JPS6354395A - 免疫抑制物質類、それらの製造法およびそれらを含有する製薬学的組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、免疫抑制物質類、それらの製造法およびそれ
らを含有する製薬学的組成物に関する。

本発明は、２種類の新規な免疫抑制物質、ここで５５１
８５　　ＲＰおよび５９４５１　　ＲＰと呼５ｐ）Ｓ−
１６３２８（ＣＢＳ　　１６２．８６）と呼ぶ、よく詳
しく後述する、新規な微生物の培ｊ也から７ｊ）ること
ができる。

５５１８５　　ＲＰおよび５９４５１　　ＲＰは、一般
式： 式中、Ｘは塩素（５５１８５ＲＰ）または水素（５９４
５１ＲＰ）である、 を有するシクロデブシベブチドである。

５５１８５　　ＲＰは、次の物理化学的性質によって特
徴づけられるニ ー　外観−白色ないし淡黄色の非晶質粉末ニー　溶解性
：メタノール、エタノール、酢酸エチル、アセトン、ア
セトニトリル、ジメチルホルムアミド、およびジメチル
スルホキシド中に可溶性であり、そして水（ｐＨに無関
係に０．１〜０゜％）、エチルエーテル、およびヘキサ
ン中に不溶性； −百分率組成：５５１８５　　ＲＰは実験式Ｃ４６Ｈ４
６ＣＩＮ７’０１２に相九する。百分率組成は、次の通
りである： 計算値　　　実ａＩＩＩ値 ０％　　　　５８．４７　５８．２９ Ｈ％　　　　　４．５８　　５．３０ Ｃ１％　　　　３．８４　　３．８４ Ｎ％　　　　　　　１０．６１　　１０．１３０％　　
　　　　２２．５０　　２２．５７；融点：３００℃以
上； ＝０．５．メタノール）； ５５１８５　　ＲＰの構造は、その紫外線、赤外線およ
び質、ら１スペクトルおよびプロトンおよび１３Ｇ核磁
気共鳴スペクトルから決定した。

紫外線スペクトル：（２６７，５ルｇ　／　ｍ　１を含
有するメタノール溶液を使用する決定、１ｍｍの厚さ）
二 ２０２４０）； 肩は２３０ｎｍに観Ｊ１１される。

紫外線スペルトルは塩酸の添加によって変更しない、水
酸化ナトリウムの添加後、２３０ｎｍから２４７ｎｍお
よび２７４ｎｍから２９５ｎｍへの深色シフトが［１さ
れる。

５５１８５　　ＲＰの紫外線スペクトルを第１図に示す
。

−赤外スペクトル：（ＫＢｒとの混合物の錠剤を使用す
る決定） 赤外スペクトルを第２図に示し、ここで波数ｃｍ−’は
横軸におよび光学濃度は縦軸にプロットされている。

表Ｉは、波数Ｃｍ−’で表わした、この生成物の主な赤
外吸収帯を示す。

人工 ３３８０ｖｓ　（Ｈ２０を含む）、３３００ｖｓ、３０
９０ｗ、３０６０ｗ、３０３０ｓｈ、２９８０Ｗ、２９
４．　Ｏｗ、２８８０ｓｈ、２７００ｓｈ、２５００ｓ
ｈ、２３４０　　ｃｏ２．２１６０ｗｗ、１９５０ｓｈ
、１８８０ｗｗ、１７４０ｓ、１６８０ｓｈ、Ｌ６５５
ｖｓ、Ｌ６２５ｍ、１６０５ｍ、１５５５ｓｈ、１５２
０ｖｓ、１５００ｓｈ、１４５５ｍ、１４４０ｓｈ、１
４２５ｓｈ、１４０５ｗ、１３８０ｗ、１３４０ｍ、１
３１０ｍ、１２８５ｗ、１２１．５ｍ、１２０５ｓｈ、
１１６０ｓ、　１１２０ｓｈ、　　１１０８０ｖ。

１０６０ｓｈ、　１０５０Ｗ、　　１０３０ＶＷ、　　
１０１０ｓｈ、　１０００ｍ、９８０ｓｈ、９５０Ｗ、
９２５ｗｗ、　９００ｗｗ、　８５０ｍ、　７９５ｓｈ
、　７８５ｍ、　７５０ｍ、　７００ｍ、　６９０ｓｈ
、６３５ｗｗ、　　６２５ｗｗ、６０５ｓｈ、５８０ｍ
、５２５ｗ、５１０ｗ、４９５ｓｈ、４５５ｓｈ、　４
００ｓｈ、３５５ｗｗ ｖｓ＝非常に強い　　　Ｓ＝強い ｍ＝中程度　　　　　　Ｗ＝弱い ｖｗ＝非常に弱い　　　ｓｈ＝肩 −質量スペクトル： マトリックスとしてグリセロール／チオグリセロール混
合物を使用するＦＡＢイオンン化（キセノン原子の８ｋ
ｅｙのビームを使用する急速原子衝突）および４００〜
１０１００ＯＡの質量範囲において、基本ピークは塩素
原子の存在のアイソトープコンプレックス特性を示す、
振分子（ｐｓｅｕｄｏｍｏ　１ｅｃｕｌａｒ）イオ７Ｍ
Ｈ”＝９２４である。

質量ｍ／ｚ＝６５０．ｍ／ｚ＝５６７およびｍ／ｚ＝５
０６において観ΔＩＩＩされるイオンは、次の断片に相
当する： 反応ガスと１．てＮＨ３を使用する脱着／化学的イオン
化（ＤＣＩ）において、最終ピークはｍ／ｚ＝８８０　
（ＭＨ”−ＣＯ２）において観測される。質量２７５お
よび７５３の断片は次の構造に相当する： 電子衝突（ＥＩ）（７０ｅｖにおける電子衝突）におい
て、最網ピークはｍ　／　ｚ　＝　５２１においてｆＵ
ｌｌされる。５［，７ｍ／ｚ＝　９１およびｍ／ｚ＝１
２０の断片は、フェニルアラニン（Ｆ）の存在下の特性
である −　プロトンおよび１３（核磁気共鳴スペクトルＤＭＳ
Ｏ−ｄ６中において、プロトンについて４００．１３Ｍ
Ｈｚおよび炭素について１００゜６ＭＨｚで４０°Ｃに
おいて作業して、スペクトルを記録した。

一２１当てはＤＭＳＯの中線に関してｐｐｍで４只る（
プロトンについて２．５ｐｐｍ；Ｒ素にツｕて３９．５
ｐｐｍ）。

プロトンの核磁気共５に、５スペクトルの分析を表１１
に記載する。

＋３のＬ１、１当ての結果は次の通りである・１２７．
１ シリカゲルの上昇薄層クロマトグラフィーにおいて、１
．２−ジクロロエタン／メタノール（８〇二２０容量）
溶媒混合物を使用すると、Ｒｆは０．５の領域である。

メルク（Ｍｅｒｃｋ）のシラン化シリカ板上で、３％の
ＮａＣ１を含有するアセトニトリル／木（４，０＋６０
容だ）溶媒混合物を使用すると、Ｒｆは０．１４の領域
である（エールリッヒ試薬でオレンジ色の可視化）。

５９４５１　　ＲＰは、次の物理化学的性質によって特
徴づけられるニ ー　外観：白色ないし淡黄色の非晶質粉末；−溶解性：
メタノール、エタノール、酢酸エチル、アセトン、アセ
トニトリル、ジメチルホルムアミド、およびジメチルス
ルホキシド中に可溶性であり、モして水（ｐＨに無関係
に０．１〜Ｏ９″９６）、エチルエーテル、およびヘキ
サン中に不溶性； −百分率綿Ｉｉｔ：５９４５１　　ＲＰは実験式Ｃ４６
Ｈ４７Ｎｙ　Ｏ＋　２に相当する。百分率組成は、次の
通りである： 計算値　　実ｉ１１！１値（変更せず）０％　　　　６
２．０９　５８．６４ Ｎ％　　　　　５．３２　　５．４２ Ｎ％　　　　１１．０２　１０．４７ ０％　　　　２１．５７　２５．１０゜Ｈ２０％　　　
　　　　　　５．３７ −　融点＝１７５〜２８０℃（分解）以上；０．５；メ
タノール）； ５９４５１　　ＲＰの構造は、その紫外線、赤外線およ
び質量スペクトルおよびプロトンおよび１３Ｃ核磁気共
鳴スペクトルから決定した。

