例、徐放性マイクロカプセル）であってもよい。
なお、医薬製剤中の化合物（Ｉ）の含有量は、製剤全体の約０.０１ないし約１００重量％である。
化合物（Ｉ）の投与量は、投与対象、症状、投与方法等により適宜選択される。例えば、本発明化合物を経口投与する場合、ヒト（体重６０ｋｇとして）に対する投与量は、一日につき約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。化合物（Ｉ）を非経口的に投与する場合、ヒト（体重６０ｋｇとして）に対する投与量は、一日につき約０．０１〜３０ｍｇ、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ、より好ましくは約０．５〜１０ｍｇである。この量を１日１〜数回に分けて投与することができる。
本発明の医薬の製造に用いられてもよい薬理学的に許容される担体としては、製剤素材として慣用の各種有機あるいは無機担体物質が挙げられ、例えば固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤及び崩壊剤、あるいは液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤及び無痛化剤等が挙げられる。更に必要に応じ、通常の防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤、吸着剤、湿潤剤等の添加物を適宜、適量用いることもできる。
賦形剤としては、例えば乳糖、白糖、Ｄ−マンニトール、デンプン、コーンスターチ、結晶セルロース、軽質無水ケイ酸等が挙げられる。
滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、コロイドシリカ等が挙げられる。
結合剤としては、例えば結晶セルロース、白糖、Ｄ−マンニトール、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、デンプン、ショ糖、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム等が挙げられる。
崩壊剤としては、例えばデンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、Ｌ−ヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。
溶剤としては、例えば注射用水、アルコール、プロピレングリコール、マクロゴール、ゴマ油、トウモロコシ油、オリーブ油等が挙げられる。
溶解補助剤としては、例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコール、Ｄ−マンニトール、安息香酸ベンジル、エタノール、トリスアミノメタン、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。
懸濁化剤としては、例えばステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、モノステアリン酸グリセリン等の界面活性剤；例えばポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等の親水性高分子等が挙げられる。
等張化剤としては、例えばブドウ糖、Ｄ−ソルビトール、塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ−マンニトール等が挙げられる。
緩衝剤としては、例えばリン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩等の緩衝液等が挙げられる。
無痛化剤としては、例えばベンジルアルコール等が挙げられる。
防腐剤としては、例えばパラヒドロキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸等が挙げられる。
抗酸化剤としては、例えば亜硫酸塩、アスコルビン酸、α−トコフェロール等が挙げられる。
着色剤としては、例えば水溶性食用タール色素（例、食用赤色２号及び３号、食用黄色４号及び５号、食用青色１号及び２号等の食用色素）、水不溶性レーキ色素（例、前記水溶性食用タール色素のアルミニウム塩）、天然色素（例、β−カロチン、クロロフィル、ベンガラ）等が挙げられる。
甘味剤としては、例えばサッカリンナトリウム、グリチルリチン酸二カリウム、アスパルテーム、ステビア等が挙げられる。
吸着剤としては、例えば有孔デンプン、ケイ酸カルシウム（商品名：フローライトＲＥ）、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム（商品名：ノイシリン）、軽質無水ケイ酸（商品名：サイリシア）が挙げられる。
湿潤剤としては、例えばプロピレングリコールモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、ジエチレングリコールモノラウレート、ポリオキシエチレンラウリルエーテルが挙げられる。
賦形剤としては、例えば乳糖、白糖、Ｄ−マンニトール、デンプン、コーンスターチ、結晶セルロース、軽質無水ケイ酸等が挙げられる。
滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、コロイドシリカ等が挙げられる。
結合剤としては、例えば結晶セルロース、白糖、Ｄ−マンニトール、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、デンプン、ショ糖、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム等が挙げられる。
崩壊剤としては、例えばデンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、Ｌ−ヒドロキシプロピルセルロース等が挙げられる。
溶剤としては、例えば注射用水、アルコール、プロピレングリコール、マクロゴール、ゴマ油、トウモロコシ油、オリーブ油等が挙げられる。
溶解補助剤としては、例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコール、Ｄ−マンニトール、安息香酸ベンジル、エタノール、トリスアミノメタン、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。
懸濁化剤としては、例えばステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、モノステアリン酸グリセリン等の界面活性剤；例えばポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等の親水性高分子等が挙げられる。
