JPS61182578A - 抗ストレプトリジンｏ抗体の定量法及びその定量試薬 - Google Patents
抗ストレプトリジンｏ抗体の定量法及びその定量試薬Info
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- JPS61182578A JPS61182578A JP2422385A JP2422385A JPS61182578A JP S61182578 A JPS61182578 A JP S61182578A JP 2422385 A JP2422385 A JP 2422385A JP 2422385 A JP2422385 A JP 2422385A JP S61182578 A JPS61182578 A JP S61182578A
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- serum
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54346—Nanoparticles
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は血清中の抗ストレプトリジンＯ抗体（Ａｇｏ）
の迅速な定量法に関し，％′にラテックス凝集比濁法を
利用する定量法及びその定量試薬に関する。
の迅速な定量法に関し，％′にラテックス凝集比濁法を
利用する定量法及びその定量試薬に関する。
（従来の技術）
溶しン菌はショウ紅熱，咽頭炎，化膿性疾患。
急性腎炎，リウマチ熱などの起因菌として知られている
。溶しン菌には種々の抗原物質が存在するので，感染に
よシ多くの抗体が産生される。溶しン菌の抗原物質性ス
トレプトリジンＤ，デオキシリボヌクレアーゼＢ，ヒア
ルロニダーゼ、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチダ
ーゼ，ストレプトキナーゼなどがある。
。溶しン菌には種々の抗原物質が存在するので，感染に
よシ多くの抗体が産生される。溶しン菌の抗原物質性ス
トレプトリジンＤ，デオキシリボヌクレアーゼＢ，ヒア
ルロニダーゼ、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチダ
ーゼ，ストレプトキナーゼなどがある。
各種抗原物質と血清学的検査で検出できる抗体を表１に
示す。
示す。
菌体外毒素に対する抗体は感染早期から産生されるため
、ごく最近溶しン菌の感染があったか否かの診断に本抗
体の存在が重要な意義を有することが知られている。も
つとも代表的な抗体として抗ストレプトリジン 広く日常検査で行なわれている。ＡＳＯ価の測定方法を
表２に示した。測定法は溶血阻止反応と受身凝集反応の
二つの異なる原理に分かれる。前者はＡＳＯの毒素中和
活性を，後者はＡＳＯの沈降素活性を利用した検査法で
ある。
、ごく最近溶しン菌の感染があったか否かの診断に本抗
体の存在が重要な意義を有することが知られている。も
つとも代表的な抗体として抗ストレプトリジン 広く日常検査で行なわれている。ＡＳＯ価の測定方法を
表２に示した。測定法は溶血阻止反応と受身凝集反応の
二つの異なる原理に分かれる。前者はＡＳＯの毒素中和
活性を，後者はＡＳＯの沈降素活性を利用した検査法で
ある。
（発明が解決しようとする問題点）
これらの検査法のうち前者の代表的な方法であるランツ
ーランダール（ Ｒａｎｔｚ−Ｒａｎｄａｌｌ ）
法はＡＳＯがストレプトリジン の溶血作用を中和することを利用した半定量法で。
ーランダール（ Ｒａｎｔｚ−Ｒａｎｄａｌｌ ）
法はＡＳＯがストレプトリジン の溶血作用を中和することを利用した半定量法で。
患者血清を種々の倍数で希釈し，これを一定濃度のＳＬ
Ｏ，赤血球と反応させ，この時の溶血阻止希釈倍数を抗
体量とする方法である。拳法は血清希釈が非常に煩雑で
，手間がかかシ，また検査のために新鮮血球を常時入手
する必要があること。
Ｏ，赤血球と反応させ，この時の溶血阻止希釈倍数を抗
体量とする方法である。拳法は血清希釈が非常に煩雑で
，手間がかかシ，また検査のために新鮮血球を常時入手
する必要があること。
ＳＬＯも酸化に不安定で溶解後一定時間内に使用する必
要がちり，脂質の影響を受けやすいなどの問題があった
。
要がちり，脂質の影響を受けやすいなどの問題があった
。
また、既販のラテックス凝集法は定性法で，スクリーニ
ング試験にしか使用できない欠点があった。
ング試験にしか使用できない欠点があった。
（問題点を解決するための手段）
