JPS6368616A - 親水性架橋重合体粒子の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、親水性架橋重合体粒子の製造方法、特に液体
クロマトグラフィー用充填剤等として有用な親水性架橋
重合体粒子の製造方法に関する。

（従来の技術） 従来、液体クロマトグラフィー用充填剤としては、■ス
チレンと架橋性単量体ジビニルベンゼンの共重合体ゲル
、■アクリル酸エステル系単量体と架橋性単量体ポリア
ルキレングリコールのポリアクリル酸エステルの共重合
体ゲル（特開昭５５−９９０６８号公報）、■ポリビニ
ルアルコールをエピクロルヒドリンで架橋したゲル（特
開昭５２−１３８０７７号公報）、■酢酸ビニルとトリ
アリルイソシアヌレートの共重合体ゲルを加水分解した
ポリビニルアルコールゲル（特開昭５７−３０９４５号
公報）、■アクリル酸エステル系単量体又はアクリルア
ミドと架橋性単量体メチレンビスアクリルアミドの共重
合体ゲル、■デキストランをエピクロルヒドリンで架橋
したゲル（特公昭４７−２１４０５号公報）、■シリカ
ゲルやガラス等の無機系ゲルを化学修飾したもの等が知
られている。

（発明が解決しようとする問題点） 上記■のゲルは、有機溶媒を溶出液とする液体クロマト
グラフィーでは優れた充填剤となり得るが、水とのなじ
みが良くないため、水を溶出液とする場合には使用でき
ない、上記した■、■及び■のゲルは、若干疎水性が残
っているため、被分離物質に疎水性があると、疎水性吸
着を起こし、分子ふるい分離を行う場合には都合が悪い
。上記した■及び■のゲルは１．疎水性ではないが、機
械的強度に乏しく、高圧がかかる高速液体クロマトグラ
フィー用充填剤として用いることはできない。

上記した■のゲルは疎水性でなく、機械的強度もあるが
、アルカリに弱く、耐久性に劣るという欠点があった。

本発明者らは、このような従来技術の問題点を解決する
ため鋭意研究を行い、親水性で、高速液体クロマトグラ
フィーに適用でき、耐久性が良く、しかも排除限界分子
量（ＭＬ！−）をペプチドや水溶性オリゴマーの分離に
有効な範囲に任意に調整でき、充填カラムに゛した際の
較正曲線が直線に近く、かつ適当な勾配を持つ液体クロ
マトグラフィー用充填剤として適用可能な親水性架橋重
合体粒子を提供することを目的とする。

（問題点を解決するための手段） 本発明は、一般式（■）： 〔式中、Ｒ１はＨ又はＣＨｌを表し、ｎは２〜４の整数
を表し、ｍは０．１又は２を表し、ｍ＋ｎは４である〕
で示される化合物及び一般式（■）：〔式中、Ｒ１及び
Ｒ３は、それぞれ独立してＨ又はＣＨ３を表し、ｌは１
〜３０の整数を表す〕で示される化合物を水と混和しな
い非反応性有機溶媒の存在下に水性ＱＳ重合させること
により親水性架橋重合体粒子を製造する方法において、
水と混和しない非反応性有機溶媒が脂肪酸エステルと脂
肪族アルコールの組み合わせであることを特徴とする親
水性架橋重合体粒子の製造方法に関する。

本発明に用いられる一般式（Ｉ）の化合物としては、ペ
ンタエリドリフトジアクリレート、ペンタエリドリフト
トリアクリレート、ペンタエリドリフトテトラアクリレ
ート、ペンタエリトリットジメタクリレート、ペンタエ
リドリフトトリメタクリレート、ペンタエリトリットテ
トラメタクリレートが挙げられ、これらの一種又は二種
以上を使用できる。これらの化合物は、平均した場合に
、前記一般式（Ｉ）中のｎが２．５以上になるように二
種以上併用して使用するのが機械的強度を向上させる上
で好ましい。