等張化剤としては、例えばブドウ糖、Ｄ−ソルビトール、塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ−マンニトール等が挙げられる。
緩衝剤としては、例えばリン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩等の緩衝液等が挙げられる。
無痛化剤としては、例えばベンジルアルコール等が挙げられる。
防腐剤としては、例えばパラヒドロキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸等が挙げられる。
抗酸化剤としては、例えば亜硫酸塩、アスコルビン酸、α−トコフェロール等が挙げられる。
着色剤としては、例えば水溶性食用タール色素（例、食用赤色２号及び３号、食用黄色４号及び５号、食用青色１号及び２号等の食用色素）、水不溶性レーキ色素（例、前記水溶性食用タール色素のアルミニウム塩）、天然色素（例、β−カロチン、クロロフィル、ベンガラ）等が挙げられる。
甘味剤としては、例えばサッカリンナトリウム、グリチルリチン酸二カリウム、アスパルテーム、ステビア等が挙げられる。
吸着剤としては、例えば有孔デンプン、ケイ酸カルシウム（商品名：フローライトＲＥ）、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム（商品名：ノイシリン）、軽質無水ケイ酸（商品名：サイリシア）が挙げられる。
湿潤剤としては、例えばプロピレングリコールモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、ジエチレングリコールモノラウレート、ポリオキシエチレンラウリルエーテルが挙げられる。
経口剤を製造する際には、必要により、味のマスキング、腸溶性あるいは持続性を目的として、コーティングを行ってもよい。
コーティングに用いられるコーティング基剤としては、例えば、糖衣基剤、水溶性フィルムコーティング基剤、腸溶性フィルムコーティング基剤、徐放性フィルムコーティング基剤が挙げられる。
糖衣基剤としては、白糖が用いられ、さらに、タルク、沈降炭酸カルシウム、ゼラチン、アラビアゴム、プルラン、カルナバロウ等から選ばれる１種又は２種以上を併用してもよい。
水溶性フィルムコーティング基剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルヒドロキシエチルセルロース等のセルロース系高分子；ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、アミノアルキルメタアクリレートコポリマーＥ〔オイドラギットＥ（商品名）〕、ポリビニルピロリドン等の合成高分子；プルラン等の多糖類が挙げられる。
腸溶性フィルムコーティング基剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース フタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロース アセテートサクシネート、カルボキシメチルエチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース等のセルロース系高分子；メタアクリル酸コポリマーＬ〔オイドラギットＬ（商品名）〕、メタアクリル酸コポリマーＬＤ〔オイドラギットＬ−３０Ｄ５５（商品名）〕、メタアクリル酸コポリマーＳ〔オイドラギットＳ（商品名）〕等のアクリル酸系高分子；セラック等の天然物が挙げられる。
徐放性フィルムコーティング基剤としては、例えば、エチルセルロース等のセルロース系高分子；アミノアルキルメタアクリレートコポリマーＲＳ〔オイドラギットＲＳ（商品名）〕、アクリル酸エチル−メタクリル酸メチル共重合体懸濁液〔オイドラギットＮＥ（商品名）〕等のアクリル酸系高分子が挙げられる。
上記したコーティング基剤は、その２種以上を適宜の割合で混合して用いてもよい。また、コーティングの際に、例えば、酸化チタン、三二酸化鉄等のような遮光剤を用いてもよい。
ＮＫ３受容体は、種々の生体内現象に関与していることが知られている。従ってＮＫ３受容体アゴニスト作用を有する化合物（Ｉ）は、ＮＫ３受容体が関与する種々の生体内現象を解明するのに役立つツールとなり得る。従って本発明化合物は、研究用試薬としても有用である。
本発明は、更に以下の実施例および試験例によって詳しく説明されるが、これらの例は単なる実施であって、本発明を限定するものではなく、また本発明の範囲を逸脱しない範囲で変化させてもよい。
実施例１ 保護ペプチド樹脂の構築
NovaSyn（登録商標）TGR樹脂(100 mg, 0.026 mmol)またはRink Amide樹脂(45.5 mg, 0.025 mmol)上、Fmoc保護アミノ酸もしくはFmoc保護ジペプチド等価体(0.075 mmol)、HOBt・H2O (11.5 mg, 0.075 mmol)及びDIC (11.6 μL, 0.075 mmol)を用いたFmoc固相合成法により保護ペプチド樹脂を構築した。N-メチルアミノ酸へのアシル化には、Fmoc保護アミノ酸(0.125 mmol)、HATU (46.8 mg, 0.12 mmol)/(i-Pr)2NEt (43.6 μL, 0.25 mmol)を用いた。
NovaSyn（登録商標）TGR樹脂(100 mg, 0.026 mmol)またはRink Amide樹脂(45.5 mg, 0.025 mmol)上、Fmoc保護アミノ酸もしくはFmoc保護ジペプチド等価体(0.075 mmol)、HOBt・H2O (11.5 mg, 0.075 mmol)及びDIC (11.6 μL, 0.075 mmol)を用いたFmoc固相合成法により保護ペプチド樹脂を構築した。N-メチルアミノ酸へのアシル化には、Fmoc保護アミノ酸(0.125 mmol)、HATU (46.8 mg, 0.12 mmol)/(i-Pr)2NEt (43.6 μL, 0.25 mmol)を用いた。
実施例２ ペプチド鎖Ｎ末端のアセチル化
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、DMF溶媒中、無水酢酸(20.2 μL, 0.25 mmol)とピリジン(20.2 μL, 0.25 mmol)を添加し、室温下1.5時間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖を得た。
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、DMF溶媒中、無水酢酸(20.2 μL, 0.25 mmol)とピリジン(20.2 μL, 0.25 mmol)を添加し、室温下1.5時間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖を得た。