第１の発明は，血清とＳＬＯを感作した粒径０、２μｍ
未満の不溶性担体のラテックスとを該不溶性担体の最終
濃度が０．０５重量％未満となるように混合して混合液
とし，抗原−抗体反応によるラテックス凝集反応を起こ
させて，５３０〜６００ｎｍの波長で吸光度を測定し，
この測定値から血清中のＡＳＯを定量することを特徴と
するＡＳＯの定ｌ法に関する。
未満の不溶性担体のラテックスとを該不溶性担体の最終
濃度が０．０５重量％未満となるように混合して混合液
とし，抗原−抗体反応によるラテックス凝集反応を起こ
させて，５３０〜６００ｎｍの波長で吸光度を測定し，
この測定値から血清中のＡＳＯを定量することを特徴と
するＡＳＯの定ｌ法に関する。
第２の発明は，第１の発明に使用されるＡＳＯＳ量定薬
に関し，該定量試薬は，８ＬＯを感作した粒径０．２μ
ｍ未満の不溶性担体のラテックスか悼を感作した不溶性
担体を適当な媒体に分散させ九ラテックスである。該不
溶性担体は，粒径が０、２μｍ未満である。この粒径が
０．２μｍ以上では，吸光度の測定が困難になる。該不
溶性担体としては，公知の診断用ポリスチレン系ラテッ
クス粒子などがある。なお、不溶性担体は，粒径がＯ．
ＯＳμｍ以上であるのが好ましい。また、上記媒体とし
ては，リン酸緩衝液等が好ましく，媒体には，牛血清ア
ルブミン、塩濃度調整のためにＮａＣｌ等の塩などを含
むのが好ましい。不溶性担体は，媒体中に，適宜の濃度
で分散させられるが。
に関し，該定量試薬は，８ＬＯを感作した粒径０．２μ
ｍ未満の不溶性担体のラテックスか悼を感作した不溶性
担体を適当な媒体に分散させ九ラテックスである。該不
溶性担体は，粒径が０、２μｍ未満である。この粒径が
０．２μｍ以上では，吸光度の測定が困難になる。該不
溶性担体としては，公知の診断用ポリスチレン系ラテッ
クス粒子などがある。なお、不溶性担体は，粒径がＯ．
ＯＳμｍ以上であるのが好ましい。また、上記媒体とし
ては，リン酸緩衝液等が好ましく，媒体には，牛血清ア
ルブミン、塩濃度調整のためにＮａＣｌ等の塩などを含
むのが好ましい。不溶性担体は，媒体中に，適宜の濃度
で分散させられるが。
０、１〜０．５重量％が好ましく，＃に０．４重量％前
後が好ましい。
後が好ましい。
血清と上記ラテックスとは混合され，これによシ，抗原
−抗体反応【よるラテックス凝集反応が起こる。この混
合時に，さらに、リン酸緩衝液等の希釈液を混合し，適
当なラテックス濃度にされる。混合液は，混合初期に攪
拌され，この後は。
−抗体反応【よるラテックス凝集反応が起こる。この混
合時に，さらに、リン酸緩衝液等の希釈液を混合し，適
当なラテックス濃度にされる。混合液は，混合初期に攪
拌され，この後は。
静置される。この混合液の濃度（ラテックス凝集反応中
の混合液における不溶性担体の最′終濃度）は、０．０
５重量−未満処され，また、０．０１重量−以上である
のが好ましい。最終濃度が０．０５重量％以上であると
吸光度の測定が困難になシ，小さすぎると凝集反応が不
充分になシやすい。
の混合液における不溶性担体の最′終濃度）は、０．０
５重量−未満処され，また、０．０１重量−以上である
のが好ましい。最終濃度が０．０５重量％以上であると
吸光度の測定が困難になシ，小さすぎると凝集反応が不
充分になシやすい。
また、上記反応は、２５〜３７℃で行なうのが好ましく
９反応中は恒温にするのが好ましい。この範囲をはずれ
ると抗原−抗体反応が不安定になシやすい。さらに、こ
の反応は、５秒〜１５分間行なわれるのが好ましく、特
に１０秒から５分間が困難になシ、１５分を越えると短
時間測定の長所が減じる。
９反応中は恒温にするのが好ましい。この範囲をはずれ
ると抗原−抗体反応が不安定になシやすい。さらに、こ
の反応は、５秒〜１５分間行なわれるのが好ましく、特
に１０秒から５分間が困難になシ、１５分を越えると短
時間測定の長所が減じる。
上記ラテックス凝集反応後２反応液の吸光度が好ましく
は５３０〜５ Ｑ Ｑ ｎｍの適切な波長を選択して測
定される。
は５３０〜５ Ｑ Ｑ ｎｍの適切な波長を選択して測
定される。
また、吸光度測定におけるセルの光路長は、５〜１０ｍ
ｍであるのが好ましい。
ｍであるのが好ましい。
以上の測定は、抗原−抗体反応開始後、少なくとも２回
混合液の吸光度を測定し、その間の吸光度の増加分また
は単位時間当シの増加分（すなわち、抗原−抗体反応の
進行に伴う吸光度の増加分。
混合液の吸光度を測定し、その間の吸光度の増加分また
は単位時間当シの増加分（すなわち、抗原−抗体反応の
進行に伴う吸光度の増加分。
ΔＡｙ）を求めるのが好ましい。