紫外線スペクトル：（３８ＩＬｇ／ｍｌを含有するメタ
ノール溶液を使用する決定、１ｃｍの厚さ）： 入ｍａｘ＝２８０ｎｍ（Ｅ　　　＝２２３．ｃ＝＝ｌＣ
！Ｉ＋ １９８６４）； ５９４５１　　ＲＰの紫外線スペクトルを第３図に示す
。

−赤外スペクトル：（ＫＢｒとの混合物の錠剤を使用す
る決定） 赤外スペクトルを第４図に示し、ここで波数ｃｍ−’は
横軸におよび光学濃度は縦軸にプロットされている。

表ＩＩＩは、波数ａｍ−’で表わした、この生成物の主
な赤外吸収帯を示す。

表ｌｌｌ ３３６０ｓｈ、３４８０ｓｈ　（Ｈ２０を含む）、３４
００ｖｓ、３２８０　ｖ　ｓ、３０６０ｓｈ、３０４０
　ｓ　ｈ、２９８０ｗ、２９４０ｗ５ｈ、２８８０ｓｈ
、２６８０ｓｈ、２５２０ｓｈ、２１６０ｓｈ、２０６
０ｓｈ、１９５０ｓｈ、１８８０ｓｈ、１７４０ｓ＋＋
、　１６７５Ｓｈ、　１６５５ｓｈ、　１６４０ｖｓ、
　　１６２５ｖｓ、　　１６０５ｓ、１５５５　ｓ　、
ｌ　５３０　Ｓ　、　　ｌ　５００　Ｓ　ｈ、　１４５
５ｓ、　１４４５　ｓｌ１、　１４１５ｍ、　　１３８
０ｍ、１３４０ｍ、　　１３１０ｒｚ、　１２９５ｓｈ
、　１２７５　ｓｈ、　１２４５ｗｗ、　１２３０ｓｈ
、　１１９０ｓｈ、　１１７０ｓ、　　１１４５ｓｈ、
　　１１１０ｍ、１０９０ｓｈ、　１０７０ｗ、　　１
０６０ｓｈ、　１０４０ｗ、　１０３０ｓｈ、　　１０
００ｍ、　９９０ｖＷ、　９７０ｓｈ、　９６０ｖｗ、
　９３０ｓｈ、　９２０Ｗ、　８８５ｖｗ、　８７０ｓ
ｈ、　８５０ｍ、　８３０ｓｈ、　７８５ｓｈ、　７５
０ｓｈ、　７４０ｓ、　７００ｓ、　６９ｓｈ、０．　
６４５ｖｗ、　６２０ｖｗ、６０５ｓｈ、　５８５ｍ、
　５５０ｓｈ、　５２０■Ｗ、　５０５ｍ、　４７０ｖ
ｗ、　４４５ｖｗ、　４００Ｓｈ、　３３０ｓｈ ｖｓ＝非常に強い　　　Ｓ＝強い ｍ＝中程度　　　　　　Ｗ＝弱い ｖｗ−非常に弱い　　　ｓｈ＝肩 −質Ｎｌ１−スペクトル：マ トリックス ロール混合物を使用するＦＡＢイオンン化（ギセノン原
子の８ｋｅｙのビームを使用する急速原子衝突）におい
て、基本ピークは擬分子イオンＭＨ”＝８９０である。

イオンは質量ｍ／ｚ＝７８１およびｍ　／　ｚ　＝　６
５０においてｒｉ！Ｊ！測される。

質量ｍ　／　ｚ　＝　６　５　０において観測されるイ
オンは、次の断片に相当する： 反応ガスとしてＮＨ３を使用する脱着／化学的イオン化
（ＤＣＩ）において、質ｐｐｍ／　ｚ　＝　２　４１お
よびｍ　／　ｚ　＝　３　４　１の断片が得られ、断片
は次の構造に相当する： および ＤＭＳＯ−ｄ６中において、プロトンについて２　５　
０ＭＨ　ｚ　オヨび炭素二ラいテ１　０　０　、　６Ｍ
Ｈｚにおいて作業して、スペクトルを記録した。

割当てはＤＭＳＯの中線に関してｐｐｍで与える（プロ
トンについて２．５ｐｐｍ；炭素につぃて３９．５ｐｐ
ｍ）。

プロトンの核磁気共鳴スペクトルの分析を表ＩＶに記載
する。

５９４５１　　ＲＰのＩ３Ｃ核磁気共呪スペクトルは、
ビロー・ル部分の除外［２て、５５１８５　　ＲＰのそ
れに１０．２以内で同一であるニシリカゲルの」−Ｈを
１層り１コマ計グラフイーにおいて、１，２−ジクロロ
エタン／′メタノール（８０：２０容量）溶媒混合物を
使用すると、Ｒｆは０．５の両君である。メルクのシラ
ン化シリカゲル板上で、３％のＮａＣＬを含有するアセ
トニトリル／水（４０：４０容量）溶媒混合物を使用す
ると、Ｒｆは０．２１の領域である（エールリッヒ試薬
で燻瓦赤色に可視化）。

５５１８５　　ＲＰおよび５９４５１　　ＲＰは、異な
る試薬を使用する着色反応によって特徴づけられる。そ
れらはヨウ素、ギツプの試薬、硫酸バニリン、塩化第二
鉄、グライダ−リーバツク試薬（塩素／トルイジン）お
よびエールリッヒ試薬で養成の反応を与える。それらは
ニンヒドリンおよびドラゲンドルフ試薬で陰性の反応を
グーえる。

５５１８５　　ＲＰおよび５９４５１　　ＲＰを生成す
る微生物は、スペイ国のニスカントンで採取された土か
ら分離され、そしてこれに番号Ｓ−１６３２８が付され
た。この微生物の試料は、ブタベスト条約に従い、バア
アルン（Ｂ　ａ　ａ　ｒ　ｎ）（オランダ国）のセトラ
アルビューロウφブーアφシムメルーカルチャーズ（Ｃ
ｅｎ、ｔｒａａｌｂｕｒｅａｕ　　ｖｏｏｒ　　Ｓｅｈ
ｉｍｍｅｌ−ｅｕｌｔｕｒｅｓ）に１９８６年３月２４
．０に受託され、ここで受託番号ＣＢ３　１６２．８６
を与えられた。

この微生物はすでに記載された種と区別する特徴を有し
、それゆえ、新規であると考えなくてはならない。それ
は表示ストレプトマイセス種（互ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ　　５ｐ）Ｓ−１６３２８が存えられた。

微生物は一般的方法によって分離された。この方法は、
少量の十を無菌の蒸留中に懸濁させ、この懸濁液を異な
る濃度に希釈し、そして寒天栄養培地を含有するベトリ
皿の表面へ少量の各希釈物を配置する、−とから成る。

２６℃で数日間インキーユベーション１．た後、これに
より微生物は生長することができ、七れ以上研究できる
ようにするため、分離しようとするコロニーを取り出し
、そ１、てさらに豊富な培養物を得るために栄養寒天上
で継代Ｊ８養する。

アクチノミセテ（ａｃｔ　ｉｎｏｍｙｃｅｔｅ）Ｓ−１
６３２８は、その細胞壁が２．６−ジアミツーし一ピメ
リン酸を含有するので、ストレプトｍｙｃｅｓ）の族に
屈する。