実施例３ ペプチド鎖Ｎ末端のスクシニル化
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、DMF溶媒中、無水コハク酸(12.5 mg, 0.125 mmol)と(i-Pr)2NEt (43.6 μL, 0.125 mmol)を添加し、室温下1.5時間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖を得た。
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、DMF溶媒中、無水コハク酸(12.5 mg, 0.125 mmol)と(i-Pr)2NEt (43.6 μL, 0.125 mmol)を添加し、室温下1.5時間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖を得た。
実施例４ ペプチド鎖Ｎ末端のオキサリル化
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、CH2Cl2溶媒中、tert-butyl chloro(oxo)acetate (20.6 mg, 0.125 mmol)と(i-Pr)2NEt (43.6 μL, 0.25 mmol)を添加し、室温下1.5時間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖を得た。
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、CH2Cl2溶媒中、tert-butyl chloro(oxo)acetate (20.6 mg, 0.125 mmol)と(i-Pr)2NEt (43.6 μL, 0.25 mmol)を添加し、室温下1.5時間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖を得た。
実施例５ ペプチド鎖Ｎ末端のカルバモイル化
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、CH2Cl2溶媒中、chlorosulfonyl isocyanate (10.9 μL, 0.125 mmol)とピリジン(20.2 μL, 0.25 mmol)を添加し、室温下16時間反応させた。その後H2O (50 μL)を添加して48時間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖を得た。
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、CH2Cl2溶媒中、chlorosulfonyl isocyanate (10.9 μL, 0.125 mmol)とピリジン(20.2 μL, 0.25 mmol)を添加し、室温下16時間反応させた。その後H2O (50 μL)を添加して48時間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖を得た。
実施例６ ペプチド鎖Ｎ末端のヒドロキシカルバモイル化
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、THF/CH2Cl2(1:1)溶媒中、p-nitrophenyl chloroformate (186.4 mg, 0.925 mmol)と(i-Pr)2NEt (161.4 μL, 0.925 mmol)を添加し、室温下30分間反応させた。その後DMF溶媒中、ヒドロキシルアミン塩酸塩(64.3 mg, 0.925 mmol)と(i-Pr)2NEt (322.3 μL, 1.85 mmol)を添加して15分間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖を得た。
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、THF/CH2Cl2(1:1)溶媒中、p-nitrophenyl chloroformate (186.4 mg, 0.925 mmol)と(i-Pr)2NEt (161.4 μL, 0.925 mmol)を添加し、室温下30分間反応させた。その後DMF溶媒中、ヒドロキシルアミン塩酸塩(64.3 mg, 0.925 mmol)と(i-Pr)2NEt (322.3 μL, 1.85 mmol)を添加して15分間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖を得た。
実施例７ ペプチド鎖Ｎ末端のヒドラジンカルボニル化
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、無水THF中、p-nitrophenyl chloroformate (100.8 mg, 0.5 mmol)、tert-butyl carbazate (66.1 mg, 0.5 mmol)とN-methylmorpholine (55 μL, 0.5 mmol)を混合した溶液とトリエチルアミン(69.3 μL, 0.5 mmol)を添加し、室温下42時間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖（Boc保護体）を得た。
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、無水THF中、p-nitrophenyl chloroformate (100.8 mg, 0.5 mmol)、tert-butyl carbazate (66.1 mg, 0.5 mmol)とN-methylmorpholine (55 μL, 0.5 mmol)を混合した溶液とトリエチルアミン(69.3 μL, 0.5 mmol)を添加し、室温下42時間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖（Boc保護体）を得た。
実施例８ ペプチド鎖Ｎ末端のメチルオキサリル化
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、CH2Cl2溶媒中、methyl oxalyl chloride (11.4 μL, 0.125 mmol)とピリジン (20.1 μL, 0.25 mmol)を添加し、室温下2時間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖を得た。
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、CH2Cl2溶媒中、methyl oxalyl chloride (11.4 μL, 0.125 mmol)とピリジン (20.1 μL, 0.25 mmol)を添加し、室温下2時間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖を得た。
