JPWO2016208713A1 - プレート - Google Patents
プレート Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2016208713A1 JPWO2016208713A1 JP2017525442A JP2017525442A JPWO2016208713A1 JP WO2016208713 A1 JPWO2016208713 A1 JP WO2016208713A1 JP 2017525442 A JP2017525442 A JP 2017525442A JP 2017525442 A JP2017525442 A JP 2017525442A JP WO2016208713 A1 JPWO2016208713 A1 JP WO2016208713A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- detection space
- adapter
- substrate
- plate
- detection
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
- C12M1/34—Measuring or testing with condition measuring or sensing means, e.g. colony counters
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/508—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above
- B01L3/5085—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above for multiple samples, e.g. microtitration plates
- B01L3/50851—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above for multiple samples, e.g. microtitration plates specially adapted for heating or cooling samples
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
- C12Q1/6825—Nucleic acid detection involving sensors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/645—Specially adapted constructive features of fluorimeters
- G01N21/6452—Individual samples arranged in a regular 2D-array, e.g. multiwell plates
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
- B01L2200/02—Adapting objects or devices to another
- B01L2200/026—Fluid interfacing between devices or objects, e.g. connectors, inlet details
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
- B01L2300/0627—Sensor or part of a sensor is integrated
- B01L2300/0654—Lenses; Optical fibres
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
- B01L2300/069—Absorbents; Gels to retain a fluid
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
- B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
- B01L2300/0819—Microarrays; Biochips
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/56—Labware specially adapted for transferring fluids
- B01L3/563—Joints or fittings ; Separable fluid transfer means to transfer fluids between at least two containers, e.g. connectors
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L7/00—Heating or cooling apparatus; Heat insulating devices
