JPS63304980A - Ｌ−フェニルアラニンデヒドロゲナ−ゼおよびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、Ｌ−フェニルアラニンの製造、シーフェニル
アラニンおよびフェニルピルビン酸の定量等に有用な、
し−フェニルアラニンデヒドロゲナーゼおよびその製造
方法に関する。

（従来技術およびその問題点） 本発明のＬ−フェニルアラニンデヒドロゲナーゼに類似
する作用を有するＬ−フェニルアラニンデヒドロゲナー
ゼおよびこの酵素を利用するＬ−アミノ酸の製造方法は
、特開昭５９−１９８９７２、特開昭６１−１４６１８
３、特開昭６１−２３９８８７および特開昭６１−２３
９８８８等に記載されている。しかしながらこの公開さ
れた明細書に記載されているＬ−フェニルアラニンデヒ
ドロゲナーゼは常温筒であるプレヒバクテリウム（Ｂｒ
ｅＶｉｂａＣｔｅｒｉｕｌ）属、ロドコッカス（Ｒｈｏ
ｄｏｃｏｃｃｕｓ）属、スポロサルシナ（Ｓｐｏｒｏｓ
ａｒｃｉｎａ）属、およびバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
）属細菌により生産されたものであり、いずれも常温で
は活性を示すが、５０℃以上では失活するものであった
。しかし、産業上の酵素利用の観点からは、反応速度が
速く、反応液が雑菌により汚染されにくい条件下で使用
可能な酵素を用いる事が要望される。

この様な条件を満たすには耐熱性酵素を用いるのがよく
、種々の耐熱性酵素の検索が行なわれている。

しかしながら、これまでのところ耐熱性のＬ−フェニル
アラニンデヒドロゲナーゼは見いだされていない。

（問題を解決するための手段） 本発明者らは、耐熱性に優れたＬ−フェニルアラニンデ
ヒドロゲナーゼの探索を目的に、該酵素産生能を有する
菌株を求めて、公知の保存菌株も含めて鋭意に研究を続
けた結果、サーモアクチノマイセス・インターメディウ
スＡＴＣＣ３３２０５が、従来知られているものとは全
く異なる高度に耐熱性を有するＬ−フェニルアラニンデ
ヒドロゲナーゼを産生ずることを見い出し本発明に至っ
た。

すなわち、本発明は、 （１）次の理化学的性質を有するＬ−フェニルアラニン
デヒドロゲナーゼ （ａ）作用： １モルのＬ−フェニルアラニン、１モルのＮＡＤ　及び
１モルの水から、１モルのフェニルピルビン酸、１モル
のＮＡＤＨ及び１モルのアンモニウムイオンを生成する
反応（酸化的脱アミノ反応）、並びにこの逆反応（還元
的アミノ化反応）を触媒する。

（ｂ）！ｉ質特異性： 酸化的脱アミノ反応では、Ｌ−フェニルアラニンに特異
的に作用し、他のアミノ酸には極めてわずかしか作用し
ない、または全く作用しない。

還元的アミノ化反応では、フェニルピルビン酸に特異的
に作用し、他のα−ケト酸には極めてわずかしか作用し
ない、または全く作用しない。

（表−１） （Ｃ）至適ｐＨ： 酸化的脱アミノ反応ではｐＨ１０，８付近、還元的アミ
ノ化反応ではｐ）−１９，２付近（図−１）（ｄ）安定
ｐＨ範囲： ５０℃１０分間の処理でｐＨ５，５〜１０．８の範囲で
活性の低下は全くみられない。

