JP6117482B2 - 選定分子導入装置 - Google Patents
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Description
第1の液体を、電圧を印加した電極の内部または外表面を通過させることにより、前記第1の液体に電界を作用させながら、容器に移送する移送ステップを含み、
前記第1の液体は、前記選定分子を含む液体である導入液、前記標的細胞または標的組織、および、培養液からなる群から選択される少なくとも1つを含み、
前記移送ステップの前または後に、前記選定分子と、前記標的細胞または標的組織とを接触させる、選定分子の導入方法である。
前記移送ステップの前に、前記選定分子と、前記標的細胞または標的組織とを接触させることがさらに好ましい。
前記第2の液体は、前記選定分子を含む液体である導入液、前記標的細胞または標的組容器織、および、培養液のうち前記第1の液体に含まれるものを除く群から選択される少なくとも1つを含むことが好ましい。
前記第1の液体を移送するための移送機構と、
移送された前記第1の液体を収容するための容器と、
前記電極に電圧を印加するための電圧印加機構とを備える、選定分子導入装置にも関する。
本発明の標的細胞または標的組織への選定分子の導入方法は、第1の液体を、電圧を印加した電極の内部または外表面を通過させることにより、前記第1の液体に電界を作用させながら、容器に移送する移送ステップを含むことを特徴とする。前記第1の液体は、前記選定分子を含む液体である導入液、前記標的細胞または標的組織、および、培養液からなる群から選択される少なくとも1つを含む。本方法では、前記移送ステップの前または後に、前記選定分子と、前記標的細胞または標的組織とを接触させる。
本発明の選定分子の導入方法において用いる標的細胞とは、選定分子を導入する標的となる細胞のことを示し、特に特定の種類の細胞に限定されるものではない。このような標的細胞の具体例としては、ヒトを含む動物細胞、ヒト以外の動物個体、ヒトの個体から採取された細胞、ヒトの個体内の細胞、ヒトの個体、植物細胞、微生物細胞などが挙げられる。これらの標的細胞は、単一の種類を用いてもよいし、二種以上を混合して用いてもよい。
一方、本発明に用いられる標的組織とは、選定分子を導入する標的となる組織のことを示し、特に特定の種類の組織に限定されるものではない。このような標的組織の具体例としては、移植に用いられるドナーからの臓器、再生医療の方法を用いて再構成された皮膚や歯根などの組織、カルス培養で構築された植物に分化前の組織、などが挙げられる。これらの標的組織は、単一の種類を用いてもよいし、二種以上を混合して用いてもよい。
本発明の標的細胞または標的組織内への選定分子の導入方法において用いる選定分子とは、標的細胞または標的組織に導入するために選定した分子のことを示し、特に特定の種類の分子に限定されるものではない。このような選定分子の具体例としては、DNA、RNAなどのポリヌクレオチドまたはその誘導体、シグナル伝達蛋白質や転写調節因子などの蛋白質やペプチドとその誘導体などの高分子化合物があげられる。
第1の液体は、選定分子を含む液体である導入液、標的細胞または標的組織、および、培養液からなる群から選択される少なくとも1つを含む。
第1の液体が移送される容器は、少なくとも移送された第1の液体を収容することのできる構造であれば特に限定されるものではないが、たとえば、プレート、シャーレ、チューブ、試験管、フラスコなどが挙げられる。
第1の液体が容器に移送される前に、容器には第2の液体が収容されていることが好ましい。ここで、第2の液体は、選定分子を含む液体である導入液、標的細胞または標的組織、および、培養液のうち第1の液体に含まれるものを除く群から選択される少なくとも1つを含む液体である。例えば、第1の液体が標的細胞または標的組織および導入液を含む場合、第2の液体は、培養液または緩衝液などである。
電極への電圧印加方法としては、電極の内部または外表面(第1の液体が通過する領域)に電界を発生させるものであれば特に限定されない。例えば、電極と対向電極(底面電極)との間に電圧を印加することにより、電極の内部または外表面を通過する第1の液体に電界を作用させることができる。この電界が第1の液体に含まれる標的細胞または標的組織や、導入液中の選定分子に作用を及ぼすことにより、選定分子の標的細胞または標的組織への導入効率が向上し、標的細胞または標的組織の死滅率を低減することが可能となる。
本発明の選定分子導入装置は、上記の選定分子の導入方法に用いられるものであって、
前記第1の液体を移送するための移送機構と、
移送された前記第1の液体を収容するための容器と、
前記電極に電圧を印加するための電圧印加機構とを備える。
本実施例では、図1を用いて説明したような構成を有する選定分子導入装置を使用した。注射器(マイクロシリンダー)1のバレル11内部には、予め標的細胞(COS7)と選定分子としてDNA(pCX−EGFP)を含む溶液、培養液(D−MEM、FBSおよびペニシリンの混合液(混合比100:10:1)、または、リン酸緩衝液(PBS))のいずれかを含む液体(第1の液体)0.52mLを収容した。また、シャーレには、これらのうち第1の液体とは異なるものを含む液体(第2の液体)を収容した。第1の液体と第2の液体の組み合せは、図2の下欄に記号で示す通りの9種類とした(なお、何も記載のない箇所はリン酸緩衝液であることを示している。)。
Claims (2)
- 標的細胞または標的組織(ヒトの生体内の細胞、および、ヒトの個体を除く)への選定分子の導入方法に用いられる選定分子導入装置であって、
前記導入方法は、第1の液体を、電圧を印加した電極の内部または外表面を通過させることにより、前記第1の液体に電界を作用させながら、容器に移送する移送ステップを含み、
前記第1の液体は、前記選定分子を含む液体である導入液、および、前記標的細胞または標的組織を含み、
前記移送ステップの前に、前記選定分子と、前記標的細胞または標的組織とを接触させ、
前記第1の液体が前記容器に移送される前に、前記容器には第2の液体が収容されており、
前記第2の液体は培養液を含み、
前記選定分子導入装置は、
前記第1の液体を移送するための移送機構と、
移送された前記第1の液体を収容するための容器と、
前記電極に電圧を印加するための電圧印加機構とを備え、
前記電圧印加機構は、前記電極と、前記容器の前記電極とは反対側に設けられた対向電極と、前記電極および前記対向電極に接続された直流または交流の電源とを備える、
選定分子導入装置。 - 前記電極は、前記第1の液体を収容するバレルに接続され、前記容器とは離間して設置されている、請求項1に記載の選定分子導入装置。
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