JPWO2007129485A1 - 粒子分類方法および装置 - Google Patents
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Abstract
Description
また、従来のフローサイトメータを使用した血液分析装置においては、染色試薬を使用した試料の作成に際して、染色時間が例えば30分以上必要となる問題があった。
さらに、細胞浮遊液にゴミなどの非細胞由来粒子の存在により、計測装置のバックグランドが上昇してしまうことがあった。
本発明においては、測定を行う試料として、血液成分として採取した試料の調製を行う。この場合、図1に示すように、所要量の染色試薬10を一定量に分注する時に、20〜50℃の範囲に加温し、この加温され分注された染色試薬10Aに、血液成分からなる所定量の試料20を添加して、5〜10秒間攪拌し、このようにして得られた試料30を20〜50℃の範囲に保温して、10〜40秒間保持する。この結果、本発明においては、前記試料30の調製を、15〜60秒間において完了することができる。
図2は、本発明に係る血液成分中の細胞分類方法を実施するための装置としてのシステム構成を示すものである。すなわち、図2において、参照符号40は前述した試料の調製を行う試料調製手段を示す。そして、参照符号50はフローサイトメータであって、前記試料調製手段40で調製された試料30を、検出領域において光を照射する光照射手段と、光照射された試料に含まれる細胞から発生する散乱光および蛍光を電気信号として検出する細胞のパラメータ検出手段と、検出された細胞のパラメータに基づいて血液成分中の細胞の分析を行う細胞分析手段とを備えたものとして構成される。またプロセッサ70により染色具合の判断や規格化が行なわれる。なお、フローサイトメータの場合、前記検出領域は、フローセルとして設定される。
(2)〔図6の(c)〕は、染色が過染色な状態の規格化DNA/規格化RNAのスキャッタグラムである。この場合、バックグラウンドが上がり、成熟赤血球の蛍光が擬似的に過剰となるため、網赤血球としてカウントされてしまう。このため、網赤血球数は偽高値となる。また赤血球の分布が右上方向にシフトする。これと同時に、同様の理由で血小板分布も右上方向にシフトする。
(3)そこで、血小板の染色態度を指標にする。良好な染色状態〔図6の(b)〕においては、規格化DNA/規格化RNAのスキャッタグラムにおいて、血小板と赤血球の分布とその距離は一定である。そこで、染色が良好であれば、血小板と赤血球、網赤血球の分布位置は安定しているし、染色が不良であってもその分布距離は一定であり、同じように変動することから、網赤血球の染色の良否は規格化DNA/規格化RNAのスキャッタグラムにおける血小板の分布位置と、血小板と赤血球、網赤血球の分布距離で確認できる。
10A 分注された染色試薬
20 血液成分としての試料
30 調製された試料
40 試料調製手段
50 フローサイトメータ
51 フローセル
52 レーザ光源
53 照射光集光レンズ
54 散乱光集光レンズ
55、56、57 ビームスプリッタ
58、59 波長選択フィルタ
61 前方小角散乱光検出器(FSs)
62 前方大角散乱光検出器(FLs)
63 側方散乱光検出器(SS)
64 第1蛍光検出器(FL1)
65 第2蛍光検出器(FL2)
70 プロセッサ
Claims (12)
- アクリジンオレンジを用いて血液中の細胞を分類する粒子分類方法において、
アクリジンオレンジを用いて血液中の細胞を染色するステップと、
血液中の細胞に光を照射するステップと、
血液中の血小板を染色の指標として染色具合を判断するステップと、
血液中の細胞を分類するステップと、を有することを特徴とする粒子分類方法。 - アクリジンオレンジを用いて血液中の細胞を分類する粒子分類方法において、
アクリジンオレンジを用いて血液中の細胞を染色するステップと、
血液中の細胞に光を照射するステップと、
細胞の蛍光強度を細胞の大きさや形状で規格化するステップと、
規格化された値に基づいて血液中の細胞を分類するステップと、を有することを特徴とする粒子分類方法。 - アクリジンオレンジを用いて血液中の細胞を分類する粒子分類方法において、
アクリジンオレンジを用いて血液中の細胞を染色するステップと、
血液中の細胞に光を照射するステップと、
細胞の蛍光強度を細胞の大きさや形状で規格化するステップと、
血液中の血小板を染色の指標として染色具合を判断するステップと、
規格化された値に基づいて血液中の細胞を分類するステップと、を有することを特徴とする粒子分類方法。 - 血液中の血小板を染色の指標として染色具合を判断するステップは、血小板のオレンジ蛍光成分および/または緑蛍光成分から判断することを特徴とする請求項1又は3記載の粒子分類方法。
- 血液中の細胞に光を照射して発生した散乱光および蛍光を電気信号として検出し、検出された電気信号に基づいて赤血球のRNAヒストグラムを作成し、前記RNAのハーフピークの右側アドレスを検出すると共にその2倍のアドレスを検出し、この右側の集団を網赤血球として分類することを特徴とする請求項1ないし4のいずれかに記載粒子分類方法。
- 血液中の細胞に光を照射し発生した前方散乱光および蛍光を電気信号として検出し、細胞の緑およびオレンジの蛍光強度を細胞の大きさや形状で規格化したスキャッタグラムを用いて、細胞や破砕細胞などの細胞由来粒子および非細胞由来粒子を分類することを特徴とする請求項1ないし5のいずれかに記載の粒子分類方法。
- 血液中の細胞に照射される光の波長の中心波長は、408nm、445nm、473nmまたは488nmであることを特徴とする請求項1ないし6のいずれかに記載の粒子分類方法。
- アクリジンオレンジを用いて血液中の細胞を染色するステップは、アクリジンオレンジと緩衝液を含む染色試薬と血液検体を混合させて調整された試料を所定の温度に設定し、所定時間染色することを特徴とする請求項1ないし7のいずれかに記載の粒子分類方法。
- 分類される細胞が、赤血球、血小板、破砕赤血球、有核赤血球、マラリア原虫、ハウエルジョリー小体であることを特徴とする請求項1ないし8のいずれかに記載の粒子分類方法。
- 血液中の細胞に光を照射する光源と、
試料を流すフローセルと、
前方散乱光を検出する前方散乱光検出器と、
側方散乱光を検出する側方散乱光検出器と、
蛍光を検出する蛍光検出器と、
血小板の染色の良否を判断する染色判断手段と、
網赤血球または血小板を判断する手段と、から構成することを特徴とする粒子分類装置。 - 血液中の細胞に光を照射する光源と、
試料を流すフローセルと、
前方散乱光を検出する前方散乱光検出器と、
側方散乱光を検出する側方散乱光検出器と、
蛍光を検出する蛍光検出器と、
細胞の蛍光強度を細胞の大きさや形状で規格化する規格化手段と、
規格化された値に基づいて血液中の細胞および非細胞由来粒子を分類する手段と、から構成することを特徴とする粒子分類装置。 - 血液中の細胞に光を照射する光源と、
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前方散乱光を検出する前方散乱光検出器と、
側方散乱光を検出する側方散乱光検出器と、
蛍光を検出する蛍光検出器と、
細胞の蛍光強度を細胞の大きさや形状で規格化する規格化手段と、
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規格化された値に基づいて血液中の細胞および非細胞由来粒子を分類する手段と、から構成することを特徴とする粒子分類装置。
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