JP5953128B2 - アッセイ用キャピラリアレイの製造方法 - Google Patents
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Description
また、複数のキャピラリ内腔がそれぞれに異なる試薬を有するキャピラリアレイの従来の製造は煩雑であり、したがってそのような方法で製造されるキャピラリアレイの単価は高く、単回使用には適していない。
(a)長手軸に垂直な横断面が矩形である外形を有し且つ内腔壁に検出試薬が付着した2以上の管状中空材を、長手軸方向及び矩形の向きが一致し且つ隣り合う管状中空材の1つの側壁面が略接触するように配列して保持する工程、
(b)隣り合う側壁面同士を接着剤で接着して管状中空材の集合体を形成し、同時に又は続いて、隣り合う管状中空材間で接着面の上方及び/又は下方に生じ得る凹部に接着剤を充填する工程、
(c)管状中空材の集合体の上面及び下面を透明フィルムで被覆する工程、
(d)管状中空材の集合体を管状中空材の長手軸方向に1箇所以上で所望の長さに切断して複数個のキャピラリアレイを得る工程
を含むことを特徴とする、内腔壁に検出試薬が付着した2以上のキャピラリからなるアッセイ用キャピラリアレイを製造する方法を提供する。
上記の製造方法により製造された少なくとも1種のキャピラリアレイと、
第1の開口部と第2の開口部を備え、第1の開口部はキャピラリアレイの一方の端部を受容可能な溝状構造部の開口部であり、第2の開口部は溝状構造部の底部に連通し、そのことにより、溝状構造部がキャピラリアレイを受容しているとき、第2の開口部から陽圧を印加することで、キャピラリアレイの全ての内腔からの流体の同時排出が可能であるコネクタと
を含むキャピラリアッセイ用キットを提供する。
本発明の製造方法は、内腔壁に検出試薬が付着した2以上のキャピラリからなるアッセイ用キャピラリアレイの製造方法であって、下記の工程
(a)長手軸に垂直な横断面が矩形である外形を有し且つ内腔壁に検出試薬が付着した2以上の管状中空材を、長手軸方向及び矩形の向きが一致し且つ隣り合う管状中空材の1つの側壁面が略接触するように配列して保持する工程、
(b)隣り合う側壁面同士を接着剤で接着して管状中空材の集合体を形成し、同時に又は続いて、隣り合う管状中空材間で接着面の上方及び/又は下方に生じ得る凹部に接着剤を充填する工程、
(c)管状中空材の集合体の上面及び下面を透明フィルムで被覆する工程、
(d)管状中空材の集合体を管状中空材の長手軸方向に1箇所以上で所望の長さに切断して複数個のキャピラリアレイを得る工程
を含むことを特徴とする。
工程(a)は、長手軸に垂直な横断面が矩形である外形を有し且つ内腔壁に検出試薬が付着した2以上の管状中空材を、長手軸方向及び矩形の向きが一致し且つ隣り合う管状中空材の1つの側壁面が略接触するように配列(並置)して保持する工程である(図1a、2a及び3a)。
内腔の横断面(長手軸に垂直な横断面)は、特に制限されず、円形を含む任意の形状であり得るが、矩形であることが好ましい。
外形が矩形であることで、管状中空材同士の接着面積が大きくなり、製造されたキャピラリアレイの機械的強度が増大する。また、外形及び内腔が矩形であることにより、製造されたキャピラリアレイにおいて、アッセイに利用する光の取り扱いが容易となる。すなわち、キャピラリ内腔への照射光(例えば、励起光)の照射及び/又は内腔からの射出光(例えば、蛍光又は化学発光)の検出が容易となる。横断面は正方形(略正方形を含む)であり得る。
配列すべき複数の管状中空材は、略同一の外形寸法を有していることが好ましい。「略同一の寸法」とは、同一の寸法、及び差が管材製造の分野において許容される程度であるものを意味する。
管状中空材の長さは、特に制限されないが、例えば、一方の端の開口部から液体を内腔に毛細管現象により全長にわたって導入することが可能な長さであり得る。例えば、管状中空材は10cm〜1m程度の長さであり得る。
