JPS6367864B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は抗原抗体反応の測定方法に関するもの
である。 今日、特に医学、衛生科学分野で、多くの生体
反応が抗原と抗体の反応との関わりの中で大きく
注目され、健康保持増進や疾病の治療等を目的と
して解析されている。また生体外（invitro）で
も、生体反応を反映させる試料をもとに免疫化学
的研究が盛んであり、一部は既に医学の日常検査
の中で活用されている。代表的な測定法には、高
感度定量法として放射免疫測定法（RIA）、ラテ
ツクス近赤外比濁法（PIA）、酵素免疫測定法
（EIA）、螢光免疫測定法、および光散乱を利用し
た免疫測定法（ネフエロメトリー）等がある。ま
た従来より液相以外に赤血球や細菌などの生物系
の担体や有機合成担体のラテツクスあるいはシリ
カベントナイト等の無機質担体に抗原あるいは抗
体を結合し検体中の抗体あるいは抗原を検出する
免疫反応が多く行なわれてきた。 免疫反応は本質的には対応する物質間の反応が
厳密にかつ撰択的に行なわれるという点で特異性
が高くまた該反応の特徴とされ、重要な医学的検
査法として位置付けされている。 しかるに一方、生体活動を反映する体液はその
組成も性状も多様であり、これが為多くの免疫反
応では、該抗原抗体反応とは無関係な副反応とも
いうべき非特異反応を多少ともまぬがれ得なかつ
た。 かかる非特異反応の対策には多くの場合カオリ
ンや吸収剤添加処理あるいは抽出操作等による該
因子の除去あるいは中和を目的とした方法がとら
れ、その一部は有効であるが各抗原抗体反応毎に
詳細に検討せねばならず、実用上の難点も多かつ
た。 本発明者はこのような点を改良すべく、種々検
討した結果抗原抗体反応の測定において、ポリア
ニオンで処理した試料を用いて該反応を行なうこ
とにより、該検出物質の回収率、測定精度が向上
し、より正確な抗体および抗原の測定値が得られ
ることを見出し、本発明に到達した。すなわち、
本発明は、反応媒体中で測定すべき抗原または抗
体と、それに対応する抗体または抗原とを反応さ
せる抗原抗体反応の測定方法において、測定すべ
き抗原または抗体を含む試料を、該反応媒体に可
溶なポリアニオンで処理し、これを用いて該反応
を行なうことを特徴とする抗原抗体反応の測定方
法にある。 以下、本発明を詳細に説明する。 本発明において使用されるポリアニオンとして
は、多糖類、ポリスチレン等の天然又は合成高分
子化合物中に、複数のスルホン基又はカルボキシ
ル基等のアニオンを有するものであつて、抗原抗
体反応における反応媒体に可浴なものが挙げられ
る。 このようなポリアニオンとしては、具体的に
は、デキストラン硫酸、ヘパリン、ポリスチレン
スルホン酸、フタル酸酢酸セルロース、ヒアルロ
ン酸、コンドロイチン硫酸等が挙げられる。本発
明方法において、測定すべき抗原または抗体を含
む試料は、上記ポリアニオンで処理され、次いで
それに対応する抗体または抗原と反応媒体中で抗
原抗体反応が行なわれる。 上記ポリアニオン処理は、）抗原抗体反応に
際し、反応媒体中にポリアニオンを存在させてお
く方法、又は）抗原抗体反応に先立ち、予めポ
リアニオンを含む固相又は液相中で処理しておく
方法（この場合、処理された抗原または抗体を含
む試料よりポリアニオンを除去し、次いで抗原抗
体反応に供することもできるが、通常は、ポリア
ニオンを附着させたまま上記反応に供される）が
挙げられる。 抗原抗体反応における、反応媒体としては、水
性媒体、例えば水や緩衝液が挙げられ、これらは
安定剤、防腐剤、キレート剤、界面活性剤等の添
加物を含んでいてもよい。 反応媒体のPHは通常の抗原抗体反応の適用範囲
であればよく、通常５〜10程度が選ばれる。 反応媒体中のポリアニオンの濃度は、通常５重
量％以下、好ましくは、0.001〜0.5重量％が採用
される。 あまり多すぎると測定法によつては、反応が不
安定となり、少なすぎると対応する抗原との反応
以外の血清検体中の要因に依る阻害効果の為、正
確な測定値が得られないいわゆる非特異反応の抑
制効果が減少し、従つて精度を低下する。 測定物および反応物となる抗原としては、例え