本発明における一般式（ＩＩ）の化合物としては、エチ
レングリコール又はポリエチレングリコールのモノアク
リレート又はモノメタクリレート及びこれらのメチルエ
ーテルがある。一般式（ＩＩ）において、ｌが大きすぎ
ると、水と混和しない非反応性有機溶媒との相溶性が低
下するため、得られる親水性架橋重合体粒子を液体クロ
マトグラフィー用充填剤に応用する際の細孔の調整が困
難になる。一般式（ｆｆ）において、ｌは１〜３０の整
数、好ましくは５〜１５の整数である。これらも一種又
は二種以上使用することができる。

−ｉ式（Ｉ）で示される化合物と一般式（ＩＩ）で示さ
れる化合物は、前者が多すぎると架橋度が増加し、機械
的強度は上がるが、疎水性になる傾向があり、後者が多
すぎると、親木性は向上するが、架橋度が減少し、機械
的強度が低下する傾向があるため、重量比で前者／後者
が４／１〜３／７の範囲になるように、好ましくは２／
１〜２／３の範囲になるように使用される。

また、目的に応じて、他のビニル系単量体を全ビニル系
単量体に対して１０重量％以下で使用することができる
。他のビニル系単量体が多すぎると、親水性架橋重合体
粒子の親水性が阻害されやすくなる。

他のビニル系単量体としては、アクリル酸系単量体及び
その他のビニル系単量体を使用することができる。

アクリル酸系単量体としては、アクリル酸、メタクリル
酸及びこれらの誘導体がある。誘導体としては、アクリ
ル酸メチル、アクリル酸エチル、アクリル酸ブチル、ア
クリル酸ラウリル、アクリル酸ステアリル等のアクリル
酸アルキルエステル、メタクリル酸メチル、メタクリル
酸エチル、メタクリル酸ブチル、メタクリル酸ラウリル
、メタクリル酸ステアリル等のメタクリル酸アルキルエ
ステル、アクリル酸２−ヒドロキシプロピル、アクリル
酸ヒドロキシブチル等のアクリル酸ヒドロキシアルキル
エステル、トリメチロールプロパン、トリメチロールエ
タン等の多価アルコールのアクリル酸モノエステル゛、
ジエステル又はトリエステル、ポリプロピレングリコー
ルモノアクリレート等のポリアルキレングリコールのア
クリル酸モノエステル又はジエステル、メタクリル酸２
−ヒドロキシプロピル、メタクリル酸ヒドロキシブチル
等のメタクリル酸ヒドロキシアルキルエステル、トリメ
チロールプロパン、トリメチロールエタン等の多価アル
コールのメタクリル酸モノエステル、ジエステル又はト
リエステル、ポリエチレングリコールモノアクリレート
、ポリプロピレングリコールモノメタクリレート等のポ
リアルキレングリコールのメタクリル酸モノエステル又
はジエステル、ジエチルアミノエチルアクリレート等の
ジアルキルアミノアルキルアクリレート、ジエチルアミ
ノエチルメタクリレート等のジアルキルアミノアルキル
メタクリレート、アクリルアミド、メタクリルアミド、
グリシジルアクリレート、グリシジルメタクリレート等
、更に上記のアクリル酸ヒドロキシアルキル、上記のメ
タクリル酸ヒドロキシアルキル、上記の多価アルコール
のアクリル酸モノエステル、上記の多価アルコールのメ
タクリル酸モノエステル、上記のポリアルキレングリコ
ールのアクリル酸モノエステル及び上記のポリアルキレ
ンゲリコールのメタクリル酸モノエステルのメチルエー
テル、エチルエーテル、プロピルエーテル、ブチルエー
テル、ペンチルエーテル等のアルキルエーテル等がある
。トリス（β−ヒドロキシエチル）イソシアヌレートの
アクリル酸モノエステル、ジエステル又はトリエステル
、同様のメタクリル酸のモノエステル、ジエステル又は
トリエステルも使用できる。

