JPS6349083A - 電気細胞融合方法 - Google Patents
電気細胞融合方法Info
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- JPS6349083A JPS6349083A JP19272186A JP19272186A JPS6349083A JP S6349083 A JPS6349083 A JP S6349083A JP 19272186 A JP19272186 A JP 19272186A JP 19272186 A JP19272186 A JP 19272186A JP S6349083 A JPS6349083 A JP S6349083A
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M35/00—Means for application of stress for stimulating the growth of microorganisms or the generation of fermentation or metabolic products; Means for electroporation or cell fusion
- C12M35/02—Electrical or electromagnetic means, e.g. for electroporation or for cell fusion
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、電気的な場を用いて細胞を融合させる方法に
関する。
関する。
一般に電気的な場を用いて細胞を融合する装置及び方法
は、高周波電圧を印加することによって生ずる誘電泳動
（ｄｉｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ： ジエレク
トロフォレーシス）現象を利用して数珠状細胞列を形成
する手段と、パルス電圧により細胞質膜を破壊し融合さ
せる手段とを具備し、各手段から出力される電圧を細胞
懸蜀液中に挿入した電極を介して細胞に印加することに
より、所要の細胞融合を達成するものである。
は、高周波電圧を印加することによって生ずる誘電泳動
（ｄｉｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ： ジエレク
トロフォレーシス）現象を利用して数珠状細胞列を形成
する手段と、パルス電圧により細胞質膜を破壊し融合さ
せる手段とを具備し、各手段から出力される電圧を細胞
懸蜀液中に挿入した電極を介して細胞に印加することに
より、所要の細胞融合を達成するものである。
しかしながら、誘電泳動によって数珠状細胞列を形成せ
しめる場合、その数珠状の配列が、異なる細胞Ａ、Ｂの
配列になればよいが、同じ細胞Ａ、ＡあるいはＢ、Ｈの
配列を形成する場合が少なくない為、融合操作を繰り返
し行ない、雑種ｍ胞Ａ、Ｂを選択採取するか、あるいは
電極表面を広くして、たくさんの数珠状細胞列を形成し
融合させ、雑種細胞Ａ、Ｂを選択採取する等、非効率的
な方法しかなかった。
しめる場合、その数珠状の配列が、異なる細胞Ａ、Ｂの
配列になればよいが、同じ細胞Ａ、ＡあるいはＢ、Ｈの
配列を形成する場合が少なくない為、融合操作を繰り返
し行ない、雑種ｍ胞Ａ、Ｂを選択採取するか、あるいは
電極表面を広くして、たくさんの数珠状細胞列を形成し
融合させ、雑種細胞Ａ、Ｂを選択採取する等、非効率的
な方法しかなかった。
又、平行電極を用いた電気融合においては、細胞の大き
さのばらつきや配列の仕方により細胞に印加される電圧
の大きさか異なるため、常に一定のパルス幅及び電圧を
持つパルス電圧を印加しても、必ずしも再現性良（融合
が生ずるとは限らなかった。
さのばらつきや配列の仕方により細胞に印加される電圧
の大きさか異なるため、常に一定のパルス幅及び電圧を
持つパルス電圧を印加しても、必ずしも再現性良（融合
が生ずるとは限らなかった。
本発明の目的は上記に係る点に鑑みなされたしので、細
胞融合を効率よく、しかも確実に行なう細胞融合方法を
提供することである。
胞融合を効率よく、しかも確実に行なう細胞融合方法を
提供することである。
本発明の特徴とするところは、細胞懸濁液中に挿入され
る可動電極の各々に異種細胞を夫々支持せしめ、次いで
それら細胞同士を接触せしめてから電圧を印加すること
により、異種細胞間の雑種融合細胞を確実に再現性良く
融合操作を行なうものである。
る可動電極の各々に異種細胞を夫々支持せしめ、次いで
それら細胞同士を接触せしめてから電圧を印加すること
により、異種細胞間の雑種融合細胞を確実に再現性良く
融合操作を行なうものである。
以下、本発明の実施例を図面を参照して詳細に説明する
。
。
第１図は、アクチュエータによって電極を可動させて、
融合操作を行なった動作説明図であり、図中、（１３ａ
）（１３ｂ）は白金等から成３電極である。（１４ａ）
