JPWO2005105993A1 - Hla結合性ペプチド、その前駆体、それをコードするdna断片および組み換えベクター - Google Patents
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Abstract
Description
本実施形態では、能動学習実験法(特開平11−316754号公報)を用いて得られる仮説により予測された、HLA分子との結合性が、−logKd値に換算して3以上であるアミノ酸配列を含み、8以上11以下のアミノ酸残基からなるペプチドを、HLA結合性ペプチド候補とした。そして結合実験を行った結果、実際にこれらのペプチドがHLA結合性ペプチドであることを確認した。
さらに、上記のHLA結合性ペプチドは、ヒトHLA−A2型分子に結合するペプチドであってもよい。
さらにこの構成によれば、日本人種に加えて欧米人種に多いHLA−A2型分子に対して結合するペプチドが得られるため、日本人種に加えて欧米人種に特に効果的な治療薬、予防薬などの開発に利用できる。
本実施形態によれば、HLA−A型分子に結合するHLA結合性ペプチドであって、上記のHLA結合性ペプチドに含まれるアミノ酸配列のうち1若しくは2個のアミノ酸残基が欠失、置換若しくは付加されてなるアミノ酸配列を含み、8以上11以下のアミノ酸残基からなるHLA結合性ペプチドが提供される。
本実施形態によれば、上記のHLA結合性ペプチドをコードするDNA配列を含むDNA断片が提供される。本実施形態に係るDNA断片は、特定のDNA配列を含むため、上記のHLA結合性ペプチドを発現可能である。
本実施形態によれば、上記のHLA結合性ペプチドをコードするDNA配列を含む組み換えベクターが得られる。本実施形態に係る組み換えベクターは、特定のDNA配列を含むため、上記のHLA結合性ペプチドを発現可能である。
を得た。
実験データは、蓄積データとして随時格納される。
ペプチドは、Fmocアミノ酸を用い、Merrifieldの固相法にて、マニュアル合成をした。脱保護の後、C18カラムを用いて逆相HPLC精製をし、95%以上の純度にした。ペプチドの同定と純度の確認は、MALDI−TOF質量分析にて行った(Voyager DE RP、PerSeptive)。ペプチドの定量は、BSAを標準蛋白質としてMicro BCAアッセイ(Pierce社)にて行った。
HLA−A*2402遺伝子の産物であるHLA−A24型分子へのペプチドの結合能の測定は、HLA−A24型分子を発現するC1R−A24細胞(熊本大学、滝口雅文教授作成のものを、許可を得て愛媛大学、安川正貴助教授から供与いただいた。)を用いて行った。
HLA−A*0201遺伝子の産物であるHLA−A2型分子へのペプチドの結合能の測定は、HLA−A*0201を発現する細胞株JYを用いて行った。
結合能を測定したいペプチドの段階希釈列に上記JY細胞と精製β2mを加えたのち、氷上で4時間インキュベートした。この時点までに再会合したHLA−A*0201分子を、会合型特異的な蛍光標識モノクローナル抗体BB7.2を用いて染色した。
その結果、上記表1〜表4に示した予測結果および実験結果が得られた。
Claims (8)
- HLA−A型分子に結合するHLA結合性ペプチドであって、
配列番号1から183からなる群より選ばれる1種以上のアミノ酸配列を含み、
8以上11以下のアミノ酸残基からなることを特徴とするHLA結合性ペプチド。 - 請求項1に記載のHLA結合性ペプチドにおいて、
配列番号1、2、3、5、8、12、13、14、16、17、18、19、22、23、25、27、34、37、38、40、42、45、48、49、52、53、54、55、56、58、59、60、61、62、63、64、65、67、71、72、74、75、76、84、86、87、90、91、92、93、94、96、97、98、100、101、102、104、106、107、108、109、110、112、123、124、126、127、131、132、133、134、135、136、137、139、141、142、146、147、149、150、152、162、170、173、176、177および179からなる群より選ばれる1種以上のアミノ酸配列を含むことを特徴とするHLA結合性ペプチド。 - HLA−A型分子に結合するHLA結合性ペプチドであって、
請求項1または2に記載のHLA結合性ペプチドに含まれる前記アミノ酸配列のうち1若しくは2個のアミノ酸残基が欠失、置換若しくは付加されてなるアミノ酸配列を含み、
8以上11以下のアミノ酸残基からなることを特徴とするHLA結合性ペプチド。 - 請求項1乃至3いずれかに記載のHLA結合性ペプチドにおいて、
前記HLA結合性ペプチドは、
ヒトHLA−A24型分子に結合することを特徴とするHLA結合性ペプチド。 - 請求項1乃至3いずれかに記載のHLA結合性ペプチドにおいて、
前記HLA結合性ペプチドは、
ヒトHLA−A2型分子に結合することを特徴とするHLA結合性ペプチド。 - 請求項1乃至5いずれかに記載のHLA結合性ペプチドをコードするDNA配列を含むことを特徴とするDNA断片。
- 請求項1乃至5いずれかに記載のHLA結合性ペプチドをコードするDNA配列を含むことを特徴とする組み換えベクター。
- ほ乳類の生体内において、請求項1乃至5いずれかに記載のHLA結合性ペプチドに変化することを特徴とするHLA結合性ペプチド前駆体。
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