内腔壁に付着された検出試薬は、内腔壁表面に固定されていてもよいし、されていなくてもよい(すなわち、内腔に試料等の液体が導入されたとき、内腔壁から該溶液中に放出されてもよい)。検出試薬は、内腔壁の表面(該表面が活性化されている場合も含む)に直接付着していてもよいし、内腔壁表面(少なくともその一部)に形成される層(この層は、検査対象の試料溶液に可溶であり、好ましくは水溶性である)中に保持されていてもよい。
2以上の管状中空材の内腔壁はそれぞれ、種類及び/又は濃度(量)に関して異なる検出試薬が付着されていてもよい。
本発明の製造方法は常温常圧で実施し得るので、管状中空材の内腔壁に予め付着させた試薬(特に、生体分子)が製造過程で変性することを回避できる。
例えば、付着は、検出試薬と内腔壁表面との間の相互作用(疎水性や静電力)を利用して該試薬を該表面に直接吸着させることにより行うことができる。この手法は、管状中空材がガラスで構成されている場合に特に適切である。付着はまた、活性化処理した内腔壁面と検出試薬が有する官能基との間で共有結合を形成することによっても行うことができる。表面の活性化は、例えば、アミノ基、メタクリル基、カルボキシル基、イソシアネート基、エポキシ基、アルデヒド基、SH基などの官能基を少なくとも1つ有する化合物(例えば、シランカップリング剤又はシランカップリング剤と他の化合物との組合せ)を用いる官能化であり得る。
いずれの場合にも、検出試薬と必要に応じて親水性高分子とを含有する溶液(溶媒は、例えば、水、メタノール、エタノールなど)を内腔に充填した後、溶媒を乾燥(例えば風乾)等により除去することで、該試薬を内腔壁面に付着させることができる。溶液の内腔への充填は、例えば、毛細管現象を利用して容易に行うことができる。
特にELISAに使用する場合には、アッセイ時に試料中の検出対象以外のタンパク質やペプチドが内腔壁に非特異的に吸着することを防止するために、検出試薬の付着後、内腔壁面に対して、ウシ血清アルブミン(BSA)などを用いるブロッキング処理を行ってもよい。
ここで、「矩形の向きが一致するように配列する」とは、管状中空材を配列させる基準面に、いずれの管状中空材も、外形(矩形)の長辺を構成する面が対向するように配向させるか又は短辺を構成する面が対向するように配向させて並置することを意味する。外形が略正方形である管状中空材は、いずれの面(両端面を除く)を基準面に対向させてもよい。
また、「略接触」状態とは、接触状態及び極近接した状態(例えば、間隙が毛細管現象により呈する程度のもの)を意味するが、但し、接触面間に接着剤を(例えば毛細管現象を利用して)供給できない程度にまで密着している状態を除くものとする。
板状非中空材を構成する材料の例としては、管状中空材を構成する材料について上記したものが挙げられる。板状非中空材は、接着性、切断の容易性及び切断面のきれいさの観点から、管状中空材と同じ材料で構成されていることが好ましい。
板状非中空材の横断面において、隣接する管状中空材に対向する面に対応する辺の長さは、該管状中空材の横断面において該板状非中空材に対向する面に対応する辺の長さとほぼ等しいことが好ましい。
工程(b)は、工程(a)で配列・保持された2以上の管状中空材(該当する場合、及び板状非中空材)の隣り合う側壁面同士を接着剤で接着して管状中空材の集合体を形成し、同時に又は続いて、隣り合う管状中空材間で接着面の上方及び/又は下方に生じ得る凹部に接着剤を充填する工程である(図1b、2b、3b)。該当する場合、工程(a)で、管状中空材と板状非中空材との隣り合う側壁面同士も接着し、同時に又は続いて、該側面同士の接着面の上方及び/又は下方に生じ得る凹部にも接着剤を充填する。
接着剤には可塑剤が含まれていることが好ましい。可塑剤は、特に制限されず公知のものを使用できるが、例えば、フタル酸エステル、トリメット酸エステル、脂肪族二塩基酸エステル、正リン酸エステル、安息香酸エステルなどである。可塑剤の具体例としては、フタル酸ジ-n-ブチル(DBP)、フタル酸-2-エチルヘキシル(DOP)、フタル酸ジイソノニル(DINP)、フタル酸ジイソデシル(DIDP)、トリメット酸トリ-2-エチルヘキシル(TOTM)、アジピン酸ジ-2-エチルヘキシル(DOA)、アジピン酸ジイソノニル(DINA)、リン酸トリフェニル(TPP)、リン酸トリクレジル(TCP)が挙げられる。可塑剤は、主成分たる樹脂100重量部に対して、例えば、30〜300重量部である。