実施例９ ペプチド鎖Ｎ末端のオキサミド化
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、CH2Cl2溶媒中、oxamic acid (11.1 mg, 0,125 mmol)、DIC (19.4 μL, 0.125 mmol)とHOBt・H2O (19.1 mg, 0.125 mmol)を添加し、室温下2時間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖を得た。
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、CH2Cl2溶媒中、oxamic acid (11.1 mg, 0,125 mmol)、DIC (19.4 μL, 0.125 mmol)とHOBt・H2O (19.1 mg, 0.125 mmol)を添加し、室温下2時間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖を得た。
実施例１０ ペプチド鎖Ｎ末端のスルホンアミド化
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、無水CH2Cl2溶媒中、chlorosulfonyl isocyanate (21.8 μL, 0.25 mmol)とtert-ブタノール(23.7 μL, 0.25 mmol)を混合した溶液とトリエチルアミン(69.3 μL, 0.5 mmol)を添加し、室温下3時間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖（Boc保護体）を得た。
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、無水CH2Cl2溶媒中、chlorosulfonyl isocyanate (21.8 μL, 0.25 mmol)とtert-ブタノール(23.7 μL, 0.25 mmol)を混合した溶液とトリエチルアミン(69.3 μL, 0.5 mmol)を添加し、室温下3時間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖（Boc保護体）を得た。
実施例１１ ペプチド鎖Ｎ末端のカルボキシメチル化
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、無水DMF溶媒中、tert-butyl bromoacetate (18.3 μL, 0.125 mmol)と(i-Pr)2NEt (43.6 μL, 0.25 mmol)を添加し、室温下16時間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖（tert-Bu保護体）を得た。
実施例１の手順により保護ペプチド樹脂を構築後、無水DMF溶媒中、tert-butyl bromoacetate (18.3 μL, 0.125 mmol)と(i-Pr)2NEt (43.6 μL, 0.25 mmol)を添加し、室温下16時間反応させることにより、目的の修飾保護ペプチド鎖（tert-Bu保護体）を得た。
実施例１２ ペプチド鎖Ｎ末端のビス（カルボキシメチル）化
DMF溶媒中、N-Fmoc-L-アスパラギン酸 4-tertブチル(2.0 g, 4.86 mmol)、トリエチルアミン(1.0 mL, 7.29 mmol)と臭化ベンジル(865.8 μL, 7.29 mmol)を混合し、室温下14時間反応させることにより、N-Fmoc-L-アスパラギン酸 4-tertブチル 1-ベンジル(1.74 g)を得た。生成物(700 mg, 1.41 mmol)に対して、DMF中、ジエチルアミン(2.0 mL, 20.2 mmol)を添加し、室温下30分間反応させることにより、L-アスパラギン酸 4-tert-ブチル 1-ベンジル(368.3 mg)を得た。その後、生成物(368.3 mg, 1.32 mmol)に対して、無水DMF溶媒中、tert-butyl bromoacetate (919.6 μL, 6.27 mmol)と炭酸カリウム(1049.0 mg, 7.59 mmol)を添加し、室温下40時間反応させることにより、N,N-ビス(tert-ブチルオキシカルボニルメチル)-L-アスパラギン酸 4-tert-ブチル 1-ベンジル(528.8 mg)を得た。生成物(150 mg, 0.30 mmol)にEtOH溶媒中、10％ Pd/C (14.8 mg, 50 mg/mmol)を添加し、水素雰囲気下、室温下6.5時間反応させることにより、N,N-ビス（tert-ブチルオキシカルボニルメチル）-L-アスパラギン酸4-tert-ブチル(113.5 mg)を得た。これを実施例１のFmoc固相合成法に適用し、保護ペプチド樹脂に導入することで、目的の修飾保護ペプチド樹脂（tert-Bu保護体）を構築した。
DMF溶媒中、N-Fmoc-L-アスパラギン酸 4-tertブチル(2.0 g, 4.86 mmol)、トリエチルアミン(1.0 mL, 7.29 mmol)と臭化ベンジル(865.8 μL, 7.29 mmol)を混合し、室温下14時間反応させることにより、N-Fmoc-L-アスパラギン酸 4-tertブチル 1-ベンジル(1.74 g)を得た。生成物(700 mg, 1.41 mmol)に対して、DMF中、ジエチルアミン(2.0 mL, 20.2 mmol)を添加し、室温下30分間反応させることにより、L-アスパラギン酸 4-tert-ブチル 1-ベンジル(368.3 mg)を得た。その後、生成物(368.3 mg, 1.32 mmol)に対して、無水DMF溶媒中、tert-butyl bromoacetate (919.6 μL, 6.27 mmol)と炭酸カリウム(1049.0 mg, 7.59 mmol)を添加し、室温下40時間反応させることにより、N,N-ビス(tert-ブチルオキシカルボニルメチル)-L-アスパラギン酸 4-tert-ブチル 1-ベンジル(528.8 mg)を得た。生成物(150 mg, 0.30 mmol)にEtOH溶媒中、10％ Pd/C (14.8 mg, 50 mg/mmol)を添加し、水素雰囲気下、室温下6.5時間反応させることにより、N,N-ビス（tert-ブチルオキシカルボニルメチル）-L-アスパラギン酸4-tert-ブチル(113.5 mg)を得た。これを実施例１のFmoc固相合成法に適用し、保護ペプチド樹脂に導入することで、目的の修飾保護ペプチド樹脂（tert-Bu保護体）を構築した。
実施例１３ 保護ペプチド樹脂の脱保護と精製