- B01L7/52—Heating or cooling apparatus; Heat insulating devices with provision for submitting samples to a predetermined sequence of different temperatures, e.g. for treating nucleic acid samples
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Hematology (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Automatic Analysis And Handling Materials Therefor (AREA)
Abstract
Description
本願は、2015年6月26日に日本に出願された特願2015−129012号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
また、これ以外にも市販されているシステムが知られている。
このように、市販品は実用性が高いが汎用性が低いことがある。逆に、研究品は汎用性が市販品よりも高い場合があるが、実用性が低いことがある。
上記一態様において、前記アダプターが、前記検出空間と外部とを連通し、前記貫通孔に嵌合可能な第一端と、前記第一端よりも拡径した開放端である第二端とを有する管体であってもよい。
上記一態様において、前記アダプターが、前記検出空間と他の検出空間とを連通し、前記検出空間の前記貫通孔に嵌合可能な第一端と、前記他の検出空間の前記貫通孔に嵌合可能な第二端と、を有していてもよい。
上記一態様において、前記アダプターの内壁に試薬が固定され、前記試薬を前記検出空間内に送達するように構成されていてもよい。
上記一態様において、前記アダプターが前記検出空間から前記物質を排出するように構成され、前記貫通孔に嵌合可能な第一端と、前記第一端よりも拡径した開放端または閉塞端である第二端とを有していてもよい。
上記一態様において、前記アダプター内に廃液を吸収する吸収手段が設けられ、前記検出空間から排出された廃液を吸収するように構成されていてもよい。
上記一態様において、前記第一の基板及び前記第二の基板の少なくとも一方が透過性を有し前記検出空間内の蛍光または発光を外部から検出するように構成されていてもよい。
上記一態様において、前記第一の基板及び前記第二の基板がいずれも透過性を有し前記検出空間内の蛍光または発光を外部から検出するように構成されていてもよい。
上記一態様において、前記検出空間が複数設けられ、前記アダプターにより複数の前記検出空間が連通するように構成されていてもよい。
上記一態様において、前記検出空間内において、前記第一の基板及び前記第二の基板の少なくとも一方の面に、容量1pl以下の穴が1個以上存在してもよい。
上記一態様において、生体内物質の濃度を定量するように構成されていてもよい。
上記一態様において、前記生体内物質がDNA、RNA、miRNA、mRNA、またはタンパク質のいずれか1つであってもよい。
上記一態様において、前記貫通孔が、取り外しまたは突き破り可能なフィルムまたは蓋体によって閉塞されていてもよい。
上記一態様において、前記検出空間が、加熱されるように構成されていてもよい。
さらに、上記一態様において、前記第一の基板及び前記第二の基板がいずれも透過性を有し前記検出空間内の蛍光または発光を外部から検出するように構成されていてもよい。これにより、上述した焦点距離の範囲まで光学系ヘッドを接近させることが両面から可能となる。
図1は、本実施形態におけるプレートを示す断面図であり、図2は、本実施形態におけるプレートを示す模式平面図であり、図3は、図1における拡大断面図であり、本実施形態におけるプレートを示す断面図である。図1〜3において、符号10は、プレートである。
基板11および基板12のうち少なくともいずれか一方は光透過性を有して外部から観察・測定可能となっている。基板11および基板12のうち少なくともいずれか一方は、実質的に透明な材料から形成される板状の部材である。基板11,12の材質は、例えば、ガラスや樹脂である。
検出空間13は、容量1pl以下の穴が1つ以上、より好ましくは100以上設けられた面を有することができる。この容量1pl以下の穴は、基板12表面に設けることや、基板11表面に設けることもできる。なお、この容量1pl以下の穴を別部材(例えば膜)に設け、この別部材を基板11,12表面に貼り付けるなどして検出空間13内に配置することもできる。
ポート14a、14bのどちらを送液、排出する側にするかは任意である。
基板12には、サンプルの入口と出口となるポート14a,14bのように検出空間13に通じる最低2つの貫通孔を有する必要がある。ポート14a,14bとなる貫通孔の内径は2mm程度でよく、また、2mm以上の径寸法であると望ましい。
基板11と基板12とは、一定の厚みを有する空間を保つために、厚みが一定である両面テープを用いて貼り合わされる。このように、面内で一定厚みの検出空間13を有するプレート10を作製する。また、スペーサーを用いて、接着剤により一定の厚みを維持するように基板11と基板12とを貼り合わせてもよい。その他、基板11,12が樹脂から形成される場合には、熱圧着により貼り合わせてもよい。
図4は、本実施形態におけるアダプターを示す正断面図である。
