JPS609491A - 細胞を融合させるための方法および装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、融合室内において細胞懸濁液中に存在してい
る１（１１胞を外力を加えることによって相互に僅かな
間隔に位ぼさせ、互いにＬ％？接し合つゾζ細胞の＋１
＜＜構造内に外力を加えることによって、これらの瞬接
し合った細胞間に膜橋絡を形成させかつ細胞を融合させ
る、破ｊ−萼を誘起させる様式の、細胞を融合させるだ
めの方法および装置に関する。

懸濁液中の二つの細胞は、これらが互いに接触し合い、
これら両イ用胞の膜間に狭い接触が生じた際、互いに融
合し合うようになる。なぜなら膜内の第１４造要素が移
動性であるからである。

細胞のこのような自然の融合（フュージョン）は自然の
条件下では観察できないか　、極めて稀れにしか観、察
されない。公知の例外としてあげられるのは、性的な生
殖の際のオ′１°ｊ子芽細胞による卵細胞の受鞘である
。自然７７’ｄｌｊ合は焙Ｂ’ｉ’Ｊ’質および他のｌ
ｉ４％要素の負の電荷によって妨げられる。

この融合は、細胞が僅かな間隔に近接した際卸１胞の剥
離を招く。しかし、細Ｊｉｉ＋ｊ、　）ｉｉ！ｌ！合に
は、両膜が１０〜７ｔＭよりも小さな間隔に接近するこ
とが必要である。

技術的な手段で実施される細胞の融合は広い適用範囲で
使用可能である。即ち、大多数の細胞が互いに溶は合う
と云うことは生医学的な研究にとって極めて電装である
。多くの鳴合によっては大多数の１ｔ１１１胞−例えば
１０００〜１゜０００の面球−を融合させることによっ
て生じる大きｆｌ　、ｊ４１１胞の大きさが適当である
場合、微少電極、微少圧力測定ゾンデおよび他のセンサ
を膜の不可逆的な破壊を招くこと外くこれらの大きな細
胞に２つ一人することが可能である。この場合、センサ
を介して直接仙１胞列卦よび膜機能を４１”！握すると
云う技術は、臨床的な診断学、例えば病気の早期発情並
びに一般に基礎研究にとって重要である。

更に、細ｌｉｔ！融合の技術は、素姓の異なる二つの、
細胞を１Ａ・ｋ合させることによって雑種ａｔ　Ｊｌｆ
ｙの形成に使用できる。この場合、植物細胞から成る−
再び全植物の生育が可能な一細胞混成物或いは動物細胞
から成る−例えば腫瘍および白１ｆｌ′Ｌ病に対するモ
ノクロナーレ抗体を得ることのできる一細胞混成物を形
成することが可能である。例としてはリンパ細胞と骨髄
肝細胞との融合が掲げられるが、この融合は特に医学的
なおよび薬学的な観点から極めて有意義である。

成るリンパ細胞は器管にあって異種物質、例えば血管を
介して注射される異種蛋白質に対して抗体を形成する。

リンパ細胞を単離し、これを例えば骨髄肝細胞のような
腫瘍細胞と融合させると、両親細胞の性質を有するいわ
ゆる雑種細胞が形成する機会が生まれる。この細胞は抗
体、しかも特に当該異種物質に対してのみ抗体（いワユ
ルモノクロナーレ抗体）を生産する。この細胞は不死で
あり、例えばリンパ細胞のように通常の選別した細胞と
は異り永久に培養地で増殖することが可能である。

冒頭に記載した様式の細胞の融合方法は、ｒＢｌｏｃｈ
ｌｍｌｃａ　ｅｔ　Ｂｌｏｐｈｙｓｌｃａ　Ａｃｔａ、
６９４巻（１９８２）、２２７〜２７７頁（（−Ｋｌｅ
ｃｔｒ（ｃＦｉｅ１４−ＭｅｄＩａｔｅｄ　ＦｕＥｔｌ
Ｏｎ　ａｎｄ　ＲｅｌａｔｅａＢｌｅｃｔｒｉｃａＩＰ
ｈｅｎｏｍｅｎａ　（電気的な場を仲介とする融合とこ
れと関連する電気的な現象）」の表題の下でのＵ、　Ｚ
ｌｍｍｅｒｍａｎｎの論文」から公知である。この公知
の方法−この方法の経過は顕微鏡下で観察可能である−
にあっては、少なくとも二つのイＩＩＩ胞間の脱接触は
弱い異質の交番する場を印加することによって形成され
る。