得られた樹脂をTFA/m-cresol/thioanisole/1,2-ethanedithiol/H2O(80:5:5:5:5)の反応溶液中、氷冷下で２時間処理し、側鎖保護基の除去を伴う樹脂からの切り出しを行った。樹脂を濾去し、濾液中のＴＦＡをトルエンと共沸することにより留去した後、冷Et2Oを加えることでペプチドを析出させた。得られた粗ペプチドの洗浄操作を３回行った後、HPLCにより精製し、目的のペプチドを得た。得られたペプチドの物性データを下記表８に示す。各ペプチドの構造は表１〜７の各ペプチド番号の構造に対応している。以下、本発明により得られた化合物（ペプチド）を本発明のsenktide誘導体とも称する。
得られた樹脂をTFA/m-cresol/thioanisole/1,2-ethanedithiol/H2O(80:5:5:5:5)の反応溶液中、氷冷下で２時間処理し、側鎖保護基の除去を伴う樹脂からの切り出しを行った。樹脂を濾去し、濾液中のＴＦＡをトルエンと共沸することにより留去した後、冷Et2Oを加えることでペプチドを析出させた。得られた粗ペプチドの洗浄操作を３回行った後、HPLCにより精製し、目的のペプチドを得た。得られたペプチドの物性データを下記表８に示す。各ペプチドの構造は表１〜７の各ペプチド番号の構造に対応している。以下、本発明により得られた化合物（ペプチド）を本発明のsenktide誘導体とも称する。
senktideは公知のＮＫ３受容体アゴニストである。
試験例１ 本発明のSenktide誘導体による放射活性ＮＫＢのＮＫ３受容体結合阻害活性評価
ＮＫ３受容体を強制発現したFlp-In CHO細胞（インビトロジェン社のFlp-In CHO細胞にＮＫ３受容体を安定発現するように遺伝子導入して作製したもの）より調製した受容体膜画分を用い、各種ペプチドの（[125I]His3, MePhe7）−ＮＫＢの受容体結合阻害活性を評価した。
まず、緩衝液［50 mM HEPES (pH 7.4), 5 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 0.1% BSA］を用いて調製した化合物（ペプチド）溶液50 μLを各ウェルに添加した。細胞膜画分が4 μL／ウェルとなるように調製した溶液25 μLを加えた後に、0.2 nMの（[125I]His3, MePhe7）−ＮＫＢ溶液25 μLを加えて混合した。室温で１時間インキュベーション後、０．３％ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）で前処理し、ＰＥＩ洗浄バッファー（50 mM HEPES, pH 7.4, 0.5% BSA）で洗浄したＧＦ／Ｂフィルターを用いて吸引濾過した。続いて洗浄バッファー［50 mM HEPES (pH 7.4), 500 mM NaCl, 0.1% BSA］で洗浄した後、フィルターを十分に乾燥させた。その後、MicroScint O 25 μLを加え、TopCount NXTを用いて1 min／ウェルでフィルター上の放射能を測定した。
ＮＫ３受容体を強制発現したFlp-In CHO細胞（インビトロジェン社のFlp-In CHO細胞にＮＫ３受容体を安定発現するように遺伝子導入して作製したもの）より調製した受容体膜画分を用い、各種ペプチドの（[125I]His3, MePhe7）−ＮＫＢの受容体結合阻害活性を評価した。
まず、緩衝液［50 mM HEPES (pH 7.4), 5 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 0.1% BSA］を用いて調製した化合物（ペプチド）溶液50 μLを各ウェルに添加した。細胞膜画分が4 μL／ウェルとなるように調製した溶液25 μLを加えた後に、0.2 nMの（[125I]His3, MePhe7）−ＮＫＢ溶液25 μLを加えて混合した。室温で１時間インキュベーション後、０．３％ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）で前処理し、ＰＥＩ洗浄バッファー（50 mM HEPES, pH 7.4, 0.5% BSA）で洗浄したＧＦ／Ｂフィルターを用いて吸引濾過した。続いて洗浄バッファー［50 mM HEPES (pH 7.4), 500 mM NaCl, 0.1% BSA］で洗浄した後、フィルターを十分に乾燥させた。その後、MicroScint O 25 μLを加え、TopCount NXTを用いて1 min／ウェルでフィルター上の放射能を測定した。
試験例２ 本発明のSenktide誘導体によるＮＫ３受容体アゴニスト活性の評価
ＮＫ３受容体を強制発現したFlp-In CHO細胞を各種ペプチドで刺激した時における細胞内カルシウム濃度の変化を定量した。
まず、ＮＫ３受容体発現CHO細胞を、トリプシンを用いて回収し、4×104 cells／ウェルとなるように９６穴プレートに播種した。３７℃で一晩培養後、カルシウム指示薬100 μLを添加し、さらに１時間培養した。続いて、５倍濃縮で調製したペプチド溶液25 μLを滴下し、FlexStationにより細胞内カルシウム濃度の経時的変化を６０秒間観察した。
ＮＫ３受容体を強制発現したFlp-In CHO細胞を各種ペプチドで刺激した時における細胞内カルシウム濃度の変化を定量した。
まず、ＮＫ３受容体発現CHO細胞を、トリプシンを用いて回収し、4×104 cells／ウェルとなるように９６穴プレートに播種した。３７℃で一晩培養後、カルシウム指示薬100 μLを添加し、さらに１時間培養した。続いて、５倍濃縮で調製したペプチド溶液25 μLを滴下し、FlexStationにより細胞内カルシウム濃度の経時的変化を６０秒間観察した。
試験例３ 本発明のSenktide誘導体による放射活性サブスタンスＰ（ＳＰ）のＮＫ１受容体結合阻害活性評価
ＮＫ１受容体を強制発現したFlp-In CHO細胞（インビトロジェン社のFlp-In CHO細胞にＮＫ１受容体を安定発現するように遺伝子導入して作製したもの）より調製した受容体膜画分を用い、各種ペプチドの[125I]-BH-SPの受容体結合阻害活性を評価した。
まず、緩衝液［50 mM HEPES (pH 7.4), 5 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 0.1% BSA］を用いて調製した化合物50 μLを各ウェルに添加した。細胞膜画分が4 μL／ウェルとなるように調製した溶液25 μLを加えた後に、0.2 nMの[125I]-BH-SP溶液25 μLを加えて混合した。室温で１時間インキュベーション後、0.3%ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）で前処理し、ＰＥＩ洗浄バッファー［50 mM HEPES, pH 7.4, 0.5% BSA）で洗浄したＧＦ／Ｂフィルターを用いて吸引濾過した。続いて洗浄バッファー［50 mM HEPES (pH 7.4), 500 mM NaCl, 0.1% BSA］で洗浄した後、フィルターを十分に乾燥させた。その後、MicroScint O 25 μLを加え、TopCount NXTを用いて1 min／ウェルでフィルター上の放射能を測定した。
