JPS634804B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は血小板凝集抑制剤に関する。

プロトピン（Protopine）はPapaverac−eae
やFumariaceae属の植物成分として知られてい
るが、本発明者らの研究の結果強力な血小板凝集
阻止作用を有することが判つた。

次にその作用に関する実験を例示する。

実験１ 延胡索塊茎より抽出精製したプロトピンを用い
てその血小板凝集抑制作用を調べた。

材料および方法 プロトピンはジメチルスルフオキサイドに溶解
し実験に用いた。対照には溶媒のジメチルスルフ
オキサイドを用い、陽対照として、アスピリンの
ジメチルスルフオキサイド溶液を用いた。血小板
の凝集誘発剤として最終濃度0.05μMのアデノシ
ン２リン酸生理食塩溶液（以下ADPという）を
用いた。

血小板の調整：体重200ｇ前後の雄ラツトをエ
ーテル麻酔下に心臓より全採血し、50U／mlのヘ
パリンを1/10量加えて軽くふりまぜ、1200rpm10
分間遠沈し、上清をplateletri−ch plsma（以後
PRPという）とした。さらに沈渣を3000rpm30分
間遠沈し、上清をplatelet poor plasma（以後
PPPという）とした。

方法：血小板凝集メーターを使用し、血小板凝
集による吸光度の変化を経時的に記録した。すな
わち0.2mlのPRPをとりPPPとの吸光度の差を一
定に調整した後、PRPに検液及び対照溶媒10μ
を加えて撹拌を開始し（1200rpm）１分後に
ADP5μを加え、吸光度の変化を記録した（第
１図）。

結果：第１図にみられるごとくアスピリン
1000μｇ／mlでは対照に較べて約８％吸光度の変
化が抑制され、また経時的にみた場合対照に較べ
てわずかに吸光度の復帰が早い傾向がみられた。
プロトピンでは50μｇ／mlで、アスピリン1000μ
ｇ粉mlよりやや吸光度変化が抑制され、経時的な
吸光度の復帰も同様にみられた。そして100μ
ｇ／ml、250μｇ／ml、500μｇ／mlと濃度に従が
つて吸光度の変化は抑制され、経時的な復帰も著
明となつた。

以上のことからプロトピンは50μｇ／mlでアス
ピリン1000μｇ／mlと同等またはすぐれた血小板
凝集抑制、解離の効果をもち、500μｇ／mlでは
凝集を著明に抑制し、かつ完全に解離させること
がわかつた。

考察：プロトピンは血小板凝集の最も直接的な
誘発剤であるアデノシン２リン酸による血小板凝
集をアスピリンの1/20の濃度でほぼ同等に抑制す
る力価を有し、血栓形成をおさえるすぐれた薬物
となることが考えられた。

実験２ 材料および方法 プロトピンはジメチルスルフオキサイドに溶解
し実験に用いた。対照には溶媒のジメチルスルフ
オキサイドを用い、陽対照としてアスピリンのジ
メチルスルフオキサイド溶液を用いた。

血小板の凝集誘発剤としては、コラーゲンを用
いた。

血小板の調整：体重200ｇ前後の雄ラツトをエ
ーテル麻酔下に心臓より全採血し、50U／mlのヘ
パリンを1/10量加えて軽くふりまぜ1200rpm10分
間遠沈し上清をplatelet rich plasma（以後PRP
という）とした。さらに沈渣を3000rpm30分間遠
沈し、上清をplatelet poor plasma（以後PPPと
いう）とした。

コラーゲンの調整：市販の不溶性コラーゲン
（Insoluble Collagen）を200mg／mlの濃度に生理
食塩液に懸濁し乳鉢中でよくすりつぶし、
1000rpm10分間遠沈し上清を用いた。

方法：血小板凝集メーターを使用し、血小板凝
集による吸光度の変化を経時的に記録した。

すなわち0.2mlのPRPをとり、PPPとの吸光度
の差を一定に調整した後PRPに検液及び対照溶
媒10μを加えて撹拌を開始し（1200rpm）１分
後にコラーゲン20μを加え吸光度の変化を記録
した（第２図）。

結果：第２図にみられるごとくアスピリン
1000μｇ／mlでは対照にくらべ約49％吸光度の変
化が抑制された。プロトピンでは100〜250μｇ／
mlでアスピリン1000μｇ／mlと同等の抑制がみら
れまた経時的な吸光度の復帰がみられた。

以上のことからプロトピンはアスピリンの10倍
に近い血小板凝集抑制作用を持ち250〜500μｇ／
mlで凝集を著明に抑制し、かつほぼ完全に解離さ
せることがわかつた。