一方、上記混合液において、血清の代わシに水又は生理
食塩水を使用して得た液を同様に吸光度の増加分または
単位時間当シの増加分（ΔＡａａ）を求めておく。
食塩水を使用して得た液を同様に吸光度の増加分または
単位時間当シの増加分（ΔＡａａ）を求めておく。
上記ΔＡＴ及びΔＡＲＢからＡＳＯに関する吸光度Δλ
Ａｓｏ が次の式から求められる。
Ａｓｏ が次の式から求められる。
ΔＡＡｇｏ ＝ΔＡＴ−ΔＡＢＢ
＾Ｓ。
ΔＡ Ａ １１０ から−褌１の定量は、ＡＳＯ価標準
血清を用いてΔＡ Ａ ８０ とＡＳＯ価（ｔｏｄｄ
； Ｉ・ラド）の検量線を上記した測定方法によシ
作成しておき。
血清を用いてΔＡ Ａ ８０ とＡＳＯ価（ｔｏｄｄ
； Ｉ・ラド）の検量線を上記した測定方法によシ
作成しておき。
上記算出吸光度増加分（ΔＡＡｓｏ）に該当するＡＳＯ
価を検量線から求めることによって達成される。
価を検量線から求めることによって達成される。
（実施例）
次に試薬、測定方法、実測結果などに関連して本発明を
具体的に説明する。以下、チは重量％を意味する。
具体的に説明する。以下、チは重量％を意味する。
１）試薬
１）希釈液
０、１５ Ｍ ＮａＣ１及びＯ，ｉ牛血清アルブミン
含有０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，５０）１１）ラ
テックス試薬 上記１）希釈液に溶しン薗から抽出精製したストレプ：
・リジン０を感作した粒径０．２μ未満のポリスチレン
ラテックスを分散させた試液（ラテックス濃度０．４チ
） ｉｌｉ）Ａ８０価標準血清 国立予防衛生試験新法に準じ、トッド（Ｔｏｄｄ ）単
位で表示。
含有０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，５０）１１）ラ
テックス試薬 上記１）希釈液に溶しン薗から抽出精製したストレプ：
・リジン０を感作した粒径０．２μ未満のポリスチレン
ラテックスを分散させた試液（ラテックス濃度０．４チ
） ｉｌｉ）Ａ８０価標準血清 国立予防衛生試験新法に準じ、トッド（Ｔｏｄｄ ）単
位で表示。
２）測定方法
生理食塩水３μｌ、希釈液（試液１．Ｒ１と略す）３５
０μｌを混合し、３７℃で適時、保持した後。
０μｌを混合し、３７℃で適時、保持した後。
ラテックス試薬（試液２．Ｒ２と略す）５０μｌを添加
攪拌し、この後、１分後及び３分後の５３０ｎｍ〜５
Ｑ Ｑ ｎｍの間の適切な波長での吸光度変化を測定す
る。この間の吸光度の増加分から単位時間当シの増加分
を求め、これを試薬ブランクの吸光度変化（ΔＡＢＳＲ
Ｂ）とする。次に検体血清３μｌ、希釈液３５０μｌを
混合し、３７℃で適時保持した後、ラテックス試薬５０
μｌを添加攪拌し、試薬ブランク測定と同一条件で吸光
度変化をみる。これを被験液の吸光度変化（ΔＡＢＳＴ
）とする。
攪拌し、この後、１分後及び３分後の５３０ｎｍ〜５
Ｑ Ｑ ｎｍの間の適切な波長での吸光度変化を測定す
る。この間の吸光度の増加分から単位時間当シの増加分
を求め、これを試薬ブランクの吸光度変化（ΔＡＢＳＲ
Ｂ）とする。次に検体血清３μｌ、希釈液３５０μｌを
混合し、３７℃で適時保持した後、ラテックス試薬５０
μｌを添加攪拌し、試薬ブランク測定と同一条件で吸光
度変化をみる。これを被験液の吸光度変化（ΔＡＢＳＴ
）とする。
検体血清の吸光度変化（ΔＡＢＳＡＩＩＯ）を式３式％
から算出する。一方、上記と同様に検体血清の代シにＡ
ＳＯ価標準血清を用いて吸光度変化とＡＳＯ価（Ｔｏｄ
ｄ単位）の検量線を作成し、上記算出吸光度変化に該尚
するＡＳＯ価を上記検量線から求める。測定は日立自動
分析装置７０５形及び７３６形（以下２日立７０５形及
び７３６形と略す）を用い、上記測定原理を適用した。
ＳＯ価標準血清を用いて吸光度変化とＡＳＯ価（Ｔｏｄ
ｄ単位）の検量線を作成し、上記算出吸光度変化に該尚
するＡＳＯ価を上記検量線から求める。測定は日立自動
分析装置７０５形及び７３６形（以下２日立７０５形及
び７３６形と略す）を用い、上記測定原理を適用した。
日立７０５形及び７３６形（共に光路長６ ａｎ ）で
は分析法プログラムのレートアッセイ法を使用すると自
動的に装置が本測定法にもとづいて演算し、測定結果を
算出する。反応温度は２５〜３７℃、測定波長は５３０
〜５ＱＱｎｍの間の適切な波長を選択し、−波長を採用
する。
は分析法プログラムのレートアッセイ法を使用すると自
動的に装置が本測定法にもとづいて演算し、測定結果を
算出する。反応温度は２５〜３７℃、測定波長は５３０
〜５ＱＱｎｍの間の適切な波長を選択し、−波長を採用
する。