ＮＫ１受容体を強制発現したFlp-In CHO細胞（インビトロジェン社のFlp-In CHO細胞にＮＫ１受容体を安定発現するように遺伝子導入して作製したもの）より調製した受容体膜画分を用い、各種ペプチドの[125I]-BH-SPの受容体結合阻害活性を評価した。
まず、緩衝液［50 mM HEPES (pH 7.4), 5 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 0.1% BSA］を用いて調製した化合物50 μLを各ウェルに添加した。細胞膜画分が4 μL／ウェルとなるように調製した溶液25 μLを加えた後に、0.2 nMの[125I]-BH-SP溶液25 μLを加えて混合した。室温で１時間インキュベーション後、0.3%ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）で前処理し、ＰＥＩ洗浄バッファー［50 mM HEPES, pH 7.4, 0.5% BSA）で洗浄したＧＦ／Ｂフィルターを用いて吸引濾過した。続いて洗浄バッファー［50 mM HEPES (pH 7.4), 500 mM NaCl, 0.1% BSA］で洗浄した後、フィルターを十分に乾燥させた。その後、MicroScint O 25 μLを加え、TopCount NXTを用いて1 min／ウェルでフィルター上の放射能を測定した。
試験例４ 本発明のSenktide誘導体による放射活性ＮＫＡのＮＫ２受容体結合阻害活性評価
ＮＫ２受容体を強制発現したFlp-In CHO細胞（インビトロジェン社のFlp-In CHO細胞にＮＫ２受容体を安定発現するように遺伝子導入して作製したもの）より調製した受容体膜画分を用い、各種ペプチドの[125I]-NKAの受容体結合阻害活性を評価した。
まず、緩衝液［50 mM HEPES (pH 7.4), 5 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 0.1% BSA］を用いて調製した化合物50 μLを各ウェルに添加した。細胞膜画分が4 μL／ウェルとなるように調製した溶液２５ μLを加えた後に、0.2 nMの[125I]-NKA溶液 ２５ μLを加えて混合した。室温で１時間インキュベーション後、0.3%ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）で前処理し、ＰＥＩ洗浄バッファー［50 mM HEPES (pH 7.4), 0.5% BSA］で洗浄したＧＦ／Ｂフィルターを用いて吸引濾過した。続いて洗浄バッファー（50 mM HEPES (pH 7.4), 500 mM NaCl, 0.1% BSA）で洗浄した後、フィルターを十分に乾燥させた。その後、MicroScint O 25μLを加え、TopCount NXTを用いて1 min／ウェルでフィルター上の放射能を測定した。
ＮＫ２受容体を強制発現したFlp-In CHO細胞（インビトロジェン社のFlp-In CHO細胞にＮＫ２受容体を安定発現するように遺伝子導入して作製したもの）より調製した受容体膜画分を用い、各種ペプチドの[125I]-NKAの受容体結合阻害活性を評価した。
まず、緩衝液［50 mM HEPES (pH 7.4), 5 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 0.1% BSA］を用いて調製した化合物50 μLを各ウェルに添加した。細胞膜画分が4 μL／ウェルとなるように調製した溶液２５ μLを加えた後に、0.2 nMの[125I]-NKA溶液 ２５ μLを加えて混合した。室温で１時間インキュベーション後、0.3%ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）で前処理し、ＰＥＩ洗浄バッファー［50 mM HEPES (pH 7.4), 0.5% BSA］で洗浄したＧＦ／Ｂフィルターを用いて吸引濾過した。続いて洗浄バッファー（50 mM HEPES (pH 7.4), 500 mM NaCl, 0.1% BSA）で洗浄した後、フィルターを十分に乾燥させた。その後、MicroScint O 25μLを加え、TopCount NXTを用いて1 min／ウェルでフィルター上の放射能を測定した。
試験例５ 各種動物血清及びブタ視床下部組織外液中における本発明のSenktide誘導体の安定性評価
氷冷下、各動物組織液196 μLに対してペプチド溶液(10 mM)を4 μL加えて混合し、37℃でインキュベーションした。次に、インキュベーションの間、評価液を対応時間毎に30μL採取した。採取した評価液に対して、氷冷下でＭｅＣＮ 90 μLを加えて組織タンパクを沈殿させた。振盪した後、遠心し(4℃, 13000 g, 10 min)、得られた上清をＨＰＬＣにて解析した。
氷冷下、各動物組織液196 μLに対してペプチド溶液(10 mM)を4 μL加えて混合し、37℃でインキュベーションした。次に、インキュベーションの間、評価液を対応時間毎に30μL採取した。採取した評価液に対して、氷冷下でＭｅＣＮ 90 μLを加えて組織タンパクを沈殿させた。振盪した後、遠心し(4℃, 13000 g, 10 min)、得られた上清をＨＰＬＣにて解析した。
試験例６ In vivoにおける本発明のSenktide誘導体の活性評価
卵巣摘出ヤギ５頭を供試し、外科的に記録電極を視床下部弓状核のキスペプチンニューロン近傍に留置した。約１ヶ月の回復期をおき、覚醒したヤギにおいて神経活動をＭＵＡとしてリアルタイムに計測し、約２分程度続く一過性の神経活動の上昇（ＭＵＡボレー）が規則正しい周期で起きていることを確認した。ＭＵＡボレーは、ＧｎＲＨをパルス状に分泌させるキスペプチンニューロンの神経活動を反映している。卵巣摘出ヤギでは、内因性のＭＵＡボレーの周期の長さは約２５分（±５分程度）であり、個体により多少異なるが、同一個体内では周期の長さはほぼ一定（±２分以内）である。
試験当日、ＭＵＡ計測機器をセットし、終日ＭＵＡを連続的に記録した。また、試料投与用の頚静脈カテーテルを留置した。まず、それぞれの個体で約２時間のコントロール時間中に起きた内因性ＭＵＡボレーを数本確認し、そのボレー間隔（分）の平均値（Ｔ）を計算した。次に、任意のＭＵＡボレー発現後、１／２Ｔ分のタイミングで被検試料溶液を頚静脈内に一気に投与した。投与後、ＭＵＡボレーが４分以内に発現した場合をＮＫ３Ｒアゴニスト活性陽性（○）、４〜８分の間で発現した場合を擬陽性（△）、それ以上の間隔で起きた場合を陰性（×）と評価した。陰性試料で確認されたＭＵＡボレーは、内因性のものである。