アクリル酸系単量体以外の一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で
表されるビニル系単量体と共重合させ得る他のビニル系
単量体としては、マレイン酸、ツマニル酸、・ｆタコン
酸及びこれらのアクリル酸又はメタクリル酸誘導体と同
様の誘導体、ビニルピリジン、ビニルピロリドン、酢酸
ビニル、アクリロニトリル、スチレン又はクロロスチレ
ン、クロロメチルスチレン、ビニルトルエン、エチルビ
ニ）Ｌｔヘンゼン、α−メチルスチレン、ジビニルベン
ゼン等のスチレン誘導体等がある。

一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）で表されるビニル系単量体以
外のビニル系単量体を用いる場合、使用する単量体の種
類及び使用量は、親水性架橋重合体粒子の用途等を考慮
して適宜法めればよい。

やや疎水性の粒子を得るためには、スチレン、ジビニル
ベンゼン、メタクリル酸ラウリル等の疎水性の単量体を
使用するのが好ましい。

陰イオン交換樹脂として応用できる粒子を得るためには
、アクリル酸、メタクリル酸、マレイン酸、フマール酸
、イタコン酸等のカルボキシル基を有するビニル系単量
体を必須成分として使用するのが好ましい。陽イオン交
換樹脂として応用できる粒子を得るためには、ジアミノ
アルキルアクリレート、ジアミノアルキルメタクリレー
ト、ビニルピリジン等の三級アミノ基を有するビニル単
量体を必須成分として使用するのが好ましい。また、ク
ロロメチルスチレン、グリシジルメタクリレート、グリ
シジルアクリレート、多価アルコールのモノアクリレー
ト及びモノメタクリレートを用いて重合体を合成し、そ
の後、塩素、グリシジル基、水酸基を変性し、第四級ア
ンモニウム基、スルホン酸基等の種々の官能基や蛋白質
等を導入し、アフィニティクロマトグラフイー等、種々
の分離方式を導入することも可能である。

本発明において、水と混和しない非反応性有機溶媒の組
み合わせに用いられる脂肪酸エステルとしては、酢酸プ
ロピル、酢酸ブチル、酢酸アミル、酢酸ヘキシル等の酢
酸エステルの他、ギ酸エステル、プロピオン酸エステル
等があり、これらの一種又は二種以上が用いられる。経
済性や沸点等を考慮すると、酢酸ｎ−ブチルが好ましい
。

また、脂肪族アルコールとしては、ブチルアルコール、
アミルアルコール、ヘキサノール等があり、これらの一
種又は二種以上を使用することができる。経済性や沸点
等を考慮すると、イソアミルアルコールが好ましい。

本明細書において、「水と混和しない」とは、室温で水
に対する溶解度がＬｏｇ／１００ｇ水以下であることを
意味する。

親水性架橋重合体粒子を液体クロマトグラフィー用充填
剤として応用する際には、Ｍ　Ｌ　ｉ　＋１１を２×１
０３〜１０’の範囲で任意に調整し、較正曲線を適当な
勾配を持つ直線にするためには、充填剤の細孔（ボア）
を制御する必要があた、そのためには、脂肪酸エステル
（Ａ）と脂肪族アルコール（Ｂ）の使用量比を重量比で
Ａ／Ｂが２／１〜１／３になるようにするのが特に好ま
しい。

更に、これらの使用量は、単量体のＩ、８１（Ｃ）に対
する非反応性有機溶媒の使用量！　（Ｄ）の比がＤ／Ｃ
で１／２〜３／１の範囲になるように使用するのが好ま
しい。充填剤の空隙率と耐圧性を考慮すると、Ｄ／Ｃで
１／１〜２／１の割合とするのが更に好ましい。非反応
性有機溶媒が少なすぎると、得られる充填剤を多孔性に
し難くなり、分離能が不足し、多すぎると、得られる粒
子の空隙率が大きくなり、耐圧性に乏しくなる。