アダプター16、17は、例えば、樹脂成型により作製される。アダプター16、17の一端16a,17aと基板12側の貫通孔との接合部分は嵌合時に液体が漏れないように構成されている。アダプター16、17の色や接合部以外のサイズは制限を持たない。
アダプター17は、液体を含む物質または気体を検出空間13内から排出するように構成され、ポート14bに嵌合可能である。
アダプター16の他端16bは、ピペットチップやスポイトの先端が挿入出来る形状であることが好ましい。
アダプター17は、他端17b側に、吸収手段としての廃液溜めもしくは廃液吸収スポンジ17eを有することで、検出空間13から排出された廃液を吸収可能に構成されている。
一端16a,17aが基板12表面に密着すると、切欠部16d,17dと検出空間13への液体や気体の移動がスムーズに行えないことがある。アダプター16,17から検出空間13への液体や気体の移動をスムーズに行うために、一端16a,17aに当接部16c,17cを設けることができる。当接部16c,17cは、例えば、図4に示すようにアダプター16,17の一端16a,17aの一部を削った形状に形成することができる。
当接部16c,17cを設置する場所、数、形状は任意に設定できる。また、当接部16c,17cは、切欠部16d,17dと一体に設けることもできる。
当接部16c,17cは省略することも可能である。
当接部16c,17cは、アダプター16,17がポート14a,14bに装着された際に、アダプター16,17が基板11表面に対して直交する方向となるように複数設けられることが好ましい。
アダプター18の一端18aおよび他端18bは、アダプター16,17の一端16a,17aと同様に、貫通孔であるポート14aまたはポート14bにそれぞれ嵌合可能な円筒形状を有する。これら一端(第一端)18aおよび他端(第二端)18bには、図4に示すように、ポート14a,14bに嵌合した際に、基板11表面に当接する当接部18cと、流路となる切欠部18dとがそれぞれ設けられている。
アダプター18の当接部18cも上述のアダプター16,17の当接部16c,17cと同様に設けることができる。また当接部18cを設けないこともできる。
また、アダプター18には、図4に示すように、両端18a,18bの開口方向と反対側の中間位置に把持部18fが設けられる。把持部18fにより、アダプター18のハンドリング性を向上することができる。
本実施形態におけるプレート10において、単一の検出空間13のみを使用する場合を説明する。この場合、図5に示すように、使用する単一の検出空間13に対して、ポート14aにアダプター16を装着し、ポート14bにアダプター17を装着する。さらに、使用する検出空間13に隣接しているが、使用しない検出空間13に対して連通するポート14a,14bには、蓋体19Aを装着してポート14a,14bを密閉することができる。なお、図示していないが、ポート14a,14bは、フィルム19によって密閉されているが、このフィルム19をアダプター16,17によって突き破って、アダプター16,17を装着する。
本実施形態におけるプレート10において、隣接する2つの検出空間13を連続して使用する場合を説明する。この場合、図6に示すように、上流となる検出空間13に対して、そのポート14aにアダプター16を装着し、下流となる検出空間13に対して、そのポート14bにアダプター17を装着する。さらに、上流となる検出空間13のポート14bおよび下流となる検出空間13のポート14aにアダプター18を装着する。
これら、隣接する検出空間13どうしは、接着層15によって分離されているが、アダプター18によって連通されて、一連の処理を連続して行うことが可能となる。
アダプター16〜18が装着されないポート14a,14bでは、フィルム19が破られずに密閉状態が維持される。
本実施形態におけるプレート10において、隣接する3つの検出空間13を連続して使用する場合を説明する。この場合、図7に示すように、上流となる検出空間13のポート14aにアダプター16を装着し、この上流となる検出空間13のポート14bにアダプター18の一端18aを装着する。また中間位置となる検出空間13のポート14aにアダプター18の他端18bを装着し、この中間位置となる検出空間13のポート14bに別のアダプター18の一端18aを装着する。この別のアダプター18の他端18bは、下流となる検出空間13のポート14aに装着され、下流となる検出空間13のポート14bにアダプター17を装着する。
すなわち、本実施形態において、プレート10を構成する基板11と12との2つの基板とそれらの基板に挟まれた検出空間13に存在する物質を加熱する際に、検出空間13を均一に加熱することが容易となる。
また、プレート10の表面が平坦であるため、焦点距離の短いレンズを用いた顕微鏡などによる検出空間13内部の観察や蛍光または発光等の検出においても、プレート10の上面と下面の片面もしくは両面からアプローチすることが可能となる。
また、検出空間13内に微小な穴が多数存在し、その穴にサンプル中の分子や細胞等を入れて数量をカウントする際や、サンプル中の標的物質の定量を行う際には、母数となる微小な穴の個数を増やして検出することが容易に可能となる。
アダプター18は、複数の検出空間13を連結するだけでなく、別の機能を有することが可能である。例として次のようなものが挙げられる。
アダプター18の内部(管内)に、フィルターなどの多孔質部材や半透膜などを設置して、アダプター18を通過する溶液中の不純物や反応生成物などの、検出反応に不要な物質を除去してもよい。