（１４ｂ）はア・クチュエータであり、左右に摺動し得
るように構成されている。（１７ａ）（＋７ｈ）は連結
体であり、該電極（１３ａ）（１３ｂ）とアクチュエー
タ（１４ａ）（１４ｂ）とを連結するものである。
融合操作を行なった動作説明図であり、図中、（１３ａ
）（１３ｂ）は白金等から成３電極である。（１４ａ）
（１４ｂ）はア・クチュエータであり、左右に摺動し得
るように構成されている。（１７ａ）（＋７ｈ）は連結
体であり、該電極（１３ａ）（１３ｂ）とアクチュエー
タ（１４ａ）（１４ｂ）とを連結するものである。
（１１）は誘導電圧出力装置であり、その周波数が１０
０Ｈｚ −１００ＭＨｚで振幅が約２Ｖ程度のパルス電
圧を出力する。（１２）は刺激パルス電圧出力装置であ
り、電位勾配５０〜１５０Ｖ／ａｍの矩形波パルスを出
力し、隣り合った細胞の融合を起こさせるものである。
０Ｈｚ −１００ＭＨｚで振幅が約２Ｖ程度のパルス電
圧を出力する。（１２）は刺激パルス電圧出力装置であ
り、電位勾配５０〜１５０Ｖ／ａｍの矩形波パルスを出
力し、隣り合った細胞の融合を起こさせるものである。
切り換えスイッチ（１５）は、誘電泳動電圧出力装置（
１１）と刺激パルス電圧出力、装置（１２）の電極に対
する出力を切り換えるスイッチである。尚、図中、融合
室及び細胞懸濁液は省略した。
１１）と刺激パルス電圧出力、装置（１２）の電極に対
する出力を切り換えるスイッチである。尚、図中、融合
室及び細胞懸濁液は省略した。
次に、第１図に示す実施例の動作を説明する。
第１図（ａ）に於いて切り換えスイッチ（１５）を誘導
電圧出力装置（１１）に設定し、電極（１３ａ）（１３
ｂ）間に交流電圧が印加される。それぞれの電極に所定
の細胞が付着した後、電極（Ｈａ）（’１３ｂ）を狭め
ていく。第１図（ｂ）の様に、細胞Ａ。
電圧出力装置（１１）に設定し、電極（１３ａ）（１３
ｂ）間に交流電圧が印加される。それぞれの電極に所定
の細胞が付着した後、電極（Ｈａ）（’１３ｂ）を狭め
ていく。第１図（ｂ）の様に、細胞Ａ。
Ｂが隣接した所で、アクチュエータ（１４ａ）及び（１
４ｂ）を停止させ、刺激パルス電圧発生装置に切り換え
る。印加された刺激パルス電圧（Ｖ）は、互いに接触し
た細胞間に印加されるため、細胞膜１枚あたり（Ｖ／４
）の電圧が確実に加わり、このため第１図（Ｃ）に示す
如く、細胞は再現性良く確実に融合を行なう。切り換え
スイッチ（１５）を切り、第１図（ｄ）に示す如（、電
極をアクチュ二一夕を動作させて離し、融合細胞を取り
出す。
４ｂ）を停止させ、刺激パルス電圧発生装置に切り換え
る。印加された刺激パルス電圧（Ｖ）は、互いに接触し
た細胞間に印加されるため、細胞膜１枚あたり（Ｖ／４
）の電圧が確実に加わり、このため第１図（Ｃ）に示す
如く、細胞は再現性良く確実に融合を行なう。切り換え
スイッチ（１５）を切り、第１図（ｄ）に示す如（、電
極をアクチュ二一夕を動作させて離し、融合細胞を取り
出す。
次に、ｉｔ極を回転させて融合操作を行なう実施例を第
２”図を参照して詳細に説明する。
２”図を参照して詳細に説明する。
誘電泳動電圧出力装置（２１）、刺激パルス電圧出力装
置（２２）、切り換えスイッチ（２５）は、第１図に示
すものと同様の機能を有する。電極（２３ａ）（２３ｂ
）は、誘電泳動電圧出力装置（２１）及び刺激パルス電
圧出力（２２）に切り換えスイッチ（２５）を介して接
続されている。第１図と同様、融合室及び細胞懸濁液は
省略した。
置（２２）、切り換えスイッチ（２５）は、第１図に示
すものと同様の機能を有する。電極（２３ａ）（２３ｂ
）は、誘電泳動電圧出力装置（２１）及び刺激パルス電
圧出力（２２）に切り換えスイッチ（２５）を介して接
続されている。第１図と同様、融合室及び細胞懸濁液は
省略した。
電極（２３ａ） （２３ｂ）は、中心（２０）を中心と
して回転運動を行なう。■は駆動手段である。この駆動
手段■は、電動機等を用いるものとする。この回転力を
連結体を設けて伝達し、電極（２３ａ）（２３ｂ）を回
転させるものである。
して回転運動を行なう。■は駆動手段である。この駆動
手段■は、電動機等を用いるものとする。この回転力を
連結体を設けて伝達し、電極（２３ａ）（２３ｂ）を回
転させるものである。
電極（２３ａ）（２３ｂ）を回転させ、所定の細胞Ａ。
Ｂ１．：電極をそれぞれ近づける。次に誘電泳動電圧出
力装置（２１）の出力により、細胞を各々電極に付着支
持させる。更にこの電極を回転させ、第２図（ｂ）の゛
ように細胞Ａ、Ｂが隣り合うようにする。隣り合ったと
ころで刺激パルス電圧出力装置（２２）に出力を切り換
えて、この出力パルス電圧で、第２図（Ｃ）に示すよう
に融合させる。
力装置（２１）の出力により、細胞を各々電極に付着支
持させる。更にこの電極を回転させ、第２図（ｂ）の゛
ように細胞Ａ、Ｂが隣り合うようにする。隣り合ったと
ころで刺激パルス電圧出力装置（２２）に出力を切り換
えて、この出力パルス電圧で、第２図（Ｃ）に示すよう
に融合させる。
融合後、電極（２３ａ）（２３ｂ）を回転させ、融合細