本発明において最も好ましい接着剤は、主成分がポリ塩化ビニルであり、可塑剤がフタル酸-2-エチルヘキシルであり、溶剤がテトラヒドロフランであるものである。
側壁面同士の接着に際しては、接着剤を毛細管現象により供給することが好ましい。よって、接着剤(溶液)の粘度(濃度)は、毛細管現象により流動可能な粘度であることが好ましい。
凹部の埋め込みは、接着剤を充填することによって行うことができる。
過剰の接着剤は、ヘラ又はワイパー等を用いて、除去することが好ましい。
工程(c)は、工程b)で得られた管状中空材集合体の上面及び下面を透明フィルムで被覆する工程である(図1c、2c、3c)。該当する場合、板状非中空材の上面及び下面も透明フィルムで被覆することが好ましい。管状中空材集合体(該当する場合、板状非中空材)の側面もまた被覆されてよい(図2c、3c)。
透明フィルムは、公知のものから適宜選択して使用することができる。例えば、透明フィルムを構成する材料としては、塩化ビニル系樹脂、ポリオレフィン系樹脂、アクリレート系樹脂、ウレタン系樹脂、ポリエステル系樹脂(例えば、ポリカーボネート系樹脂、ポリエチレンテレフタレート系樹脂)、セロハンが挙げられる。
被覆は、1枚のフィルムを折り曲げて管状中空材集合体を挟み込むように行なわれてもよいし、2枚のフィルムの間に管状中空材集合体を挟むように行なわれてもよい。
被覆の後、ラミネート加工を行なってもよい(図1c')。
この透明フィルムは、製品たるキャピラリアレイにおいて補強材として機能すると共に、後述するコネクタに接続した際のシーリング材としても機能し得る。
工程(d)は、工程(c)で得られた被覆された管状中空材集合体を管状中空材の長手軸方向に1箇所以上で所望の長さに切断して複数個のキャピラリアレイを得る工程である(図1d、2d、3d)。
切断により得られるキャピラリアレイの長さ(キャピラリ管長)は、特に制限されないが、例えば0.5〜10cm程度、好ましくは0.5〜5cm、より好ましくは0.5〜2cm、より好ましくは0.5〜1cmである。
例えば、切断は、キャピラリの長手方向に対し垂直方向に、ダイアモンドカッター又はダイアモンドソーを用いて行う。
本発明のコネクタは、第1の開口部と第2の開口部を備え、第1の開口部はキャピラリアレイの一方の端部を受容可能な溝状構造部の開口部であり、第2の開口部は溝状構造部の底部に連通し、そのことにより、溝状構造部がキャピラリアレイを受容しているとき、第2の開口部から陽圧を印加することで、キャピラリアレイの全ての内腔からの流体の同時排出が可能であることを特徴とする。
本発明のコネクタは、キャピラリアレイ(好ましくは上述の方法で製造されたキャピラリアレイ)の全ての内腔から、存在し得る流体を同時に排出するために使用される。
第1の開口部(401、501)は、溝状構造部(403、503)の開口部であり、キャピラリアレイの接続口として機能する。第1の開口部の形状及び寸法は、キャピラリアレイの一方の端部を受容可能な形状及び寸法である限り、特に制限されない。
溝状構造部は、その内壁が、深さ方向に少なくとも一箇所(又は一区間)において、受容したキャピラリアレイ端部の外周と密着可能であり、その底部がキャピラリアレイの端部開口部(内腔の開口部)をいずれも閉塞しない構造を有する。
溝状構造部はまた、キャピラリアレイの一方の端部を受容(保持)したとき、少なくとも他方の端部が該溝状構造部外に露出(突出)するような構造及び寸法を有する。
第2の開口部の形状及び寸法は特に制限されないが、例えば、形状は多角形又は円形であり得る。
第2の開口部は、形状が円形である場合、円錐状、円錐台状又は円筒状の凹部の開口部であり得るし、円錐台状又は円筒状凸部の端面に設けられた開口部であり得る。形状が多角形である場合、第2の開口部は、円錐台状又は円筒状凸部の端面に設けられた開口部であり得る。