アダプター18の内部に、pH調整試薬やアダプター16とは異なる試薬等を設置(内包)し、アダプター18を溶液が通過する際に溶液の性質を調整するように構成されていてもよい。また、アダプター18の内部に、色素等を設置し、溶液の性質が検出可能なように構成されてもよい。
試薬等としては、pH調整試薬、緩衝液(バッファー)、核酸(人工核酸を含む)やタンパク、酵素、界面活性剤、抗体、ビーズなどの補足物(担体)、および標識試薬、色素などの呈色試薬(呈色とは可視光だけでなく紫外線や赤外線などの電磁波を含む)、これらを組合わせたもの、(例えば抗体つきビーズや標識つき核酸)が挙げられる。
アダプター18内部に液溜部を設け、これらの試薬を液体や固体の状態で載置することもできる。また、アダプター18内部に多孔質部材を設置し、多孔質部材に前記試薬等を含ませておくことも可能である。
また、アダプター18の断面形状を部分的あるいは連続的に変化させて、アダプター18の断面積が変化するように構成されてもよい。具体的にはアダプター18の断面形状(管径)を一部又は連続的に変化させることで溶液送液時に抵抗を与えることで、送液速度や量を調整することが可能となる。
アダプター18に試薬を内包しておく場合は、アダプター18の外壁に中身の試薬の種類を識別するシールや刻印がされていてもよい。また、識別方法は、アダプター18自身の色による識別でもよい。
本実施形態におけるプレートは、定量、定性に利用可能である。
以下、本実施形態に係るプレート10の変形例について説明する。
さらに、試薬は冷凍または冷蔵など特殊な条件で保管しておかなければならない場合でも、アダプター16のみをその形態で保管すればよく、プレート10自身をその形態で保管する必要はない。
内包方法としては、アダプター16の内壁に試薬を熱乾燥や凍結乾燥により固定することや、または、突き破り可能なフィルムにより液体状態として試薬をアダプター16の他端16b側に内包することができる。
さらに、アダプター16に試薬を内包しておく場合は、アダプター16の外壁に中身の試薬の種類を識別するシールや刻印がされていてもよい。また、識別方法は、アダプター16自身の色による識別でもよい。
内包する試薬としては、例えば、核酸増幅、核酸検出などの反応に用いるものでもよく、蛍光物質、緩衝液、マイクロビーズなどでもよい。
以下、本実施形態に係るプレート10の変形例2について説明する。
この場合、スポンジ17eの下端は、廃液を吸収後に、必要なサンプルに接触しない位置となるように設定されている。
また、閉塞端であるアダプター17の他端17bに小孔をあけ、当該閉塞端17bの小孔を指などで押さえながら当該アダプター17を変形させることで、検出空間13内、またはアダプター16、17、18に存在する試薬等の溶液を、移動させることができる。
このほかに、他端17bが閉塞端であるアダプター17や、他端17bに小孔をあけたアダプター17を、各アダプターや検出空間13に存在する試薬等に含まれる、気泡を抜くことに利用することもできる。
上記の実施形態において、アダプター16,17においては、一端16a,17aに当接部16c,17cと切欠部16d,17dとを設けて流路を確保した。これ以外にも、一端16a,17aの外周位置に突起部16h,17hを設けて、一端16a,17aが基板11の表面に当接しないように嵌合時の挿入位置を規定する位置規定による流路確保部を有することができる。
突起部16h,17hは、一端16a,17a外周に連続的な突条として周設してもよい。また、図8に示すように、突起部16h,17hを断続的な突条として周設してもよく、さらに、一端16a,17aの周囲に、例えば、1箇所以上好ましくは2カ所以上の突起として設けることもできる。
この突起部16h,17hを基板12の表面に位置するように設けることで、一端16a,17bが基板11に当接しないように嵌合位置を規定する。
0.5mm厚のガラスウエハにフッ素系樹脂(CYTOP:旭硝子製)をスピンコートし、180℃で3時間硬化させた。その後、フォトマスクを用いて露光を行い、ドライエッチングにより、直径5〜6μm、高さ3μmの穴をフッ素系樹脂に100万個形成した基板11を作製した。
なお、蛍光1と蛍光2とは検出波長の異なる蛍光である。
0.5mm厚のガラスウエハにフッ素系樹脂(CYTOP:旭硝子製)をスピンコートし、180℃で3時間硬化させた。その後、フォトマスクを用いて露光を行い、ドライエッチングにより、直径5〜6μm、高さ3μmの穴をフッ素系樹脂に100万個形成した基板11を作製した。
インベーダー反応用の試薬(1μM プローブ、1μM インベーダーオリゴ、2μM FRETカセット、10mM MOPS緩衝液、500U/μlクリベース)を用意した。この試薬を樹脂で成型されたアダプター16の内壁に分注し、60℃に設定したオーブンを用いて、15分間、乾燥固定した。
プレート10の検出空間13内の微小穴での反応を、1つ目の検出空間13だけではなく、2つ目の検出空間13でも検出を行った。
ビーズが含まれた核酸溶液サンプルからビーズを取り除いて核酸溶液の標的核酸の検出を行う手法を検証した。つまり、1つ目の検出空間13で試薬からのビーズ除去をおこない、2つ目の検出空間13で試薬の反応をさせた。