この電気的な場によって一細胞内の分極化プロセスによ
って条件ずけられはするが一二極が生成され、この二極
は、細胞が電気的な場において移動する間に互いに近接
した場合（いわゆるジエレクトロフォレーゼ覗、象が生
じた場合）、互いに引き合う。細胞列が形成された後、
隣接し合っている細胞間の膜構造内での破壊が電気的な
破壊パルスによって生じる（　Ｊ、　Ｍｅｍｂｒａｎ旧
０１．６７　、１６５−１８２（１９８２）、Ｅｌ、ｅ
ｃｔｒｉｃＦｌｅ：Ｌｄ−■ｎｄｔｔｃｅｄ　０ｅｌｊ
−ｔｏ　Ｃｅ１ｌ　Ｆｕｓｌｏｎ　（電場導入による計
１胞間融自）の標題のもとでのＵ。

Ｚｌｍｍｅｒｍａｎｎ　およびＪ、　Ｖｌｅｎｋｅｎ　
の論文参照）。

との場合、−従来のモデル現出により−１！Ｉ′ｌｒ接
し合っている細胞の膜接触帯域内に孔が生じ、これらの
孔は両糾胞囲の細胞形質的連続と隣接し合っている細胞
の膜間の脂質の橋絡を誘起する。脂質分子はもはやその
元の膜内に整列しない。橋絡が形成するや否や、エネル
ギー上の理由から、脂質橋絡を介して互いに結合し合っ
ている細胞から成る形成された形成体の円味化が行われ
る。

しかし、ディエレクトロフォレーゼにょるイ：１１胞の
集合の公知の方法を実施する際には、細胞がこの方法の
実施の間存在している溶液が可能な限り僅かに導電性で
なければならない。もし、そうでない場合は熱の発生が
高くなシすぎ、これによって互いに隣接し合っている細
胞間の狭い膜接触の乱れと破壊とが生じるからである。

これは、はんの僅かに導η゛ε性の溶液でも赴１胞にと
っては許容しがたいものであるか、或いはＷ「容できた
としても備かなイソ腹であシ、シたがって＃ｌｉｌ胞は
イイ１かに導電性の媒質内では障害をとおむり、これは
特に卸１胞の寿命を阻害する。

更に、二つの細胞の膜間の間ＩＴｈが僅か々」ハ合生じ
る電気的な反わ）力をポリエチレングリコール（ｐｉＧ
）或いは不活性のウィルスのような一定の化学物質を使
用することによって排除することも公知である。ウィル
スもＰＦｉＧも両方の細胞膜を交錯させる。しだがって
緊密な膜接触が生じる。同時に１ウイルスおよびＰＥＧ
によって膜構造内の破壊が生じ、この破壊は非生理学的
な条件の調節、例えば高濃度のカルシウムイオンの添加
および極めて高い或いは低いｐＨ−価の選択によって更
に増強される。これらの破壊によって、膜接触帯域内に
おいて孔が形成され、これによシ隣接し合っている細胞
膜間の燐脂質橋絡の形成が起る。これは、新しい単位の
形成下に両細胞の融合を誘起する。

しかし、上に述べた公知の方法を実施するにあたって、
互いに融合されるべき細胞の数は制御できない。一方で
は細胞を含んでいる溶液内におけるあまりに僅かな細胞
密度は例等の融合製品も生じない。なぜなら１ｉｌｊ胞
が互いに接触し合ないからである。他方では融合にとっ
て十分な細胞密度−これは細胞を含んでいる溶液を遠心
分離することＫよっても達せられるーは規制しがたく２
倍、３倍、４倍或いは多重倍の個別細胞から成る生成物
を産む。