ストレプトマイセス（Ｓｔ　ｒｅｐｔ　ｏｍｙｃｅｓ）
Ｓ−１６３２８２８は、０．４〜０．６ｐｍ／ｌ−１．
２ｐｍと測定される円柱状のとげのある胞子を形成する
。その直線状または波状の胞子を生じる鎖（気中性菌糸
）は、長くかつ一般に多数の胞子を含有する。胞子柄は
筒車である。その胞子形成のモードを基準にして、この
菌株はブリドハム（Ｐｒｉｄｈａｍ）の分類のレクッス
ーフレキシビリス舎セクション（Ｒｅｃｔｕｓ−Ｆｌｅ
ｘｉｂｉｌｉｓ　　５ｅｃｔｉｏｎ）に分類される。

ストレプトマイセス（Ｓｔ　ｒｅｐｔ　ｏｍｙｃｅ互）
Ｓ−１６３２８２８は、ビンクーベージュ色の胞子形成
した気中性菌糸体である。それは２８°Ｃにおいてよく
生長する。その生長の菌糸体の着色は、一般に、培地に
従い、黄色がかった白色からベージュ−褐色に変化する
。

新規なストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
）は、それが観察されたｊ８＃！上に可溶性の顔料を与
えない。２８℃で実施したこれらの培養において、それ
は次の生化学的特徴を右する、メラミンの生産　　　　
　　　陰性 Ｈ２Ｓの生産　　　　　　　　陰性 チロシン　　　　　　　　　　陽性 カゼインの加水分解　　　　　陽性 ゼラチンの加水分解　　　　　陽性 硝酸用類からの亜硝酸塩類の 生産　　　　　　　　　　　　陰性 ｙ粉の加水分解　　　　　　　陽性 ミルク」−の培養　　　　　　　凝固を含まないペプト
ン化、Ｐ Ｈのアルカリ性 化を伴なう、こ れは２８日の間 に６．４から ７．５に変化す る。

ストレプトマイセス（Ｓｔ　ｒｅｐｔ　ｏｍｙｃｅＳ）
の培養の特徴を表Ｖにおいて対照する。これらは生長の
良好な段階に到達１．た」８着物、すなわち、２８℃に
おいて３２〜ｊｐ１、に適用される。これらの特徴は、
Ｚ」±−ｙｈフィー丸−る（旦」Ｊ」」ｔｏｍｙ−以ｅ
ｓ−）菌株の形態学的特徴の決定に汀通に使用される栄
養寒天またはブイヨン（液状培地）で観♂１りした。１
８地」二の封１養は、それを寒天領斜培地上で実施した
時、培地ＩＳＰ、、、ｌ５Ｐ７およびワクスマン（Ｗａ
　ｋ　ｓ　ｍ　ａ　ｎ）のメラミンを除外して、ベトリ
血中で実施した。培地の参照または組成は次の通りであ
る： 参照、１．＝「ストレプトマイセス種の特性付は法（Ｍ
ｅｔｈｏｄｓ　　ｆｏｒ　　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ
ｔｉｏｎ　　ｏｆ　　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　５
ｐｅｃｉｅｓ）Ｊ　、　　インターナショナル・ジャー
ナル拳オブ・システマヂ・ンク・バクテリオロジー（Ｉ
ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　　Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ
　　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　　Ｂｅｔｅｒｉｏｌｏｇｙ
）−Ｅ、Ｂ、ｙ：ｚシャーリング（Ｓｉｒｌｉｎｇ）お
よびり、ゴー／　ｌ・リーブ（Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）　、
　ｖｏ１、１６、Ｎ０１３、１９６６．３１３−３４０
ページ。

参照、２：　「メラニン形成培ｊ１！！（Ｍｅｌａｎｉ
ｎ　　ｆｏｒｍａｔ　ｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ）Ｊ、、ジ
・アクチノミセテス（Ｔｈｅ　　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅ
ｔｅｓ）、ｖｏ１、２．Ｎｏ、４２，３３３ページ、ザ
ーウィリアムスーアンド・ウィルキンス・カンバ＝　−
（Ｔｈｅ　　Ｗｉ　ｌ　ｌ　ｉ　ａｍｓ　　ａｎｄ　　
Ｗｉ　Ｉｋｉｎｓ　　Ｃｏｍｐａｎｙ）、バルチモア、
１９６１゜ 参照、３：　「バクテリアの純粋な培養研究のための方
法のマニュアル（Ｍａｎｕａｌ　　ｏｆ　　Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ　　ｆｏｒ　　Ｐｕｒｅ　　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　　５
ｔｕｄｙ　　ｏｆ　　Ｂａｃｔｅｒｉａ）Ｊ、ソサイア
ティ・オブーアメリカン拳バクテリオロジスト（Ｓｏｃ
ｉｅｔｙ　　ｏｆ　　Ａｍｅｒｉｃａｎ　　Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌｏｇｉｓｔｓ）、−＝、ニーヨーク、ジェノバ
、ｌｌ５ｏ−１８゜ 参照、４：　「土のバクテリアの分類法（Ｔ　ｈ　ｅＴ
ａｘｏｎｏｍｙ　　　ｏｆ　　　５ｏｉｌ　　　Ｂａｅ
ｔｅｒｉａ）Ｊ−Ｒ，Ｅ、ゴードア（Ｇｏｒｄ。

ｎ）、土のバクテリアの生態学（Ｅｅｏｌｇｙｏｆ　　
５ｏｉｌ　　Ｂａｃｔｅｒｉａ）、　　リバープール・
ユニバージティーφブレス（Ｌｉｖｅｒｐｏｏｌ　　Ｕ
ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　　Ｐ　　ｒ　　ｅ　　ｓＳ）、１
９６７、Ｔ、Ｒ，Ｇ、グレイ（Ｇ　ｒ　ｅｙ）、Ｂ、パ
ーキンソン（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ）編。

参照、５：　［バクテリアの純粋な培養研究のための方
法のマニュアル（Ｍａｎ、ｕａｌ　　ｏｆ　　Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ　　ｆｏｒ　　Ｐｕｒｅ　　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　　
５ｔｕｄｙ　　ｏｆ　　Ｂａｃｔｅｒｉａ）Ｊ、ソサイ
アティ拳オブ拳アメリカン・バクテリオロジスト（Ｓｏ
ｃｉｅｔｙ　　ｏｆ　　Ａｍｅｒｉｃａｎ　　Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌｏｇｉｓｔｓ）、二、−ヨーク、ジェノバ、
ＩＩｓ。−１８に従って調製した、純粋なゼラチン。

参照、６：製造者の指示に従って再構成した商°・・、
−６４ ４， １′ ′ダ（、 ストレプトマイセス種（Ｓｔ　ｒｅｐｔ　ｏｍｙｃｅｓ
　　５Ｐ）Ｓ−１６３２８についテノ生理学的試験は、
ＩＳＰ炭水化物利用培地およびミシュラ（Ｍｉ　５ｈｒ
ａ）、Ｓ、Ｊ　、、ボードｙ（Ｇｏｒｄｏｎ）、Ｒ，Ｅ
、およびバーネット（Ｂ　ａ　ｒ　ｎｅｔｔ）、Ｄ、Ａ
、、ジャーナル・オブ・クリニカル・マイクロバイオロ
ジー（Ｊ、　　Ｃ１１ｎ。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏ１、）、ｌｌニア２８−７３６．１９
８０の試験の系列を使用して実施した。

これらの２つの系列の結果を、それぞれ表ｖ１および表
ＶＩＩに要約する。これらのデータが示すように、菌株
５１６３２８は、ｌ５Ｐ５５３９にｄｕｒｈａｍｅｎｓ
ｉｓ）、ゴートン（Ｇｏｒｄｏｎ）、Ｍ、およびラバ（
Ｌａｐａ）、Ｅ、、アプライド・マイクロバイオロジー
（Ａｐｐｌ。