７０℃１０分間の処理でｐＨ５，５〜９．８の範囲で活
性の低下は全くみられない。（図−２）（ｅ）熱安定性
ニ ア０℃６０分間の処理で活性の低下は全くみられない。

７５℃３０分間の処理で活性は約２５％残存する。（図
−３） （ｆ）分子量： 全分子量−約２７〜２９万（ゲル濾過法）サブユニット
の分子量−４７，０００（ＪＯＩ−サブユニットの６量
体構造） および （２）サーーＥ−７クチノマイセス（Ｔｈｅ　ｒ＋＋＋
ｏａｃ　ｔ　ｉ　ｎｏａ＋ｙ−ｃｅｓ）Ｊｉに属するＬ
−フェニルアラニンデヒドロゲナーゼ生産菌を培養し、
培養物からＬ−フェニルアラニンデヒドロゲナーゼを採
取することを特徴とするし−フェニルアラニンデヒドロ
ゲナーゼの製造方法 である。

本発明のＬ−フェニルアラニンデヒドロゲナーゼの理化
学的性質について以下に説明する。

（ａ）作用： １モルのＬ−フェニルアラニン、１モルのＮＡＤ　及び
１モルの水から、１モルのフェニルピルビン酸、１モル
のＮＡＤＨ及び１モルのアンモニウムイオンを生成する
反応（酸化的脱アミノ反応）、並びにこの逆反応（還元
的アミノ化反応）を触媒する。

（ｂ）基質特異性： 酸化的脱アミノ反応ではＬ−アミノ酸を、還元的アミノ
化反応ではα−ケト酸を基質として酵素活性を測定した
。その結果を表−１の１および１の２に示す。酵素活性
はＬ−フェニルアラニンおよびフェニルピルビン酸に対
する活性を１００とした相対活性で表示した。

Ｌ−フェニルアラニン　　　　　　１００Ｌ−ｐ−アミ
ノフェニルアラニン　　　７．２Ｌ−ロイシン　　　　
　　　　　　　　３．９また、Ｄ−フェニルアラニン、
ＯＬ−フェニルグリシン、Ｌ−チロシン、ＤＬ−ｔｅｒ
ｔ−ロイシン、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−メチオニン、
Ｌ−アルギニン、Ｌ−アラニン、Ｌ−バリン、グリシル
グリシン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−プロリン、Ｌ−グルタ
ミン酸、Ｌ−イソロイシンに対しては全く作用しない。

フェニルピルビンｉ！２　　　　　　　１００ケトメチ
オニン　　　　　　　　　　１３．９α−ケトイソカプ
ロンＭ　　　　　　　５．５α−ケトイソ古草酸　　　
　　　　　　５．０α−ケトイソロイシン　　　　　　
　　３．３α−ケト酪酸　　　　　　　　　　　　１．
３ピルビン酸　　　　　　　　　　　　　　０．７オキ
ザロ酢酸　　　　　　　　　　　　０．９α−ケトグル
タルＳ　　　　　　　　　　Ｏｐ−ヒドロキシフェニル
ピルビン酸０ 表−１かられかるように、本発明のＬ−フェニルアラニ
ンデヒドロゲナーゼは酸化的脱アミノ反応では、Ｌ−フ
ェニルアラニンに特異的に作用し、他のアミノ酸には極
めてわずかしか作用しない、または全く作用しない。

還元的アミノ化反応では、フェニルピルビン酸に特異的
に作用し、他のα−ケト酸には極めてわずかしか作用し
ない、または全く作用しない。

本発明のＬ−フェニルアラニンデヒドロゲナーゼは、従
来の該酵素と比較し、Ｌ−フェニルアラニンおよびフェ
ニルピルビン酸に対して極めて基質特異性の高い酵素で
あるといえる。

（Ｃ）至適ｐＨ： 酸化的脱アミノ反応においては、０．２８　ＧＩＶ−Ｋ
ＣＩ−に０１１緩衝液（１）８９〜１１）　、５０ｍＨ
Ｋ　　ＦＩＰＯ４−Ｋ　ＯＨ緩衝液（ｐＨ１１〜１２）
を用いて検討した。還元的アミノ化反応では、２００１
１８　　Ｎ　８４Ｃ，ｌ　−ＮＨ４ＯＨ緩衝液（ａｌ１
８〜１０）を、１００ＩＩＩＨＮａ２ＣＯ−ＮａＨＣＯ
３緩衝液と２ＨＮＨ４ＯＩの代わりに用いて検討した。