被検試料溶液は以下のように調製した。試験当日、ＤＭＳＯ中に10 mMの濃度で調整された被検試料7.5 μLを滅菌蒸留水4.5 mLに溶解した。析出せず、完全に溶解したことを確認後、0.5 mLの滅菌９％ＮａＣｌを加え、溶液の最終濃度を被検試料：75 nmol/5 mL、ＮａＣｌ：０．９％、ＤＭＳＯ：０．１５％とした。ここから2 mL (30 nmol)を注射筒にとり、活性評価に供した。また、原則として、１被検試料について５頭中任意の２頭を用いて活性評価を行った。
卵巣摘出ヤギ５頭を供試し、外科的に記録電極を視床下部弓状核のキスペプチンニューロン近傍に留置した。約１ヶ月の回復期をおき、覚醒したヤギにおいて神経活動をＭＵＡとしてリアルタイムに計測し、約２分程度続く一過性の神経活動の上昇（ＭＵＡボレー）が規則正しい周期で起きていることを確認した。ＭＵＡボレーは、ＧｎＲＨをパルス状に分泌させるキスペプチンニューロンの神経活動を反映している。卵巣摘出ヤギでは、内因性のＭＵＡボレーの周期の長さは約２５分（±５分程度）であり、個体により多少異なるが、同一個体内では周期の長さはほぼ一定（±２分以内）である。
試験当日、ＭＵＡ計測機器をセットし、終日ＭＵＡを連続的に記録した。また、試料投与用の頚静脈カテーテルを留置した。まず、それぞれの個体で約２時間のコントロール時間中に起きた内因性ＭＵＡボレーを数本確認し、そのボレー間隔（分）の平均値（Ｔ）を計算した。次に、任意のＭＵＡボレー発現後、１／２Ｔ分のタイミングで被検試料溶液を頚静脈内に一気に投与した。投与後、ＭＵＡボレーが４分以内に発現した場合をＮＫ３Ｒアゴニスト活性陽性（○）、４〜８分の間で発現した場合を擬陽性（△）、それ以上の間隔で起きた場合を陰性（×）と評価した。陰性試料で確認されたＭＵＡボレーは、内因性のものである。
被検試料溶液は以下のように調製した。試験当日、ＤＭＳＯ中に10 mMの濃度で調整された被検試料7.5 μLを滅菌蒸留水4.5 mLに溶解した。析出せず、完全に溶解したことを確認後、0.5 mLの滅菌９％ＮａＣｌを加え、溶液の最終濃度を被検試料：75 nmol/5 mL、ＮａＣｌ：０．９％、ＤＭＳＯ：０．１５％とした。ここから2 mL (30 nmol)を注射筒にとり、活性評価に供した。また、原則として、１被検試料について５頭中任意の２頭を用いて活性評価を行った。
試験例１及び６に基づいて、Senktide及び本発明のSenktide誘導体との生物活性を比較した結果を表９に示す。本発明のSenktide誘導体としてはタキキニン類のコンセンサス配列を置換したものを用いた。
試験例１〜４及び６に基づいて、Senktide及び本発明のSenktide誘導体との生物活性を比較した結果を表１０に示す。本発明のSenktide誘導体としてはSenktideの３番目のアミノ酸残基であるMePheを異なるアミノ酸に変換したものを用いた。
試験例１〜４及び６に基づいて、Senktide及び本発明のSenktide誘導体との生物活性を比較した結果を表１１に示す。本発明のSenktide誘導体としてはSenktideのＮ末端を変換したものを用いた。
試験例１〜４及び６に基づいて、Senktide及び本発明のSenktide誘導体との生物活性を比較した結果を表１２に示す。本発明のSenktide誘導体としてはSenktideのＮ末端、及び１番目のアミノ酸残基であるAspを異なるアミノ酸に変換したもの、あるいは１番目のアミノ酸残基のＮ末側にアミノ酸を導入したものを用いた。
試験例１〜４及び６に基づいて、Senktide及び本発明のSenktide誘導体との生物活性を比較した結果を表１３に示す。本発明のSenktide誘導体としてはSenktideのＮ末端、及び１番目のアミノ酸残基であるAspを異なるアミノ酸に変換したものを用いた。
試験例１〜４及び６に基づいて、Senktide及び本発明のSenktide誘導体との生物活性を比較した結果を表１４〜１６に示す。本発明のSenktide誘導体としてはSenktideのＮ末端構造（Succinyl-Asp）を模倣したものを用いた。
試験例１〜４に基づいて、Senktide及び本発明のSenktide誘導体との生物活性を比較した結果を表１７に示す。本発明のSenktide誘導体としてはSenktideのGly-Leuをそのペプチド等価体に変換したものを用いた。
試験例５に基づいて、Senktide及び本発明のSenktide誘導体（E14）のネプリライシンに対する安定性を比較した。結果を図１に表す。
本出願は、日本国で出願された出願（特願２０１３−２５３５３４；出願日：２０１３年１２月６日）を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。
［配列表フリーテキスト］
配列番号１；Senktide
配列番号２；ペプチド１
配列番号３；ペプチド２
配列番号４；ペプチド３
配列番号５；ペプチド４
配列番号６；ペプチド５
配列番号７；ペプチド６
配列番号８；ペプチド７
配列番号９；ペプチド８
配列番号１０；ペプチド９
配列番号１１；ペプチド１２
配列番号１２；ペプチド１３
配列番号１３；ペプチド１４
配列番号１４；ペプチド１５
配列番号１５；ペプチド１６
配列番号１６；ペプチド１７
配列番号１７；ペプチド２５
配列番号１８；ペプチド２６
配列番号１９；ペプチド２７
配列番号２０；ペプチド１８
配列番号２１；ペプチド２０
配列番号２２；ペプチド２１
配列番号２３；ペプチド２２
配列番号２４；ペプチド１９
配列番号２５；ペプチド２３
配列番号２６；ペプチド４０ｂ１、ペプチド４０ｂ２
配列番号２７；ペプチド４０ｃ
配列番号２８；ペプチド４０ｄ１、ペプチド４０ｄ２
配列番号２９；ペプチド４０ｇ１、ペプチド４０ｇ２
配列番号３０；ペプチド１１１
配列番号３１；ペプチド１１２、ペプチド１１３
配列番号３２；ペプチド３９
配列番号３３；ペプチド１１４
配列番号３４；ペプチド１０１
配列番号３５；ペプチド１０２
配列番号３６；ペプチド３５
配列番号３７；ペプチド３６
配列番号３８；ペプチド１０５
配列番号３９；ペプチド３１
配列番号４０；ペプチド１０９
配列番号４１；ペプチド２８
配列番号４２；ペプチド３２
配列番号４３；ペプチド１１０
配列番号４４；ペプチド１１６
配列番号４５；ペプチド１１７、ペプチド１１８
配列番号４６；ペプチド１１９
配列番号４７；ペプチド１２０
配列番号４８；ペプチド１２１
配列番号４９；ペプチド１２２
配列番号５０；ペプチド１２３
配列番号５１；ペプチド１２４
配列番号５２；ペプチド１２５
配列番号５３；ペプチド１２６
配列番号５４；ペプチドＹ４ａ
配列番号５５；ペプチドＹ４ｂ
配列番号５６；ペプチドＹ４ｃ
配列番号５７；ペプチドＹ６ａ
配列番号５８；ペプチドＹ６ｂ
