JPS636451A - 酵素センサ - Google Patents

酵素センサ

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JPS636451A
JPS636451A JP61149753A JP14975386A JPS636451A JP S636451 A JPS636451 A JP S636451A JP 61149753 A JP61149753 A JP 61149753A JP 14975386 A JP14975386 A JP 14975386A JP S636451 A JPS636451 A JP S636451A
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redox
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直人 内田
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Noboru Koyama
昇 小山
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    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/58Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving urea or urease
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12Q1/004Enzyme electrodes mediator-assisted
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    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/817Enzyme or microbe electrode

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 10発明の背景 (1)技術分野 本発明は酵素センサ、特に酵素の分子識別機能に基づい
て、ポテンショメトリック応答により所定の生体内の基
質の濃度を測定する酵素センサに関する。
(2)先行技術およびその問題点 酵素反応を利用する酵素センサとしては、グルコースセ
ンサ、尿素センサなどが知られている。
その中で、グルコースセンサでは、次の酵素反応を利用
する。
グルコース+H20+02 酵素(グルコース・オキシダーゼ) →グルコン酸+H2O2 従来のグルコースセンサとしては、酵素センサを用いて
生体内の02の消費速度または生体内のH2O2の生成
速度を測定して、基質であるグルコースの濃度を測定す
る原理のセンサが用いられてきた。しかし、これらの測
定は電流値により測定を行うため、生体に電流を流す必
要がある。
−方、グルコン酸の生成による水素イオン濃度の変化量
をpHセンサで検出し、グルコース濃度を測定する方法
があり、ガラス電極pHセンサやイオン選択性FETセ
ンサを利用したものが報告されている。
しかし、ガラス電極を用いる場合には、電極膜の抵抗が
非常に高いため、酵素層の被着による応答が非常に不安
定となる、また形状が大きいなどの欠点があった。イオ
ン選択性FETセンサを用いると小型化が可能ではある
が、酵素層の被着性が問題となっている。また、大型の
製造装置を必要とするなどのため作製が容易ではない。
他の酵素センサにおいても同様の問題があった。
II 、発明の目的 本発明の目的は、上記先行技術の問題点を解決した電位
法(ポテンショメトリック)で生体内の基質濃度を測定
する固体型の酵素センサを提供することにある。
又、作成が容易で、酵素層の被着性が良く、耐久性の良
い、小型の酵素センサを提供することにある。
■0発明の構成 前記目的を達成するために、本発明の酵素センサは、次
の構成から成る。
導電性基体と、該導電性基体の表面を覆い前記生体内の
基質の酸化還元反応を促す酵素から成る酵素層とを備え
る。
又、導電性基体と、該導電性基体の表面を覆い酸化還元
機能を有する酸化還元機能層と、該酸化還元機能層の表
面を覆い前記生体内の基質の酸化還元反応を促す酵素か
ら成る酵素層とを備える。
又、導電性基体と、該導電性基体の表面を覆い酸化還元
機能を有する酸化還元機能層と、該酸化還元機能層の表
面を覆い所定のイオンに感応するイオン感応層と、該イ
オン感応層の表面を覆い前記生体内の基質の酸化還元反
応を促す酵素から成る酵素層とを備える。
本発明の好ましい態様を以下に述べる。
1、酵素はグルコースオキシダーゼであって、グルコー
スの濃度を測定する。
2、酵素はウレアーゼであって、尿素の濃度を測定する
3、酵素はウリカーゼであって、尿酸の濃度を測定する
4、酵素はコレステロールオキシダーゼであって、コレ
ステロールの濃度を測定する。
5、酵素は架橋剤により架橋構造にされている。
6、導電性基体はグラファイト構造の炭素である。
7、酸化還元機能層はキノン−ハイドロキノン型の酸化
還元反応を行う物質のグループから運ばれる。
8、酸化還元機能層はアミン−キノイド型の酸化還元反
応を行う物質のグループから選ばれる。
9、酸化還元機能層はポリ(ピロール)、ポリ(チェニ
レン)の酸化還元反応を行う物質のグループから遷ばれ
る。
■0発明の詳細な説明 酵素センサはバイオセンサのはしりで、トランスデユー
サ部(信号変換部位)が電極であるため、酵素電極(e
nzyme electrode)の呼称でなじまれて
いる。レセプタ部(分子識別部位)は酵素層であり、ト
ランスデユーサ部には各種層電極が用いられている。主
な酵素センサの基本構成を第6図に示す。酵素層で誘起
される物質変化は、02、H2O2,H” 、NH3,
CO2などであり、これらの物質はトランスデユーサ部
のガス透過層などに達し、それぞれ電気化学的に電気信
号に変換される。
たとえば、グルコース酵素センサの場合には、グルコー
スオキシダーゼ(COD)を固定化した酵素層がレセプ
タ部に用いられる。レセプタ部がグルコースを分子識別
すると、02が減少するか、あるいはH2O2が増大す
る。
グルコース+02 +H20 →グルコン酸+H2O2 すなわち酸素電極あるいは過酸化水素電極の酸素透過層
あるいは過酸化水素透過層に密着して、COD層が装着
されれば、グルコース酵素センサができる。
しかし、先行技術の欄でも述べた如く、電流値による測
定であったり、ガラス電極の使用により小型化に限界が
ある等の不都合があった。
そこで、本実施例においては、前記グルコースの酸化反
応が次の2つの反応、 (1)(COD)。8+グルコース −グルコノラクトン(H” ) + (G OD ) 
Rad(2)(COD)Red +o2 − (Go D) OX+H202(速い反応)に分解
されることに注目して、(1)の反応におけるグルコノ
ラクトン(H+)を固体型PH電極又は固体型電極等で
測定する。
(1)と(2)をまとめると、 液  界面 (電極表面) 界面   液トン で示される。ここで、(COD)。つは酸化状態のグル
コースオキシダーゼ、(COD)□dは還元状態のグル
コースオキシダーゼを示している。
以下に示す3種の酵素センサを作製した。
実施例1 本実施例の酵素センサの構成模式図を第1図(a)に示
す。
(1)導電性基体 ベーサル・プレーン・ピロリティック・グラファイト1
 (直径1.0mmφ×長さ3.5mm、以下、BPC
Iと称す)の底面に導電性接着剤2(アミコン社製、C
−850−6)を用いてリード線3(銅線ZUE−CM
5W、トクトク(株)社製)を接続したものの周囲をテ
フロン7(タフコートエナメルR1ダイキン工業(株)
製)で絶縁してBPG電ifを作製した。
(2)酵素層 作製したBPG電極1の面上に以下に示す操作でグルコ
ースオキシダーゼ層4を約1mmの厚さに被着した。該
層の被着は、グルタルアルデヒドを架橋剤とする架橋法
によった。この架橋構造により、被検液中にグルコース
オキシダーゼが溶出するのを防止できる。
(A液)pH8,04リン酸塩111衝液に15重量パ
ーセントとなる牛血漿アルブミンを溶かし、さらにその
溶液5mJ1にグルコースオキシダーゼ0.5 (g)
を溶かす。
(B液)25パーセントグルタルアルデヒド水溶液 (C液)10パーセントグリシン水溶液BPG電極1を
上記A液に浸漬し、約1分間乾燥させてから、B液に浸
し、さらに1分間乾燥するという操作を層厚が約1mm
となるまで繰り返し、最後にC液に1分間浸すことによ
り未反応のグルコースオキシダーゼを取り除いてグルコ
ースオキシダーゼ層4の被着を完成した。
実施例2 本実施例の酵素センサの構成模式図を第1図(b)に示
す。
(1)導電性基体 実施例1と同様のBPG電極1を作製した。
(2)酸化還元機能層 作製したBPG電極1を作用極、白金セルを対極、銀/
塩化銀電極を基準極とする3電極セルを用いて、以下の
条件で電解重合を行ない、BPG電極表面に酸化還元機
能層5を直接被着した。
く電解液組成〉 2.6−シメチルフエノール ・・・ 0.5M過塩素
酸ナトリウム     ・・・ 0.2Mアセトニトリ
ル       ・・・ 溶媒く電解重合条件〉 0〜+1.5V(vs、Ag/AgCu)の間で3回電
位掃引(掃引速度50 m V / s ec)した後
、+1.5Vで10分間定電位電解した。重合は一20
℃付近で行なった。
(3)酵素層 作製した電極の酸化還元機能層5の面上に実施例1と同
様な操作でグルコースオキシダーゼ層4を被着した。
実施例3 本実施例の酵素センサの構成模式図を第1図(C)に示
す。
(1)導電性基体 実施例1と同様のBPG電極1を作製した。
(2)酸化還元機能層 実施例2と同様な方法でBPG電8i!1の面上に酸化
還元機能層5を被着した。
(3)イオン感応層 作製した酸化還元機能層5の面上に、以下に示す組成の
水素イオンキャリア層6を被着した。該水素イオンキャ
リア層6の被着は、以下に示すテトラヒドロフラン混合
液に酸化還元機能層5を被着したBPG電極1を浸漬・
乾燥する操作を10回繰り返すことにより行なった。
く水素イオンキャリア組成物〉 セバシン酸ジオクチル (DO3) ・・・ 65.2重量パーセント ポリ塩化ビニル (PVCSP、=1050)・・・ 
32.7重量パーセント トリドデシルアミンテトラキス (p−クロロフェニル)・・・4.0重量パーセントホ
ウ酸カリウム      0.6重量パーセント(4)
酵素層 水素イオンキャリア層6の面上に、実施例1と同様の操
作で、グルコースオキシダーゼ層4を被着した。
実験例1 第2図に示すように、実施例1.2及び3で作製した酵
素センサ20を用いて基準電8i(飽和ナトリウムカロ
メロ電極)21との間の電位差を測定する方法により、
被検液22のグルコース濃度のステップ変化に対するそ
の応答性を調べた。
尚、被検液22の温度は37℃、測定環境温度としては
室温21℃〜23℃に設定した。
く試験方法〉 被検液22のpHはリン酸塩緩衝溶液で6.2に調整し
た。37℃のグルコース水溶液に、やはり37℃の高濃
度のグルコース水溶液を滴下して濃度を変え、その時の
基準電8i21に対する酵素センサ20の電位を測定し
た。尚、グルコースの濃度はモル濃度で、被検液1文中
のグルコースのモル数で示す6又 、滴下後10分経っ
た安定時間の酵素センサの電位値を求めた。
これらの測定結果を第3図〜第5図に示す。このように
、グルコースの濃度の対数と、酵素センサの電位応答の
間には、良い直線関係が見られた。
それらの近似式は以下のようになった。
実施例1で作製した酵素センサ E = 191.9 + 74.al og [Glu
cosel (M/ 交)(第3図より) 実施例2で作製した酵素センサ E =190.7 +38.741og [Gluco
sel (M/ n )(第4図より) 実施例3で作製した酵素センサ E = 176.8 +21.61og [Gluco
sel (M/ l )(第5図より) 尚、本実施例ではグルコースオキシダーゼ層を被着する
ことにより、グルコースの濃度を測定したが、ウレアー
ゼ層により尿素濃度を、ウリカーゼ層により尿酸濃度を
、又コレステロール才キシダーゼ層によりコレステロー
ル濃度を等、他の酵素による酵素センサについても同様
の結果が得られた。又、本発明は、生体内の基質に所定
の反応を起させる酵素と、発生するイオンによるイオン
濃度の変化を測定する内部液室を有しない固体型イオン
センサとを構成要素としており、実施例で述べた水素イ
オンの測定に限らず他のイオンを測定する固体型イオン
センサで構成されても良い。
更に、本発明の技術思想は、微生物センサ、免疫センサ
等の他のバイオセンサにも拡張できる。
■1発明の具体的効果 本発明により、電位法(ポテンショメトリック)で生体
内の基質濃度を測定する固体型の酵素センサを提供した
。又、構造および構成が簡単なため作成が容易で、酵素
層の被着性が良く、安定かつ耐久性の良い、更に小型化
が容易な酵素センサを提供した。このため、カテーテル
等と併せて用いることにより、生体中での測定が可能で
ある。又、濃度の対数と電位値との直線性の範囲が広く
、応答が安定している酵素センサを提供した。
【図面の簡単な説明】
第1図(a)は実施例1の酵素センサの構成模式図、 第1図(b)は実施例2の酵素センサの構成模式図、 第1図(c)は実施例3の酵素センサの構成模式図、 第2図は本実施例の酵素センサによる測定回路側図、 第3図は実施例1の酵素センサによる測定結果を示す図
、 第4図は実施例2の酵素センサによる測定結果を示す図
、 第5図は実施例3の酵素センサによる測定結果を示す図
、 第6図は従来の酵素センサの説明図である。 図中、1・・・BPG、2・・・導電性接着剤、3・・
・リード線、4・・・グルコースオキシダーゼ層、5・
・・酸化還元機能層、6・・・水素イオンキャリア層、
7・・・テフロンである。 特許出願人   テルモ株式会社 (CI)       (b)        (c)
第1図 第2図 巳/mVvs、  5SCE o8 E mVvs、5SCE E/mVvs、SSCE

Claims (27)

    【特許請求の範囲】
  1. (1)酵素の分子識別機能に基づいて所定の生体内の基
    質の濃度を測定する酵素センサにおいて、導電性基体と
    、該導電性基体の表面を覆い前記生体内の基質の酸化還
    元反応を促す酵素から成る酵素層とを備え、前記導電性
    基体の電位によつて前記生体内の基質の濃度を測定する
    ことを特徴とする酵素センサ。
  2. (2)酵素はグルコースオキシダーゼであつて、グルコ
    ースの濃度を測定することを特徴とする特許請求の範囲
    第1項記載の酵素センサ。
  3. (3)酵素はウレアーゼであつて、尿素の濃度を測定す
    ることを特徴とする特許請求の範囲第1項記載の酵素セ
    ンサ。
  4. (4)酵素はウリカーゼであつて、尿酸の濃度を測定す
    ることを特徴とする特許請求の範囲第1項記載の酵素セ
    ンサ。
  5. (5)酵素はコレステロールオキシダーゼであつて、コ
    レステロールの濃度を測定することを特徴とする特許請
    求の範囲第1項記載の酵素センサ。
  6. (6)酵素は架橋剤により架橋構造にされていることを
    特徴とする特許請求の範囲第1項記載の酵素センサ。
  7. (7)導電性基体はグラファイト構造の炭素であること
    を特徴とする特許請求の範囲第1項記載の酵素センサ。
  8. (8)酵素の分子識別機能に基づいて所定の生体内の基
    質の濃度を測定する酵素センサにおいて、導電性基体と
    、該導電性基体の表面を覆い酸化還元機能を有する酸化
    還元機能層と、該酸化還元機能層の表面を覆い前記生体
    内の基質の酸化還元反応を促す酵素から成る酵素層とを
    備え、前記導電性基体の電位によつて前記生体内の基質
    の濃度を測定することを特徴とする酵素センサ。
  9. (9)酵素はグルコースオキシダーゼであつて、グルコ
    ースの濃度を測定することを特徴とする特許請求の範囲
    第8項記載の酵素センサ。
  10. (10)酵素はウレアーゼであつて、尿素の濃度を測定
    することを特徴とする特許請求の範囲第8項記載の酵素
    センサ。
  11. (11)酵素はウリカーゼであつて、尿酸の濃度を測定
    することを特徴とする特許請求の範囲第8項記載の酵素
    センサ。
  12. (12)酵素はコレステロールオキシダーゼであつて、
    コレステロールの濃度を測定することを特徴とする特許
    請求の範囲第8項記載の酵素センサ。
  13. (13)酵素は架橋剤により架橋構造にされていること
    を特徴とする特許請求の範囲第8項記載の酵素センサ。
  14. (14)導電性基体はグラファイト構造の炭素であるこ
    とを特徴とする特許請求の範囲第8項記載の酵素センサ
  15. (15)酸化還元機能層はキノン−ハイドロキノン型の
    酸化還元機能を有する物質のグループから選ばれること
    を特徴とする特許請求の範囲第8項記載の酵素センサ。
  16. (16)酸化還元機能層はアミン−キノイド型の酸化還
    元機能を有する物質のグループから選ばれることを特徴
    とする特許請求の範囲第8項記載の酵素センサ。
  17. (17)酸化還元機能層はポリ(ピロール)、ポリ(チ
    エニレン)の酸化還元機能を有する物質のグループから
    選ばれることを特徴とする特許請求の範囲第8項記載の
    酵素センサ。
  18. (18)酵素の分子識別機能に基づいて所定の生体内の
    基質の濃度を測定する酵素センサにおいて、導電性基体
    と、該導電性基体の表面を覆い酸化還元機能を有する酸
    化還元機能層と、該酸化還元機能層の表面を覆い所定の
    イオンに感応するイオン感応層と、該イオン感応層の表
    面を覆い前記生体内の基質の酸化還元反応を促す酵素か
    ら成る酵素層とを備え、前記導電性基体の電位によつて
    前記生体内の基質の濃度を測定することを特徴とする酵
    素センサ。
  19. (19)酵素はグルコースオキシダーゼであつて、グル
    コースの濃度を測定することを特徴とする特許請求の範
    囲第18項記載の酵素センサ。
  20. (20)酵素はウレアーゼであつて、尿素の濃度を測定
    することを特徴とする特許請求の範囲第18項記載の酵
    素センサ。
  21. (21)酵素はウリカーゼであつて、尿酸の濃度を測定
    することを特徴とする特許請求の範囲第18項記載の酵
    素センサ。
  22. (22)酵素はコレステロールオキシダーゼであつて、
    コレステロールの濃度を測定することを特徴とする特許
    請求の範囲第18項記載の酵素センサ。
  23. (23)酵素は架橋剤により架橋構造にされていること
    を特徴とする特許請求の範囲第18項記載の酵素センサ
  24. (24)導電性基体はグラファイト構造の炭素であるこ
    とを特徴とする特許請求の範囲第18項記載の酵素セン
    サ。
  25. (25)酸化還元機能層はキノン−ハイドロキノン型の
    酸化還元反応を行う物質のグループから選ばれることを
    特徴とする特許請求の範囲第18項記載の酵素センサ。
  26. (26)酸化還元機能層はアミン−キノイド型の酸化還
    元反応を行う物質のグループから選ばれることを特徴と
    する特許請求の範囲第18項記載の酵素センサ。
  27. (27)酸化還元機能層はポリ(ピロール)、ポリ(チ
    エニレン)の酸化還元反応を行う物質のグループから選
    ばれることを特徴とする特許請求の範囲第18項記載の
    酵素センサ。
JP61149753A 1986-06-27 1986-06-27 酵素センサ Granted JPS636451A (ja)

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