その結果、図−１に示すように、至適ｐＨは、酸化的脱
アミノ反応ではｐｌ−１１０，８付近、還元的アミノ化
反応ではｐＨ９，２付近である。

（ｄ）安定ｐｔ−＋範囲： 本酵素液ｏ、　ｌａｄ！に対し、後述する各ｐＨ値の緩
衝液を０．４７加え、５０℃と７０℃で１０分間処理し
氷冷してサンプルとした。これについて比活性を求めた
。緩衝液は、ｐ；１４〜６に対しては５０ａ＋ＨＣＨＣ
００）ｌ　−ＣＨＣＯＯＮａ　、　ｐＨ６〜８に対して
は５０１１８　　にＩＩ　　ＰＯ−に　ｔｌ　ＰＯ４、
ｐＨ８〜８．６に対しては５０ａ＋ＨＴｒｉｓ−ＨＣＩ
　、ｐＨ９〜Ｉｔに対しては５０１８ｃｒｙ−にＣ１−
にＯＨ、ｌ）旧１〜１２，５に対しては５０＋ｎ）４に
２ＩＩ　Ｐ　Ｏ４−に３Ｐ０４をそれぞれ使用した。

その結果、図−２に示すように、本酵素は５０℃１０分
間の処理ではｐＨ５，５〜１０．８付近まで安定である
。また７０℃１０分間の処理ではｐＨ５，５〜９．８付
近まで安定である。

このことから本発明のフェニルアラニンデヒドロゲナー
ゼは、従来の該酵素と比較して広範囲において安定であ
ることより、酵素の取り扱いが容易であるといえる。

（ｅ）熱安定性： 本酵素液ｏ、Ｉａｅに対し、０．０１％２−メルカプト
エタノール、１ａＨＥＤＴ八を含む１０ｍｔ４リン酸カ
リウム緩衝液（ｐＨ７，２）０．４ａ＋！を加えた試験
管を１０本用意し、２０℃、３７℃、４５℃、５０℃、
５５℃、６０℃、６５℃、７０℃、７５℃、８０℃の温
度でそれぞれを５分間処理し、氷冷してサンプルとした
。これについて比活性を求めた。さらに、７０℃および
７５℃で０〜６０分間処理し同様に比活性を求めた。そ
の結果、図−３に示すように、本酵素は５分間の処理で
は、７０℃まで安定であり、活性の低下は全くみられず
、７５℃では約５０％の活性が残存する。

また、７０℃では６０分の処理でも安定で活性の低下は
全くみられず、７５℃では３０分の処理で約２５％の活
性が残存する。

このことから本発明のフェニルアラニンデヒドロゲナー
ゼは、従来の約５０℃で失活する常温菌由来の該酵素と
比較して、それより２０℃も高い７０℃でも全く活性の
低下はみられず、非常に熱安定性に優れた酵素であると
いえる。

（ｆ）分子量： 全分子量の測定は、トヨバールＨＷ５５Ｆのカラム（径
１．５Ｘ６３．５ｚ＞（東洋曹達製）を用いるゲル濾過
法で行った。標準タンパク質には、フェリチン（分子１
４６０．０００）　、バチルス・スフエリカス（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓ　５ｐｈａｅｒｉｃｕｓ　）由来の７ラニン
デヒドロゲナーゼ（分子量　２３５，０００）　、馬心
臓由来の乳酸脱水素酵素（分子量　１４０，０００）　
、牛血清アルブミン（分子ｆｌ１６８，０００＞　、卵
白アルブミン（分子の４３．０００　）を用いた。