ここで、Ｍ３．、とは、充填剤のボア内に入れない分子
の下限の分子量を示し、この分子量に相当する大きさ以
上のボアは充填剤に存在せず、この値以上の分子量を持
つ成分は、実質的に同じ溶出容量を持つので、分離でき
ない。そのため、分子ふるい分離による分析は、Ｍ３．
、以下の成分について行われる。ペプチドや水溶性オリ
ゴマーは分子量１０５以下の物質が多く、そのような物
質の分析に用いる充填剤はＭ３．、が２Ｘ１０３〜ｉｏ
’であるのが良い。

分子ふるいだけでなく、イオン交換や分配・吸着、アフ
ィニティクロマトグラフィー等の他のメカニズムによる
分離でも、ボアを制御し、数多く存在させることは、分
析されるオリゴマー等の接することができる表面積を大
きくすることになるので、これらを目的とした充填剤の
分離能を向上させることになる。

Ｍ　Ｌ　ｉ　ｓを求める方法に制限はない。例えば、縦
軸に分子量既知の水溶性高分子（例えば、プルランやポ
リエチレングリコール等）の分子量の対数を、横軸に溶
出容量を目盛ったグラフにプロットして得られる較正曲
線の縦軸に平行な線をそれに続く負の勾配を持った直線
の交点から求める。

本発明においては、−ｉ式（Ｉ）で表される化合物及び
一般式（Ｉｆ）で表される化合物を、非反応性有機溶媒
の存在下に水性媒体中で懸濁重合させる。

このとき、非反応性有機溶媒の添加時期は、反応前にす
べて添加するか又は重合率が２０％に達するまでに添加
するのが好ましい。添加方法としては、分割して行って
もよい。

本発明方法において使用するための好適な重合開始剤と
しては、過酸化ベンゾイル、過酸化ジクロロベンゾイル
、ジクミルペルオキシド、ジー第３−ブチルペルオキシ
ド、２．５−ジ（ペルオキシベンゾエート）ヘキシン−
３，１，３−ビス（第３−ブチルペルオキシイソプロビ
ル）ベンゼン、過酸化ラウロイル、第３−ブチルペルア
セテート、２，５−ジメチル−２，５−ジ（第３−ブチ
ルペルオキシ）ヘキシン−３，２，５−ジメチル−２，
５−シ（第３−ブチルペルオキシ）ヘキサン及び第３−
ブチルベルベンゾエート、メチルエチルケトンペルオキ
シド、メチルシクロヘキサノンペルオキシド等の有機過
酸化物、アゾビス−イソブチロニトリル及びジメチルア
ゾジイソブチレート等のアゾ系化合物があり、これらの
一種又は二種以上を使用できる。この使用量はビニル系
単量体の種類及び得られる重合体の目的とする分子量に
より決められるものであるが、好ましくはビニル系単量
体に対して０．１〜４．０重量％使用される。

また、本発明において、分散剤として難溶性燐酸塩、水
溶性高分子保護コロイド等を重合系に添加することがで
きる。

難溶性燐酸塩としては、燐酸三カルシウム、燐酸マグネ
シウム等がある。高分子保護コロイドとしては、ポリビ
ニルアルコール、アルキルセルロース、ヒドロキシアル
キルセルロース、カルボキシアルキルセルロース等の水
溶性セルロース誘導体、ポリアクリル酸ナトリウム等が
ある。難溶性燐酸塩は、重合系に存在する物質全量に対
して０．０１重量％以上、水溶性高分子保護コロイドは
１〜０．００１重量％の範囲で使用されるのが好ましい
。

その他、陰イオン系界面活性剤、硫酸ナトリウム、塩化
ナトリウム等の水溶性無機塩等の助剤を使用することが
できる。

ビニル系単量体、非反応性有機溶媒、分散剤、重合開始
剤及び必要に応じて助剤は、これらを予め混合して又は
各々別々に水性媒体に添加して分散させる。この場合、
よく分散させるために、ホモミキサー等により高速攪拌
するのが好ましく、この高速攪拌は、重合初期まで行う
ことができる。