Ｍｉｅｒｏｂｉｏ１、）、上４　：　７５４−７６０．
１９６６、非常に類似し、そしてゴートンの系列におけ
る５５の試験のうち６つにおいて異なる。５１６３２８
およびｌ５Ｆ５５３９の両者は、気中性着色において非
常にわずかに異なり、両者は多少灰色がかった褐色であ
り、そしてとげのある胞子を右する。

表ＶＩ Ｓ１６３２８およびｌ５Ｐ５５３９　（ＩＳＰ、Ｊ（本
ｉＢ　Ｊ１！！　）による炭水化物の利用ｉＲ水化物　
　　　５１６３２８　　ｌ５Ｐ５５３９アラビノース　
　　　＋　　　　　　　＋フルクトース　　　　　＋　
　　　　　　　＋グルコース　　　　　＋　　　　　　
　　＋イメシトール　　　　＋　　　　　　　＋マンニ
トール ラフィノース　　　　＋　　　　　　　＋ラムノース　
　　　　ー　　　　　　　−スクロース　　　　　＋　
　　　　　　＋キシロース　　　　　＋　　　　　　　
＋表ＶＩＩ ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｅｅｓ）Ｓ１
６３２８および門υクブｓｉ　ｓ）ＩＳＰ５１３９ｃ７
）試験の反応（ゴートン試験） ５１６３２８　　ＩＳＰ５５３９ 次の物質の劣化 ／転化 カゼイン　　　　　　＋　　　　　　　　＋キサンチン
　　　　　＋　　　　　　　＋ハイポキサンチ ン　　　　　　　　　　　　　　　　＋　　　　　　　
　　　　　＋チロシン　　　　　　＋　　　　　　　＋
アデニン　　　　　　＋　　　　　　　＋メラノイド顔
料　　　−　　　　　　　＋表ＶＩＩ（続き） Ｓ１６３２８　　　ＩＳＰ５５３９ アミラーゼ　　　　　＋　　　　　　　　＋ゼラチナー
ゼ　　　　＋　　　　　　　１ホスフアターゼ　　　＋
　　　　　　　＋硝酸塩リダク ターゼ　　　　　　　ー ウラーゼ　　　　　　＋　　　　　　　＋エスクリナー
ゼ　　　＋　　　　　　　十次の物質の一Ｌ／　　　＋
　　　　　　　＋中の生長 ５％のＮａＣｌ　　　　＋　　　　　　　　−サリシレ
ート　　　　　±　　　　　　　　ーリゾチームのブ イヨン　　　　　　　＋　　　　　　　＋表ＶＩＩ（続
き） Ｓ１６３２８　　　ＩＳＰ５５３９ 酢酸ｊｉ！＋　　　　　　　　＋ 安息香酸塩　　　　　− クエン酸塩　　　　　＋　　　　　　　　＋乳酸塩　　
　　　　　＋　　　　　　　　＋リンゴ酸塩　　　　　
士　　　　　　　　＋ムチン酸塩　　　　　− シュウ酸塩　　　　　＋　　　　　　　ープロピオン酸
塩　　　＋　　　　　　　＋ピルビン酸塩　　　　＋　
　　　　　　＋コハク酸塩　　　　　＋　　　　　　　
　＋酒石耐塩　　　　　　− 表ＶＩＩ（続き） Ｓ１６３２８　　　ｌ５Ｐ５５３９ 次の温度におけ 杢Ｊ、長　　−− １Ｏ℃　　　　　　　→−− ４５℃　　　　　　　− ５３℃　　　　　　　− 次の物質からの アドニトール　　　　＋　　　　　　　＋アラビオノー
ス　　　　＋　　　　　　　＋セルビオース　　　　＋
　　　　　　　＋デキストリン　　　　＋　　　　　　
　＋ズルシトール　　　　− エリスリトール　　　− フルクトース　　　　　＋　　　　　　　　＋ガラクト
ース　　　　＋　　　　　　　＋表ＶＩＩ（続き） Ｓ１６３２８　　　ｌ５Ｐ５５３９ グルコース　　　　　　＋　　　　　　　　＋グリセロ
ール　　　　千　　　　　　　十イノシトール　　　　
＋　　　　　　　＋ラクトース　　　　　＋　　　　　
　　＋マルトース　　　　　＋　　　　　　　＋マンニ
トール　　　　＋　　　　　　　＋マンノース　　　　
　＋　　　　　　　＋メルビオース　　　　→−＋ α−Ｍ　ｅ　−Ｄ　− グルコシド　　　　　＋　　　　　　　＋ラフィノース
　　　　＋　　　　　　　＋ラムノース　　　　　−− サリシン　　　　　　＋　　　　　　　＋ソルビトール
　　　　−− スクロース　　　　　＋　　　　　　　＋表ＶＩＩ（続
き） ５１６３２８　　　ｌ５Ｐ５５３９ トレハロース　　　　＋　　　　　　　＋キシロース　
　　　　＋　　　　　　　＋α−Ｍ　ｅ　−Ｄ　− キシロシド　　　　　十　　　　　　　−５５１８５Ｒ
Ｐおよび５９４５１　　ＲＰを調製する方法は、ストレ
プトマイセス種（ＳＬｒｅｐｔ　ｏｍｙｃｅｓ　　５ｐ
）Ｓ−１６３２８、または生産性突然変異体を、培地１
−で適当な条件下で培養し、そして培養の間に形成した
産生物を分箸および精製することから木質的に成る。

ストレプトマイセス種（−ミーＬ工副）ｔｏｍｙ旦ｅｓ
　　５ｐ）Ｓ−１６３２８のＪＨ’、ｉは、使用溶液培
養法または液内培養法によって実施することができるが
、後者の型の方法は便利であるので好ましい、この目的
に、発酵産業において普通に使用されている種々の型の
装置を使用することができる。

とくに、次の物質をこの作業の実施に適合させることが
できる： ストレフト′アーＬ欠ｚ種（旦±工且〜ｌ−を旦ｍｙｃ
ｅユ　ｓ　ｐ）　Ｓ　−１６３２８−原寒天」−の培養 ↓ 攪拌したフラスコ内の培養 ↓ 発酵器内の（］（襲物の培養 ↓ 発８２器内の清算Ｊ８養 発酵培地は、主として、同化可能な炭素源および同化可
能な窒素、無機要素、とくに塩化物、および適当ならば
、生長因子を含有しなくてはならず、これらの成分のす
べてはよく定められた生成物の形態で、あるいは種々の
起源の生物学的生産物において直面するような複雑な混
合物によって供給することができる。

同化可能な炭素源として、淡水化物、例えば、グルコー
ス、スクロース、マルトース、デキストリン、Ｖ粉また
は他の炭水化物、例えば、糖アルコール（グリセロール
）または、例えば、ある種の有機酸１例えば、乳酸およ
びクエン酸を使用することが可能であるいある種の動物
油または植物油、例えば、ラード油または大豆油を、こ
れらの異なる炭水化物源の代わりに、あるいはそれらと
Ｍｌみ合わせて使用することができる。

適当な同化可能な窒素ｊ（はきわめて変動可能である。

それらは簡単な化学的物質、例えば、無機または有機の
アンモニウム塩、尿素またはある種のアミノ酸であるこ
とができる。それらは、また、主として蛋白質の形態で
窒素を含有する複雑な物質：例えば、カゼシン、ラクト
アルブミン、グルテンおよびこれらの物質の加水分解物
、例えば、大豆粉末、落花生粉末、魚粉、肉類および酵
母エキス、酒造業者の可溶性物質およびトーモロコシ浸
漬物であることができる。