サブユニットの分子量測定は、５ＤＳ−スラブ電気泳動
法で行った。標準タンパク質には、牛血清アルブミン（
分子ｆｆ１６８，０００）　、α−キモトリプシノーゲ
ンＡ（分子ｆｆ１２５，７００）　、カタラーゼ（分子
ｆｆ１６０，０００）　、オバルブミン（分子鎖４３，
０００）、チトクローム（分子１１２，３８４）を用い
た。

その結果、全分子量は２７０，０００〜２９０，０００
である。また、サブユニットの分子量は４７．０００で
あり、ＳＤＳタンパク質バンドが１つであったことから
、本酵素は同一サブユニットの６ω体構造であることが
わかる。

（Ｑ）金属イオンの影響 侵達する酵素活性測定の反応液中に、各種金属イオンを
塩化物として混合し、活性を測定した。

その結果、表−２に示すように、本酵素はＦｅ３＋、Ｈ
ｇ２”ｋ：よって阻害される。

従来知られている酵素については、１”　ｅ　”ｃよっ
て酵素活性が増加することが多く報告されているが本発
明による酵素はＦｅ３＋ｔｃより阻害されることからも
新規な酵素である事が裏づけられる。

（以下余白） （以下余白） 本発明のＬ−フェニルアラニンデヒドロゲナーゼは、例
えばサーモアクチノマイセス属に属するフェニルアラニ
ンデヒドロゲナーゼ産生菌を培養し、培養物からＬ−フ
ェニルアラニンデヒドロゲナーゼを採取することによっ
て製造することができる。

本発明のＬ−フェニルアラニンデヒドロゲナーゼの製造
方法に用いられる微生物は、Ｌ−フェニルアラニンデヒ
ドロゲナーゼを産生ずることができるサーモアクチノマ
イセス属に属するすべての菌株、突然変異株、変種を含
む。その好ましい具体例は、サーモアクチノマイセス・
インターメディウスであり、この種に属する保存菌とし
ては、サーモアクチノマイセス・インターメディウスＡ
ＴＣＣ３３２０５を挙げることができる。

本発明のＬ−フェニルアラニンデヒドロゲナーゼを得る
にあたってのＬ−フェニルアラニンデヒドロゲナーゼ産
生菌の培養は、通常の基礎栄養培地中で行うことができ
る。例えば、ペプトン、醇母エキス、肉エキス、無機塩
類などを含む培地が用いられる。また、この基礎栄養培
地に誘導物質として少量のＬ−フェニルアラニンを添加
すると、Ｌ−フェニルアラニンデヒドロゲナーゼが誘導
される。Ｌ−フェニルアラニンの添加口は、培地の組成
、菌株の性質により異なるが、０．１〜１％程度が好ま
しい。

培養は固体培地又は液体培地のいずれを用いて行っても
よいが、目的酵素を多量に得るためには、液体培地を用
い、振盪培養、通気撹拌培養等により好気的条件下で培
養を行うことが好ましい。培養湿度は菌が生育し、Ｌ−
フェニルアラニンデヒドロゲナーゼが生産される温度範
囲内であればよいが、好ましくは２５〜６０℃である。

培養時間は酵素活性が発現される時間を選べば良いが好
ましくは６〜１１０時間である。培養のｐＨは、７〜７
．５が好ましい。

この培養によって本醇素の大部分は菌体内に蓄積される
。

培養終了後は培養物をそのまま醇素源として利用しても
よいが、通常は分離精製を行なう。精製法としては、通
常の酵素精製法を用いることが出来る。例えば遠心分離
により菌体を集め、超音波処理、ダイノミル等の機械的
方法によって菌体を破砕する。続いて遠心分離などによ
り細胞片などの固形物を除き、粗酵素液を得る。次にこ
の粗酵素液を硫安沈殿法により分画し、メルカプトエタ
ノール、ＥＤＴＡの添加による透析、アフィニテイクロ
マトグラフィー等によって均一の結晶酸素標品を単離す
ることができる。