ば蛋白質、ポリペプチド、ステロイド、多糖類、
脂質、花粉、塵あるいはハプテン等種々のものが
挙げられる。また、抗体としては、例えば上記し
た抗原に対する抗体である蛋白質が挙げられる。 本発明方法での抗原−抗体反応の測定は、従来
周知の方法に適用することができる。すなわち、
測定物と反応物のいずれも可溶性のものを用い
る、いわゆる溶液系と、反応物を反応媒体に実質
的に不溶性の粒子担体に感作（担持）する、いわ
ゆる担体系のいずれにも適用され得る。例えば、
放射免疫測定法、ラテツクス近赤外比濁法、酵素
免疫測定法、螢光免疫測定法、光散乱を利用した
免疫測定法、血球凝集反応、ラテツクス凝集反応
その他、における抗原抗体反応が挙げられるが、
凝集反応、特にラテツクス近赤外比濁法のような
逆受身凝集反応を利用する測定方法において、好
適に使用される。 本発明方法によれば、抗原抗体反応に際し起る
非特異反応を抑止し、より正確な測定値を得るこ
とができる。 以下に実施例を挙げて、本発明をさらに詳細に
説明するが、本発明はその要旨を超えない限り、
以下の実施例に限定されるものではない。 なお、実施例中の％は、重量％をあらわす。 実施例 １ ラテツクス近赤外比濁法における例を示す。α_L
−フエト蛋白（AFP）が2nｇ／ml以下の正常人
血清50μに1μｇ／mlのAFPを50μ加え、更に
デキストラン硫酸を含む牛血清アルブミン加食塩
液を100μ加えて被検液とする。被検液50μに
AFP抗体感作ラテツクス試薬50μと緩衝液200μ
を添加し940nmの近赤外光における濁度変化を
撹拌下に測定し、標準曲線より該検体の値を続み
回収率を算出する。対照としてポリアニオンを含
まない反応系をつくり比較した。 表１に示したように回収率はデキストラン硫酸
添加（最終濃度は0.1％）により有意に向上（Ｐ
＜0.01）し、変動係数（CV）を大巾に改善され
た。なお、それぞれの回収率は濁りのない透明な
10検体の正常プール血清での回収率を100とした
ときの値である。 実施例 ２ ポリアニオンとしてポリスチレンスルフオン酸
を最終濃度0.2％で使用した。測定法は実施例１
と同じである。表１に示すように変動係数の改善
がみられた。 実施例 ３ 実施例１と同様にして、ポリアニオンとしてヘ
パリンを最終濃度0.1％で使用した。表１に示す
ように回収率の改善がみられた。 実施例 ４ ポリアニオンとしてフタル酸酢酸セルロースを
最終濃度0.1％で使用し、実施例１と同様にして
測定した。表１に示すように回収率に改善がみら
れた。

【表】 実施例 ５ 血球凝集反応については、検体により疑反応が
出現し、これが為判断をあやまることがある。こ
こではデキストラン硫酸の添加効果について示
す。 AFPを含む検体をデキストラン硫酸の最終濃
度が0.001％になるよう調製したデキストラン硫
酸のリン酸バツフアー（PH．6.4）溶液で20倍に
希釈し、その100μを抗AFP抗体感作羊血球浮
遊液に加え、２時間静置する。AFP含量が50n
ｇ／ml以下のものではリングを形成するが、
100nｇ／ml以上の検体ではリングが明らかに大
きいか、マツト状の凝集反応を呈する。既知濃度
の検体についての検討では混濁の強い検体でも疑
反応が減少し判定が容易になつた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 反応媒体中で測定すべき抗原または抗体と、
   それに対応する抗体または抗原とを反応させる抗
   原抗体反応の測定方法において、測定すべき抗原
   または抗体を含む試料を、該反応媒体に可溶なポ
   リアニオンで処理し、得られる試料を用いて該反
   応を行なうことを特徴とする抗原抗体反応の測定
   方法。 ２ 該反応をポリアニオンの存在下に行なうこと
   を特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３ ポリアニオンがデキストラン硫酸である特許
   請求の範囲第１項又は第２項記載の方法。 ４ 抗原抗体反応が凝集反応である特許請求の範
   囲第１項記載の方法。 ５ 凝集反応が逆受身凝集反応である特許請求の
   範囲第４項記載の方法。