特に、素姓の異る二つの細胞のみを融合させることによ
る雑種細胞の形成の点で、最後に述べた公知の方法は極
めて不満足なものである。

なぜなら、性質の新規の組合せを治する細胞混成物ｉ１
：公知方法の実施の後途方もなく時間のかかる選択方法
を適用することによって始めて単離されなければならな
いからである。植物細胞から細胞混成物−これらは古び
全植物の育成が可能である−或いは動物からの卸１胞混
成物−これを介して例えば腫瘍および白血病に対するモ
ノクロナーレ抗体を得ることが可能である−を得るには
、それぞれ二つの細胞のみを互いに融合させる融合技術
が心残である。

本発明の課題は、その実施にあたって細胞が導電性の高
い溶液内に存在していてもよく、シかも細胞を融合の本
来の方法段で先ず相互の狭い間隔に置くことのできる、
細胞を融合させるための方法を造ることである。

この課題は本発明によυ以下のようにして解決される。

即ち、ＮＩＬ胞に磁性をもつた粒子を附Ｊｉし、融合室
を貫通する不均一な磁性の場にさらして耐力された細胞
が僅かな相互間隔で集合させ、其後１１％接している１
１１胞の膜構造内において破壊を発生さぜるため細胞に
少くとも破壊電圧の高さの電気的な場のパルスを作用さ
せるか或いはポリエチレングリコールのような月！′！
構造内において破壊を誘起する化学物ｙを作用させるか
或いはＳθｎｒｌａｌ−ウィルスのような膜構造内の破
壊を誘起する不活性化したウィルスを作用させることに
よってｊ’ｔ￥決される。

ＩｖＪＩＩ胞の集合の方法段は一ξれが磁力の作用下に
おいてのみ行われ、電流の存在下においては行われない
ので−一どんな熱発生も伴わずに行われる。この場合、
細胞ｔよ心’ｉｊｉ、性の高い溶治、例えば細胞のだめ
の培養液或いは有するカリウム−濃度が細胞内のイオン
濃度と等しい培養液に懸濁されていてもよい。細胞の融
合が電気的な破壊によって行われる場合Ｋｌ′ｉ、−−
１ｉ１１１＋胞懸濁液の導電性が比較的高いので一＋１
秒の領域のパルス長で十分である。

本発明による方法により、ポリエチレングリコール或い
は５ｅｎｄａｌ−ウィルスを膜構造の破壊に使用１７た
場合二つ戊いは一定数の細胞の規制可能な融合が可能で
ある。この場合、互いに融合されるべき細胞の数は細胞
懸濁液内の所定の細胞密度によっても制ｆＩＩｌｌ可能
である。更に、本発明による方法によって、この「非電
気的な、」との融合方法を破壊を起す物質の配量の点で
比較的正確に検べかつ適正なものとすることも可能であ
る。

特にこのことは１．／ｉ）も高い界磁密度の場所での細
胞の集合を本発明による方法を実施する際に顕微鏡下で
観察できることによって可能となる。

磁性粒子を細胞の表面に載せるのが有利である。この磁
性粒子を可能な限り微細に配分された形で細胞表面に載
せ、冥土細胞懸濁液内に細胞表面に吸着されない個々の
磁性粒子が存在するのを回避するだめ、細Ｊ把をその表
面へのイａ性粒子の吸着を行わせるため磁性粒子をコロ
イド状に溶解して含んでいる溶液中に入れるのが有利で
ある。吸着工程がすっかり終了した後或時間をおいて、
コロイド状溶液内に存在している過剰の磁性粒子を細胞
を遠心処理することによりこの細胞から分離する。