３）実測結果
１） 検量線及び直線性
２５０トッド単位前後のＡＳＯ価標準血清を対照ＫＡＳ
Ｏ陽性検体（血清）の希釈系列を調製し。
Ｏ陽性検体（血清）の希釈系列を調製し。
各希釈系列について３回、上記測定法によシ測定し、測
定結果の平均値をプロットしたのが第１図である。４０
０トッド単位強まで良好な直線性が得られた。
定結果の平均値をプロットしたのが第１図である。４０
０トッド単位強まで良好な直線性が得られた。
１１）抗体過剰による地帯現象の有無
高ＡＳＯ陽性検体（血清）で希釈系列を作成し。
上記測定方法により測定して抗体過剰による地帯現象の
有無を検討した。この結果を第２図に示す。
有無を検討した。この結果を第２図に示す。
抗体過剰による地帯現象が生ずれば、高値で測定値が低
下するが、第２図の結果からはこういった現象は認めら
れず、打出し値は６００１−ラド単位強でプラト−にな
った。
下するが、第２図の結果からはこういった現象は認めら
れず、打出し値は６００１−ラド単位強でプラト−にな
った。
１１１）共存物質の影響
アスコルビン酸、ビリルビン、乳び（イントラファツト
使用）、溶血（ヘモグロビン使用）をＡＳＯ陽性検体（
血清）に添加して上記測定法によシ測定し、これら共存
物質の影響を検討した。
使用）、溶血（ヘモグロビン使用）をＡＳＯ陽性検体（
血清）に添加して上記測定法によシ測定し、これら共存
物質の影響を検討した。
これら共存物質のＡＳＯ価測定値におよぼす影響は第３
〜６図に示したように認められなかった。
〜６図に示したように認められなかった。
この事実はレーザー比ろう法で必要とされる検体血清の
特別な前処理が本発明では不要であることを如実に示し
ている。
特別な前処理が本発明では不要であることを如実に示し
ている。
１ｖ）本性とマイクロタイター法との相関栄研化学製マ
イクロタイター法との相関を示した。第７図に示すよう
に相関係数γ＝０．８９７と良好な結果が得られた。第
７図中、数値は、各枠内に入った回数を示す。
イクロタイター法との相関を示した。第７図に示すよう
に相関係数γ＝０．８９７と良好な結果が得られた。第
７図中、数値は、各枠内に入った回数を示す。
（発明の効果）
本発明によシ、血清中のＡＳＯを迅速に精度良く定量す
ることができ、そのための定量試薬を提供することがで
きる。
ることができ、そのための定量試薬を提供することがで
きる。
第１図は実施例で求めた検量線、第２図は高ＡＳＯ陽性
検体（血清）とその希釈系列の本発明（第１の発明）に
よる測定結果を示すグラフ、第３図、第４図、第５図及
び第６図は各々ＡＳＯ陽性検体（血清）に、イントラフ
ァツト、ビリルビン、ヘモグロビン及びアスコルビン酸
を添加して本発明（第１の発明）Ｋよる測定結果を示す
グラフ並びに第７図は本発明（第１の発明）とマイクロ
タイター法との相関関係を示す図である。 混Ｉ！７Ｉｌ／１生Ｊ−νトー−ｔうε（ｊ眉タリ第
１ 図 Ａ応θ厭捧シ錬糸ｙ・） 輩２ 口 へｉ ７”ｏ ｒ； ン（τ炒ン １スス
′νビン−１（ｙｎｖｄｏ 箋第５０
ｆ、を図 １ ２１） ＃１１９１） ／１１） ／６０２４１３
２６） ４１Ｍ Ｍｅ ７６６ ／２８１）−ｚ４７ｏ
ｆイ、−広 （ｔ”） 第 ７ 口 手続補正書（自発） 昭和６１年５ 月 θ 日
検体（血清）とその希釈系列の本発明（第１の発明）に
よる測定結果を示すグラフ、第３図、第４図、第５図及
び第６図は各々ＡＳＯ陽性検体（血清）に、イントラフ
ァツト、ビリルビン、ヘモグロビン及びアスコルビン酸
を添加して本発明（第１の発明）Ｋよる測定結果を示す
グラフ並びに第７図は本発明（第１の発明）とマイクロ
タイター法との相関関係を示す図である。 混Ｉ！７Ｉｌ／１生Ｊ−νトー−ｔうε（ｊ眉タリ第
１ 図 Ａ応θ厭捧シ錬糸ｙ・） 輩２ 口 へｉ ７”ｏ ｒ； ン（τ炒ン １スス
′νビン−１（ｙｎｖｄｏ 箋第５０
ｆ、を図 １ ２１） ＃１１９１） ／１１） ／６０２４１３
２６） ４１Ｍ Ｍｅ ７６６ ／２８１）−ｚ４７ｏ
ｆイ、−広 （ｔ”） 第 ７ 口 手続補正書（自発） 昭和６１年５ 月 θ 日
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、血清とストレプトリジンＯを感作した粒径０．２μ
ｍ未満の不溶性担体のラテックスとを該不溶性担体の最
終濃度が０．０５重量％未満となるように混合して混合
液とし、抗原−抗体反応によるラテックス凝集反応を起
こさせて、５３０〜６００ｎｍの波長で吸光度を測定し
、この測定値から血清中の抗ストレプトリジンＯ抗体を
定量することを特徴とする抗ストレプトリジンＯ抗体の