第2の開口部が円錐台状又は円筒状凸部の端面に設けられた開口部である場合、該凸部にはチューブが装着され得、該チューブの他方の端部は陽圧を付与できる装置に接続され得る。
第3の開口部の存在により、キャピラリアレイはコネクタに装着された状態で、毛細管現象を利用してキャピラリ内腔中に流体を導入することができる。すなわち、キャピラリ内腔中の流体を排出する際には、第2の開口部を通じて印加された陽圧がキャピラリアレイ端部開口部(内腔開口部)に付与されるように第3の開口部は閉塞され、キャピラリ内腔中の流体を毛細管現象により導入する際には、第3の開口部は開放状態にされる。
第3の開口部の形状及び寸法は特に制限されず、開放状態でキャピラリアレイの毛細管現象を妨げない形状(例えば、円形)及び寸法である。
コネクタ(610)に接続されたキャピラリアレイ(620)の各キャピラリ内腔(621)は、コネクタの溝状構造部(603)の底部を介して第2の開口部(605)と連通状態になる。換言すれば、第2の開口部(605)は、キャピラリアレイ(620)の全てのキャピラリ内腔(621)と連通する。よって、第2の開口部(605)に陽圧を印加することにより、キャピラリアレイ(620)の各内腔(621)のコネクタ挿入側開口部に陽圧が付与され、その結果、全てのキャピラリ内腔から存在し得る(試料や洗浄液のような)流体が同時に押出される。
本発明のコネクタ(特に、第3の開口を有する実施形態)は、キャピラリアレイのホルダーとしても機能することができ、キャピラリアレイを使用する自動化アッセイにおける使用に好適である。
本発明のコネクタは、第2の開口部へ陰圧を付与することにより、受容するキャピラリアレイの全ての内腔への流体の同時導入に使用することも可能である(が、通常は、流体の導入は毛細管現象を利用する)。
本発明のキャピラリアッセイ用キットは、(i)長手軸に垂直な横断面が矩形である外形を有する2以上のキャピラリからなるキャピラリ集合体と該キャピラリ集合体の少なくとも一方(好ましくは両方)の側方に接して配置された非中空部材とを備える少なくともキャピラリアレイと、(ii)上記で説明した本発明に係るコネクタとを含むことを特徴とする。
キャピラリアレイ(i)におけるキャピラリの数は、2以上であれば特に制限されず、例えば2〜100、好ましくは2〜50、より好ましくは2〜40、より好ましくは5〜40、より好ましくは10〜40である。
キャピラリアレイ(i)において、キャピラリ及びその内腔の外形(長手軸方向に垂直な横断面の外形)は、円形であっても矩形であってもよいが、外形は矩形であることが好ましい。より好ましくは内腔も矩形である。キャピラリ及びその内腔の外形が矩形である場合、その寸法は上記製造方法について記載したものであり得る。
キャピラリの長さは、特に制限されないが、例えば0.5〜10cm程度、好ましくは0.5〜5cm、より好ましくは0.5〜2cm、より好ましくは0.5〜1cmである。
キャピラリアレイ(i)の内腔壁には、検出試薬が付着されていることが好ましい。検出試薬は、上記製造方法について記載したものであり得る。
キャピラリアレイ(i)において、キャピラリの材料は、上記製造方法において管状中空材について記載したものであり得る。
キャピラリアレイ(i)は、上記の製造方法により製造することができる。
本発明は、アッセイ用キャピラリアレイを用いて、試料中の対象物質を検出することを含むアッセイ法も提供する。
より具体的には、
長手軸に垂直な横断面が矩形である外形を有し且つ内腔壁に検出試薬が付着した2以上のキャピラリからなるキャピラリ集合体と該キャピラリ集合体の少なくとも一方の側方に接して配置された非中空部材とを備える少なくとも1種のキャピラリアレイと、
第1の開口部と第2の開口部を備え、第1の開口部はキャピラリアレイの一方の端部を受容可能な溝状構造部の開口部であり、第2の開口部は溝状構造部の底部に連通し、そのことにより、溝状構造部がキャピラリアレイを受容しているとき、第2の開口部から陽圧を印加することで、キャピラリアレイの全ての内腔からの流体の同時排出が可能であるコネクタと