更に、磁性粒子を細胞表面に吸着させずに、細胞内に取
込ませるのが有利である。この目的のため、磁性粒子を
コロイドの形で含んでいる溶液内に存在している細胞膜
の透過性を電気的な界磁パルスを適用することによって
、磁性粒子が細胞内に達するように、高める。即ち、例
えば電解液と７８３０４−粒子を含んでいる細胞懸濁液
を通して約１５　ＫＶ　／　ｅｍと５０　ｌｔｓ　持続
の界磁パルスが適用され、これによってｌＦｅ３０４−
粒子を電解液内に到達させるのに十分な細胞膜の透過性
増強が達せられる。透過性増強が完成した後附加的に表
面に吸着された磁性粒子は等張圧の溶液で細胞を数回洗
うことによって除去される。

磁性粒子としては強磁性の粒子、特にＦθ、ｏ４−粒子
が使用される。

細胞の特別な整向、特に真珠部の様式の細胞の列化を望
む場合は、細胞を磁性の場の最大の界磁密度の領域内で
の集合させた後、細胞の大きさに応じて５　ｋＨ２〜２
　ＭＨｚの領域の周波数と１０　Ｖ　／　ｃｗｒ　〜２
０００　Ｖ　／　ｃｒｎの領域の強さの外部の不均一な
電気的な場に短時間−一般に数秒間−細胞をさらし、細
胞が所定の整向でもって整列するように作業を行う。細
胞が電気的な交番する場の作用を受ける以前に既に磁性
の場の作用によって集合しているので、細胞の゛所望の
整列を達するには電気的な場の作用は短時間でよい。し
たがって、細胞懸濁液およびこれに伴って細胞の加温は
一細胞の列化が同時に達せられる傍ら一十分に回避され
る。

膜構造内の破壊をポリエチレングリコール或いは５ａｎ
ｄａｌ−ウィルスで行う場合は、先ずこの物質を、細胞
を含んでいる懸濁液に添加し、其後細胞を集合させるか
或いは集合させて引続き列に整向させ、次いでカルシウ
ムイオンを細胞の膜内の破壊を起させるために添加する
。冥土、５Ｏｎｄａｌ−ウィルスを使用した場合は、温
度は３７℃に高められる。この方法の場合物質の作用は
細胞の整向後やつと発揮される。

膜＋ｔｉ造内膜内ける破壊を誘起する化学物質或いはウ
ィルスを〔実用して本発明による方法を実施するには、
細胞１’ｉ■濁液を収容するだめの非導電性の壁から形
成された空間を有する室を備え、磁石がこの室にこの室
の空間を不均一な磁場が貫通ずるように設けられている
装置が適している。

磁石としては永久磁石、しかも電磁石或いは例えば界磁
力を実際に零にまで変えることのできる両者の組合せを
適用できる。

細胞の膜ｔ７１・ｉ端内の破壊を電気的な破壊によって
行う本発明による方法の他の構成を実施するには、細胞
懸濁液を収容するだめの非導電性の壁から形成された空
間を有する室が設けられており、この室内に少くとも二
つの電極が、これらの電極間に区画される領域が形成さ
れるように突出しており、この領域内において細胞が電
極間に形成される電気的な場にさらされるように構成さ
れており、かつ磁石がこの室にこの室の空間を不均一な
磁場が貫通するように設けられている装置が適している
。

この装置の有利な実施形は上記両装置の構成にあって、
磁石が室に、空間を貫通する磁場がその最高の密度でも
って室の空間内に突出している磁石の部分に相当するよ
うに、設けられていることである。この場合、市内に突
出している磁石の部分が鋭利な部分或いは縁部を備えだ
極片であるのが有利である。この場合、この極片は同時
に電極の一つであってもよい。

以下に添付図面に図示しだ実施形につき本発明を詳説す
る。

第１図および第２図に図示しだ装置は、細胞破壊を化学
的な物質或いは不活性化されたウィルスによって行う方
法を実施するだめに役立つ。

この装置にあって、室空間１は上方が開いているか或い
は閉じられており、閉じられている場合細胞懸濁液で室
空間を満すことが可能であるように例えば供給導管およ
び排出導管が設けられている。