定量法。 ２、ラテックス凝集反応を５秒〜１５分間、恒温で行な
う特許請求の範囲第１項記載の抗ストレプトリジンＯ抗
体の定量法。 ３、不溶性担体が診断用ポリスチレン系ラテックス粒子
である特許請求の範囲第１項又は第２項記載の抗ストレ
プトリジンＯ抗体の定量法。 ４、吸光度測定について、ラテックス凝集反応の進行に
伴う吸光度の増加を測定する特許請求の範囲第１項、第
２項又は第３項記載の抗ストレプトリジンＯ抗体の定量
法。 ５、ストレプトリジンＯを感作した粒径０．２μｍ未満
の不溶性担体のラテックスからなる抗ストレプトリジン
Ｏ抗体定量試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2422385A JPS61182578A (ja) | 1985-02-08 | 1985-02-08 | 抗ストレプトリジンｏ抗体の定量法及びその定量試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2422385A JPS61182578A (ja) | 1985-02-08 | 1985-02-08 | 抗ストレプトリジンｏ抗体の定量法及びその定量試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61182578A true JPS61182578A (ja) | 1986-08-15 |
Family
ID=12132274
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2422385A Pending JPS61182578A (ja) | 1985-02-08 | 1985-02-08 | 抗ストレプトリジンｏ抗体の定量法及びその定量試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61182578A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63184063A (ja) * | 1986-09-24 | 1988-07-29 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 抗ストレプトリジンｏの新規測定法 |
| WO2001092885A1 (fr) * | 2000-05-30 | 2001-12-06 | Iatron Laboratories, Inc. | Methode immunologique de turbidimetrie provoquee par du latex et reactif pour la mise en oeuvre de ladite methode |
| JP2006349838A (ja) * | 2005-06-14 | 2006-12-28 | Fuji Seal International Inc | ラベル |
-
1985
- 1985-02-08 JP JP2422385A patent/JPS61182578A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63184063A (ja) * | 1986-09-24 | 1988-07-29 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 抗ストレプトリジンｏの新規測定法 |
| WO2001092885A1 (fr) * | 2000-05-30 | 2001-12-06 | Iatron Laboratories, Inc. | Methode immunologique de turbidimetrie provoquee par du latex et reactif pour la mise en oeuvre de ladite methode |
| US7759074B2 (en) | 2000-05-30 | 2010-07-20 | Mitsubishi Kagaku Iatron, Inc. | Immunological latex turbidimetry method and reagent therefor |
| JP2006349838A (ja) * | 2005-06-14 | 2006-12-28 | Fuji Seal International Inc | ラベル |
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