胞Ａ、Ｂから電極を離すものである。
胞Ａ、Ｂから電極を離すものである。
次に、電極表面にテフロン等の誘電材料をコーティング
することによって誘電体層を形成し、その表面に細胞の
直径以下の孔を開けた電極を用いることによって構成さ
れた実施例を第３図に示す。
することによって誘電体層を形成し、その表面に細胞の
直径以下の孔を開けた電極を用いることによって構成さ
れた実施例を第３図に示す。
誘電泳動電圧出力装置（３１）、刺激パルス電圧出力装
置（３２）、及び切り換えスイッチ（３５）は、第１図
に示した実施例と同様の機能を有する。
置（３２）、及び切り換えスイッチ（３５）は、第１図
に示した実施例と同様の機能を有する。
電極（３３ａ） （３３ｂ）は、切り換えスイッチ（３
５）を介して誘電泳動電圧出力装置（３１）、及び刺激
パルス電圧出力装置（３２）に接続されている。
５）を介して誘電泳動電圧出力装置（３１）、及び刺激
パルス電圧出力装置（３２）に接続されている。
電極（３３ａ） （３３ｂ）は円筒形をしており、その
中心点（３１０）を中心に回転する。駆動手段■は、モ
ーター等の回転機能を有するものを示す。駆動手段■の
出力が、直接あるいは連結体を介して伝達され、電極Ｃ
３３ａ） （３３ｂ）を回転させる。
中心点（３１０）を中心に回転する。駆動手段■は、モ
ーター等の回転機能を有するものを示す。駆動手段■の
出力が、直接あるいは連結体を介して伝達され、電極Ｃ
３３ａ） （３３ｂ）を回転させる。
電極（３３ａ） （３３ｂ）には、誘電体層が形成され
ている。誘電体層（３８）には、孔（３１Ｍ）が開いて
いる。
ている。誘電体層（３８）には、孔（３１Ｍ）が開いて
いる。
次に、第３図の動作を説明する。
誘電泳動電圧出力装置（３１）の出力が、電極（３３ａ
）（３３ｂ）に印加されると、電界は孔（３Ｍ）に集中
し、細胞Ａ、Ｂが孔（３Ｍ）にそれぞれ付着支持される
。次に駆動手段■を駆動し、電極（３３ａ）（３３ｂ）
を回転させミ第３図（ｂ）のようにする。次に刺激パル
ス電圧出力装置（３２）に接続を切り換え、第３図（Ｃ
）に示すように融合させる。融合した後、駆動手段■を
駆動させ、融合細胞Ａ。
）（３３ｂ）に印加されると、電界は孔（３Ｍ）に集中
し、細胞Ａ、Ｂが孔（３Ｍ）にそれぞれ付着支持される
。次に駆動手段■を駆動し、電極（３３ａ）（３３ｂ）
を回転させミ第３図（ｂ）のようにする。次に刺激パル
ス電圧出力装置（３２）に接続を切り換え、第３図（Ｃ
）に示すように融合させる。融合した後、駆動手段■を
駆動させ、融合細胞Ａ。
Ｂを電極（３３ａ）（３３ｂ）から離す。第３図に示し
た実施例は、電極に付着しがちな細胞が、誘電体層に邪
魔されることから付着が阻止でき、より確実な融合方法
として示される。
た実施例は、電極に付着しがちな細胞が、誘電体層に邪
魔されることから付着が阻止でき、より確実な融合方法
として示される。
尚、電極の形状あるいは駆動手段は、上記実施例に於い
て省略した融合室及び細胞！Ｑ濁液の形状又は、状態に
応じ適宜選択されるものであるが、融合室が小さい場合
などは、駆動手段を外部に設け、外部から電極を可動け
しめてもよい。
て省略した融合室及び細胞！Ｑ濁液の形状又は、状態に
応じ適宜選択されるものであるが、融合室が小さい場合
などは、駆動手段を外部に設け、外部から電極を可動け
しめてもよい。
又、上記実施例では、１対の細胞融合のみを取り扱った
が、電極を多数並べて細胞懸濁液中に配置せしめること
により、複数の細胞を同時に融合させることも可能であ
る。
が、電極を多数並べて細胞懸濁液中に配置せしめること
により、複数の細胞を同時に融合させることも可能であ
る。
以上詳述の如く、本発明電気細胞融合方法によれば、電
極の各々に異種細胞を夫々支持せしめ、次いでそれら細
胞を接触させた後に融合電圧を印加するため、確実に乙
から効率よく融合動作を行なうことができる等の効果を
有するものである。
極の各々に異種細胞を夫々支持せしめ、次いでそれら細
胞を接触させた後に融合電圧を印加するため、確実に乙
から効率よく融合動作を行なうことができる等の効果を
有するものである。
第１図乃至第３図は、それぞれ本発明の実施例に於ける
融合過程を示す説明図である。 （１１）（２１）（３１）・・・・・・・・・・・・誘
電泳動電圧出力装置、（１２）（２２）（３２）・・・
・・・・・・・・・・刺激パルス出力装置、（１３ａ）
（１３ｂ）、（２３ａＸ２３ｂ）、（３３ａ）（３３ｂ
） ・・・・・・導７Ｆｉ題、（１４）（２４）・・・
・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・アクチ
ュエータ、（１５）（２５）（３５）・・・・・・・・
・・・・・切り換えスイッチ、（１７ａ）（１７ｂ）・
・・・・・・・・・・・・・・・・・・連結部、Ａ、Ｂ
・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
・・・・・・・・細胞、（３８）・・・・・・・・・・