第３図に図示した装置にあっては、室空間内に二つの行
、４へ２と３が突出しており、これらの電極の間隔ｔよ
処理すべき細胞の種類および大きさに応じて一般に５１
１ｍ〜１０００μｍである。

高い界磁密度を有する磁場を起す磁石の１■極に面した
電極乙は直かにＮ極に面した室壁に当接しているか、或
いはこの壁として形成されている。この電４・１ｉ３に
最大の界磁密度の場所に移Ｍ）する卸１胞が到達する。

この場合、細胞は密なまと７１つ／こ形で集合１−、、
電極を経て導かれる電気的なパルスにより高い破壊電圧
で融合される。

この場合、電イ（ば一般に３００Ｖ’までの（電気的な
破壊のだめの）方形パルスを発生させるための一図示し
なかった装置に接続されている。

Ｘ４■胞を磁、局内において集合の後かつ融合する以前
に真珠の稙のように互いに並べるには、電極に一般に５
０Ｖの出力電圧を有する電気的な交番渦を発生させる装
置が接続されている。

第４図に図示した装置にあっては、磁石の部分−鋭利部
分を有する極片−が室空間１内に突出しておシ、同時に
電極６′として形成されている。この実施形の場合細胞
は電極３′の鋭利部分に直接年金する。

磁石のＮ　ｌ＋ＭもＳ極も室空間１内に突出していてか
つ同時に電極２と５として形成されている装置は第５図
に示した。

第６ａ図と第６１）図には細胞を電気的に処理するため
の室の特別な実施形を示した。室σ〕空間１は基板４に
よって区画されており、室の空間の側壁を形成する０１
！１方部分５が形成されている。空間を上方で区画する
ため被覆板或１／）はシートが設けられている。

空間１内には二つの１［極２と６が突出してネ・す、こ
れらの電極のうち電極ろ′は板状に力）つ比較的大きな
磁透過性を有する材料（軟鉄）７５）ら形成されている
。本発明による方法を実施するため電極３′−例えば棒
磁石との接触−によシ磁力線が導かれ、これによ多空間
１を貫通する磁力線の所望の経過を形成することができ
る。

実施例１ 赤白血病の細胞（フレンド細胞）の表面にＦ　ｅｌ　０
４−粒子（磁鉄鉱）を吸着させた。これに加えて、細胞
懸濁液の１　ｍｅにコロイド状の等張圧のＦｅ５０じ溶
液１００μｔ　を加えた。Ｆθｓ　０４−　Ｂ子の吸着
を高めるため附加的に更に１■のプロナーゼ（或いｔま
デイスパーゼ）を添加し、た（コロイド状のＦｅ５０じ
溶液はＦｅ５０じＰ濁液を０４５μｍ孔径の膜フィルタ
を介して涙過することによって造った）。吸着工程が完
全に終了した後の１１ぼ一時間の潜伏期の後細胞を遠心
分離して過剰のＦｅ５０じ粒子の溶液から分離しブζ。

なぜならコロイド状の溶液内のＦｅ３０じ粒子は遠心分
離不可能であるからである。細胞を引続き等張圧溶液で
洗滌した。

磁性の粒子を耐力された細胞を、４１５％のポリエチレ
ングリコール（ＰＥＷ　：　ＭＷ６０００　）　並びに
１５％のジメチルスルフオキシド（ＤＭＳＯ）を添加し
た等張圧の０．３モルのマンニット溶液中に潜伏させた
。

細胞を第１図に図示した様式の融合室内に入れた。使用
した磁石の磁場の強さはその表面において約１　ｋＧ　
である（明瞭であるように、集合工程は一片の磁化した
鋼板を使用した際に既に、Ｆｅ５０じ粒子を附加した赤
血球で確認された）。

界磁密度が最も強い場所に細胞が集合した後、室空間内
に０３モルのマンニット溶液中の１０ｍＭ　０ａ０４を
含んでいる溶液を慎重に加えた。カルシウムイオンを添
加することによってＰＥＧによる磁化した細胞の融合を
開始した。