インベーダー反応用の試薬(1μM プローブ、1μM インベーダーオリゴ、2μM FRETカセット、10mM MOPS緩衝液、500U/μlクリベース)を用意した。この試薬を、樹脂で成型されたアダプター16の内壁に分注し、60℃に設定したオーブンを用いて、15分間、乾燥固定した。
プレート10の1つ目の検出空間13内のビーズの観察と、2つ目の検出空間13内の微小穴での反応の検出を行った。
上皮成長因子受容体(EGFR)遺伝子の変異型を検出するインベーダー反応用の試薬(1μM プローブ、1μM インベーダーオリゴ、2μM FRETカセット、10mM MOPS緩衝液、500U/μlクリベース)を用意した。この試薬を樹脂で成型された1つ目のアダプター16の内壁に分注した。また、上皮成長因 子受容体(EGFR)遺伝子の野生型を検出するインベーダー反応用の試薬を用意した。この試薬を樹脂で成型された2つ目のアダプター16の内壁に分注した。これらを60℃に設定したオーブンを用いて、15分間、乾燥し、試薬を固定した。
次に、疎水性のフッ素系液体(FC40)を1つ目のアダプター16から送液し、1つ目の検出空間13内の微小穴の外部に存在する試薬をフッ素系液体に置換した。
1つ目と2つ目のアダプター16,17を取り外し、1つ目と2つ目の検出空間13の穴(ポート)14a,14bをそれぞれ粘着フィルムにより封じた。その後、ホットプレートを用いてプレート10を63℃に温め、15分反応させた。
プレート10の2つの検出空間13内の微小穴での反応の検出を行った。
0.5mm厚のガラスウエハにフッ素系樹脂(CYTOP:旭硝子製)をスピンコートし、180℃で3時間硬化させた。その後、フォトマスクを用いて露光を行い、ドライエッチングにより、直径5〜6μm、高さ3μmの穴をフッ素系樹脂に100万個形成した基板11を作製した。
0.5mm厚のガラスウエハにフッ素系樹脂(CYTOP:旭硝子製)をスピンコートし、180℃で3時間硬化させた。その後、フォトマスクを用いて露光を行い、ドライエッチングにより、直径5〜6μm、高さ3μmの穴をフッ素系樹脂に100万個形成した基板11を作製した。
インベーダー反応用の試薬(1μM プローブ、1μM インベーダーオリゴ、2μM FRETカセット、10mM MOPS緩衝液、500U/μlクリベース)を用意した。この試薬を、樹脂で成型されたアダプター16の内壁に分注し、60℃に設定したオーブンを用いて、15分間、乾燥固定した。
その結果、貫通孔(ポート)14bから試薬液およびフッ素系液体が溢れ出て、プレート10の側面や検出空間13の外側面に付着するという不具合が発生した。
11,12…基板
13…検出空間
14a,14b…ポート
15…接着層
16,17,18…アダプター
Claims (14)
- 表面と裏面とを有する第一の基板と、
前記第一の基板の前記裏面に対向し、前記第一の基板の前記裏面との間に、外部から検出可能な検出空間を形成する第二の基板と、前記第一の基板の前記表面に設けられ、前記検出空間と連通する貫通孔を有し、前記検出空間内に液体を含む物質を送液する第一のポートと、
前記第一の基板の前記表面に設けられ、前記検出空間と連通する貫通孔を有し、前記検出空間内から液体を含む物質または気体を排出する第二のポートと、
前記第一及び前記第二のポートに着脱可能なアダプターと、を備え、
前記アダプターは、前記検出空間内に液体を送液又は排出する際に取り付けられ、前記検出空間内を外部から観察する際には取り外されるように構成され、
前記アダプターが取り外された状態では、前記第一の基板の表面は平坦であるプレート。 - 前記アダプターが、前記検出空間と外部とを連通し、前記貫通孔に嵌合可能な第一端と、前記第一端よりも拡径した開放端である第二端とを有する管体である請求項1に記載のプレート。
- 前記アダプターが、前記検出空間と他の検出空間とを連通し、前記検出空間の前記貫通孔に嵌合可能な第一端と、前記他の検出空間の前記貫通孔に嵌合可能な第二端と、を有する請求項1に記載のプレート。
- 前記アダプターの内壁に試薬が固定され、前記試薬を前記検出空間内に送達するように構成される請求項1から3のいずれか一項に記載のプレート。
- 前記アダプターが前記検出空間から前記物質を排出するように構成され、前記貫通孔に嵌合可能な第一端と、前記第一端よりも拡径した開放端または閉塞端である第二端とを有する請求項1に記載のプレート。
- 前記アダプター内に廃液を吸収する吸収手段が設けられ、前記検出空間から排出された廃液を吸収するように構成される請求項5に記載のプレート。
- 前記第一の基板及び前記第二の基板の少なくとも一方が透過性を有し前記検出空間内の蛍光または発光を外部から検出するように構成される請求項1から4のいずれか一項に記載のプレート。
- 前記第一の基板及び前記第二の基板がいずれも透過性を有し前記検出空間内の蛍光または発光を外部から検出するように構成される請求項1から4のいずれか一項に記載のプレート。
- 前記検出空間が複数設けられ、前記アダプターにより複数の前記検出空間が連通するように構成される請求項1から8のいずれか一項に記載のプレート。
- 前記検出空間内において、前記第一の基板及び前記第二の基板の少なくとも一方の面に、容量1pl以下の穴が1個以上存在する請求項1から9のいずれか一項に記載のプレート。
- 生体内物質の濃度を定量するように構成される請求項1から10のいずれか一項に記載のプレート。
- 前記生体内物質がDNA、RNA、miRNA、mRNA、またはタンパク質のいずれか1つである請求項11に記載のプレート。
