JPS63298062A

JPS63298062A - 抗ストレプトリジンｏ抗体の定量法

Info

Publication number: JPS63298062A
Application number: JP13307787A
Authority: JP
Inventors: Kazunobu Tanno; 和信丹野; Hiromi Iijima; 飯嶋　裕已
Original assignee: Hitachi Chemical Co Ltd
Current assignee: Resonac Corp
Priority date: 1987-05-28
Filing date: 1987-05-28
Publication date: 1988-12-05

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は血清中の抗ストレプトリジン０抗体（ＡＳＯ）
の迅速な定量法に関し、特にラテックス凝集比濁法を利
用する定量法及びその定量試薬に関する。

〔従来の技術〕

溶レン菌はショウ紅熱、咽頭炎、化膿性疾患。

急性腎炎、リウマチ熱などの起因菌として知られている
。溶レン菌には種々の抗原物質が存在するので、感染に
より多くの抗体が産生される。溶レン菌の抗原物質はス
トレプトリジンＯ，デオキシリボヌクレアーゼＢ、ヒア
ルロニダーゼ、ニコチンアミアデニンジヌクレオチダー
ゼ、ストレプトキナーゼなどがある。

各種抗原物質と血清学的検査で検出できる抗体表　　１
　溶しン菌の抗原物質と抗体菌体外毒素に対する抗体は感染早期から産生されるため
、ごく最近溶しン菌の感染があったか否かの診断に本抗
体の存在が重要な意義を有することが知られている。も
つとも代表的な抗体として抗ストレプトリジン○抗体（
ＡＳＯ）があげられ、広く日常検査で行なわれている。

ＡＳＯ価の測定方法を表２に示した。測定法は溶血阻止
反応と受身凝集反応の二つの異なる原理に分かれる。前
者はＡＳＯの毒素中和活性を、後者はＡＳＯの沈降表　
２　　Ａ３０価測定法〔発明が解決しようとする問題点〕これらの検査法のうち前者の代表的な方法であるランツ
ーランダール（Ｒａｎｔｚ−Ｒａｎｄａｌｌ　）法はＡ
ＳＯがストレプトリジン０（以下ＳＬＯと略す）の溶血
作用を中和することを利用した半定量法で、患者血清を
種々の倍数で希釈し、これを一定濃度のＳＬＯ，赤血球
と反応させ、この時の溶血阻止希釈倍数を抗体量とする
方法である。水沫は血清希釈が非常に煩雑で、手間がか
かり、また検査のために新鮮血清球を常時入手する必要
があること、ＳＬＯも酸化に不安定で溶解後一定時間内
に使用する必要があり、脂質の影響を受けやすいなどの
問題があった。

また、既成のラテックス凝集法は定性法で、スクリーニ
ング試験にしか使用できない欠点があった。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明は、血清とＳＬＯを感作した粒径０．２μｍ未満
の不溶性担体のラテックスとを該不溶性担体の最終濃度
が０．０５重量％未満となるように混合して混合液とし
、抗原−抗体反応によるラテックス凝集反応を起こさせ
て、光学的強度を測定し、この測定値から血清中のＡＳ
Ｏを定量することを特徴とするＡＳＯの定量法に関する
。

上記不溶性担体のラテックスとは、ＳＬＯを感作した不
溶性担体を適当な媒体に分散させたラテックスである。

該不溶性担体は、粒径が０．２μｍ未満である。この粒
径が０．２　　μｍ以上では、吸光度の測定が困難にな
る。該不溶性担体としては、公知の診断用ポリスチレン
系ラテックス粒子などがある。なお、不溶性担体は、粒
径が０．０５μｍ以上であるのが好ましい。また、上記
媒体としては、リン酸緩衝液等が好ましく、媒体には、
牛血清アルブミン、塩濃度調整のためにＮ５ＣＱ等の塩
などを含むのが好ましい。不溶性担体は、媒体中に、適
宜の濃度で分散させられるが、０．１〜０．５重量％が
好ましい。

血清と上記ラテックスとは混合され、これにより、抗原
−抗体反応によるラテックス凝集反応が起こる。この混
合時に、さらに、リン酸緩衝液等の希釈液を混合し、適
当なラテックス濃度にされる。混合液は、混合初期に撹
拌され、この後は、静置される。この混合液の濃度（ラ
テックス凝集反応中の混合液における不溶性担体の最終
濃度）は、０．０５重量％未満にされ、また、０．０１
重量％以上であるのが好ましい。最終濃度が０．０５重
量％以上であると吸光度の測定が困難になり、小さすぎ
ると凝集反応が不充分になりやすい。

また、上記反応は、２５〜３７℃で行なうのが好ましく
、反応中は恒温にするのが好ましい。この範囲をはずれ
ると抗原−抗体反応が不安定になりやすい。さらに、こ
の反応は、５秒〜１５分間行なわれるのが好ましく、特
に１０秒から１０分間行なわれるのが好ましい。５秒未
満では、上記反応が不充分であり、光学的強度からＡＳ
Ｏを定量するのが困難になり、１５分を越えると短時間
測定の長所が減じる。

