JPWO2007043619A1 - 試験デバイス - Google Patents
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Abstract
Description
2 貯蔵室
3,3a〜3d 反応室
4 トラップ室
5 吸引口
6 分配流路
7 吸引流路
8,8a〜8d 液止め部
9 液止め部
10 フィルム又は樹脂板
11 トラップ室
12 吸引口
13 液止め部
14 液止め部
15 貫通流路
16 貯蔵室
17 ろ過流路
18 空気槽
19 液止め部
20 接続流路
21 トラップ室
図中、1は基板、2、16は貯蔵室、3、3a〜3dは反応室、4、11及び21はトラップ室、5は吸引口、6は分配流路、7は吸引流路、8、8a〜8d、9、13、14及び19は液止め部、10はフィルム又は樹脂板、15は貫通流路、17はろ過流路、18は空気槽、20は接続流路である。
基板1は、貯蔵室、反応室、分配流路、吸引流路を固定支持し成形体を構成するための透明な構造体であるが、反応室が外部から光学測定可能な状態にあれば、全体が必ずしも透明である必要はない。
反応結果の測定は、反応室内部の反応物を光学的手段を用いて測定することにより行われる。
液止め部の構造は、全ての反応室に試料が分配される前に、試料で満たされることがないように設計されていればよく、例えば、吸引流路の断面積が分配流路の断面積より小さくなるように、流路の太さ又は深さを調整すればよい。
また、トラップ室は、必要に応じて2以上設けてもよい(図3,図7参照)。
トラップ室4に設けられた吸引口5から吸引すると、分配流路6を介して8個の各反応室に試料が分配される。さらに吸引を続けると、分配流路中のサンプルは中央の貫通流路15を介してトラップ室4に誘導される。
本デバイスによれば、分配流路を分岐させたことにより、分配にかかる時間を短縮することができる。また、各反応室間の間隔を小さくできるため、全体サイズを縮小することができる。
第1の貯蔵室2に添加された試料は、吸引によってろ過流路17を介して第2の貯蔵室16に誘導される。続いて、分配流路6を介して16個の反応室に順次試料が分配される。貯蔵室を2つに分け、その間に1以上のろ過流路を設けることにより、試料中のゴミ等をろ過でき、これにより流路が詰まり分配不良になることを防止できる。
図6(B)は、当該デバイスの反応室部分の拡大図であり、18は、反応室へ酸素を供給するための空気槽、19は液止め部(流路の太さを調節)である。空気槽18には液体試料が充満しない構造となっており、試料分配後も空気の層が残るため酸素の供給が可能となり、酸素を必要とする培養試験が可能となる。
本デバイスでは、一対の分配系ごとに貫通流路15及び液止め部が設けられていることから、各反応室へ確実に試料を分配することが可能である。
すなわち、注入口から貯蔵室2に注入された試料液体(図8a)は、トラップ室4に設けられた吸引口5から液体吸引手段により吸引され、分配流路6を介して反応室3a〜3dに到達し分配される(図8b)。この時、試料液体は、液止め部8a〜8dの手前で抵抗のため一時止まる、同じく液止め部14の手前でも止まる。さらに吸引を続けて、液止め部14のある流路を貫通させる(図8c)。さらに吸引を続け、分配流路中のサンプルを空気で置換し、各反応室を独立させる(図8d)。最後に上部をシールし、密閉系とする。
図9に示す試験デバイスを用い、精製水100μLを注入口に分注してから、吸引口にシリンジポンプを装着し、吸引した。精製水は図9に示すとおり、全ての反応室に到達し、独立な反応系として分注できることが確認された。
図7に示すデバイスの反応室に、蛍光基質4-Methylumbelliferyl-β-D-galactoside 10μg/ウェルを乾燥固定した。あらかじめ非選択培地で増菌したE.coli ATCC25922を滅菌生理食塩水に懸濁し、検体槽に分注した後、吸引口より吸引することにより各反応ウェルに分配した。これを市販のプレートリーダーを用いて培養し、1時間おきに蛍光(励起波長:360nm、蛍光波長:450nm)を測定した。
図10に示すように、培養時間の経過とともに蛍光強度が上昇することが確認され、本株がβ-ガラクトシダーゼを保有することが確認できた。
図7に示すデバイスの反応室に、WST-1(2-(4-Indophenyl)-3-(4-nitrophenyl) -5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium, monosodium salt)130〜200μg/mLとアミカシン(AMK)0.125μg/mL、0.25μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL、32μg/mLを乾燥固定した。あらかじめ非選択培地で増菌したE.coli ATCC25922を滅菌生理食塩水に懸濁し、さらにMHB(ミュラーヒントン液体培地)で希釈したものを検体槽に分注した後、吸引口より吸引することにより各反応ウェルに分配した。これを市販のプレートリーダーを用いて培養し、30分おきに440nmの吸光度を測定した。
図11に示すように、菌の増殖に伴い吸光度が上昇することが確認され、薬剤濃度による増殖曲線の違いから最小発育阻止濃度(MIC)を算出することができた。
Claims (7)
- 透明な成形体の内部に、液体試料を注入・保持するための貯蔵室と、試料を反応させるための反応室と、試料を吸引・トラップするためのトラップ室を具備し、前記貯蔵室と反応室が分配流路を介して連通し、反応室とトラップ室が吸引流路を介して連通し、前記反応室とトラップ室の間に液止め部を有してなる試験デバイス。
- 反応室を複数有する請求項1記載の試験デバイス。
- 反応室毎に液止め部を有する請求項2記載の試験デバイス。
- 貯蔵室と反応室とを連通する分配流路に、吸引口を具備する第2のトラップ室を連通させてなる請求項1〜3のいずれか1項記載の試験デバイス。
- 分配流路と吸引流路の間に新たな貫通流路を設けてなる請求項1〜4のいずれか1項記載の試験デバイス。
- 分配流路を反応室の手前で分岐させてなる請求項2〜5のいずれか1項記載の試験デバイス。
- 更に、反応室へ酸素を供給するための空気槽を設けてなる請求項1〜6のいずれか1項記載の試験デバイス。
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