- 前記貫通孔が、取り外しまたは突き破り可能なフィルムまたは蓋体によって閉塞されている請求項1から12のいずれか一項に記載のプレート。
- 前記検出空間が、加熱されるように構成される請求項1から13のいずれか一項に記載のプレート。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015129012 | 2015-06-26 | ||
JP2015129012 | 2015-06-26 | ||
PCT/JP2016/068803 WO2016208713A1 (ja) | 2015-06-26 | 2016-06-24 | プレート |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2016208713A1 true JPWO2016208713A1 (ja) | 2018-04-12 |
JP6743815B2 JP6743815B2 (ja) | 2020-08-19 |
Family
ID=57585063
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017525442A Active JP6743815B2 (ja) | 2015-06-26 | 2016-06-24 | プレート |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11142731B2 (ja) |
JP (1) | JP6743815B2 (ja) |
WO (1) | WO2016208713A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB201615320D0 (en) * | 2016-09-09 | 2016-10-26 | Invitron Ltd | Point of care platform test |
JP6972835B2 (ja) * | 2017-09-25 | 2021-11-24 | 株式会社Jvcケンウッド | 分注ユニット |
CN112368080A (zh) * | 2018-07-16 | 2021-02-12 | 普兰德有限两合公司 | 用于实验室器皿的温度控制装置 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007121130A (ja) * | 2005-10-28 | 2007-05-17 | Fujirebio Inc | マイクロ流体デバイスおよびその製造方法 |
JP2009047438A (ja) * | 2007-08-13 | 2009-03-05 | Aida Eng Ltd | マイクロ流路チップ |
JP4911592B2 (ja) * | 2006-11-01 | 2012-04-04 | 財団法人生産技術研究奨励会 | エマルジョンの製造方法及びその製造装置 |
US8222047B2 (en) * | 2008-09-23 | 2012-07-17 | Quanterix Corporation | Ultra-sensitive detection of molecules on single molecule arrays |
JP2014503831A (ja) * | 2011-01-28 | 2014-02-13 | クワンテリクス コーポレーション | 分子または粒子の超高感度検出用のシステム、デバイスおよび方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5123847B2 (ja) * | 2005-05-25 | 2013-01-23 | バイオ−ラド ラボラトリーズ インコーポレイテッド | 流体工学装置 |
-
2016
- 2016-06-24 WO PCT/JP2016/068803 patent/WO2016208713A1/ja active Application Filing
- 2016-06-24 JP JP2017525442A patent/JP6743815B2/ja active Active
-
2017
- 2017-12-26 US US15/854,355 patent/US11142731B2/en active Active
-
2021
- 2021-09-22 US US17/481,354 patent/US11739288B2/en active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007121130A (ja) * | 2005-10-28 | 2007-05-17 | Fujirebio Inc | マイクロ流体デバイスおよびその製造方法 |
JP4911592B2 (ja) * | 2006-11-01 | 2012-04-04 | 財団法人生産技術研究奨励会 | エマルジョンの製造方法及びその製造装置 |
JP2009047438A (ja) * | 2007-08-13 | 2009-03-05 | Aida Eng Ltd | マイクロ流路チップ |
US8222047B2 (en) * | 2008-09-23 | 2012-07-17 | Quanterix Corporation | Ultra-sensitive detection of molecules on single molecule arrays |