これ以後の重合は、プロペラ攪拌機等を用いる普通の攪
拌下に行われる。

なお、水性媒体は、前記単量体及び前記非反応性有機溶
媒の総量に対して１〜５０重量倍使用するのが好ましい
。この場合、水性媒体としては、水が使用されるが、懸
濁系の安定性を阻害しない範囲で水溶性有機溶媒を溶解
して含む水を使用してもよい。

本発明により得られる親水性架橋重合体粒子は、液体ク
ロマトグラフィー用充填剤、特に、ゲルパーミェーショ
ンクロマトグラフィー用又は分配吸着型クロマトグラフ
ィー用充填剤として使用できる。更に、グリシジル基、
水酸基、アミノ基、第四級アンモニウム基、カルボキシ
ル基、スルホン酸基、酵素等の蛋白質等を導入して、充
填剤の性質を変えたり、アフィニティクロマトグラフィ
ーやイオンクロマトグラフィー用担体としても使用可能
である。

（実施例） 次に、実施例に基づいて本発明を詳述するが、本発明は
これに限定されるものではない。

実施例１ （Ｉ）親水性架橋重合体粒子の合成 メトキシポリエチレングリコールメタクリレート（ポリ
エチレングリコールの平均重合度９：商品名ＮＫ−エス
テルＭ−９Ｇ、新中村化学工業■製）５６ｇ、ペンタエ
リドリフトジアクリレート３重量％、ペンタエリドリフ
トトリアクリレート５１重量％及びペンタエリドリフト
テトラアクリレート４６重量％から成る混合物〔一般式
（Ｉ）中のｎは、平均３．４３である〕６４ｇ、酢酸ブ
チル１１０ｇ、イソアミルアルコール７０ｇ、水１４５
０ａ＋ｆｆｉ、１０重量％燐酸三カルシウム水懸濁液５
５０＋ｄ、メチルセルロース１．５ｇ並びに７ゾビスイ
ソブチロニトリル１．２ｇを混合し、ホモミキサーを使
用して高速攪拌下（６０００〜８０００ｒ、ｐ、ｍ、）
に６５℃で反応を進めた。その後、プロペラ攪拌機を備
えた容器に移して７０〜８０℃で約８時間、攪拌速度３
０　Ｏｒ、ｐ、ｍ、で反応させ、有機溶媒及び水に不溶
な親水性架橋重合体粒子を得た。粒度は、１〜３０μｍ
であった。

（２）液体クロマトグラフィーへの応用例（Ｉ）で得ら
れた粒子をふるい分けして８〜１２μｍの粒度とし、こ
れを水に分散させてスラリー状としてから直径１０．７
　ｍ、高さ３００ｍのステンレスカラムに充填した。こ
のカラムを用いて多ｖＮ類のプルラン、エチレングリコ
ール及びポリエチレングリコールの測定を行った。測定
条件としては、移動相（溶出液）に水を使用し、流量を
１．０ｄ／分及び温度を２５℃とし、検出器には示差屈
折計を使用した。プルランとエチレングリコール及びポ
リエチレングリコールの分子量と溶出容量の関係を示し
た較正曲線を第１図に示す。

第１図中、プロット１〜４は、順次、プルランＰ１００
（分子量９．５４Ｘ１０４）、プルランＰ５０（分子量
４．６７ｘｌＯ’）、プルランＰ２０（分子量２．０８
ｘｌＯ’）及びプルランＰ１０　（分子！１．２　Ｘ　
１０’）　（これらはいずれも昭和電工■製品の商品名
〕のプロットであり、符号５〜１０は、順次、ポリエチ
レングリコール６０００（分子１３６０００）、ポリエ
チレングリコール４０００　（分子量４０００）、ポリ
エチレングリコール２０００　（分子ｆ２０００）、ポ
リエチレングリコール６００（分子１１６００）、ポリ
エチレングリコール２００（分子ｉ１２００）及びエチ
レングリコール（分子量６２）のプロットを示す。