添加する無機成分のうちで、あるものは緩衝化または中
和作用を有することができ、例えば、アルカリ金属また
はアルカリ土類金属のリンｑＪ１２またはカルシウムお
よびマンガンの炭酸塩であることができる。他のものは
ストレイトマイセス種（Ｓｔ　ｒｅｐｔ　ｏｍｙｅｅｓ
　　　５ｐ）Ｓ−１６３２８の成長および５５１８５　
　ＲＰおよび５９４５１　　ＲＰの発行に要求されるイ
オンのバランスを提供し、これらは、例えば、アルカリ
金属またはアルカリ土類金属の塩化物および硫酸塩であ
２８の代謝反応の活性化剤として一層ことに作用しこれ
は亜鉛、コこれは亜鉛、コバルト、銅およびマンガンの
塩類を使用する場合である。　生長因子はビタミンの性
質の産生物、例えば、リボフラビン、葉酸およびパント
テン酸である。　発酵の開始時の発酵培地のＰＲは、５
．８〜７．８、好ましくは６．２〜７．４である０発酵
のための最適温度は２５〜３０℃であるが、満足すべき
生産は２３〜３３℃においてｔｉＰられる。発酵培地の
通気は広い限界内で変化させることができる。しかしな
がら、０．３〜３リットル／リットルブイヨン／分の通
気はことに適当であることがわがった。５５１８５　　
ＲＰの最大の収ｉ１５は２〜８１’ｌのｊ８養後に得ら
れ、この時間は主として使用するｊ）３地に依存する。

以上から理解されるように、５５１８５　　ＲＰおよび
５９４５１　　ＲＰの生産のためにストレプトマイセス
種（Ｓｔ　ｒｅｐｔ　ｏｍｙｃｅｓ　　５Ｐ）Ｓ−１６
３２８を培養するための一般条件は、広い範囲内で変化
させることができ、そして各々の４．ν定の要求に適合
させることができる。

５５１８５　　ＲＰおよび５９４５１　　ＲＰは、次の
方法で発酵培地から分離することができる。

培地を、一般にｐＨ６〜８、ｔｌｆましくはｐ　Ｈ約７
において波過助剤の存在下に症過する。

フィルターケーク中に保持された５５１８５ＲＰおよび
５９４５１　　ＲＰを、適当な有機溶媒、例えば、ケト
ン、例えば、アセトンまたはアルコール、例えば、メタ
ノールで抽出する。粗生成物は、これらの溶靜の減圧濃
縮後、適当ならば劣った溶媒または、Ｊｌ溶媒を添加し
た後、結晶化し、そして暗室内にある期間にわたっ−Ｃ
放置する。

５５１８５　　ＲＰおよび５９４５１　　ＲＰは、慣用
法、例えば、再結晶化、種々の吸着坦体を使用するクロ
マトグラフィーあるいは自流分配によって分離および精
製することができる。

５９４５１　　ＲＰは、また、分子の残部に影響を及ぼ
さないで水素原子により１１！素原子をと換することが
できる慣用法に従い、５５１８５　　ＲＰの脱塩素化す
ることによって得ることができる。

５５１８５　　ＲＰをメタノール溶液中で気体の水素で
触媒の存在下に２０℃付近の温度において処理すること
は、ことに右利である。触媒として、パラジウム化木炭
を、一般に、酸受容体、例えば、酸化マグネシウムの存
在下に使用する。

次の実施例により本発明を説明する。

実施例１（３−醍入 １７０リツトルの発酵器に、次の成分を供給する： ペプトン　　　　　　　　　　　　１２００ｇ酵母エキ
ス　　　　　　　　　　　　６００ｇセレロース（デキ
ストロース）　　　　１２００ｇ塩化ナトリウム　　　
　　　　　　　６００ｇ水道木　　１２０リツトルとす
るために十分量ｐ　ＨをＩＯＮの水酸化ナトリウム溶液
（３０ＣＣ）の添加によって７．０に調節する。

この培地を１２２℃の水蒸気を４０分間泡立てて通入す
ることによって滅菌する。冷却後、培地のＰＨは６．６
である。

培地にストレプトマイセス種（Σ↓ｒｅｐｔ。

ｍｙｃｅｓ　　５ｐ）Ｓ−１６３２８ｃ７）７２時間攪
拌したエルレンマイヤー培養物の一部（２００ｃｃ）を
接種する。

培養物を２８℃で３６時間生長させ、２５０回転／分で
攪拌し、そして無菌の空気で４ｍ３／時間の流速で通気
する０次いで、それは生産培養物を接種するために適す
る。

生産培養は８００リツトルの発酵器内で実施し、ここで
次の物質を供給する： 滅菌した蒸留渚の可溶性物質　　１０ｋｇ滅菌したセレ
ロース　　　　　　　４ｋｇ大豆油　　　　　　　　　
　　　　２リツトル炭酸カルシウム　　　　　　　　０
．８ｋｇ水道水　　４００リツトルとするために十分量
１ＯＮの水酸化ナトリウム溶液（４００ｃ　ｃ）の添加
により、ｐＨ７，０に調節する。

この培地を１００℃に１５分間加熱した後、１２２℃の
水蒸気を４０分間泡立てて通人することによって滅菌し
た。

この培地のｐＨはその時６．７５である。

次いで、それを、前述のように１７０リツトルの発酵器
内で調製した接種用培養物（４０リツトル）を接種する
。

培養物を２６℃で８３時間生長させ、２５０回転／分で
攪拌し、そして２０ｍ３／時間の流速において無菌空気
で通気した。

この作業の終りにおいて、培養物のｐＨは８゜０５であ
り、そして発酵した培地の体積は４１０リツトルであっ
た。

実施例２（腹出−精製） 発酵した培ｊ１！！（４００リツトル）を濾過助剤［ク
ラルセル（Ｃ１ａｒｃｅｌ）；２０ｋｇ］（７）存在下
にフィルタープレスで濾過する。菌糸体を含有するフィ
ルターケークを、２０％の木を含イＪするアセトン（２
００リツトル）中では激しく攪拌しながら破壊する。懸
濁液を諸過助剤の存在下にフィルタープレスで濾過する
。得られた油液を減圧濃縮してアセトンを除去する。残
留水溶液を７の領域のｐＨにおいて酢酸エチル（２Ｘ５
０リツトル）で抽出する。有機相をデカンテーションに
より分離し、そして減圧（２〜３トル；０゜２７〜０．
４ｋＰａ）ｅ縮乾固する。油状残留物（１８３ｇ）がこ
れにより得られる。

この油状残留物をメタノール（１、５１Ｊントル）中に
溶解し１次いで「ｆニオライト（Ｄｕ。

Ｉ　ｉ　ｔ　ｅ）Ｓ８６１Ｊ樹脂（５００ｅｅ）ｌ−に
減圧（２〜３）ル；　０．２７〜０．４ｋＰａ）蒸発に
より堆積させる。この樹脂を、メタノール／水（５０：
５０容量）の混合物中で平衡化した「デュオライト（Ｄ
ｕｏｌｉｔｅ）Ｓ８６１Ｊ樹脂（３リツトル）を含有す
る直径７．５Ｃｍのカラムの上部に供給する。溶離を６
４０ｃｃ／時間の流速で実施し、３０分毎に分画を取り
、そして、順次に、 メタノール／水（５０：５０容量）：分画１〜メタノー
ル／水（７０：３０容量）：分画３５〜７１ メタノール／水（８０：２０容量）二分画７２へ・１０
０ で溶離する。

各分画をシリカゲルのｆ３層りロマトグラフィーで監視
し、１．２−ジクロロメタン／メタノール（８０：２０
容量）系で溶離し、そして、０．５の領域のＲｆについ
て、ギツプの試薬でｊｉｆ視化し、これによりフェノー
ル基を含有する化合物で特徴ある青色が得られる。

５５１８５　　ＲＰの大部分は分画８７〜９７中に存在
し、これの分画を一緒に１７、次いで「ブレイス（ＧＲ
ＡＣＥ）６０オングストローム」シリカゲル（４０〜６
３ミクロン）　　（４０００Ｃ）上の減圧（２〜３トル
；０．２７〜０．４ｋＰａ）蒸発により堆積する。