次に本発明のＬ−フェニルアラニンデヒドロゲナーゼの
活性測定法について説明する。

酸化的脱アミノ反応においては、補酵素ＮＡＤ”と基質
を含む表−３の１に示すような反応液を、一方、還元的
アミノ化反応においては補酵素ＮＡＯＨと基質を含む表
−３の２に示すような反応液を２〜３分間、３７℃でイ
ンキュベートし、それぞれの反応に伴うＮＡＤＨの増減
囲を定量することで反応速成を決定する。ただし反応の
開始ｔま補酵素で行なう。ＮＡＤＨは３４０　ｎｍに吸
収極大を持つスペクトルを示すので、この３４０ｎｍの
経時的な変化量を分光光度計で測定する。測定において
は、吸収が直線的に増減するよう酵素量を加減して使用
する。

本酵素における酵素活性単位は、１μｍｏｌ／ｗｉｎの
Ｎ　Ａ　Ｄ　Ｈを生成する酵素量を’ｌ　Ｌｌｎｉｔ　
（単位）と定義する。比活性は酵素タンパク質１１１ｙ
あたりの単位数で表わす。

（以下余白） 表−３の１ 表−３の２ 次に実施例によって、本発明のＬ−フェニルアラニンデ
ヒドロゲナーゼの製造方法を詳細に説明するが本発明は
これに限定されるものではない。

（実施例） 第１段階 サーモアクチノマイセス・インターメディウスＡ　Ｔ　
ＣＣ３３２０５を表−４に示す培地に白金耳で植菌し、
５０℃で７時間振盪培養した。菌体を含む培地を遠心分
離（８０００Ｇ、１０分間）して集菌し、０．８５％食
塩水により洗浄した後、菌体を０．０１％２−メルカプ
トエタノール、１ｍＨＥＤＴＡを含む１０ｍＭリン酸カ
リウム緩衝液（１）８７．２）に懸濁し、氷冷しながら
超音波破砕器により破砕した。さらに、２００００Ｇ　
、　２０分間の条件で遠心分離機により沈降させ、上清
液を粗酵素液として分離した。

表−４ ペプトン　　　　　　　　　　　５ｇ グリセリン　　　　　　　　　５ｇ Ｋ＋−１２Ｐ０４　　　　　　　　　１ｇＫ２ＨＰＯ４
２ｇ Ｍ０８０　　・７ＨＯ０，１ｇ ＣａＣＩ２　　　　　　０．０５ｇ 酵母エキス　　　　　　　　　　２ｇ 肉エキス　　　　　　　　　　　２ｇ ビオチン　　　　　　　　　　　９μびＬ−チロシン　
　　　　　　０．４ｇ Ｈ２Ｏ１ｉ ｐＨ７，２ 第２段階 第１段階で得られた粗酵素液を氷冷しながら撹拌し、硫
安を最終濃度が２５％飽和になるように、徐々に酵素液
に添加した。酵素液のｐ　Ｉ−１が低下した場合１４％
アンモニア水を添加しｐト１７〜８に調製した。次にこ
の溶液を遠心分離（１００ＯＯＧ、１０分間）し、沈殿
を除去した。上清液に、最終濃度が６０％飽和になるよ
うに硫安を添加し、上記と同様にして、沈殿と上清とを
分けた。この沈殿をできる限り少量の０．０１％２−メ
ルカプトエタノール、１１１１８　　ＥＤＴＡを含む１
０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，２）に溶解し、
同じ組成の緩衝液（ｐＨ６，７）１Ｊで２回約２０時間
、低温室（５〜１０℃）でスターラーで撹拌しながら透
析し、透析した酵素液を得た。

第３段階 第２段階で得られた透析した酵素液を、あらかじめ０．
０１％２−メルカプトエタノール、１　ｍＨＥＤＴＡを
含む１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６，７）で平
衡化したレッドセファロース４Ｂカラム（径３Ｘ２２ｚ
）に吸着させ、０．０１％２−メルカプトエタノール、
１１１８　　ＥＤＴＡを含む１０ｍＭリン酸カリウム緩
衝液（ｐＨ６゜７）５００ｍを用いて非吸着蛋白質を洗
浄した。