を使用し、前記キャピラリアレイの内腔において、試料中の対象物質を検出することを特徴とする、キャピラリアッセイ法が提供される。
試料は、対象物質の存在が疑われる試料であれば特に限定されない。試料は、被検体(ヒト、家畜動物や実験動物を含む動物)からの生物学的試料であり得る。生物学的試料としては、血液(血清、血漿を含む)、リンパ液、髄液、腹水、組織滲出液又は分泌液、唾液、痰及び尿を含む体液;器官又は組織(そのホモジネート、溶解物若しくは抽出物);細胞(その溶解産物及び抽出物を含む)が挙げられる。試料はまた、細菌感染が疑われているような食品サンプルであってもよい。試料には、防腐剤、凝固防止剤、界面活性剤などの添加剤や緩衝液が添加されていてもよい。
検出試薬は、上記製造方法について記載したものであり得る。
検出試薬が、抗体若しくはそのフラグメント(一次抗体)又は抗原である場合、検出はELISA法により行うことができる。ELISA法による検出工程は、例えば、以下のとおりである。
反応後、検出試薬に結合しなかった物質を除去するために、キャピラリ内腔を洗浄液(例えば、PBS、TBSのような緩衝液)で洗浄する。内腔中の試料又は洗浄液の排出は、キャピラリの一方の端面の内腔開口部に陽圧を付することにより行うことができる。このとき、上記の本発明のコネクタを用いることで、キャピラリアレイの全てのキャピラリ内腔からの試料又は洗浄液の排出を同時に行うことができる。洗浄液のキャピラリ内腔への導入は、毛細管現象を利用することができる。洗浄は、1回又は2回以上の複数回であり得る。
標識は、当該分野で公知であり、使用する検知の方法に応じて適宜選択できる。標識としては、酵素、発色色素、蛍光色素、化学発光色素、吸収色素、放射性同位体、スピン標識、電気化学的標識などを用いることができるが、好ましくは酵素、発色色素、蛍光色素又は化学発色色素である。
その後、結合しなかった二次抗体を除去するため、キャピラリ内腔を、上記のとおり洗浄液で洗浄する。このとき、本発明のコネクタを用いることで、キャピラリアレイの全てのキャピラリ内腔を同時に洗浄することができる。
使用した標識を検出するためには別の試薬(例えば酵素基質など)との反応が必要である場合、該試薬を含有する溶液をキャピラリ内腔中に導入して当該反応に十分な時間及び温度にて保持した後、標識に起因する信号を検出、測定する。
検出・測定は、分光光度計、蛍光顕微鏡、蛍光光度計、CCDカメラ、フォトダイオード、光電子増倍管などを使用して行うことができる。
反応後、一次プローブにハイブリダイズしなかった物質を除去するために、キャピラリ内腔を上記のように洗浄液で洗浄する。洗浄後、対象物質と、特異的にハイブリダイズする標識二次プローブ(一次プローブがハイブリダイズする部位(例えば、一方の端部)とは異なる部位(例えば、他方の端部)でハイブリダイズするプローブ)を含有する溶液を、キャピラリ内腔中に導入する。標識二次プローブのキャピラリ内腔への導入は、毛細管現象を利用することができる。
標識は、ELISAについて上述したとおりである。
その後、結合しなかった二次プローブを除去するため、キャピラリ内腔を、上記のとおり洗浄液で洗浄する。このとき、本発明のコネクタを用いることで、キャピラリアレイの全てのキャピラリ内腔を同時に洗浄することができる。
使用した標識を検出するためには別の試薬(例えば酵素基質など)との反応が必要である場合、該試薬を含有する溶液をキャピラリ内腔中に導入して当該反応に十分な時間及び温度にて保持した後、標識に起因する信号を検出、測定する。
検出・測定は、分光光度計、蛍光顕微鏡、蛍光光度計、CCDカメラ、フォトダイオード、光電子増倍管などを使用して行うことができる。
また、発明のコネクタ/ホルダを備え、本発明のキャピラリアレイを用いるアッセイを実行するための自動アッセイ装置は、検査すべき項目数が異なる2以上の試料を連続してアッセイすることができる。すなわち、検査すべき項目数が変わり、そのために使用するキャピラリアレイが変わる(キャピラリ数が変化する)たびに、コネクタ/ホルダを交換する必要がない。