上記ラテックス凝集反応後、反応液の吸光度が好ましく
は５３０〜１１０００ｎの適切な波長を選択して測定さ
れる。

また、吸光度測定におけるセルの光路長は、５〜１０ｍ
ｍであるのが好ましい。

光学的強度とは吸光度又は散乱光強度を意味し、反応開
始後の測定値のうち１個を用いて定量される。従って、
一定の光学的強度に達するまでの時間を測定するをも採
用することができる。

定量は、ＡＳＯ価既知量の試料（例えばＡｓ。

価標準血清とその希釈系列）について、前記の測定を行
ない、その測定値とＡ３０価値とから検量線を作成して
おき、Ａ３０価未知量の試料について同一条件で測定し
た測定値から該検量線によって対応するＣＲＰ量を求め
ることによって行なうことができる。

反応開始後、１回測定する方法で、前記の２液型の試薬
を用いる場合にはさらに、次のようにして定量する。す
なわち、試料について吸光度（Ａｔ）を測定し、この値
から試料に起因する吸光度（Ａｓａ）とラテックス試薬
に起因する吸光度を差し引き、算出吸光度（Ａ　ＡＳＯ
）を求める。

ここで、試料に起因する吸光度とは、例えば、上記混合
液の調整において、ラテックス試薬の代わりに生理食塩
水を使用して得た液の光学的濁度である。ラテックス試
薬に起因する吸光度とは、例えば、上記した混合液の調
整において、試料の代わりに生理食塩水を使用して得た
液の吸光度（ＡＲＩ３）から、上記した混合液において
試料及びラテックス試薬の代わりに生理食塩水を使用い
て得た吸光度（Ａａａ）を差し引いた値である。

上記Ａｔ、ＡＲＢＩ　ＡＢＢからＡＳＯ価に関する吸光
度Ａ　ＡＳＯが次の式により求められる。

ＡＡＳＯ：ＡＴ−ＡＳＢ　　（ＡＲＢ−Ａａａ）ＡＡＳ
ＯからＡＳＯ価を定量する方法は、前記の定量の方法と
同様である。

以上は、散乱光強度でも同様である。

（実施例）次に、試薬、測定方法、実測結果などに関連して本発明
の詳細な説明する。以下、％は重量％を意味する。

１）試薬ｉ）希釈液０．１５ＭＮａＣＱ及び０．１　　％牛血清アルブミン
含有、０．０５Ｍリンリ酸緩衝液（ｐＨ６，５０）ｉｉ）ラテックス試薬上記ｉ）希釈液に溶しン菌から抽出精製したストリプト
リジン０を感作した粒径０．２μ未満のポリスチレンラ
テックスを分散させた試液（ラテックス濃度０．１　％
）で１０分間恒温反応した後、５７０ｎｍの吸光度を測定
し、検体の吸光度（ＡＡＳＯ）　　を式、ＡＡｓｏ＝　
ＡＴ　−Ａｓｎ　　　（ＡＲＢ　−Ａａａ）から算出す
る。検体としてＡＳＯ価高値検体の希釈系列を用いて吸
光度とＡ３０価（ドツト単位）との希釈直線系列を作成
した。測定は、日立自動分析装置７０５形（以下日立７
０５形と略す）を用い、上記測定原理を適用した。日立
７０５形では分析法プログラムの２ポイントエンド法を
使用すると自動的に装置が上記測定法にもとづいて演算
し、測定結果を算出する、反応温度は２５℃〜３７℃、
測定波長は５７０ｎｍを選択し、−波長測光を採用した
。

３）実測結果上記で得られた希釈直線性を第１図に示す。

〔発明の効果〕

本発明により、血清中のＡＳ○を迅速に精度良く定量す
ることができ、そのための定量試薬を提供することがで
きる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例において作成した希釈直線性を示すグ
ラフである。九　　％　　乞　　俟　　１４−＊Ｗミ　　　タリ１１　口

Claims

【特許請求の範囲】１、血清とストレプトリジンＯを感作した粒径０．２μ
ｍ未満の不溶性担体のラテックスとを該不溶性担体の最
終濃度が０．０５重量％未満となるように混合して混合
液とし、抗原−抗体反応によるラテックス凝集反応を起
こさせて、光学的強度を測定し、この測定値から血清中
の抗ストレプトリジンＯ抗体を定量することを特徴とす
る抗ストレプトリジンＯ抗体の定量法。２、ラテックス凝集反応を５秒〜１５分間、恒温で行な
う特許請求の範囲第１項の抗ストレプトリジンＯ抗体の
定量法。３、不溶性担体が診断用ポリスチレン系ラテックス粒子
である特許請求の範囲第１項又は第２項記載の抗ストレ
プトリジンＯ抗体の定量法。