第１図で得られた較正曲線はＭｌｌａ　５　Ｘ　１０　
’で、適度な傾きと直線性あ・る較正曲線であった。

また、市販の標準蛋白質（生血端アルブミン、β−ラク
トグロブリン、チトクロームＣ）及びβ−アラニンの混
合物の分離分析を行った。測定条件としては、移動相（
溶出液）にｐＨ７の１／１５Ｍ燐酸緩衝液に０．２Ｍの
食塩を加えた溶出液を使用し、流量を１．０ｄ／分及び
温度を２５℃とし、検出器はＵＶ検出器（２２０ｍｍ）
を使用した。

得られたクロマトグラムを第２図に示す。

第２図中、ピーク１１〜１４は、順次、牛血清アルブミ
ン、β−ラクトグロブリン、チトクロームＣ及びβ−ア
ラニンのピークを示す。

実施例２ （Ｉ）親水性架橋重合体粒子の合成 ＮＫ−エステルＭ−９Ｇ５０ｇ、ペンタエリドリフトジ
アクリレート３重量％、ペンタエリドリフトトリアクリ
レート５１重量％及びペンタエリドリフトテトラアクリ
レート４６重量％から成る混合物〔一般式（Ｉ）中のｎ
は、平均して３．４３である）７０ｇ、酢酸ｎ−ブチル
４４ｇ及びイソアミルアルコール１０８ｇを使用した以
外は、実施例１、（Ｉ）と同様にして反応させ、有機溶
媒及び水に不溶な親水性架橋重合体粒子を得た。粒度は
１〜３０μｍであった。

（２）液体クロマトグラフィーへの応用例（Ｉ）で得ら
れた粒子を実施例１　（２）と同様にふるい分は後、カ
ラムに充填し、エチレングリコール及びポリエチレング
リコールの分子量と溶出容量の関係を示した較正曲線を
第３図に示す。

第３図中、プロット１５〜２２は、順次、ポリエチレン
グリコール６０００．ポリエチレングリコール４０００
．ポリエチレングリコール２０００゜ポリエチレングリ
コール１０００　（分子ｉ　１０００）、ポリエチレン
グリコール６００．ポリエチレングリコール４００（分
子１４００）、ポリエチレングリコール２００．エチレ
ングリコールのプロットである。

第３図で得られた較正曲線はＭｔｉ、　６　Ｘ　１０　
’で、適度な傾きと直線性のある較正曲線であった。

更に、塩酸及び水酸化ナトリウムを使用し、ｐＨを調整
した溶出液を用いてカラムの性能に及ぼす影響を調べた
が、ｐＨ２〜１０の範囲で測定時の圧力や理論段数等の
カラム性能に大きな差はなかった。

実施例３ （Ｉ）親水性架橋重合体粒子の合成 ＮＫ−エステルＭ−９Ｇ６０ｇ、ペンタエリドリフトジ
アクリレート３重量％、ペンタエリドリフトトリアクリ
レート５１重量％及びペンクエリドリフトテトラアクリ
レート４６重世％から成る混合物〔一般式（Ｉ）中のｎ
は、平均して３．４３である〕６０ｇ、酢酸ｎ−ブチル
９０ｇ及びイソアミルアルコール９０ｇを使用した以外
は、実施例１、（Ｉ）と同様にして反応させ、有機溶媒
及び水に不溶な親水性架橋重合体粒子を得た。粒度は１
〜３０μｍであった。

（２）液体クロマトグラフィーへの応用例（Ｉ）で得ら
れた粒子を実施例１、（２）と同様にふるい分は後、カ
ラムに充填し、プルランとエチレングリコール及びポリ
エチレングリコールを用い、較正曲線を求めたところ、
Ｍｔｔ＊９Ｘ１０３で、適度な傾きと直線性のある較正
曲線であった・ 比較例１ （Ｉ）親水性架橋重合体粒子の合成 ＮＫ−エステルＭ−９Ｇ６０ｇ、ペンタエリドリフトジ
アクリレート３重量％、ペンタエリトリットトリアクリ
レート５１重量％及びペンタエリトリットテトラアクリ
レート４６重量％から成る混合物〔一般式（Ｉ）中のｎ
は、平均して３．４３である）６０ｇ及びイソアミルア
ルコール１２０ｇを使用した以外は、実施例１、（Ｉ）
と同様に反応させて、有機溶媒及び水に不溶な親水性架
橋重合体粒子を得た。粒度は１〜３０μｍであった。