外形の横断面が300μm×300μmの略正方形、内腔の横断面が100μm×100μmの略正方形である長さ約18cmのシリカガラス製管状中空材Square Flexible Fused Silica Capillary Tubing (Polymicro Technologies;WWP100375)を使用した。
先ず、管状中空材の内腔壁表面を洗浄した。簡潔には、内腔に1N NaOHを導入して30分間静置した後、十分な量の純水でNaOHを洗い流し、次いでアセトンを導入して水分を除去し、70℃のオーブン中で30分間乾燥させた。
上記のように内腔壁に検出試薬を付着させた管状中空材を、基準面上に、隣り合う側壁が略接触するように配列し、端部を粘着テープ(メンディングテープ;Scotch)で固定して保持した(図8a)。
接着剤として、テトラヒドロフラン(THF)中にポリ塩化ビニル(PVC;15w/v%)及びフタル酸-2-エチルヘキシル(可塑剤;30w/v%)を含む溶液(PVC溶液)を用いた。この接着剤を、長手軸方向に沿って、側壁接触面にその上方から滴下した。アクリル板(約30mm×約30mm×約2mm)を用いてワイプすることにより、過剰のPVC溶液を除去した(図8b)。その後、送風乾燥により5分間乾燥させた。
ダイアモンドカッター(96800-01,大成化光株式会社)により、長手軸方向の長さ約10mmごとに切断し、18個のキャピラリアレイを製造した(図8e)。
得られたキャピラリアレイの端面(ダイアモンドカッターによる破断面)は、きれいであり、内腔の開口部はいずれも塞がれているようなことはなかった(図9)。
製造した実施例及び比較例のキャピラリアレイについて、一方の端部を溶液中に浸漬させて、毛細管現象を利用して内腔中に溶液を導入する操作を行った。この際、比較例のキャピラリアレイでは、間隙(接着面並びに及びその上方及び下方の凹部)への溶液の導入(液漏れ)が観察された一方、本発明のキャピラリアレイでは、液漏れは観察されなかった(図10)。
実施例1と同様にして、10本のキャピラリを有するキャピラリアレイ(ただし、内腔壁に検出試薬は未付着)を製造した。
コネクタとして、図11に示すコネクタを用いた。
コネクタの接続口にキャピラリアレイを装着し、キャピラリアレイの端部(接続口に挿入されていない側の端部)を1%BSA-FITC溶液に浸漬すると、毛細管現象により内腔中に1%BSA-FITC溶液が導入された。キャピラリアレイにフィルター(470/40nm)付き水銀ランプを照射すると、内腔に対応する位置に強い蛍光(約520nm)が観察された(図12)。
コネクタの接続口にキャピラリアレイを装着したまま、キャピラリアレイの端部を緩衝液(50mM,pH7.0)に浸漬すると、毛細管現象により内腔中に該緩衝液が導入された。この時点で、キャピラリアレイにフィルター(470/40nm)付き水銀ランプを照射すると、内腔に対応する位置に弱い蛍光が観察された(図12)。
再度、キャピラリアレイの端部を緩衝液に浸漬して内腔中に緩衝液を毛細管現象により導入した。この時点で、キャピラリアレイにフィルター(470/40nm)付き水銀ランプを照射すると、蛍光は観察されなかった(図12)。
以降、2回の緩衝液の導入及び押出を繰り返したが、フィルター(470/40nm)付き水銀ランプ照射による蛍光は観察されなかった(図12)。
したがって、本発明のキャピラリアレイは、2〜3回の洗浄操作により洗浄できることが示された。また、洗浄に際して、本発明のコネクタを用いることで、キャピラリアレイの全てのキャピラリ内腔を同時に洗浄できることが示された。
実施例1と同様にして、6本のキャピラリを有するキャピラリアレイ(ただし、内腔壁に検出試薬は未付着)を製造した。
1つのキャピラリアレイのキャピラリ内腔に、0.005、0.05、0.5、5、50、500μMのフルオレセイン(蛍光試薬)溶液を充填した。