得られる乾燥粉末を、１．２−ジクロロエタン／メタノ
ール（８０：２０容量）混合物中で平衡化したシリカの
直径７．５ｃｍおよび高さ１１０ｃｍのカラム上に堆積
する。アイソクラチック（ｉｓｏｅｒａｔｉｃ）溶離を
６００ｅｅ／時間の流速で実施する。５５１８５　　Ｒ
Ｐは分画６〜１５中に溶離される。黄色含量を含有する
最後の３つの分画を除去する。−諸した分画６〜１２を
減圧（２〜３　ト／Ｌ／；　０　、２７〜０　、４ｋＰ
ａ）蒸発した後、ベージュ色のゴム状固体（６、８ｇ）
が得られる。

これによって得られた生成物をメタノール（５０ｃｃ）
中に取る。この溶液を濾過し、次いで５ＣＣの堆積に濃
縮し、そして最後に、メタノール中で組立てたセファデ
ックス（Ｓｅｐｈｃｉｅｘ）ＬＨ−２０（７）直径５ｃ
ｍおよび高さ１３８ｃｍ（７）カラム上に堆積する。溶
離を純粋なメタノールで３００ｅｅ／時間の流速におい
て実施し、２０分毎に分画を集める０分画を薄層クロマ
トグラフィーによって監視する。５５１８５　　ＲＰを
含有する分画ｌＯ〜１３を一緒にし、そして１００ＣＣ
に濃縮する０次いで、シクロヘキサン（１５０ｅｅ）を
添加する。攪拌および次いでデカンテーションした後、
メタノール相を減圧（２〜３トル；　０．２７〜０．４
ｋＰａ）　濃縮乾固する。

これにより、６％の５９４５１　　ＲＰを含量］する５
５１８５　　ＲＰ　（２，３２ｇ）が得られる。

実施例３− 発酵した培地（４００リツトル）を濾過助剤（クラルセ
ル、２０ｋｇ）の存在下にフィルタープレスで濾過する
。菌糸体を含有するフィルターケークを、２０％の木を
含有するアセトン（２００リツトル）中で激しく攪拌す
ることによって破壊する。懸濁液を濾過助剤の存在下に
フィルタープレスで濾過する。得られる濾液を減圧濃縮
してアセトンを除去する。残留する水溶液を７の領域の
ｐＨにおいて酢酸エチル（２Ｘ５０リツトル）で抽出す
る。有機相をデカンテーションにより分離し、次いで減
圧（２〜３トル；０．２７〜０゜４ｋＰａ）ｅｔｌａ乾
固する。これにより、油状残留物が得られる。

これにより得られた油状残留物をメタノール（５リーフ
トル）で取る。シクロヘキサン（１５リットル）を攪拌
１７ながら添加する。デカンテーション後１．−タノー
ル相を減圧蒸発し、そして残情動をエチルエーテル（１
リツトル）中に分散させる。ｍｊ！ＩＩな粉末（３２，
５ｇ）が形成し、そしてこれを辿過によって分離する。

１１にられた粉末（２６ｇ）をメタノール（５００ｃｃ
）中に取り、そして得られた溶液をシリカゲル（粒子ザ
イズ：３５〜７０ミクロン；多孔度６０オングストロー
ム）（１８５ｇ）に吸着させる。乾燥粉末をシリカが充
填された４００ｃｃのカラムに供給する。溶離を純粋な
酢酸エチル（ｌリットル）で実施する。濃縮乾固すると
、得られる溶液は黄色粉末（１１，７ｇ）を生ずる。

上で得られた粉末の１０ｇをメタノール中に取り、そし
て得られる溶液をグラフト化シリカ（ブレイス　Ｃ１８
：粒子サイズ２０ミクロン；多孔度ｉｏｏオングストロ
ーム）（１００ｃｃ）Ｊ二の吸着させる。得られた粉末
を「予備カラム（ｐｒｅ−ｃｏｌｕｍ）Ｊ　　（直径７
．５ｅｏｎ；高さ１０ｃｍ）中に供給し、次いでこれに
グラフト化シギラを充填する。「予備カラム」を閉じた
後、その中に含有される空気を！に留水の流れで追出し
、そして蒸留水を４０％の一７七トー、４トリル（４０
０ｃｃ）で置換する。

次いで、［予備カラムｊを、４０％のアセトニトリル中
で平衡化した同一のクロマトグラフィーの担体を含イー
１するカラム（直径７　、５　ｅ　ｍ　；高さ５０ｃｍ
）に接続する。アイソクラティック溶離を１５０ｅｃ／
分の流速で実施し、５００ｃｃの分画を集める０分画を
メルクのシラン化シリカ板の薄層クロマトグラフィーに
より監視し、このカラムをアセトニトリル／３％強度の
水性塩化ナトリウム溶液（４，０：６０容ＬＤｉ合物で
溶離する。

溶離した生成物はエールリッヒ試薬による着色およびそ
れらのＲｆによって区別される。

分画１２〜１５は生成物（０，４６ｇ）を含有し、これ
はＲｆ＝０．２１であり、エールリッヒ試薬で煉瓦赤色
をＵ〜え、そして５９４５１　　ＲＰに相当する。

分画１８〜５１は生成物（５，９６ｇ）を含有し、これ
はＲｆ＝０．１４であり、エールリッヒ試薬でオレンジ
色を与え、そして５５１８５　　ＲＰに相当する。

Ｒｆ＝０．２１の生成物の１．１３ｇをメタノール／木
（６５：３５容量）混合物（１５ｃｃ）中に取る。

この透明溶液を、同一溶媒混合物中で平衡化したＭＣＩ
ゲルＣＨＰ２０Ｆのカラム（直５５　ｃ　ｍ；長さ５０
ｃｍ）カラム上に注入する。アイソクラティック溶離を
１７ｃｃ／分で実施し、１ＯＯｃｃの分画を東め、次い
で溶離をメタノール／水（７２：２８容量）混合物で同
一条件下に続ける。さらに６０の分画をこれによって集
める。

分画７８〜ｉｏｏは純粋な５９４５１　１　　Ｐ（０，
５９ｇ）を生ずる。

Ｒｆ＝０．１４の生成物の１０．５ｇを６５％のメタノ
ール（３５０ｃｃ）中に取る。この透明溶液を、６５％
のメタノール中で平衡化したＭＣ■ゲルＣＨＰ２０Ｆの
カラム（直径５ｅｍ；長さ５０ｃｍ）カラム上に注入す
る。溶離を］−と同一条件下に１７ｃｃ／分において、
６５％のメタノール（４リツトル）で、次いで８５％の
メタノール（４リツトル）で実施し、１０００Ｇの分画
を集める。

分画４６〜５６は純粋な５５１８５ＲＰ（９，７８ｇ）
を生ずる。

実施例４ 純粋な５５１８５　　ＲＰ　（１４ｇ）を、メタノール
（１２０ｃｃ）中のバラジウ１１化木炭（５％のパラジ
ウム）（３，５ｇ）および酸化マンガン（ＭｇＯ）（３
，５ｇ）の懸濁液に添加する。

水素を個々の泡の形態で、２０°Ｃの領域の温度および
７６０ｍｍＨｇ　（１０ｉ、３ｋＰａ）において１５時
間通入する。

構成脳液体クロマトグラフィーによって分析すると、５
９４５１　　ＲＰの５５１８５　　ＲＰへの！屍１社素
化がｉ、１、ｌ−的であることが示される。

この反応混合物を濾過肋間［セライ）（Ｃｅｌｉ　ｔ　
ｅ）　］の存在下に１過する。症液を蒸発乾固した後、
残留エタノールを含有する白色粉末（１５，２ｇ）が得
られる。

これによって得られた粉末のｌ１ｇをメタノール（１５
０ｅｅ）中に取る。この溶液を粒子サイズ３５〜７０ミ
クロンのグラフト化シリカ（ブレイス　Ｎ、Ｄ、　　Ｃ
ｌ８）、Ｊ二に吸着する。