（２）液体クロマトグラフィーへの応用例（Ｉ）で得ら
れた粒子を実施例１、（２）と同様にふるい分けした後
、カラムに充填し、エチレングリコール及びポリエチレ
ングリコールの分子量と溶出容量の関係を示した較正曲
線を第４図に示す、第４図中、プロット２３〜３０は、
順次、ポリエチレングリコール６０００、ポリエチレン
グリコール４０００．ポリエチレングリコール２０００
、ポリエチレングリコール１０００　（分子量１０００
）、ポリエチレングリコール６００、ポリエチレングリ
コール４００、ポリエチレングリコール２００及びエチ
レングリコールのプロットを示す。

第４図で求められた較正曲線は、Ｍ　Ｌ　ｉ　ｅ＋が１
×１０３と低く、直線性も不充分で、実用的ではなかっ
た。

比較例２ （Ｉ）親水性架橋重合体粒子の合成 ＮＫ−エステルＭ−９Ｇ６０ｇ、ペンタエリトリットジ
アクリレート３１１％、ペンタエリドリフトトリアクリ
レート５１重量％及びペンタエリドリフトテトラアクリ
レート４６重量％から成る混合物〔一般式（Ｉ）中のｎ
は、平均して３．４３である〕６０ｇ及び酢酸ｎ−ブチ
ル１２０ｇを使用した以外は、実施例１、（Ｉ）と同様
に反応させて、有機溶媒及び水に不溶な親水性架橋重合
体粒子を得た。粒度は１〜３０μｍであった。

（２）液体クロマトグラフィーへの応用例（Ｉ）で得ら
れた粒子を実施例１、（２）と同様にふるい分けした後
、カラムに充填し、プルランとエチレングリコール及び
ポリエチレングリコールの分子量と溶出容量の関係を示
した較正曲線を第５図に示す。第５図中、プロット３１
〜４５は、順次、プルランＰ８００　（分子１７．５８
Ｘ１０’　）　、プルランＰ４００　（分子量３．３８
　Ｘｌ　０’　）　、プルランＰ２Ｏ０（分子量１．９
４Ｘ１０’　）　、プルランＰ１００．プルランＰ５０
、プルランＰ２０、プルランＰ１０、ポリエチレングリ
コール６０００、ポリエチレングリコール４０００、ポ
リエチレングリコール２０００、ポリエチレングリコー
ル１０００．ポリエチレングリコール６００１ポリエチ
レングリコール４００、ポリエチレングリコール２００
及びエチレングリコールのプロットを示す。

