JPWO2014208425A1 - 遺伝子導入装置および遺伝子導入方法 - Google Patents
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Abstract
Description
図1は、本発明の実施の形態の遺伝子導入装置の一例を示している。
図1に示すように、遺伝子導入装置10は、ガラス管11と収納容器12と1対の電極13a,13bとプラズマ原料供給手段(図示せず)と電源部14とを有している。
プラズマを利用した遺伝子導入技術の導入効率等を調べるための試験を行った。図2に示すように、試験装置は、上下方向の伸びるよう配置されたガラス管21の側面に、所定の間隔をあけて、銅製の1対の電極23a,23bを設けている。また、下端部がテーパー状に形成されたガラス管21の下方に、遺伝子分散溶液25を収納した容器22を設置している。試験装置では、ガラス管21の内径を8mm、ガラス管21の下端の内径を2mmとした。また、各電極23a,23bの間隔を33mm、下方の電極23bからガラス管21の下端までを73mm、ガラス管21の下端から遺伝子分散溶液25の表面までを5mmとした。
プラズマ原料に水を含んだときの導入効率等を調べるための試験を行った。試験に使用した装置を、図6に示す。図6に示すように、試験装置は、上下方向の伸びるよう配置されたガラス管31の内部上方に、ステンレス製の円筒状の電極33aを設け、その電極33aの下方のガラス管31の側面に銅線の電極33bが巻き付けられている。また、下端部がテーパー状に形成されたガラス管31の下方に、遺伝子分散溶液35を収納した容器32を設置している。試験装置では、ガラス管31の内径を8mm、ガラス管31の下端の内径を2mmとした。また、円筒状の電極33aの長さを20mm、各電極33a,33b間隔を13mm、下方の電極33bからガラス管31の下端までを32mm、ガラス管31の下端から遺伝子分散溶液35の表面までを5mmとした。
プラズマ発生域から遺伝子分散溶液までの距離と導入効率との関係を調べるための試験を行った。試験に使用した装置は、図2に示す装置であり、下方の電極23bからガラス管21の下端までを73mmとしたもの(以下、「長拡散型」という)と、下方の電極23bからガラス管21の下端までを35mmとしたもの(以下、「短拡散型」という)について試験を行った。試験に使用した細胞は、3T3L1細胞(浮遊状態)である。また、試験では、遺伝子の代わりに、YOYO−1と、LIVE/DEAD Stainの2種類の蛍光物質を使用した。
浮遊状態ではなく接着状態の細胞を使用する場合、遺伝子分散溶液15を収納容器12に入れると、遺伝子分散溶液15中の接着細胞が収納容器12の底面に存在する。このため、図13に示すように、遺伝子導入装置10は、収納容器12が所定の深さを有しており、収納容器12の底面から、収納容器12に収納された遺伝子分散溶液15の表面までの高さを調整可能になっていることが好ましい。図13に示す一例では、収納容器12は底を有する円柱状で、深さによらず同じ内径を有し、電極13bは環状を成し、収納容器12の外側面を円周方向に沿って1周するよう取り付けられている。
11 ガラス管
12 収納容器
13a,13b 電極
14 電源部
15 遺伝子分散溶液
Claims (10)
- 遺伝子とその遺伝子を導入する細胞とを含む遺伝子分散溶液を収納する収納容器と、
前記収納容器を挟むよう配置された1対の電極と、
一方の電極から他方の電極に向かって、プラズマ原料を供給するプラズマ原料供給手段と、
前記プラズマ原料が供給された各電極間でプラズマを発生させるよう、各電極間に電圧を印加する電源部とを有し、
前記収納容器は、収納された前記遺伝子分散溶液に、発生した前記プラズマが直接当たるよう配置されていることを
特徴とする遺伝子導入装置。 - 前記他方の電極が前記収納容器に取り付けられていることを特徴とする請求項1記載の遺伝子導入装置。
- 前記一方の電極は筒状を成しており、
前記プラズマ原料供給手段は、前記一方の電極の内部を通して、各電極の間に前記プラズマ原料を供給可能に構成されていることを
特徴とする請求項1または2記載の遺伝子導入装置。 - 前記細胞は接着細胞から成り、
前記収納容器の底面から、前記収納容器に収納された前記遺伝子分散溶液の表面までの高さを調整可能に構成されていることを
特徴とする請求項1乃至3のいずれか1項に記載の遺伝子導入装置。 - 前記細胞は接着細胞から成り、
前記収納容器は、底面から前記遺伝子分散溶液の表面までの高さが1.5mm以下で、前記底面に存在する前記細胞が前記遺伝子分散溶液の表面に露出しないよう、前記遺伝子分散溶液を収納可能に設けられていることを
特徴とする請求項1乃至3のいずれか1項に記載の遺伝子導入装置。 - 前記プラズマ原料は水を含んでいることを特徴とする請求項1乃至5のいずれか1項に記載の遺伝子導入装置。
- 遺伝子とその遺伝子を導入する細胞とを含む遺伝子分散溶液を、1対の電極の間に配置し、一方の電極から他方の電極に向かってプラズマ原料を供給しつつ、各電極間に電圧を印加してプラズマを発生させ、前記遺伝子分散溶液に前記プラズマを直接当てることにより、前記細胞に前記遺伝子を導入することを特徴とする遺伝子導入方法。
- 前記他方の電極が取り付けられた収納容器を有し、前記遺伝子分散溶液を前記収納容器に収納して配置することを特徴とする請求項5記載の遺伝子導入方法。
- 前記細胞は接着細胞から成り、
前記収納容器の底面から前記遺伝子分散溶液の表面までの高さが1.5mm以下で、前記底面に存在する前記細胞が前記遺伝子分散溶液の表面に露出しないよう、前記遺伝子分散溶液を前記収納容器に収納することを
特徴とする請求項8記載の遺伝子導入方法。 - 前記プラズマ原料は水を含んでいることを特徴とする請求項7乃至9のいずれか1項に記載の遺伝子導入方法。
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