・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
・誘電体、（３１０）・・・・・・・・・・・・・・・
・・・・・・・・・・・・・・・・・・中心、■、■
・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
・・・・・・駆動手段。
融合過程を示す説明図である。 （１１）（２１）（３１）・・・・・・・・・・・・誘
電泳動電圧出力装置、（１２）（２２）（３２）・・・
・・・・・・・・・・刺激パルス出力装置、（１３ａ）
（１３ｂ）、（２３ａＸ２３ｂ）、（３３ａ）（３３ｂ
） ・・・・・・導７Ｆｉ題、（１４）（２４）・・・
・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・アクチ
ュエータ、（１５）（２５）（３５）・・・・・・・・
・・・・・切り換えスイッチ、（１７ａ）（１７ｂ）・
・・・・・・・・・・・・・・・・・・連結部、Ａ、Ｂ
・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
・・・・・・・・細胞、（３８）・・・・・・・・・・
・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
・誘電体、（３１０）・・・・・・・・・・・・・・・
・・・・・・・・・・・・・・・・・・中心、■、■
・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
・・・・・・駆動手段。
Claims (1)
- （１）少なくとも１対の可動電極の各々に異種細胞を夫
々支持せしめ、次いでこれら可動電極を動かすことによ
りそれらの細胞を接触させた後、細胞の融合を行なわせ
ることを特徴とする電気細胞融合方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61192721A JPH074216B2 (ja) | 1986-08-20 | 1986-08-20 | 電気細胞融合方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61192721A JPH074216B2 (ja) | 1986-08-20 | 1986-08-20 | 電気細胞融合方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6349083A true JPS6349083A (ja) | 1988-03-01 |
| JPH074216B2 JPH074216B2 (ja) | 1995-01-25 |
Family
ID=16295959
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61192721A Expired - Lifetime JPH074216B2 (ja) | 1986-08-20 | 1986-08-20 | 電気細胞融合方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH074216B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0607178A4 (en) * | 1991-09-05 | 1995-12-27 | Fucell Pty Ltd | Methods for the selection, separation and fusion of cells. |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60251876A (ja) * | 1984-05-30 | 1985-12-12 | Hitachi Ltd | 細胞融合装置 |
-
1986
- 1986-08-20 JP JP61192721A patent/JPH074216B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60251876A (ja) * | 1984-05-30 | 1985-12-12 | Hitachi Ltd | 細胞融合装置 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0607178A4 (en) * | 1991-09-05 | 1995-12-27 | Fucell Pty Ltd | Methods for the selection, separation and fusion of cells. |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH074216B2 (ja) | 1995-01-25 |
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