第５図で求められた較正曲線は、Ｍ　Ｌ　＝　ａが２×
１０５で、較正曲線の傾き及び直線性は不適当であった
。

（発明の効果） 本発明による親水性架橋重合体粒子は、液体クロマトグ
ラフィー用充填剤として水系高速液体クロマトグラフィ
ーに適用でき、耐久性が良く、しかも排除限界分子！　
（ＭＬｉ、　）をペプチドや水溶性オリゴマーの分離に
有効な範囲に任意に調節でき、充填カラムにした際の較
正曲線が直線に近（、かつ適当な勾配を有する優れた液
体クロマトグラフィー用充填剤である。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１における液体クロマトグラフィー分析
による較正曲線、第２図は実施例１における液体クロマ
トグラフィー分析によるクロマトグラム、第３図は実施
例２における液体クロマトグラフィー分析による較正曲
線、第４図は比較例１における液体クロマトグラフィー
分析による較正曲線、第５図は比較例２における液体ク
ロマトグラフィー分析による較正曲線を示す。 符号の説明 １−・−プルランＰ１００　（分子１９．５４Ｘ１０’
）２−プルランＰ５０　（分子ｆｆ１４．６７　Ｘ　１
０’）３−プルランＰ２０（分子量２．０８Ｘ１０’）
４・−プルランＰ１０　（分子量１．２Ｘ１０’）５−
・・ポリエチレングリコール６０００６−ポリエチレン
グリコール４０００ ７−・ポリエチレングリコール２０００８−ポリエチレ
ングリコール６００ ９・・−ポリエチレングリコール２００１０−・−エチ
レングリコール １１−・−生血溝アルブミンのピーク １２−β−ラクトグロブリンのピーク １３−チトクロームＣのピーク １４・−β−アラニンのピーク １５−・−・ポリエチレングリコール６０００１６−ポ
リエチレングリコール４０００１７−ポリエチレングリ
コール２０００１８−・−・ポリエチレングリコール１
０００１９−・・ポリエチレングリコール６００２０−
　　ポリエチレングリコール４００２１−・ポリエチレ
ングリコール２００２２・−・エチレングリコール ２３・−ポリエチレングリコール６０００２４−ポリエ
チレングリコール４０００２５・−・ポリエチレングリ
コール２０００２６−ポリエチレングリコール１０００
２７・−ポリエチレングリコール６００２８−・ポリエ
チレングリコール４００２９−ポリエチレングリコール
２００ ３０−エチレングリコール ３１−プルランＰ８００ ３２−　プルランＰ４００ ３３−・−プルランＰ２Ｏ０ ３４−プルランＰ１００ ３５−・−プルランＰ５０ ３６−・−プルランＰ２Ｏ ３７−・プルランＰＬＯ ３８−ポリエチレングリコール６０００３９・−・ポリ
エチレングリコール４０００４０−・・ポリエチレング
リコール２０００４１−ポリエチレングリコール１００
０４２・−・ポリエチレングリコール６００４３−ポリ
エチレングリコール４００ ４４−ポリエチレングリコール２００ ４５−エチレングリコール

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、Ｒ＾１はＨ又はＣＨ＿３を表し、ｎは２〜４の
   整数を表し、ｍは０、１又は２を表し、ｍ＋ｎは４であ
   る〕で示される化合物及び一般式（II）：▲数式、化学
   式、表等があります▼（II） 〔式中、Ｒ＾２及びＲ＾３は、それぞれ独立してＨ又は
   ＣＨ＿３を表し、ｌは１〜３０の整数を表す〕で示され
   る化合物を水と混和しない非反応性有機溶媒の存在下に
   水性懸濁重合させることにより親水性架橋重合体粒子を
   製造する方法において、水と混和しない非反応性有機溶
   媒が脂肪酸エステルと脂肪族アルコールの組み合わせで
   あることを特徴とする親水性架橋重合体粒子の製造方法
   。 ２、脂肪酸エステルが酢酸ｎ−ブチルであり、脂肪族ア
   ルコールがイソアミルアルコールである組み合わせを水
   と混和しない非反応性有機溶媒として使用する特許請求
   の範囲第１項記載の親水性架橋重合体粒子の製造方法。 ３、脂肪酸エステル（Ａ）と脂肪族アルコール（Ｂ）の
   混合比が重量比（Ａ／Ｂ）で２／１〜１／３である特許
   請求の範囲第１項又は第２項記載の親水性架橋重合体粒
   子の製造方法。 ４、一般式（ I ）で示される化合物及び一般式（II）
   で示される化合物を重量比で前者／後者が４／１〜３／
   ７の範囲になるように使用する特許請求の範囲第１項、
   第２項又は第３項記載の親水性架橋重合体粒子の製造方
   法。 ５、一般式（ I ）で示される化合物と一般式（II）で
   示される化合物の使用重量の和（Ｃ）及び水と混和しな
   い非反応性有機溶媒の使用重量（Ｄ）の比が、Ｄ／Ｃで
   １／２〜３／１の範囲である特許請求の範囲第１項〜第
   ４項のいずれか１項に記載の親水性架橋重合体粒子の製
   造方法。