得られた乾仔粉末を転帰状態で「予備カラ１、」に転帰
状態で供給し、同一のグラフト化シリカの新しい部分を
充填する６　丁予備カラム」を閉じた後、その中に含有
される空気を蒸留水の流れで追出し、そして後者を４０
タロのアセトニトリル（４００ｃｃ）で迫出す。

次いで、「予備カラム」を、同一であるが２０ミクロン
の粒子サイズを有するＣ１８グラフト化シリカを含量１
する直径７．５ｃｍおよび高さ５０Ｃｍのカラトへ接続
する。

アイソクラティック溶離を１５０ｃｍ／分の流速で実施
し、１，３リ−／　トルの溶尊剤が通過１．た後、５０
０ｅｅの分画を集める。

減圧蒸発後、分画８〜１２は５９４５１　　ＲＰ（８、
９ｇ）を生じ、これを実施例３に記載する条件下に精製
する。

５５１８５　　ＲＰおよび５９４５１　　ＲＰは、例外
的な免疫抑制性質を示す。さらに詳しくは、５５１８５
　　ＲＰおよび５９４５１　　ＲＰは細胞の免疫性の免
疫抑制物質である。

生体外で、１０−５〜１０−８のモル濃度において、５
５１８５　　ＲＰおよび５９４５１　　ＲＰは次のもの
を有意に阻害するニ ー　チオグリコレートＦＡ導マウスＩＬｆ１１！２マク
ロフファージ、ことに後者がインキュベーション期の間
にリンパ珠にインタリューキン−２が添加されることに
よって刺激されている場合［ジオンキオツシ（Ｇｙｏｎ
ｇｙｏｓｓｉ）ら、細胞の免疫学（Ｃｅｌｌ　　Ｉｍｍ
ｕｎｏ１、）、４５．１（１９７９）］； −フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）［ワトソン（Ｗａｔ
ｏＳｏｎ）ら、イムノロジカル・リビューズ（Ｉｍｍｕ
ｎｏ１、　　Ｒｅｖ、）、５↓、２５７　（１９８０）
］で刺激されたヒトリンパ球によるか、あるいはＰＨＡ
およびインターリューキン−１により刺激されたマウス
リンパ珠によるインターリューキン−２の生産；−ヒト
リンパ球によるか、あるいあＨマウスリンパ球によるガ
ンマインターフェロンの生産［ファジー（Ｆａｒｒａｒ
）ら、ジャーナルφオブーイムノロジー（Ｊ　、　　Ｉ
ｍｍｕｎｏ　ｌ　、）、１２６．１１２０　（１９８１
）］。

生体外で、５５Ｉ８５　　ＲＰおよび５９４５１ＲＰは
抗体の分泌へ阻害作用を示さず［Ｐ。

Ｈ、フレシラス（Ｋｌｅｓｉｕｓ）、プロシーディンゲ
スφオブーソサ・イアティφフォー〇エキスベリメンタ
ル番バイオロジー・アンド・メディジン（Ｐｒｏｃ、　
　Ｓｏｅ、　　Ｅｘｐ、　　Ｂｉ。

１、　　　Ｍｅｄ、）　　（Ｎ、Ｙ、）　、　１３５、
１５５（１９７０）およびデＨ，バ７−ジジク（Ｖａｎ
Ｄｉｊｋ）およびＮ、ブロクスマ（Ｂｌｏｋｓｍａ）、
ジャーナル・オブφイ１、ノロジカル・メソツズ（Ｊ　
、　　Ｉｍｍｕｎｏ　ｌ　、　　Ｍｅｔ　ｈｏｄｓ）、
１迭、３２５　（１９７７）の技術を使用する］、そし
てそれらは白血秒Ｐ　３８８　、Ｉ１１胞１．ｍいて細
胞障害性を事実上欠く。

マウスに２５〜５０ｍｇ／ｋｇｌｌＸｌ腔内の投与・量
で、試験の１１１前に、投与したと、き５５１８５ＲＰ
、［ヨび５９４５１　　ＲＰはＹＡＣ／３標的細胞に向
かう測定されたＮＫ活性を阻害する［ヘルベルハン（Ｈ
ｅｒｂｅｒｈａｎ）ら、インターナショナルφジャーナ
ル・オブφキャンサー（Ｉｎｔ、　　Ｊ、　　Ｃａｎｃ
ｅｒ）、１６．２１６（１９７５）］。

１０目間５０　ｍ　ｇ　／　ｋ　Ｈの投与量で経「】的
に投与すると、５５１８５　　ＲＰおよび５９４５１Ｒ
Ｐは、Ｂａ１ｂ／ｃマウスにおけるアレルギー性（Ｃｓ
ｌＢ１／６）皮１；ｑ移植体の拒絶を有意に遅延するか
、あるいはＣｓ＋Ｂｌ／６マウスにおける半アレルｆ−
性（Ｂ６　Ｉｈ　Ｆｌ　）皮Ｉ、η移植体の拒絶を有意
に遅延する。

さらに、５５１８５　　ＲＰおよび５９４５１ＲＰＪｄ
、ファージ形成細胞の生産について作用を示さないか、
あるいは刺激作用を示す［Ｎ　、　Ｋ　。

フエルネ（Ｊｅｒｎｅ）およびＡ、Ａ、ノブイン（Ｎｏ
ｄｉｎ）、ザイエンス（Ｓｅｉｅｎｅｅ）、１４０．４
０５　（１９６３）の技術を使用する］、それらは、１
２．５−５０ｍｇ／ｋｇＷ腔内の投与量で４１１間投与
したとき、マウスにおける白血病Ｐ３８８の生長に対し
て作用を有さない。

ヒトのＰｊ療において、５５１８５　　ＲＰおよび５９
４５１　　ＲＰは、器官または組織の移植体の拒絶を防
除するために、および自己免疫病、例えば、リウマチ、
インシュリン依存性糖尿病、多発性硬化症、筋無力症、
狼墳、乾せんおよびクローン病ことに有用である。

ヒトの治療において、適当な投与：１には求める効果お
よび処置の期間に依存する。それは、大人について、一
般に、経口的に０．５〜１００ｍｇ／ｋ　ｇ　／　Ｆｌ
であり、そｊ２て非経［１的に経口的に０゜１〜２０　
ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ　／　１１である。−殻に、区名は
、処置すべき、ル者の年令、体重および、ル渚に特別の
他のすべての因子に従って適当と考える投与。

量を決定するであろう。

本発明は、また、５５１８５　　ＲＰおよび５９４５１
　　ＲＰを製薬学的に許容されうる希釈剤または被膜と
組み合わせて含有する製薬学的組成物を提供する。これ
らの組成物は、経口的に、経直腸的にあるいは非経口的
に使用することができる。

経口的投与のための固体組成物として、錠剤、丸剤、粉
剤または粒剤を使用することがきる。これらの組成物に
おいて１本発明による活性生成物を１種または２種以上
の不活性希釈剤、例えば、スクロース、ラクトースまた
はド粉と混合する。

これらのＭｌ成物は、また、希釈剤以外の物質、例えば
、ステアリン酸マグネシウムのような４！Ｊ滑剤を含む
ことができる。

経「］的投与のための組成物は、不活性希釈剤、例えば
、水または液状パラフィンを含有する製薬学的に許容さ
れうる乳濁液、溶液、懸濁液、シロンブまたはエリキシ
ルを使用することができる。これらの組成物は、また、
希釈剤以外の物質、例えば、湿ｎ￥１剤、４１゛味剤ま
たは香味剤を含有することができる。

非経口的投与のための組成物は、水性もしくは非水性の
溶液、懸濁液または乳濁液であることができる。溶媒ま
たは賦形剤として、プロピレングリコール、ポリエチレ
ングリコール、植物油、ことにオリーブ油、注射可能な
エステル、例えば、オレイン酸エチル使用することがで
きる。