実施例２ 実施例１に相応して、Ａｖｅｎａ−８ａｔｉｖａ−Ｐｒ
ｏｔｏｐｌａｓｔに磁鉄鉱粒子を附加し、ＰＥＧで融合
させた。

実施例５ 実施例１に記載したように、赤白血病の細胞に磁鉄鉱粒
子を附加し、磁場に集合させた。しかし、細胞を含んで
いる溶液中にはＰＥ１Ｇは含まれておらず、約２　Ｘ　
１０−３）ＴＡＵ　／　ｍｅ　（血球凝集単位）の不活
性化し九Ｓθｎｄａｌ−ウィルスが含まれている。磁場
に細胞が集合した後、燐酸緩衝された等張圧のＮａＣ７
溶液中の約４ｍＭ／ｌのＣａＣｌ２を含んでいる２倍の
量の溶液を添付した。

引続いて温度を３７℃に上昇させて融合を開始させた。

実施例４ 実施例１に記載したように、Ａｖｅｎａ−Ｅｌａｔｌｖ
ａ−Ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ　に磁鉄鉱粒子を附加し、磁
場に集合させた。懸濁溶液は５　ｍＭ　ＣａＣｌ４と１
■プロナーゼ／　ｍｅ−これはＩ　Ｘ　１０−”Ω−１
×譚！　の導電性に相応−を含んでいる。細胞が集合し
た後、２４００　Ｖ　／　ｃｍのパルスを５００　ｍｅ
　量適用し、このようにして細胞を融合させた。

実施例５ 実施例１に記載したように、Ａｖｅｎａ−８ａｔｌｖａ
−ＰｒＯｔＯｐｌａθｔ　に磁鉄鉱粒子を附加し、磁場
に集合させた。懸濁液は実施例４に記載した組成を有し
ていた。細胞列を形成するため１５００ｋＨ２の周波数
および２００　Ｖ　／　ｃｍの強度の電気的な交番場を
５秒間作用させた。其後、実施例４に記載したように、
電気的なパルス場により融合を行った。

上記の実施例のすべては％’　６　ａ図および第６ｂ図
に図示した様式の室を使用して行った。この場合もちろ
ん実施例１〜３にあっては電圧は加えられていない。

【図面の簡単な説明】

第１図は室の両側に磁棒を有する細胞を収容するだめの
室空間、 第２図は室の片側にのみ磁石を有する室空間、第５図は
宛空間内に電極が突出している様式の第１図による磁石
の配設、 第４図は室空間内に突出していてかつ同時に電極として
形成されている磁石部分を備えた第１図による磁石の配
設、 第５図は両方の磁場が室空間内に突出していてかつ電極
として形成されている様式の第１図による磁石の配役、 第６ａ図は磁石の極片が電気的な場内に突出している様
式の、＃ｌ１１胞を処理するだめの室の平面図、 第６ｂ図は第６ａ図の線Ａ−Ｂに沿った室の縦断面図 図中符号は、 １・・・室 ２．３・・・電極 代理人　江　崎　光　好 代理人　江　ＩＱ　光　史