一方、別のキャピラリアレイのキャピラリ内腔に、300mg/mLでポリエチレングリコール(PEG;分子量20000)を溶解したメタノール中0.05、0.5、5、50、500、5000μMのフルオレセイン溶液を充填した。その後、内腔の一方の開口部から空気を穏やかに注入し、次いで約24時間自然乾燥させた。こうして、矩形内腔の隅部に、フルオレセインを含有する可溶性PEG層を形成した。
蛍光試薬としてフルオレセインの代わりに、アミノメチルクマリン(AMC)を用いて、上記と同様の実験を繰り返した。使用した試薬濃度は、0.005、0.05、0.5、5、50、500μM、並びに300mg/mLでポリエチレングリコール(PEG;分子量20000)を溶解したメタノール中0.05、0.5、5、50、500、5000μMであった
結果を図14Bに示す。図において、縦軸は蛍光強度変化を表し、横軸はAMCの濃度(logスケール)を表す。
Claims (7)
- 長手軸に垂直な横断面が矩形である外形を有する2以上のキャピラリからなり、該キャピラリが、長手軸方向及び矩形の向きが一致するように隣り合う側壁面同士で接着され、かつ、接着面の上方及び/又は下方に側壁面により形成される凹部に接着剤が充填されてなるキャピラリ集合体を備える少なくとも1種のキャピラリアレイであって、各々のキャピラリの内腔壁に検出試薬が付着し、長手軸方向両端面を除く外周に透明フィルムを備えるキャピラリアレイと、
第1の開口部と第2の開口部を備え、第1の開口部はキャピラリアレイの一方の端部を受容可能な溝状構造部の開口部であり、第2の開口部は溝状構造部の底部に連通し、そのことにより、溝状構造部がキャピラリアレイを受容しているとき、第2の開口部から陽圧を印加することで、キャピラリアレイの全ての内腔からの流体の同時排出が可能であるコネクタと
を含むキャピラリアッセイ用キット。 - キャピラリ集合体の両外側に接着され、長手軸方向の長さがキャピラリ集合体の長さと同じである板状非中空部材を更に備え、透明フィルムがキャピラリ集合体及び板状非中空部材の長手軸方向両端面を除く外周に配置されている、請求項1に記載のキャピラリアッセイ用キット。
- キャピラリ数の異なる2種以上のキャピラリアレイを含んでなり、該2種以上のキャピラリアレイ間で板状非中空部材の幅が異なる一方、該2種以上のキャピラリアレイの外形寸法の幅は同一である、請求項2に記載のキャピラリアッセイ用キット。
- 各々のキャピラリの内腔壁に異なる検出試薬が付着した請求項1〜3のいずれか1項に記載のキャピラリアッセイ用キット。
- 検出試薬が抗体及びそのフラグメント、抗原並びに核酸からなる群より選択される請求項1〜4のいずれか1項に記載のキャピラリアッセイ用キット。
- 請求項1〜5のいずれか1項に記載のキットを使用するキャピラリアッセイ法。
- (a)長手軸に垂直な横断面が矩形である外形を有し且つ内腔壁に検出試薬が付着した2以上の管状中空材を、長手軸方向及び矩形の向きが一致し且つ隣り合う管状中空材の1つの側壁面同士が略接触するように配列し、配列した管状中空材の両外側に、板状非中空部材を、長手軸方向が一致し且つ隣り合う板状非中空材及び管状中空材の側壁面同士が略接触するように更に配置して保持する工程、
(b)隣り合う側壁面同士を接着剤で接着して管状中空材の集合体を形成し、同時に又は続いて、隣り合う管状中空材間で接着面の上方及び/又は下方に生じ得る凹部に接着剤を充填する工程、
(c)管状中空材の集合体の上面及び下面を透明フィルムで被覆する工程、
(d)管状中空材の集合体を管状中空材の長手軸方向に1箇所以上で所望の長さに切断して複数個のキャピラリアレイを得る工程
を含み、板状非中空材の長手軸に垂直な横断面における配列方向の幅を、製造されるキャピラリアレイの外形寸法の幅が配列する管状中空材の数に関わらず同一となるように設定することを特徴とする、請求項3に記載のキャピラリアッセイ用キットに含まれるキャピラリアレイを製造する方法。
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