体重25〜30ｇの（ddy）系雄マウス群を用いて
プロトピンの急性毒性試験を行つた結果LD₅₀＝
403mg／Kgであつた。

プロトピンは水に不溶、脂肪溶媒に可溶でその
まゝでも投与方法を選べば本発明に使用しうる
が、水溶液が好ましい場合には、その薬学的に許
容される塩として用いてもよい。

そのような塩はたとえば塩酸塩のような鉱酸塩
でもよく、酢酸塩、シユウ酸塩などの有機酸塩で
もよい。また、プロトピンにたとえばヨードメチ
ルなどのアルキルハライドを付加して得られる第
四級アンモニウム塩でもよい。

プロトピンまたはその塩は経口的にまたは非経
口的に用いられる。

経口的にはたとえば散剤、錠剤、カプセル剤な
どの形で投与されうる。この場合希釈剤、賦形剤
としてたとえば澱粉、乳糖などを用いてもよい。

非経口的にはたとえば注射剤として皮下、筋肉
内、静脈内等に投与し、点眼剤その他の外用液
剤、軟膏、座薬等の形態で局所に適用することも
できる。

プロトピンの投与量は対象の症候、症状、年令
等によつて増減されるが、経口的には一般に１〜
500mg／日であり、普通数回に分けて投与されう
る。

注射剤としては0.1〜100mg／日の量で１回もし
くは分割して投与され、点眼剤等の外用剤として
は50〜1000μｇ／mlの濃度で適用されうる。

プロトピンは強い血小板凝集抑制作用を有する
ので血栓および血栓に起因する症状たとえば脳軟
化症、心筋硬塞等の予防、治療剤として有用であ
るばかりでなく、局所の血行を改善するので、た
とえば結膜下出血の予防、治療剤としても用いら
れ、また近視の原因となりうる毛様筋の緊張や乳
頭面の充血を緩解して近視を予防、治療する効果
が期待される。

参考例 タケニグサ（Macleaya cordata（WILLD.）R.
BR.）の全草10Kgを30〜35ずつの70％メタノー
ル２回で抽出し、合併した抽出液からメタノール
を減圧留去し、残留するエキスを４ずつの５％
酢酸水溶液で２回抽出する。抽出液を分液ロート
に入れ、クロロホールム３を加えてよく振り混
ぜ、下層を除く。この操作を下層（クロロホルム
層）がほぼ無色になるまでくりかえす。残つた上
層にアンモニア水適量を加えてアルカリ性とし、
再びクロロホルム３を加えてよく振り混ぜ、下
層（クロロホルム層）を採る。この操作を３回く
りかえし、採取したクロロホルム層を合併し、減
圧濃縮し、濃縮液を分液ロートに入れる。0.1N
塩酸水溶液３を加えて振り混ぜ、下層を他の分
液ロートに入れ、同様の操作を繰り返す。上層
（水性層）を合併して分液ロートに入れ、約1Nの
水酸化ナトリウム水溶液でアルカリ性とし、クロ
ロホルム３を加えて振り混ぜる。下層（クロロ
ホルム層）を採つて分液ロートに入れ、蒸留水を
加えて振り混ぜ、クロロホルム層を洗浄する。ク
ロロホルム層を分別し、減圧下にクロロホルムを
留去し、残留物を少量のエタノール・アセトン
（10：１）に溶かし、減圧下に静かに溶媒を蒸発
させ、析出する白色結晶を濾取し、冷エタノール
で洗い、乾燥させる。

この結晶をアルミナ・カラム・クロマトグラフ
イ（溶媒ベンゼン）で精製し、プロトピンの結晶
６ｇを得る。m.p.208℃ 実施例 １ プロトピン塩酸塩 １mg ホウ酸 0.7mg 食 塩 0.6mg 以上を精製水100mlに溶解して点眼液とする。

実施例 ２ プロトピン塩酸塩 10mg 食 塩 0.9mg 以上を蒸留水100mlに溶解し、濾過し２ml用ア
ンプルに充填し、常法により加熱滅菌して注射液
とする。

実施例 ３ プロトピン ５ｇ ６％HPC乳糖 95.5ｇ バレイシヨデンプン ６ｇ ステアリン酸マグネシウム 0.5ｇ 以上を混合機で充分混合し、打錠してプロトピ
ン12.5mgを含有する0.25ｇの錠剤400個を製する。

実施例 ４ プロトピン 0.5ｇ 流動パラフイン ５ｇ 白色ワセリン 94.5ｇ 流動パラフインと白色ワセリンを水浴上で融解
し、水浴からおろしてこれにプロトピンを加えて
よく混和し、放冷して軟膏を得る。

【図面の簡単な説明】

第１図、第２図はそれぞれ実験１および２にお
ける血小板凝集による吸光度の変化を示すグラフ
である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ プロトピンまたはその塩を含有してなる血小
   板凝集抑制剤。