これらの組成物は、また、添加剤、ことに湿潤剤、乳化
剤および分散剤を含有することができる。滅菌は種々の
方法で、例えば１．Ｗ菌学的フィルター、滅菌剤の組成
物への混入、照射または加熱により実施することができ
る。それらは、また、使用時に注射可能な無菌媒質中に
溶解することができる無菌の固体組成物の形態で調製す
ることができる。

経直腸的に投与するための組成物は生薬であり、これは
、活性成分に加えて、賦形剤、例えば、カカオバターま
たは半合成トリグリセリド類を含有することができる。

以下の実施例は、本発明による組成物を例示する。

実施例Ａ ２５ｍｇ（７）投与量（７）５５Ｉ８５　　ＲＰを含有
しかつ次の組成を有する錠剤を通常の技術に従い調製す
る： ５５１８５　　ＲＩ’　　　　　　　　　　０．０２５
ｇＶ粉　　　　　　　　　　　　　　０．０９０ｇ沈殿
シリカ　　　　　　　　　　　　０．０３０ｇステアリ
ン酸マグネシウム　　　　０．００５ｇ夫施澤１ 次の組成を右する非経口的投与のための溶液を通常の技
術に従いＡ製する： ５５１８５　　ＲＰ　　　　　　　　　Ｏ，５ｇ注射溶
液　　　　　　　　　　　　５ｃｅ丈鵠湾Ｓ ２５　ｍ　ｇの投与量の５９４５１　　ＲＰを含有しか
つ次の組成を有する錠剤を通常の技術に従い調製する： ５９４５１　　ＲＰ　　　　　　　　　　Ｏ，０２５ｇ
戯粉　　　　　　　　　　　　　　０．０９０ｇ沈殿シ
リカ　　　　　　　　　　　　０．０３０ｇステアリン
酩マグネシウム　　　　ｏ　、００５ｇ実施例り 次の組成を有する非経口的投与のための溶液を通常の技
術に従い調製する： ５９４５１　　ＲＰ　　　　　　　　　Ｏ，５ｇ注射溶
液　　　　　　　　　　　　５ｃｃ

【図面の簡単な説明】

第１図は、５５１８５　　ＲＰの紫外線スペクトルを示
す。 第２図は、５５１８５　　ＲＰの赤外スペクトルを示す
。 第３図は、５９４５１　　ＲＰの紫外線スペクトルを示
す。 第４図は、５９４５１　　ＲＰの赤外スペクトルを示す
。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｘは塩素（５５１８５　ＲＰ）または水素（５９
   ４５１　ＲＰ）である、 の免疫抑制シクロデプシペプチド。 ２、次の性質： それは白色ないし淡黄色の非晶質粉末であり、メタノー
   ル、エタノール、酢酸エチル、アセトン、アセトニトリ
   ル、ジメチルホルムアミド、およびジメチルスルホキシ
   ド中に可溶性であり、そして水、エチルエーテル、およ
   びヘキサン中に不溶性であり； その実験式はＣ＿４＿６Ｈ＿４＿６ＣｌＮ＿７Ｏ＿１＿
   ２であり； その元素組成はほぼＣ％＝５８．２９、Ｈ％＝５．３０
   、Ｃｌ％＝３．８４、Ｎ％＝１０．１３および０％：２
   ２．５７であり； その融点は３００℃以上であり； メタノール中で決定した、その旋光度（Ｃ＝０．５）は
   、［▲数式、化学式、表等があります▼であり； メタノール中のその紫外線スペクトルは、２３０ｎｍに
   肩および２７４ｎｍに吸収最大を示し（Ｅ＾１％＿１＿
   ｃ＿ｍ＝２１９；ε＝２０２４０）； ＫＢｒとの混合物の錠剤を使用して決定した、その赤外
   スペクトルは、次の吸収帯を示す： ３３８０、３３００、３０９０、３０６０、３０３０、
   ２９８０、２９４０、２８８０、２７００、２５００、
   ２３４０、２１６０、１９５０、１８８０、１７４０、
   １６８０、１６５５、１６２５、１６０５、１５５５、
   １５２０、１５００、１４５５、１４４０、１４２５、
   １４０５、１３８０、１３４０、１３１０、１２８５、
   １２１５、１２０５、１１６０、１１２０、１０８０、
   １０６０、１０５０、１０３０、１０１０、１０００、
   ９８０、９５０、９２５、９００、８５０、７９５、７
   ８５、７５０、７００、６９０、６３５、６２５、６０
   ５、５８０、５２５、５１０、４９５、４５５、４５０
   および３５５ｃｍ＾−＾１；そして 溶媒として１，２−ジクロロエタン／メタノール（８０
   ：２０容量）を使用する、シリカゲルの上昇薄層クロマ
   トグラフィーにおいて、それは０．５のＲｆを有する； を有し、５５１８５　ＲＰと表示される免疫抑制物質。 ３、次の性質： それは白色ないし淡黄色の非晶質粉末であり、メタノー
   ル、エタノール、酢酸エチル、アセトン、アセトニトリ
   ル、およびジメチルスルホキシド中に可溶性であり、そ
   して水、エチルエーテルおよびヘキサン中に不溶性であ
   り； その実験式はＣ＿４＿６Ｈ＿４＿７Ｎ＿７Ｏ＿１＿２で
   あり； その元素組成はほぼＣ％＝６２．０９、Ｈ％＝５．３２
   、０％＝２１．５７およびＮ％＝１１．０２であり； その融点は２７５〜２８０℃（分解を伴なう）であり； メタノール中で決定した、その旋光度は、［α］＾２＾
   ０＿Ｄ＝＋２４．３±１°であり； メタノール中のその紫外線スペクトルは、２６８ｎｍに
   吸収最大を示し（ε＝１９８６４）； ＫＢｒとの混合物の錠剤を使用して決定した、その赤外
   スペクトルは、次の吸収帯を示す： ３３６０、３４８０、３４００、３２８０、３０６０、
   ３０４０、２９８０、２９４０、２８８０、２６８０、
   ２５２０、２１６０、２０６０、１９５０、１８８０、
   １７４０、１６７５、１６５５、１６４０、１６２５、
   １６０５、１５５５、１５３０、１５００、１４５５、
   １４４５、１４１５、１３８０、１３４０、１３１０、
   １２９５、１２７５、１２４５、１２３０、１１９０、
   １１７０、１１４５、１１１０、１０９０、１０７０、
   １０６０、１０４０、１０３０、１０００、９９０、９
   ７０、９６０、９３０、９２０、８８５、８７０、８５
   ０、８３０、７８５、７５０、７４０、７００、６９０
   、６４５、６２０、６０５、５８５、５５０、５２０、
   ５０５、４７０、４４５、４００、および３３０ｃｍ＾
   −＾１； を有し、５９４５１　ＲＰと表示される免疫抑制物質。 ４、￥ストレプトマイセス￥種（￥Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
   ｃｅｓ￥　ｓｐ）Ｓ−１６３２８（ＣＢＳ　１６２．８
   ６）、その生産性突然変異体を、適当な培地中で好気的
   に培養し、生産された５５１８５ＲＰおよび／または５
   ９４５１　ＲＰを分離および精製することを含んでなる
   ことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の免疫抑制
   物質を調製する方法。 ５、５５１８５　ＲＰを触媒の存在下に約２０℃の温度
   において水素で水素化することを含んでなることを特徴
   とする物質５９４５１　ＲＰを調製する方法。 ６、触媒はパラジウム化木炭である特許請求の範囲第５
   項記載の方法。 ７、反応を酸受容体の存在下に実施する特許請求の範囲
   第５または６項記載の方法。 ８、酸受容体は酸化マグネシウムである特許請求の範囲
   第７項記載の方法。 ９、特許請求の範囲第１〜３項のいずれかに記載の物質
   ５５１８５　ＲＰおよび／または５９４５１　ＲＰの有
   効量と、製薬学的に許容されうる希釈剤または被膜とを
   含有することを特徴とする免疫抑制活性を有する製薬学
   的組成物。