その後０．１８　ＮａＣ１，０，３）４　ＮａＣ１をそ
れぞれ加えた０、０１％２−メルカプトエタノール、１
ｉＨＥＤＴＡを含む１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐ
Ｈ６，７）５００ｄを段階的に流しフェニルアラニンデ
ヒドＯゲナーぜを溶出させた。

第４段階 第３段階で得られた酵素溶液を１１の０．０１％２−メ
ルカプトエタノール、１１８　　ＥＤＴＡを含む１０ｍ
Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６，７）で２回約２０時
間透析した後、限外濾過ｆａ（濾紙ＬＪＨＰ４３、ＵＰ
２０）で濃縮した。

得られた濃縮液をスラブゲル（厚さ１Ｘ１０Ｘ１０３ニ
ア、５％ポリアクリルアミドゲルｐ　Ｈ８。

９）を用いて約６時間電気泳動した後、速やかに一端を
５Ｍ幅で切り、取り活性染色を行った。その断片を元に
戻し、活性バンドを指標にフェニルアラニンデヒドロゲ
ナーゼ部分を切り取った。得られたゲルを氷冷しながら
、ボッター型テフロンホモジナイザーですりつぶし、１
■Ｈ’ＥＤＴＡを含む１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（
ｐＨ７，２）を用いて酵素を抽出した。次に、この抽出
液を遠心分離（１００ＯＯＧ、１０分間）し、上清を酵
素液として得た。

次に第１〜４段階の各精製段階で得られた酵素液につい
て、総タンパク質量、総活性および比活性を測定した。

その結果を表−５に示す。総タンパク質量の測定は、第
１〜３段階についてはにａｌｂａｎｄ　ＢｅｒｎｌＯｈ
ｒによる方法で、また、第４段階についてはＦＯＩ　１
ｎ−ＬＯＷｒｙ法で行った。総活性の測定は、前述した
活性測定法に従って行った。

（以下余白） 続いて、第４段階で得られた酵素液についてＤａＶｉＳ
　ａｎｄ　ｏｒｎｓｔｅｔｎ法により純度の検定を行っ
た。

すなわちガラスチューブ（径０，５Ｘ７．５３）で、７
．５％（Ｗ／Ｖ）ポリアクリルアミドゲル（ｐＨ９，４
）を作り、１本あたり２ｍＡの電流を流し、約１時間電
気泳動を行った。

タンパク質染色ハＣｏｏｇｍａｓｉｅ　ｂｒｉｌｌｉａ
ｎｔ　ｂｌｕｅ　Ｒ−２５０で、また活性染色は表−６
に示す反応液を用いて３７℃においてＰＭＳ　（フエナ
ジンメトサルフエイト）−１ＮＴ（ヨー　ドニトロテト
ラゾリウム）法で行なった。その後、脱色液（１０％（
■／Ｖ）酢酸＋１０％（Ｖ／Ｖ）エチルアルコール）で
脱色、し、純度検定を行なった。

その結果、タンパク染色、活性染色共に、バンドが１本
となり、Ｒｆ値も一致した。これより、本酵素の精製に
成功したことがわかった。

表−６ （以下余白） （効果） 本発明のＬ−フェニルアラニンデヒドロゲナーゼは、従
来のものと比較して、 ■耐熱性に非常に優れている。

■Ｌ−フェニルアラニン、フェニルピルビン酸に対して
基質特異性が非常に高い。

■安定ｐＨ範囲が広い。

というメリットを有するものである。これらの性質を有
する本発明のＬ−フェニルアラニンデヒドロゲナーゼは
、Ｌ−フェニルアラニンの製造、Ｌ−フェニルアラニン
およびフェニルピルビン酸の定量等に極めて有用である
。