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、融合室内において細胞懸濁液中に存在している細胞
   を外力を加えることによって相互に僅かな間隔に位置さ
   せ、互いに隣接し合った細胞の膜構造内に外力を加える
   ことによって、これらの隣接し合った細胞間に膜橋絡を
   形成させかつ細胞を融合させる、破壊を誘起させる様式
   の、細胞を融合させるための方法において、細胞に磁性
   をもった粒子を附与し、融合其後陣接している細胞の膜
   構造内において破壊を発生させるため細胞に少くとも破
   壊電圧の高さの１ｂ：気菌な場のノくルスを作用させる
   ７５）或いはポリエチレングリコールのようなｒＩＩＡ
   構造内において破壊を誘起する化学物質な作用させるか
   或いは５ａｎｄａｌ−ウィルスのような膜構造内の破壊
   を誘起する不活性化したウィルスを作用させることを１
   １″ｊ徴とする上記方法。 ２、磁性の粒子を卸１胞の表面に載せる、前記特許請求
   の範囲第１項に記載の方法。 ３、磁性の粒子を細胞内に取込壕せる、前記特許請求の
   範囲第１項に記載の方法。 ４、細胞に磁性の粒子を取込ませるため磁性の粒子を含
   んでいるコロイド状の溶液内に細胞を入れる、前記特許
   請求の範囲第２項或いは第６項に記載の方法。 ５、磁性の粒子が強磁性の粒子である、特許請求の範囲
   第１項から第４項までのうちのいずれか一つに記載の方
   法。 ６、磁性の粒子がＦｅ１Ｏじ粒子である、前記特許請求
   の範囲第５項に記載の方法。 ７、磁場の最も高い界磁密度の領域内に細胞が集合した
   後、細胞に５　ｋＨｖ：〜２ＭＨＧＳの周波数と１０　
   Ｖ　／　ｃｍ　〜２０００　Ｖ　／　ｃｍの強さの不均
   一な外部の電気的な場をこの細胞の大きさにＸ　応じて
   短時間、細胞が一定の整向で並列するように、作用させ
   る特許請求の範囲第１項から第６項棟でのうちのいずれ
   か一つに記載の方法。 ８、膜ｆ；り膜内の破壊をポリエチレングリコールを使
   用して行う場合、先ず細胞を含んでいるＫＳ　ｆＢ液に
   ポリエチレングリコールを添加し、其後細胞を磁、腸内
   に集合させるか或いは集合させて並列させ、次いで細胞
   の膜内の破壊を誘起させるためカルシウムイオンを特徴
   する特許請求の範囲第１項から第７項までのうちのいず
   れか一つに記載の方法。 ９、膜構造内の破壊を不活性化した５ｅｎｄＩｎ　ウィ
   ルスを使用して誘起させる場合、先ずこのウィルスを細
   胞を含んでいる懸濁液に添加し、其後細胞を磁場に集合
   させるか、或いは集合させてかつ並列させ、次いで細胞
   の膜内の破壊を誘起させるためにカルシウムイオンを添
   加する、ｔｒｖ許請求の範囲第１項から第７項までのう
   ちのいずれか一つに記載の方法。 １０、細胞懸濁液を収容するだめの非導電性の壁から形
   成された空間を備えた室が設けられている様式の、膜構
   造の破壊を誘起する化学物質或すはウィルスを使用して
   細胞融合を行うだめの方法を実施する装置において、室
   の空間（１）を不均一な磁場が貫通ずるように室に磁石
   が設けられていることを特徴とする、上記細胞融合装置
   。 １１、細胞懸濁液を収容するだめの非導電性の壁から形
   成された空間を備えだ室が設けられておシ、この室内に
   少くとも二つの電極が、これらの電極間において区画さ
   れる領域が形成されるように突出しており、この領域内
   において細胞がこれらの電極間に形成される電気的な場
   の作用を受けるように構成されている、細胞の膜構造の
   破壊を電気的な破壊を適用して行う細胞融合方法を実施
   するだめの装置において、室の空間を不均一な磁場が貫
   通するように構成されていることを特徴とする、上記装
   置。 １２、空間（１）を貫通する磁場のその最大の界磁密度
   が室の空間内に突出している磁石の部分に相当するよう
   に構成されている、前記４・）許請求の範囲第１１項に
   記載の装置。 １５、磁石の空間内に突出している部分が鋭利部分或い
   は縁部を有する極片（５）である、前記！１−ケ許請求
   の範囲第１２項に記載の装置。 １４、極片（５）が同時に電極である、前記！庁￥［請
   求の範囲第１３項に記載の装置。 １５、磁石が永久磁石或いは電磁石である、特許請求の
   範囲第１１更から第１４項一までのうちのいずれか一つ
   にＮＬｒ　ｆｆ’ｇの装置：ｊ　。 １６、磁石が永久磁石と′電磁石との組合せ体から成る
   、特許請求の範囲第１１項から第１５項までのうちのい
   ずれか一つに記載の装置。