JP2014503831A (ja) * | 2011-01-28 | 2014-02-13 | クワンテリクス コーポレーション | 分子または粒子の超高感度検出用のシステム、デバイスおよび方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20180119078A1 (en) | 2018-05-03 |
US20220002645A1 (en) | 2022-01-06 |
JP6743815B2 (ja) | 2020-08-19 |
US11142731B2 (en) | 2021-10-12 |
WO2016208713A1 (ja) | 2016-12-29 |
US11739288B2 (en) | 2023-08-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11739288B2 (en) | Plate | |
CN105026932B (zh) | 微流控分配设备 | |
US9150907B2 (en) | Microfluidic flow cell assemblies and method of use | |
JP4513085B2 (ja) | 試料の容器 | |
JP4230816B2 (ja) | 試料の一部を自動的に貯蔵するプレート | |
JP2008517259A (ja) | 使い捨てカートリッジ内のdnaまたはタンパク質の総合的かつ自動的な分析装置、このようなカートリッジの製造方法、およびこのようなカートリッジを使用したdnaまたはタンパク質分析のための操作方法 | |
BRPI0717552A2 (pt) | Sistema de cartucho, método para formar um cartucho, cartucho, sistema de ensaio, método de análise para um ou mais analitos em uma amostra, componente de reagente para armazenar um ou mais reagentes, e, uso de um sistema de cartucho, cartucho, sistema de ensaio e/ou componente de reagente | |
EP3495824A1 (en) | Analysis cell, analysis device, analysis equipment, and analysis system | |
MX2012006244A (es) | Metodos y aparatos para segregacion de particulas, incluyendo segregacion y proliferacion de celulas fetales y celulas madre. | |
US20230001407A1 (en) | Microporous substrate for use in a disposable bioassay cartridge | |
EP3143380B1 (en) | Microfluidic flow cell assemblies and method of use | |
EP3143379A1 (en) | Microfluidic flow cell assemblies for imaging and method of use | |
US11927600B2 (en) | Fluidic bridge device and sample processing methods | |
US20060040311A1 (en) | Integrated cartridge for sample manipulation | |
US9080941B2 (en) | Microfluidic flow cell assemblies for imaging and method of use | |
WO2010077784A1 (en) | Test cartridges for flow assays and methods for their use | |
JP5953128B2 (ja) | アッセイ用キャピラリアレイの製造方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190521 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200414 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200612 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20200630 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20200713 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6743815 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |