JPS6364195B2 - - Google Patents
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- JPS6364195B2 JPS6364195B2 JP59082088A JP8208884A JPS6364195B2 JP S6364195 B2 JPS6364195 B2 JP S6364195B2 JP 59082088 A JP59082088 A JP 59082088A JP 8208884 A JP8208884 A JP 8208884A JP S6364195 B2 JPS6364195 B2 JP S6364195B2
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Description
技術の分野
この発明はクロストリジユウム属のふたつの異
なる微生物の存在下における糖類の醗酵によるブ
タノールの製造に関する。 従来の技術 ブタノールは、例えばグルコースのような5及
び6個の炭素原子をもつ糖類に分解する炭水化物
の醗酵によつて製造されうる。この方法は、第二
次大戦中にチアールス ベイツマン(Charles
Weizmann)博士によつて開発され、この化合物
が廉価の炭化水素原料から製造されるまで主要な
ブタノール源であつた。この方法は大部分とつて
代られたが、南アフリカ連邦においてまだ商業規
模で使用されている。しかし、炭化水素原料のコ
スト増加及び、例えば石油分野における第三次回
収法のような新用途の可能性により、ブタノール
の需要が増加し、ベイツマン法は合衆国において
現在商業的適用の可能性をもつている。 ベイツマン法はクロストリジユウム微生物の存
在下に糖ミツのような適当な原料の醗酵により糖
類をブタノール、アセトン及びエタノルの溶媒混
合物に転換することを含む。典型的には、29〜33
%の炭水化物をこれらの溶媒に転換する。溶媒混
合物中においてアセトンとエタノールに対するブ
タノールの有用な割合は約6:3:1である。こ
の方法は連続法に対するバツチ法であり、醗酵が
完了したとき溶媒混合物が廃物質から分離され
る。 発明の開示 クロストリジユウムの少なくともふたつの種の
共培養を使用することによつて、ベイツマン法の
ブタノール収量が実質的に、例えば20%又はそれ
以上、増加することが見い出された。これらの種
のひとつは酪酸の製造に好都合であり及び他の種
は酪酸をブタノールに転換するのに好都合でなけ
ればならない。この異るふたつの種は同一反応容
器中で同時に使用されてもよいし、多段システム
で使用されてもよい。多段システムは、(1)第一段
で酪酸の製造に好都合な種が醗酵可能な炭水化物
を酪酸に転換し、(2)第二段では、第一段の生成物
を第二の反応容器にいれて、ここで第二の種が酪
酸をブタノールに転換する。単一段システムにお
ける平衡状態で、酪酸形成種のブタノール転換種
に対する数比は約1:3から約3:1の範囲であ
る。 いくつかの種が使用できるが、酪酸の形成のた
めには、クロストリジユウム パスツリアニウム
(Clostridium pasteurianum)が特に好適である
ことが見い出された。程度は低いが、酪酸クロス
トリジユウム(Clostridium butyricum)も酪酸
の形成に使用できる。酪酸をブタノールに転換す
る第二の微生物もふたつの異なる種が使用され
た。最も好ましいのはクロストリジユウム ブチ
リシウム(Clostridium butylicum)である。こ
の発明の好ましい実施態様によれば、クロストリ
ジユウム パスツリアニウムとクロストリジユウ
ム ブチリシウムの共培養を単一段反応容器中で
使用して、原料をブタノール、アセトン及びエタ
ノールに転換する。クロストリジユウム ブチリ
シウムの代りに、またはこれと同時にクロストリ
ジユウム アセトブチリシウム(Clostridium
acetobutylicum)を使用することもできる。 クロストリジユウム パスツリアニウム、クロ
ストリジユウム ブチリシウムとしては、以下の
実施例に示す菌の他に、いわゆるカタログ菌も有
効である。一例をあげれば、ATCCに寄託されて
いるクロストリジユウム パスツリアニウム
6013、704.0及び7041、クロストリジユウム ブ
チリシウム14823などは、いずれも本発明の実施
に有効であり、たとえばクロストリジユウム ブ
チリシウム14823とクロストリジユウム パスツ
リアニウム6013との組合わせにより、本発明の目
的を達成できる。 この発明の最も好ましい実施態様によれば、ク
ロストリジユウム パスツリアニウムとクロスト
リジユウム ブチリシウムの共培養を好適な栄養
源の存在下に原料のグルコースと混合し、ガスの
発生が停止するまで醗酵させる。好ましくは、反
応混合物のPHが約4.5から約5.2の範囲に維持され
るように混合物を緩衝する。反応混合物を保持す
る最も好ましい温度は約37℃である。この温度が
微生物を最も活性にする。 この方法で製造されたブタノールの量を従来の
方法で製造されたブタノールの量と比較した。そ
の結果として、この発明の方法は少なくとも20%
の増加をもたらし、この増加は非常に重大であ
り、実質的な経済的利益を意味する。例えば、ブ
タノール、アセトン及びエタノールの混合物は通
常、最大で60重量%のブタノールを有する。この
発明の方法によれば、ブタノールの割合は溶剤混
合物の典型的には70重量%またはそれ以上であ
る。 実施例 ベイツマン法によりブタノールを製造するため
にこの発明の共培養を用いた実験を以下にしめ
す。これらの実験の結果は第一及び第二表にしめ
される。共培養及び単一の微生物システムを用い
てベイツマン法を実施した実験データが両表に含
まれる。第一表は炭酸カルシウムで緩衝した反応
混合物についてのデータである。第二表は反応混
合物を緩衝しない場合のデータである。反応混合
物のPHを所望の範囲に維持するために、緩衝が必
要である。反応混合物のPHがこの範囲のそとにあ
れば、ブタノールの収量は実質的に減少する。 醗酵方法は、この発明の基本に従つて共培養を
使用したこと以外、通常の方法によつて実施し
た。共培養はバルチモア微生物研究所
(Baltimore Biological Laboratories)から提供
され、No.11128として同定されたクツクドミート
培地上で成長され保持された。この培地は嫌気性
条件下でブルーア(Brewer)ジヤー中に保持さ
れた。約48時間の初期成長の後、デキストローズ
の添加されていないトリグリコレイト培地を含む
30mlの血清ビンに培養物を移した。デキストロー
ズの添加されていないトリグリコレイト培地に
2.5重量%のグルコースを添加した。また、PHの
低下を防ぐために一片の炭酸カルシウムを加え
た。培養物を37℃に保持し、ガスの増強を防ぐた
めに毎日換気した。正確な条件が維持されて微生
物が嫌気性条件下で成長した。以下に実験した微
生物を列挙するが、これらはイリノイ州ペオリア
にある農務省のノーザン レジヨナル リサーチ
センター(Northern Regional Research
Center)から提供された。 実験微生物 菌株No. 1 クロストリジユウム パスツリアニウム …NRRL B598 2 酪酸クロストリジユウム …NRRL B1092 3 クロストリジユウム ブチリシウム
…NRRL B592及びNRRL B593 4 クロストリジユウム アセトブチリシウム …NRRL B527 ガスクロマトグラフイー分析を使用して、エタ
ノール、アセトン、酢酸、酪酸及びブタノールの
量を測定した。5フイート×1/8インチ直径のス
テンレス スチール製カラムに吸収媒質としてポ
ラパツク(Porapak)QSをいれたフユーレツト
パツカード(Hewlett Packard)モデル
5580Aを使用した。全糖類はコダツク ケミカル
社(Kodak Chemical Company)から供給され
たジニトロサリシレイト試薬を使用して分析され
た。下記第一及び第二表は得られた実験データ
(重量%)を表す。
なる微生物の存在下における糖類の醗酵によるブ
タノールの製造に関する。 従来の技術 ブタノールは、例えばグルコースのような5及
び6個の炭素原子をもつ糖類に分解する炭水化物
の醗酵によつて製造されうる。この方法は、第二
次大戦中にチアールス ベイツマン(Charles
Weizmann)博士によつて開発され、この化合物
が廉価の炭化水素原料から製造されるまで主要な
ブタノール源であつた。この方法は大部分とつて
代られたが、南アフリカ連邦においてまだ商業規
模で使用されている。しかし、炭化水素原料のコ
スト増加及び、例えば石油分野における第三次回
収法のような新用途の可能性により、ブタノール
の需要が増加し、ベイツマン法は合衆国において
現在商業的適用の可能性をもつている。 ベイツマン法はクロストリジユウム微生物の存
在下に糖ミツのような適当な原料の醗酵により糖
類をブタノール、アセトン及びエタノルの溶媒混
合物に転換することを含む。典型的には、29〜33
%の炭水化物をこれらの溶媒に転換する。溶媒混
合物中においてアセトンとエタノールに対するブ
タノールの有用な割合は約6:3:1である。こ
の方法は連続法に対するバツチ法であり、醗酵が
完了したとき溶媒混合物が廃物質から分離され
る。 発明の開示 クロストリジユウムの少なくともふたつの種の
共培養を使用することによつて、ベイツマン法の
ブタノール収量が実質的に、例えば20%又はそれ
以上、増加することが見い出された。これらの種
のひとつは酪酸の製造に好都合であり及び他の種
は酪酸をブタノールに転換するのに好都合でなけ
ればならない。この異るふたつの種は同一反応容
器中で同時に使用されてもよいし、多段システム
で使用されてもよい。多段システムは、(1)第一段
で酪酸の製造に好都合な種が醗酵可能な炭水化物
を酪酸に転換し、(2)第二段では、第一段の生成物
を第二の反応容器にいれて、ここで第二の種が酪
酸をブタノールに転換する。単一段システムにお
ける平衡状態で、酪酸形成種のブタノール転換種
に対する数比は約1:3から約3:1の範囲であ
る。 いくつかの種が使用できるが、酪酸の形成のた
めには、クロストリジユウム パスツリアニウム
(Clostridium pasteurianum)が特に好適である
ことが見い出された。程度は低いが、酪酸クロス
トリジユウム(Clostridium butyricum)も酪酸
の形成に使用できる。酪酸をブタノールに転換す
る第二の微生物もふたつの異なる種が使用され
た。最も好ましいのはクロストリジユウム ブチ
リシウム(Clostridium butylicum)である。こ
の発明の好ましい実施態様によれば、クロストリ
ジユウム パスツリアニウムとクロストリジユウ
ム ブチリシウムの共培養を単一段反応容器中で
使用して、原料をブタノール、アセトン及びエタ
ノールに転換する。クロストリジユウム ブチリ
シウムの代りに、またはこれと同時にクロストリ
ジユウム アセトブチリシウム(Clostridium
acetobutylicum)を使用することもできる。 クロストリジユウム パスツリアニウム、クロ
ストリジユウム ブチリシウムとしては、以下の
実施例に示す菌の他に、いわゆるカタログ菌も有
効である。一例をあげれば、ATCCに寄託されて
いるクロストリジユウム パスツリアニウム
6013、704.0及び7041、クロストリジユウム ブ
チリシウム14823などは、いずれも本発明の実施
に有効であり、たとえばクロストリジユウム ブ
チリシウム14823とクロストリジユウム パスツ
リアニウム6013との組合わせにより、本発明の目
的を達成できる。 この発明の最も好ましい実施態様によれば、ク
ロストリジユウム パスツリアニウムとクロスト
リジユウム ブチリシウムの共培養を好適な栄養
源の存在下に原料のグルコースと混合し、ガスの
発生が停止するまで醗酵させる。好ましくは、反
応混合物のPHが約4.5から約5.2の範囲に維持され
るように混合物を緩衝する。反応混合物を保持す
る最も好ましい温度は約37℃である。この温度が
微生物を最も活性にする。 この方法で製造されたブタノールの量を従来の
方法で製造されたブタノールの量と比較した。そ
の結果として、この発明の方法は少なくとも20%
の増加をもたらし、この増加は非常に重大であ
り、実質的な経済的利益を意味する。例えば、ブ
タノール、アセトン及びエタノールの混合物は通
常、最大で60重量%のブタノールを有する。この
発明の方法によれば、ブタノールの割合は溶剤混
合物の典型的には70重量%またはそれ以上であ
る。 実施例 ベイツマン法によりブタノールを製造するため
にこの発明の共培養を用いた実験を以下にしめ
す。これらの実験の結果は第一及び第二表にしめ
される。共培養及び単一の微生物システムを用い
てベイツマン法を実施した実験データが両表に含
まれる。第一表は炭酸カルシウムで緩衝した反応
混合物についてのデータである。第二表は反応混
合物を緩衝しない場合のデータである。反応混合
物のPHを所望の範囲に維持するために、緩衝が必
要である。反応混合物のPHがこの範囲のそとにあ
れば、ブタノールの収量は実質的に減少する。 醗酵方法は、この発明の基本に従つて共培養を
使用したこと以外、通常の方法によつて実施し
た。共培養はバルチモア微生物研究所
(Baltimore Biological Laboratories)から提供
され、No.11128として同定されたクツクドミート
培地上で成長され保持された。この培地は嫌気性
条件下でブルーア(Brewer)ジヤー中に保持さ
れた。約48時間の初期成長の後、デキストローズ
の添加されていないトリグリコレイト培地を含む
30mlの血清ビンに培養物を移した。デキストロー
ズの添加されていないトリグリコレイト培地に
2.5重量%のグルコースを添加した。また、PHの
低下を防ぐために一片の炭酸カルシウムを加え
た。培養物を37℃に保持し、ガスの増強を防ぐた
めに毎日換気した。正確な条件が維持されて微生
物が嫌気性条件下で成長した。以下に実験した微
生物を列挙するが、これらはイリノイ州ペオリア
にある農務省のノーザン レジヨナル リサーチ
センター(Northern Regional Research
Center)から提供された。 実験微生物 菌株No. 1 クロストリジユウム パスツリアニウム …NRRL B598 2 酪酸クロストリジユウム …NRRL B1092 3 クロストリジユウム ブチリシウム
…NRRL B592及びNRRL B593 4 クロストリジユウム アセトブチリシウム …NRRL B527 ガスクロマトグラフイー分析を使用して、エタ
ノール、アセトン、酢酸、酪酸及びブタノールの
量を測定した。5フイート×1/8インチ直径のス
テンレス スチール製カラムに吸収媒質としてポ
ラパツク(Porapak)QSをいれたフユーレツト
パツカード(Hewlett Packard)モデル
5580Aを使用した。全糖類はコダツク ケミカル
社(Kodak Chemical Company)から供給され
たジニトロサリシレイト試薬を使用して分析され
た。下記第一及び第二表は得られた実験データ
(重量%)を表す。
【表】
(注) 無=検知されず
【表】
(注) 無=検知されず
この実験の結果から、この発明にしたがつて共
培養を使用することによつて、得られるブタノー
ルの量が実質的に増加することがわかる。共培養
の適切な選択により、ブタノールの収量を従来得
られたものより実質的に増加させることができ
る。 上記はこの発明を実施するうえで最とも良い態
様を表わしている。しかし、この実施例から離れ
て本発明を変更することも可能である。故に、本
発明は先に開示した実施例に限定されるものでは
ない。逆に、本発明は特許請求の範囲に表わされ
た発明の範囲中での全ての変更、修正を包含する
ものである。
この実験の結果から、この発明にしたがつて共
培養を使用することによつて、得られるブタノー
ルの量が実質的に増加することがわかる。共培養
の適切な選択により、ブタノールの収量を従来得
られたものより実質的に増加させることができ
る。 上記はこの発明を実施するうえで最とも良い態
様を表わしている。しかし、この実施例から離れ
て本発明を変更することも可能である。故に、本
発明は先に開示した実施例に限定されるものでは
ない。逆に、本発明は特許請求の範囲に表わされ
た発明の範囲中での全ての変更、修正を包含する
ものである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 クロストリジユウム属の微生物をブタノール
製造条件下で培養して糖類からブタノールを製造
する方法において;クロストリジユウム属は、ク
ロストリジユウム パスツリアニウム及びクロス
トリジユウム ブチリシウムの群から選択され、
その一つは酪酸の製造に適し、他はこのように製
造された酪酸をブタノールに転換するものである
少なくともふたつの異なる種のクロストリジユウ
ム属を使用することによつて、単一のクロストリ
ジユウムを用いる場合よりもブタノールの収量が
実質的に増加することを特徴とする、上記ブタノ
ールの製造方法。 2 酪酸を製造するのに好都合な種がクロストリ
ジユウム パスツリアニウムNRRL598である、
特許請求の範囲第1項の方法。 3 酪酸をブタノールに転換するのに好都合な種
がクロストリジユウム ブチリシウムNRRL592
又はNRRL593である、特許請求の範囲第1項の
方法。 4 クロストリジユウム パスツリアニウムとク
ロストリジユウム ブチリシウム混合物を使用す
る、特許請求の範囲第1項の方法。 5 上記混合物によつて製造されるブタノール、
アセトン及びエタノールの溶媒混合物が少なくと
も約70重量%のブタノールである、特許請求の範
囲第1項の方法。 6 上記混合物のPHを約4.5から約5.2の範囲に維
持する、特許請求の範囲第1項の方法。 7 酪酸の製造に好都合な微生物がまず糖類に作
用して酪酸を製造し、次に酪酸をブタノールに転
換する第二の微生物が第一の微生物によつて製造
された酪酸に作用する多段システムによる、特許
請求の範囲第1項の方法。 8 ふたつの種が同時に同一反応容器内に存在
し、酪酸形成種のブタノール転換種に対する重量
比が約1:3から約3:1の範囲である、特許請
求の範囲第1項の方法。
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