配列番号５９；ペプチドＹ８
配列番号６０；ペプチドＹ１０
配列番号６１；ペプチドＹ１３
配列番号６２；ペプチドＥ１４
配列番号６３；ペプチドＥ１３
配列番号６４；ペプチドＥ１５
配列番号６５；ペプチドＥ２３
配列番号６６；ペプチドＥ２４
配列番号１；Senktide
配列番号２；ペプチド１
配列番号３；ペプチド２
配列番号４；ペプチド３
配列番号５；ペプチド４
配列番号６；ペプチド５
配列番号７；ペプチド６
配列番号８；ペプチド７
配列番号９；ペプチド８
配列番号１０；ペプチド９
配列番号１１；ペプチド１２
配列番号１２；ペプチド１３
配列番号１３；ペプチド１４
配列番号１４；ペプチド１５
配列番号１５；ペプチド１６
配列番号１６；ペプチド１７
配列番号１７；ペプチド２５
配列番号１８；ペプチド２６
配列番号１９；ペプチド２７
配列番号２０；ペプチド１８
配列番号２１；ペプチド２０
配列番号２２；ペプチド２１
配列番号２３；ペプチド２２
配列番号２４；ペプチド１９
配列番号２５；ペプチド２３
配列番号２６；ペプチド４０ｂ１、ペプチド４０ｂ２
配列番号２７；ペプチド４０ｃ
配列番号２８；ペプチド４０ｄ１、ペプチド４０ｄ２
配列番号２９；ペプチド４０ｇ１、ペプチド４０ｇ２
配列番号３０；ペプチド１１１
配列番号３１；ペプチド１１２、ペプチド１１３
配列番号３２；ペプチド３９
配列番号３３；ペプチド１１４
配列番号３４；ペプチド１０１
配列番号３５；ペプチド１０２
配列番号３６；ペプチド３５
配列番号３７；ペプチド３６
配列番号３８；ペプチド１０５
配列番号３９；ペプチド３１
配列番号４０；ペプチド１０９
配列番号４１；ペプチド２８
配列番号４２；ペプチド３２
配列番号４３；ペプチド１１０
配列番号４４；ペプチド１１６
配列番号４５；ペプチド１１７、ペプチド１１８
配列番号４６；ペプチド１１９
配列番号４７；ペプチド１２０
配列番号４８；ペプチド１２１
配列番号４９；ペプチド１２２
配列番号５０；ペプチド１２３
配列番号５１；ペプチド１２４
配列番号５２；ペプチド１２５
配列番号５３；ペプチド１２６
配列番号５４；ペプチドＹ４ａ
配列番号５５；ペプチドＹ４ｂ
配列番号５６；ペプチドＹ４ｃ
配列番号５７；ペプチドＹ６ａ
配列番号５８；ペプチドＹ６ｂ
配列番号５９；ペプチドＹ８
配列番号６０；ペプチドＹ１０
配列番号６１；ペプチドＹ１３
配列番号６２；ペプチドＥ１４
配列番号６３；ペプチドＥ１３
配列番号６４；ペプチドＥ１５
配列番号６５；ペプチドＥ２３
配列番号６６；ペプチドＥ２４
本発明により得られた高活性・高選択的ＮＫ３受容体アゴニストは、タキキニン類の分泌の過剰もしくは欠乏に伴う疾患の治療薬、例えば、疼痛、性ホルモン分泌の過剰・欠乏にともなう性機能障害の改善に向けた薬剤、これらの疾患の治療薬開発に向けた基礎科学実験用試薬等として有用である。
Claims (11)
- 式（Ｉ）
Ｒ１は、水素原子、アセチル基、オキサリル基、スクシニル基、アミノカルボニル基、ヒドロキシアミノカルボニル基、ヒドラジノカルボニル基、メトキシジカルボニル基、アミノジカルボニル基、アミノスルホニル基、Ｎ，Ｎ−ジカルボキシメチルアスパラギン酸、もしくは、Ｎ−カルボキシメチルアスパラギン酸を表し；
Ａ１は、Ｌ−アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｄ−グルタミン酸、もしくは、Ｌ−α−アミノアジピン酸残基を表し；
Ａ２は、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−チロシン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｄ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、もしくは、Ｄ−グルタミン酸残基を表し；
Ａ３は、Ｌ−Ｎ−メチルフェニルアラニン、Ｌ−Ｎ−メチルバリン、Ｌ−Ｎ−メチルイソロイシン、Ｌ−Ｎ−メチルチロシン、もしくは、Ｌ−Ｎ−メチルトリプトファン残基を表し；
Ｘ４−Ｘ５は、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、もしくは、そのジペプチド等価体を表し；
Ｇｌｙは、グリシン残基を表し；
Ｌｅｕは、ロイシン残基を表し；
Ｍｅｔ−ＮＨ２は、メチオニンアミドを表す］で示される化合物又はその生理学的に許容される塩。 - Ｘ１が、
である、請求項１記載の化合物又はその生理学的に許容される塩。 - 該ジペプチド等価体が、
- 該化合物又はその生理学的に許容される塩が、以下の配列で示されるいずれか１つのペプチド又は生理学的に許容される塩である、請求項１記載の化合物又はその生理学的に許容される塩；
- 該化合物又はその生理学的に許容される塩が、以下の配列で示されるいずれか１つのペプチド又は生理学的に許容される塩である、請求項１記載の化合物又はその生理学的に許容される塩；
- 請求項１記載の化合物又はその生理学的に許容される塩を含有してなる医薬。
- ニューロキニン受容体アゴニストである、請求項６記載の医薬。
- ニューロキニン受容体が、ＮＫ３受容体である、請求項７記載の医薬。
- タキキニン類及び／又はニューロキニン受容体がその発症や進行に関与する疾患の治療薬である、請求項６記載の医薬。
- 該疾患が、疼痛又は性ホルモン分泌の過剰・欠乏にともなう性機能障害である、請求項９記載の医薬。
- 請求項１記載の化合物又はその生理学的に許容される塩を含有してなる試薬。
Applications Claiming Priority (3)
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|---|---|---|---|
| JP2013253534 | 2013-12-06 | ||
| JP2013253534 | 2013-12-06 | ||
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Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPWO2015083816A1 true JPWO2015083816A1 (ja) | 2017-03-16 |
Family
ID=53273562
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
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-
2014
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2015083816A1 (ja) | 2015-06-11 |
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