フェニルケトン尿症は、肝臓のフェニルアラニンヒドロ
キシラーゼの欠如によって血中のフェニルアラニン濃度
および尿中のフェニルピルビン酸等のフェニルケトン体
濃度の上昇をもたらし、精神発育連帯を招く遺伝性アミ
ノ酸代謝異常症であり、このフェニルケトン尿症の診断
は血中フェニルアラニン′Ｑ度または尿中フェニルピル
ビン酸濃度を測定することによって行うことができるが
、本発明のＬ−フェニルアラニンデヒドロゲナーぜは、
前述したような非常に優れた性質を有するものであるた
め、フェニルケトン尿症の診断としての７エニルアラニ
ンおよびフェニルピルビン酸の微量定量にも大変有用で
ある。

【図面の簡単な説明】

図−１は、本発明のフェニルアラニンデヒドロゲナーゼ
の至適ｐＨを示す図である。 図−２は、本発明のフェニルアラニンデヒドロゲナーゼ
の安定ｐＨ範囲を示す図である。 図−３は、本発明のフェニルアラニンデヒドロゲナーゼ
の熱安定性を示す図である。 特許出願人　ダイセル化学工業株式会社図　　　　１ 酸化的脱アミノ反応 還元的アミノ化反応 ｈ ０　　　　　　　　　　　　　の ｉ　　双　四　１　♂

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）次の理化学的性質を有するＬ−フェニルアラニン
   デヒドロゲナーゼ （ａ）作用： １モルのＬ−フェニルアラニン、１モルのＮＡＤ＾＋及
   び１モルの水から、１モルのフェニルピルビン酸、１モ
   ルのＮＡＤＨ及び１モルのアンモニウムイオンを生成す
   る反応（酸化的脱アミノ反応）、並びにこの逆反応（還
   元的アミノ化反応）を触媒する。 （ｂ）基質特異性： 酸化的脱アミノ反応では、Ｌ−フェニルアラニンに特異
   的に作用し、他のアミノ酸には極めてわずかしか作用し
   ない、または全く作用しない。 還元的アミノ化反応では、フェニルピルビン酸に特異的
   に作用し、他のα−ケト酸には極めてわずかしか作用し
   ない、または全く作用しない。（表−１）（ｃ）至適ｐ
   Ｈ： 酸化的脱アミノ反応ではｐＨ１０．８付近、還元的アミ
   ノ化反応ではｐＨ９．２付近。（図−１）（ｄ）安定ｐ
   Ｈ範囲： ５０℃１０分間の処理でｐＨ５．５〜１０．８の範囲で
   活性の低下は全くみられない。 ７０℃１０分間の処理でｐＨ５．５〜９．８の範囲で活
   性の低下は全くみられない。（図−２）（ｅ）熱安定性
   ： ７０℃６０分間の処理で活性の低下は全くみられない。 ７５℃３０分間の処理で活性は約２５％残存する。（図
   −３） （ｆ）分子量： 全分子量−約２７〜２９万（ゲル濾過法） サブユニットの分子量−４７，０００（同一サブユニッ
   トの６量体構造）
2. （２）サーモアクチノマイセス（Ｔｈｅｒｍｏａｃｔｉ
   ｎｏｍｙ−ｃｅｓ）属に属するＬ−フェニルアラニンデ
   ヒドロゲナーゼ生産菌を培養し、培養物からＬ−フェニ
   ルアラニンデヒドロゲナーゼを採取することを特徴とす
   るＬ−フェニルアラニンデヒドロゲナーゼの製造方法
3. （３）サーモアクチノマイセス属に属するＬ−フェニル
   アラニンデヒドロゲナーゼ生産菌がサーモアクチノマイ
   セス・インターメディウス（Ｔｈｅｒｍｏ−ａｃｔｉｎ
   ｏｍｙｃｅｓ　ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）ＡＴＣＣ３３
   ２０５である特許請求の範囲第２項記載の製造方法